Хемотаксис спермы

Хемотаксис спермы — это форма управления сперматозоидами , при которой сперматозоиды ( сперматозоиды ) следуют градиенту концентрации хемоаттрактанта, секретируемого из ооцита , и таким образом достигают ооцита.

Фон

момента открытия притяжения сперматозоидов к женским гаметам папоротников , С более века назад ^{[ 1 ]} Управление сперматозоидами в форме хемотаксиса сперматозоидов установлено у большого числа видов. ^{[ 2 ]} Хотя хемотаксис сперматозоидов распространен во всем царстве Metazoa , от морских видов с внешним оплодотворением, таких как морские ежи и кораллы , до человека, ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 4 ]} Большая часть современной информации о хемотаксисе сперматозоидов получена в результате исследований морских беспозвоночных, в первую очередь морских ежей и морских звезд . ^{[ 5 ]} Фактически, до недавнего времени считалось, что у млекопитающих нет необходимости направлять сперматозоиды к ооциту. Это произошло из-за распространенного убеждения, что после эякуляции в женские половые пути большое количество сперматозоидов «гонятся» к яйцеклетке и конкурируют за ее оплодотворение.

Исследования 1980-х годов ^{[ 6 ]} привело к тому, что это убеждение было разрушено, когда стало ясно, что лишь немногим из эякулированных сперматозоидов — у людей только ~1 из каждого миллиона сперматозоидов — удается проникнуть в яйцеводы ( фаллопиевы трубы ). ^{[ 4 ]}^{[ 7 ]} и когда более поздние исследования показали, что сперматозоиды млекопитающих действительно реагируют хемотаксически. ^{[ 8 ]}

Хемотаксис спермы у видов, не относящихся к млекопитающим

При хемотаксисе сперматозоида ооцит секретирует хемоаттрактант , который по мере диффундирования образует градиент концентрации : высокая концентрация вблизи яйцеклетки и постепенно более низкая концентрация по мере увеличения расстояния от ооцита. Сперматозоиды могут чувствовать этот хемоаттрактант и ориентировать свое движение вверх по градиенту концентрации в сторону яйцеклетки. Хемотаксис спермы был продемонстрирован у большого количества видов немлекопитающих, включая морских беспозвоночных. ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]} лягушкам. ^{[ 9 ]}

Хемоаттрактанты

Хемоаттрактанты спермы у немлекопитающих видов в значительной степени различаются. Некоторые примеры показаны в таблице 1. На сегодняшний день большинство хемоаттрактантов спермы, которые были идентифицированы у немлекопитающих видов, представляют собой пептиды или белки с низкой молекулярной массой (1–20 кДа ), которые термостабильны и чувствительны к протеазам . ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]} Исключением из этого правила являются хемоаттрактанты сперматозоидов кораллов, асцидий , таких растений, как папоротники и водоросли (таблица 1).

Таблица 1. Некоторые хемоаттрактанты спермы немлекопитающих*

Разновидность	Хемоаттрактант	Ссылки
Водоросли	Низкомолекулярные ненасыщенные феромоны циклической или линейной структуры (например, пентозилированный гидрохинон с молекулярной массой 532 Да в случае Chlamydomonas allensworthii )	^{[ 3 ]}^{[ 10 ]}^{[ 11 ]}
Земноводные	Аллурин — белок массой 21 кДа (для Xenopus )	^{[ 9 ]}^{[ 12 ]}
Асцидии	СААФ — сульфатированный стероид: 3,4,7,26-тетрагидроксихолестан-3,26-дисульфат (для Ciona savignii и кишечной ).	^{[ 13 ]}^{[ 14 ]}^{[ 15 ]}
Кораллы	Липидоподобный длинноцепочечный жирный спирт CH ₃ -(CH ₂ ) ₈ -CH=CH-CH=CH-CH ₂ OH (для Montipora digitata ).	^{[ 16 ]}
Папоротники	Дикарбоновые кислоты, например яблочная кислота в частично ионизированной форме (для Pteridium aquilinum )	^{[ 17 ]}
Моллюски	SepSAP — пептид-амид из 6 остатков с последовательностью PIDPGV-CONH2 (для Sepia officinalis ).	^{[ 18 ]}
Морские ежи	Resact — пептид из 14 остатков с последовательностью CVTGAPGCVGGGRL-NH2 (для Arbacia punctulata ).	^{[ 19 ]}
морская звезда	Старрак — термостабильный белок массой 13 кДа (для Pycnopodia helianthoides ).	^{[ 20 ]}

