Jump to content

Гранада средняя

Среда Гранада представляет собой селективную и дифференциальную культуральную среду, предназначенную для селективного выделения Streptococcus agalactiae (стрептококк группы B, GBS) и дифференциации его от других микроорганизмов. Granada Medium была разработана Мануэлем Роза-Фрайле и др. в службе микробиологии в больнице Вирхен де лас Ньевес в Гранаде (Испания). [ 1 ]

Идентификация GBS на среде гранады проста и основана на обнаружении гранадаена , красного полиенового пигмента, специфичного для GBS. [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]

Streptococcus agalactiae на агаре Гранада, анаэробная инкубация
Streptococcus agalactiae на бульоне гранады

Среда Гранада продается в США компанией Hardy Diagnostics. [ 5 ] а также в Европейском Союзе и Великобритании как торговая марка (®) компании Biomerieux. [ 6 ] и Бектон Дикинсон. [ 7 ]

Ингредиент [ 1 ] Количество Функция
Так что 10 г Желирующий агент
Протеозный пептон Bacto™ №3, (Difco) BD 25 г Особое питательное вещество, его нельзя заменить каким-либо альтернативным пептоном.
Крахмал 20 г Стабилизатор пигмента
Глюкоза 2,5 г Питательное вещество
Конская сыворотка 15мл Питательное вещество
MOPS (3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота) полунатриевая соль 11 г Буфер Гуда
Динатрий гидрофосфат 8,5 г Буфер
натрия Пируват 1 г Дополнительный источник энергии, защитное действие против активных форм кислорода.
Сульфат магния 0,2 г ------
Метотрексат 6 мг Усилитель пигмента
Кристаллический фиолетовый 0,2 мг Подавить рост грамположительных бактерий
Колистина сульфат 5 мг Подавить рост грамотрицательных бактерий
Метронидазол 1 мг Подавить рост анаэробных бактерий
Вода 1000мл

рН 7,45±0,1

Предыстория и принципы

[ редактировать ]

Среда Гранада была разработана для селективного выделения и идентификации СГБ из клинических образцов. [ 1 ] Продукция красного пигмента ( гранадаена ) на среде Гранада уникальна для β- гемолитических стрептококков группы В, выделенных от человека. [ 8 ]

Гранадаен – неизопреноидный полиеновый пигмент (орнитинрамнододекаен) с сопряженной системой из 12 двойных связей. [ 3 ] [ 9 ] [ 10 ]

β-гемолиз и выработка пигментов кодируются в GBS кластером генов , состоящим из 12 генов, цил- кластером. [ 11 ] [ 12 ] Более того, было высказано предположение, что пигмент GBS и гемолизин являются идентичными или близкородственными молекулами, а также сообщалось, что они являются важными факторами, способствующими вирулентности GBS. [ 8 ] [ 13 ] [ 14 ]

Компоненты

[ редактировать ]

Гранадский агар состоит в основном из протеозно -пептонно- крахмального агара, забуференного MOPS ( буфер Гуда ) и фосфатом, а также дополненного метотрексатом и антибиотиками. [ 1 ] Протеозопептон, лошадиная сыворотка, глюкоза и пируват натрия обеспечивают питательные вещества для роста Streptococcus agalactiae , пируват натрия также обеспечивает защитное действие против активных форм кислорода (АФК). MOPS и фосфатный буфер среды. Метотрексат запускает выработку пигмента [ 8 ] а крахмал стабилизирует пигмент. [ 8 ] Селективная добавка содержит антибиотики, колистин (ингибитор грамотрицательных бактерий) и метронидазол (ингибитор анаэробных бактерий), а также кристаллвиолет для подавления сопутствующих грамположительных бактерий.

