метод Гольджи
Метод Гольджи — это метод окрашивания серебром , который используется для визуализации нервной ткани под световой микроскопией. Метод был открыт Камилло Гольджи , итальянским врачом и учёным , опубликовавшим первую фотографию, сделанную с помощью этой техники, в 1873 году. [1] назвал ее черной реакцией ( la reazione nera Первоначально Гольджи ), но позже она стала более известна как окраска Гольджи , а позже — метод Гольджи.
Окрашивание по Гольджи использовалось испанским нейроанатомом Сантьяго Рамоном-и-Кахалем (1852–1934) для открытия ряда новых фактов об организации нервной системы, вдохновивших на рождение учения о нейронах . В конечном итоге Рамон-и-Кахаль усовершенствовал эту технику, применив метод, который он назвал «двойной пропиткой». Техника окрашивания Рамона-и-Кахаля, которая используется до сих пор, называется пятном Кахаля. [ нужна ссылка ]
Механизм
[ редактировать ]Клетки нервной ткани плотно упакованы, и если окрасить все клетки, можно получить мало информации об их структуре и взаимосвязях. Более того, тонкие нитевидные отростки нервных клеток, включая аксоны и дендриты нейронов , слишком тонкие и прозрачные, чтобы их можно было увидеть с помощью обычных методов окрашивания. Метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом целиком. Механизм, посредством которого это происходит, до сих пор во многом неизвестен. [2] Дендриты, как и сома клеток, четко окрашены в коричневый и черный цвета и могут быть прослежены по всей их длине, что позволило нейроанатомам отслеживать связи между нейронами и сделать видимой сложную сетевую структуру многих частей головного и спинного мозга. .
Окрашивание по Гольджи достигается путем пропитки фиксированной альдегидом нервной ткани дихроматом калия и нитратом серебра . Окрашенные таким образом клетки заполняются микрокристаллизацией хромата серебра .
Техника
[ редактировать ]По данным SynapseWeb, [3] Вот рецепт техники окрашивания по Гольджи:
- Погрузить блок (ок. 10х5 мм) фиксированной формальдегидом (или перфузированной параформальдегидом - глутаральдегидом ) ткани головного мозга в 2% водный раствор дихромата калия на 2 суток.
- Вскоре высушите блок фильтровальной бумагой .
- Погрузите блок в 2% водный раствор нитрата серебра еще на 2 суток.
- Отрежьте секции ок. Толщина 20–100 мкм .
- Быстро обезвоживайте в этаноле , очищайте и монтируйте (например, в Депекс или Энталан).
Этот метод с тех пор был усовершенствован, чтобы заменить осадок серебра золотом путем погружения образца в хлорид золота , затем в щавелевую кислоту с последующим удалением серебра тиосульфатом натрия . Это сохраняет большую степень тонкой структуры, а ультраструктурные детали отмечены мелкими частицами золота. [4]
Цитировать
[ редактировать ]Рамон-и-Кахаль сказал о методе Гольджи:
- Я выразил удивление, которое я испытал, увидев своими глазами удивительную разоблачающую силу хром-серебряной реакции и отсутствие какого-либо волнения в научном мире, вызванного ее открытием.
- Воспоминания о моей жизни, Том 2, История моей научной деятельности . Мадрид: Моя, 1917, с. 76.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Фингер, Стэнли (1994). Истоки нейробиологии: история исследований функций мозга . Издательство Оксфордского университета. п. 45. ИСБН 9780195146943 . ОСЛК 27151391 .
В 1873 году Гольджи опубликовал первую краткую, но «адекватную» картину la reazione nera (черной реакции), на которой была показана вся нервная клетка, включая ее тело, аксон и ветвящиеся дендриты.
- ^ Николлс, Дж. Г. (2001). От нейрона к мозгу . Синауэр Ассошиэйтс. стр. 5 . ISBN 0878934391 .
- ^ Спейсек Дж., Фиала Дж. (28 июня 2002 г.). «Визуализация дендритных шипиков» . СинапсВеб. Архивировано из оригинала 26 июня 2010 г. Проверено 17 июня 2010 г.
{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка ) - ^ «Дом – Спрингер» . [ мертвая ссылка ]
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Микрофотография клетки коры головного мозга, окрашенной по методу Гольджи . Галерея изображений IHC.
- Пропитки Гольджи . Изображения мозга мух.
- Визуализация дендритных шипов с использованием метода Гольджи . СинапсВеб. Включает покадровое исследование импрегнации по аппарату Гольджи.
- Берреби, Альберт: Клеточная биология нейронов: структура и методы исследования . (в PDF)
- Окрашенные изображения срезов мозга, включающие «нейроны, окрашенные по Гольджи», в проекте BrainMaps.