Взято из ссылки. ^{[ 21 ]}

Видовая специфика

Разнообразие хемоаттрактантов ставит вопрос о видовой специфичности в отношении идентичности хемоаттрактантов. Не существует единого правила специфичности, связанной с хемоаттрактантами. Так, у некоторых групп морских беспозвоночных (например, гидромедуз и некоторых офиуроидов ) специфичность очень высока; у других (например, у морских звезд) специфичность находится на уровне семейства, а внутри семейства специфичность отсутствует. ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 22 ]} У моллюсков , по-видимому, вообще нет никакой специфичности. Аналогичным образом, у растений уникальное простое соединение (например, фукосерратен — линейный ненасыщенный алкен (1,3-транс-5-цис-октатриен)) может быть хемоаттрактантом для различных видов. ^{[ 10 ]}

Поведенческий механизм

Здесь тоже нет единого правила. У некоторых видов (например, у гидроидов типа Campanularia или оболочников типа Ciona ) направление плавания сперматозоидов резко меняется в сторону источника хемоаттрактанта. У других (например, у морского ежа, гидромедузы, папоротника или таких рыб, как горчак японский) подход к источнику хемоаттрактанта непрямой и движение осуществляется посредством повторяющихся петель малого радиуса. У некоторых видов (например, сельди или асцидии Ционы) активация моторики предшествует хемотаксису. ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 23 ]}^{[ 24 ]} При хемотаксисе клетки могут либо ощущать временной градиент хемоаттрактанта, сравнивая занятость его рецепторов в разные моменты времени (как это делают бактерии). ^{[ 25 ]}), или они могут обнаружить пространственный градиент, сравнивая занятость рецепторов в разных местах клетки (как это делают лейкоциты ^{[ 26 ]}). У наиболее изученного вида, морского ежа, сперматозоиды ощущают временной градиент и реагируют на него временным увеличением асимметрии жгутиков . Результатом является поворот на траектории плавания, за которым следует период прямолинейного плавания. ^{[ 27 ]} что приводит к наблюдаемым эпициклоидоподобным движениям, направленным к источнику хемоаттрактанта. ^{[ 28 ]} Конкретный механизм, с помощью которого сперматозоиды морских ежей ощущают временной градиент, был недавно идентифицирован как естественная реализация хорошо известного адаптивного контроллера, известного как поиск экстремума. ^{[ 29 ]}

Молекулярный механизм

Молекулярный механизм хемотаксиса сперматозоидов до сих пор полностью не изучен. Современные знания в основном основаны на исследованиях морского ежа Arbacia punctulata , где связывание хемоаттрактанта (таблица 1) с его рецептором, гуанилилциклазой , активирует синтез цГМФ (рисунок 1). В результате повышение уровня цГМФ, возможно, активирует K ⁺-селективные ионные каналы . Последующая гиперполяризация активирует каналы, активируемые гиперполяризацией и управляемые циклическими нуклеотидами (HCN). Деполяризующий входящий ток через каналы HCN, возможно, активирует активируемый напряжением Ca. ²⁺ каналы, что приводит к повышению внутриклеточного Ca ²⁺. Этот подъем приводит к асимметрии жгутиков и, как следствие, к повороту спермия. ^{[ 23 ]}

Модель пути передачи сигнала во время хемотаксиса сперматозоидов морского ежа Arbacia punctulata . Связывание хемоаттрактанта (лиганда) с рецептором — мембраносвязанной гуанилилциклазы (ГЦ) — активирует синтез цГМФ из ГТФ. Циклический GMP, возможно, открывает циклический нуклеотид-зависимый (CNG) K ⁺-селективные каналы, тем самым вызывая гиперполяризацию мембраны. Сигнал цГМФ прекращается за счет гидролиза цГМФ за счет активности фосфодиэстеразы (ФДЭ) и инактивации GC. При гиперполяризации каналы, активируемые гиперполяризацией и циклические нуклеотиды (HCN), обеспечивают приток Na. ⁺ что приводит к деполяризации и тем самым вызывает быстрый выход Ca ²⁺ вход через активируемый напряжением Ca ²⁺ каналы (Ca _v ), Ca ²⁺ ионы взаимодействуют по неизвестным механизмам с аксонемой жгутика и вызывают усиление асимметрии биения жгутика и, в конечном итоге, поворот или изгиб траектории плавания. Калифорния ²⁺ удаляется из жгутика Na ⁺/Что ²⁺ обменный механизм. (Взято из исх. ^{[ 23 ]})