Гранаден

Ключевым компонентом среды Гранада является протеозо-пептон N3 (Difco & BD). Этот пептический пептон был разработан компанией DIFCO (Digestive Ferments Company) во время Первой мировой войны для производства бактериальных токсинов для производства вакцин. [ 15 ]

Для развития краснокирпичных колоний СГБ на среде Гранада необходимо присутствие в культуральной среде пептида Ile-Ala-Arg-Arg-His-Pro-Tyr-Phe. Этот пептид образуется только при гидролизе пепсином альбумина млекопитающих. [ 16 ]

Для оптимальной продукции пигмента необходимо также наличие в пептоне других веществ (не охарактеризованных в настоящее время) из тканей желудочно-кишечных стенок млекопитающих, используемых для приготовления некоторых пептонов. [ 17 ]

Наличие крахмала является основным требованием для стабилизации пигмента, способствующего развитию красных колоний GBS. [ 8 ]

Тем не менее, использование растворимого крахмала приводит к тому, что культуральная среда быстро портится при комнатной температуре, поскольку растворимый крахмал гидролизуется сывороточной амилазой (добавленной в качестве добавки). Устранить этот недостаток можно либо не используя сыворотку, либо используя для приготовления питательной среды немодифицированные крахмалы, поскольку немодифицированные крахмалы более устойчивы к гидролитическому действию амилазы. [ 18 ]

Использование

[ редактировать ]

СГБ растет на агаре Гранада в виде розово-красных колоний через 18–48 часов инкубации (35–37 °С), лучшие результаты достигаются при анаэробиозе (культивировании в анаэробной среде). [ 1 ]

Агар Гранада используется для первичного выделения, идентификации и скрининга β-гемолитического СГБ из клинических образцов. [ 2 ] [ 4 ] Данная культуральная среда является селективной в отношении СГБ, однако другие микроорганизмы (такие как энтерококки и дрожжи ), резистентные к используемым селективным агентам, могут развиваться в виде бесцветных или белых колоний. [ 2 ]

Красные колонии Streptococcus agalactiae на агаре Гранада. Вагинально-ректальная культура 18 ч инкубация 36°C анаэробиоз

Гранадский агар полезен для скрининга беременных женщин на выявление вагинальной и ректальной колонизации GBS, чтобы использовать антибиотикопрофилактику во время родов, чтобы избежать раннего начала инфекции GBS у новорожденного. [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ] Также было высказано предположение, что пигментация GBS на агаре Гранада может помочь выявить беременных женщин и новорожденных с повышенным риском развития инвазивного заболевания GBS. [ 23 ]

Процедура

[ редактировать ]

Образцы можно наносить непосредственно на чашку с агаром Гранада или после этапа обогащения для достижения максимальной изоляции. [ 20 ] Образцы следует засевать штрихами как можно скорее после их поступления в лабораторию. Если материал культивируется из тампона (например, из вагинального или вагинально-ректального мазка), катите тампон непосредственно на чашку с агаром, чтобы обеспечить достаточный контакт тампона со средой для максимального переноса микроорганизмов. Поместите культуру в анаэробную среду, инкубируйте при температуре 35–37 °C и исследуйте после инкубации в течение ночи и еще раз примерно через 48 часов. [ 1 ]

Чтобы увеличить выделение GBS, тампоны также можно предварительно инокулировать в селективную обогащенную бульонную среду, например, в бульон Тодда-Хьюитта с добавлением гентамицина или колистина и налидиксовой кислоты , и инкубировать в течение 18–24 часов при 35–37 °C. [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ]

Результаты

[ редактировать ]

Колонии β-гемолитического GBS появляются на среде Гранада в виде розовых или красных колоний, и их легко отличить от других микроорганизмов, которые также могли расти на чашке. Любую степень развития оранжевого цвета следует рассматривать как признак колонии GBS, и дальнейшие идентификационные тесты не требуются. [ 2 ] Неβ-гемолитический СГБ развивается на агаре Гранада в виде белых колоний, которые при необходимости можно дополнительно протестировать с помощью латекс-агглютинации или CAMP-теста . [ 4 ] [ 20 ]

Колонии Streptococcus agalactiae на гранадском агаре, аэробиоз, техника покровных стекол.