Хемотаксис спермы у млекопитающих

После обнаружения того, что человеческие сперматозоиды накапливаются в фолликулярной жидкости ^{[ 30 ]}^{[ 31 ]} и что существует замечательная корреляция между этим накоплением in vitro и оплодотворением яйцеклеток, ^{[ 30 ]} Было обосновано, что причиной такого накопления является хемотаксис. ^{[ 8 ]} Позже хемотаксис сперматозоидов был продемонстрирован и на мышах. ^{[ 32 ]} и кролики. ^{[ 33 ]} Кроме того, у лошадей было продемонстрировано накопление сперматозоидов в фолликулярной жидкости (но без подтверждения того, что это действительно отражает хемотаксис). ^{[ 34 ]} и свиньи. ^{[ 35 ]} Ключевой особенностью хемотаксиса сперматозоидов у человека является то, что этот процесс ограничивается капацитированными клетками. ^{[ 36 ]}^{[ 37 ]} — единственные клетки, обладающие способностью проникать в яйцеклетку и оплодотворять ее. ^{[ 38 ]} Это открыло возможность того, что у млекопитающих хемотаксис является не только механизмом наведения, но и механизмом отбора сперматозоидов. ^{[ 36 ]}^{[ 37 ]} Важно отметить, что доля капацитированных (и, следовательно, хемотаксически чувствительных) сперматозоидов невелика (~10% у человека), продолжительность жизни в капацитированном/хемотаксическом состоянии коротка (1–4 часа у человека), сперматозоид может находиться в это состояние только один раз в жизни, и отдельные сперматозоиды становятся капацитированными/хемотаксическими в разные моменты времени, что приводит к постоянной замене капацитированных/хемотаксических клеток в популяции сперматозоидов, т.е. к длительному доступности капацитированных клеток. ^{[ 36 ]}^{[ 39 ]} Эти особенности сперматозоидов позволили предположить, что продление периода времени, в течение которого капацитированные сперматозоиды могут быть обнаружены в женских половых путях, является механизмом, развившимся у людей, для компенсации отсутствия координации между оплодотворением и овуляцией. ^{[ 7 ]}^{[ 36 ]}^{[ 37 ]}^{[ 40 ]}

Хемоаттрактанты

У человека существует по крайней мере два разных происхождения хемоаттрактантов спермы. Один из них — это кумулюсные клетки, окружающие ооцит, а другой — сам зрелый ооцит. ^{[ 41 ]} Хемоаттрактант, секретируемый кумулюсными клетками, представляет собой стероид прогестерон , эффективность которого доказана в пикомолярном диапазоне. ^{[ 42 ]}^{[ 43 ]}^{[ 44 ]} Хемоаттрактант, выделяемый ооцитом, еще более эффективен. ^{[ 41 ]} Это гидрофобная непептидная молекула, которая при секретировании из ооцита находится в комплексе с белком-носителем. ^{[ 45 ]} Было показано, что дополнительные соединения действуют как хемоаттрактанты на сперматозоиды млекопитающих. К ним относятся хемокин CCL20 , ^{[ 46 ]} предсердный натрийуретический пептид (ANP), ^{[ 47 ]} специфические отдушки , ^{[ 48 ]} натрийуретический пептид типа С (NPPC), ^{[ 49 ]} и аллурин, ^{[ 50 ]} чтобы упомянуть несколько. Разумно предположить, что не все из них физиологически значимы.

Видовая специфика

Видовая специфичность не была обнаружена в экспериментах по сравнению хемотаксической реакции сперматозоидов человека и кролика на фолликулярные жидкости или среды, кондиционированные яйцеклетками, полученные от человека, крупного рогатого скота и кролика. ^{[ 51 ]} Последующие открытия о том, что кумулюсные клетки как человека, так и кролика (а, возможно, и других млекопитающих) секретируют хемоаттрактант прогестерон. ^{[ 42 ]}^{[ 43 ]}^{[ 44 ]} достаточно, чтобы объяснить отсутствие специфичности хемотаксического ответа сперматозоидов млекопитающих.