Чашки с агаром Гранада также можно инкубировать в аэробных условиях при условии, что покровное стекло . на инокулят на чашке наложено [ 2 ]

Среду Гранады также можно использовать в качестве жидкой среды (бульоны Гранады). [ 24 ] например, морковный бульон со стрептококком B [ 25 ] При использовании жидкостей granada media анаэробная инкубация не требуется. [ 2 ]

Гранаден и Streptococcus agalactiae

[ редактировать ]

β-гемолиз и производство пигмента (гранадаена) кодируются в GBS генным кластером из 12 генов, цил- кластером. [ 11 ] [ 12 ]

Более того, было высказано предположение, что пигмент GBS и гемолизин являются идентичными или близкородственными молекулами, а также сообщалось, что они являются важными факторами, способствующими вирулентности GBS. [ 8 ] [ 13 ] [ 14 ]

Тем не менее, 1–5% штаммов GBS негемолитические и не продуцируют пигмент. [ 8 ] Однако эти негемолитические и непигментированные штаммы GBS (без пигмента и гемолизина) считаются менее вирулентными. [ 13 ] [ 14 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ]

  1. ^ Jump up to: а б с д и ж Роза М., Перес М., Карасо С., Пейс Дж.И., Пареха Л., Эрнандес Ф. (1992). «Новая среда Гранады для обнаружения и идентификации стрептококков группы B» . Журнал клинической микробиологии . 30 (4): 1019–1021. doi : 10.1128/JCM.30.4.1019-1021.1992 . ПМК   265207 . ПМИД   1572958 .
  2. ^ Jump up to: а б с д и ж Роза-Фрайле М., Родригес-Грейнджер Дж., Куэто-Лопес М., Сампедро А., Биль Гайе Е., Аро М., Андреу А. (1999). «Использование среды Гранады для обнаружения колонизации стрептококками группы B у беременных женщин» . Журнал клинической микробиологии . 37 (8): 2674–2677. doi : 10.1128/JCM.37.8.2674-2677.1999 . ПМЦ   85311 . ПМИД   10405420 .
  3. ^ Jump up to: а б Роза-Фрайле М., Родригес-Грейнджер Дж., Хайдур-Бенамин А., Куэрва Х.М., Сампедро А. (2006). «Гранаден: предлагаемая структура полиенового пигмента стрептококка группы B» . Прикладная и экологическая микробиология . 72 (9): 6367–6370. Бибкод : 2006ApEnM..72.6367R . дои : 10.1128/aem.00756-06 . ПМЦ   1563658 . ПМИД   16957264 .
  4. ^ Jump up to: а б с Роза-Фрайле М., Спеллерберг Б. (сентябрь 2017 г.). «Надежное выявление стрептококка группы В в клинической лаборатории» . Журнал клинической микробиологии . 55 (9): 2590–2598. дои : 10.1128/JCM.00582-17 . ПМЦ   5648696 . ПМИД   28659318 .
  5. ^ «Гранада Медиум» (PDF) . Харди Диагностика . Проверено 21 октября 2023 г.
  6. ^ «Гранадский агар» . Биомерье . Проверено 21 октября 2023 г.
  7. ^ «Дифференциальный агар для стрептококков группы B BD (среда Гранада)» . Проверено 21 октября 2023 г.
  8. ^ Jump up to: а б с д и ж г Роза-Фрайле М., Драмси С., Спеллерберг Б. (2014). «Гемолизин и пигмент стрептококка группы B, история близнецов» . Обзоры микробиологии FEMS . 38 (5): 932–946. дои : 10.1111/1574-6976.12071 . ПМЦ   4315905 . ПМИД   24617549 .
  9. ^ Стопс М, Жюри Р, Хайдур А, Родригес Грейнджер Дж, Сампедро Мартинес А, де ла Роса Фрайар М, Оукс Р, Джастис Дж, Кроу Дж. М. (2012). «Уточнение структуры гранадаена: полный синтез родственного аналога [2]-гранадаена и подтверждение его абсолютной стереохимии». Биоорганическая и медицинская химия . 20 (22): 6655–6651. дои : 10.1016/j.bmc.2012.09.017 . ПМИД   23043725 .
  10. ^ Мэдден К.С., Моса Ф.А., Уайтинг А. (2014). «Неизопреноидные полиеновые натуральные продукты - структуры и синтетические стратегии». Органическая и биомолекулярная химия . 12 (40): 7877–7899. дои : 10.1039/C4OB01337A . ПМИД   25188767 .
  11. ^ Jump up to: а б Спеллерберг Б., Пол Б., Хаасе Г., Мартин С., Вебер-Хейнеманн Дж., Люттикен Р. (1999). «Идентификация генетических детерминант гемолитической активности Streptococcus agalactiae путем транспозиции ISS1» . Журнал бактериологии . 181 (10): 3212–3219. дои : 10.1128/JB.181.10.3212-3219.1999 . ПМК   93778 . ПМИД   10322024 .
  12. ^ Jump up to: а б Спеллерберг Б., Мартин С., Брандт С., Люттикен Р. (2000). «Гены цил Streptococcus agalactiae участвуют в производстве пигмента» . Письма FEMS по микробиологии . 188 (2): 125–128. дои : 10.1016/s0378-1097(00)00224-x . ПМИД   10913694 .
  13. ^ Jump up to: а б с Уидби С., Харрелл М.И., Бернсайд К., Нго Л., Бекрафт А.К., Айер Л.М., Аравинд Л., Хитти Дж., Адамс Уолдорф К.М., Раджагопал Л. (2013). «Гемолитический пигмент стрептококка группы B позволяет бактериям проникать в плаценту человека» . Журнал экспериментальной медицины . 219 (6): 1265–1281. дои : 10.1084/jem.20122753 . ПМЦ   3674703 . ПМИД   23712433 .
  14. ^ Jump up to: а б с Уидби С., Ворнхаген Дж., Гендрин С., Болденов Э., Самсон Дж.М., Деринг К., Нго Л., Иезекве Э.А. младший, Гундлах Дж.Х., Эловиц М.А., Лиггитт Д., Дункан Дж.А., Адамс Уолдорф К.М., Раджагопал Л. (2015). «Стрептококковый липидный токсин вызывает проницаемость мембран и пироптоз, что приводит к повреждению плода» . ЭМБО Молекулярная медицина . 7 (4): 488–505. дои : 10.15252/emmm.201404883 . ПМЦ   4403049 . ПМИД   25750210 .
  15. ^ Дифко и ББЛ. Руководство по микробиологическим культуральным средам, 2-е издание . BD Diagnostics – Диагностические системы. 2009. с. 450. ИСБН  978-0-9727207-1-7 .
  16. ^ Роза-Фрайле М., Сампедро А., Варела Х., Гарсия-Пенья М., Хименес-Гальего Дж. (1999). «Идентификация пептида из альбуминов млекопитающих, ответственного за усиленное производство пигмента стрептококками группы B» . Клин Диагн Лаборатория Иммунол . 6 (3): 425–426. doi : 10.1128/CDLI.6.3.425-426.1999 . ПМЦ   103735 . ПМИД   10225848 .
  17. ^ Энрике Камачо Муньос (2005). Значение протеозо-пептона № 3 в производстве пигментов Streptococcus agalactiae в окружающей среде Гранады (PDF) . Университет Гранады. ISBN  978-84-338-3741-7 . Проверено 24 июня 2016 г.
  18. ^ Роза-Фрайле М., Родригес-Грейнджер Дж., Камачо-Муньос Э., Сампедро А. (2005). «Использование немодифицированных крахмалов и частичное удаление сыворотки для улучшения стабильности среды Гранады» . Журнал клинической микробиологии . 43 (4): 18889–1991. doi : 10.1128/JCM.43.4.1989-1991.2005 . ПМЦ   1081375 . ПМИД   15815040 .
  19. ^ Роза-Фрайле М., Спеллерберг Б. (2017). «Надежное выявление стрептококка группы В в клинической лаборатории» . J Clin Микробиол . 55 (9): 2590–2598. дои : 10.1128/JCM.00582-17 . ПМЦ   5648696 . ПМИД   28659318 .
  20. ^ Jump up to: а б с д Верани-младший, МакГи Л., Шраг С.Дж. (2010). «Пересмотренные рекомендации CDC по профилактике перинатальной стрептококковой инфекции группы B, 2010 г.» (PDF) . Рекомендованный представитель MMWR . 59 (РР-10): 1–32. ПМИД   21088663 .
  21. ^ Jump up to: а б Лаура Филкинс, Джоселин Р. Хаузер, Барбара Робинсон-Данн, Роберт Тиббеттс, Бобби Л. Боянтон-младший, Паула Ревелл, Комитет по микробиологии Американского общества микробиологии в области клинической и общественного здравоохранения, Подкомитет по лабораторной практике (2020). «Американское общество микробиологии предоставляет рекомендации по обнаружению и идентификации стрептококка группы B на 2020 год» (PDF) . Журнал клинической микробиологии . JCM.01230-20. (1): e01230-20. дои : 10.1128/JCM.01230-20 . ПМЦ   7771461 . ПМИД   33115849 . S2CID   226049927 . Проверено 14 декабря 2020 г. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  22. ^ Jump up to: а б Филкинс Л., Хаузер Дж., Робинсон-Данн Б., Тиббеттс Р., Боянтон Б., Ревелл П. «Руководство по обнаружению и идентификации стрептококка группы B. Американское общество микробиологии. 2020» . {{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  23. ^ Хюбнер Э.М., Гудьонсдоттир М.Дж., Даканай М.Б., Нгуен С., Брокоу А., Шарма К., Эльфвин А., Хентц Е., Ривера Ю.Р., Берд Н., Шивакумар М., Колер Б., Ли М., Ли А., Мансон Дж., Орвис А., Коулман М. , Якобссон Б., Раджагопал Л., Адамс Уолдорф К.М. (2022). «Вирулентность, фенотип и генотипические характеристики инвазивных изолятов стрептококка группы В, полученных от шведских беременных женщин и новорожденных» . Анналы клинической микробиологии и противомикробных препаратов . 21 (1): 43. дои : 10.1186/s12941-022-00534-2 . ПМЦ   9560721 . ПМИД   36229877 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  24. ^ Карвальо Мда Дж., Факлам Р., Джексон Д., Билл Б., МакГи Л. (2009). «Оценка трех коммерческих бульонных сред для обнаружения пигментов и идентификации стрептококка группы B (Streptococcus agalactiae)» . J Clin Микробиол . 47 (12): 4161–4163. дои : 10.1128/JCM.01374-09 . ПМЦ   2786674 . ПМИД   19812277 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  25. ^ «МОРКОВНЫЙ БУЛЬОН СТРЕП Б™» (PDF) . Проверено 17 октября 2023 г.
  26. ^ Кристофер-Майкл Уидби (2015). Характеристика гемолизина стрептококка группы B и его роли во внутриутробной инфекции (PDF) . Университет Вашингтона . Проверено 23 июня 2016 г.
  27. ^ Родригес-Грейнджер Дж., Спеллерберг Б., Асам Д., Роза-Фрейле М. (2015). «Негемолитический и непигментированный стрептококк группы b, нечастая причина раннего неонатального сепсиса» . Патогены и болезни . 73 (9): ftv089. дои : 10.1093/femspd/ftv089 . ПМЦ   4626576 . ПМИД   26449711 .
  28. ^ Армистед Б., Олер Э., Адамс Уолдорф К., Раджагопал Л. (2019). «Двойная жизнь стрептококка группы B: бессимптомный колонизатор и мощный патоген» . Журнал молекулярной биологии . 431 (16): 2914–2931. дои : 10.1016/j.jmb.2019.01.035 . ПМК   6646060 . ПМИД   30711542 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  29. ^ Армистед Б., Куах П., Снайдер Дж.М., Сантана-Уфрет В., Фурута А., Брокоу А., Раджагопал Л. (2020). «Гемолитические мембранные везикулы стрептококка группы B способствуют инфекции» . Журнал инфекционных болезней . jiaa548 (8): 1488–1496. дои : 10.1093/infdis/jiaa548 . ПМК   8064051 . ПМИД   32861213 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 93f8bde5e2c477ceff8c22c1e29ff6fa__1719588420
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/93/fa/93f8bde5e2c477ceff8c22c1e29ff6fa.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Granada medium - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)