Поведенческий механизм

Сперматозоиды млекопитающих, как и сперматозоиды морских ежей, по-видимому, ощущают градиент хемоаттрактанта во времени (сравнивая заселенность рецепторов во времени), а не в пространстве (сравнивая заселенность рецепторов в пространстве). Это связано с тем, что установление временного градиента при отсутствии пространственного градиента достигается за счет смешивания сперматозоидов человека с хемоаттрактантом. ^{[ 52 ]} или путем фотовысвобождения хемоаттрактанта из заключенного в него соединения, ^{[ 53 ]} приводит к отсроченным временным изменениям в поведении при плавании, которые включают увеличение частоты поворотов и гиперактивацию . На основании этих наблюдений и данных о том, что уровень событий гиперактивации снижается, когда хемотаксически чувствительные сперматозоиды плавают в пространственном градиенте хемоаттрактанта. ^{[ 53 ]} было высказано предположение, что повороты и события гиперактивации подавляются, когда капацитированные сперматозоиды плывут вверх по градиенту хемоаттрактанта, и наоборот, когда они плывут вниз по градиенту. ^{[ 52 ]}^{[ 53 ]} Другими словами, человеческие сперматозоиды взаимодействуют с хемоаттрактантами путем модуляции частоты поворотов и событий гиперактивации, подобно Escherichia coli . бактериям ^{[ 25 ]}

Молекулярный механизм

Как и у видов немлекопитающих, конечным сигналом хемотаксиса изменения направления плавания является Ca ²⁺. ^{[ 54 ]} Открытие прогестерона как хемоаттрактанта ^{[ 42 ]}^{[ 43 ]}^{[ 44 ]} привело к идентификации его рецептора на поверхности спермы – CatSper , Ca ²⁺ канал присутствует исключительно в хвосте сперматозоидов млекопитающих. ^{[ 55 ]}^{[ 56 ]} (Однако обратите внимание, что прогестерон стимулирует только человеческий CatSper, но не мышиный CatSper. ^{[ 56 ]} Соответственно, хемотаксис спермы на прогестерон у мышей не был обнаружен. ^{[ 57 ]}Однако молекулярные этапы, следующие за активацией CatSper прогестероном, неясны, хотя участие трансмембранной аденилатциклазы , цАМФ и протеинкиназы А, а также растворимой гуанилилциклазы , цГМФ , инозитолтрифосфатного рецептора и депо-управляемого Са ²⁺ был предложен канал. ^{[ 58 ]}

Физиология

Хемотаксис - это механизм наведения на ближний путь. Таким образом, он может направлять сперматозоиды только на короткие расстояния, порядка миллиметров. ^{[ 59 ]} Поэтому считается, что у млекопитающих хемотаксис сперматозоидов происходит в яйцеводе, близком к ооциту. Первые сперматозоиды могут быть хемотаксически направлены к комплексу ооцит-кумулюс за счет градиента прогестерона, секретируемого кумулюсными клетками. ^{[ 42 ]}^{[ 43 ]}^{[ 44 ]} Кроме того, прогестерон может направлять внутрь сперматозоиды, уже присутствующие на периферии кучевообразных скоплений. ^{[ 42 ]} Сперматозоиды, которые уже находятся глубоко внутри кучевочковой оболочки, могут ощущать более мощный хемоаттрактант, секретируемый ооцитом. ^{[ 41 ]}^{[ 45 ]} и хемотаксически направляются к ооциту в соответствии с градиентом этого хемоаттрактанта. Однако следует иметь в виду, что этот сценарий может быть чрезмерным упрощением. Ввиду растущего числа открываемых различных хемоаттрактантов физиология хемотаксиса in vivo может быть гораздо более сложной.

Ссылки

^ Пфеффер, В. (1884) Локомоторные направленные движения, вызванные химическими раздражителями . расследование. от д. Ботан. Инст. Тюбинген 1, 363–482.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Миллер, Р.Л. (1985) Хемоориентация сперматозоидов у многоклеточных животных . В: Биология оплодотворения (Мец, С.Б. и Монрой, А., ред.), стр. 275–337. Академик Пресс, Нью-Йорк.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Коссон, член парламента (1990) Хемотаксис спермы . В: Контроль подвижности сперматозоидов: биологические и клинические аспекты (Ганьон, К., ред.), стр. 103–135. CRC Press, Бока-Ратон, Флорида.
^ Jump up to: ^а ^б Айзенбах М. и Тур-Каспа И. (1994) Хемотаксис сперматозоидов человека больше не является загадкой . Плодородный. Стерильный. 62, 233–235.
^ Каупп, У.Б., Кашикар, Н.Д. и Вейанд, И. (2008) Механизмы хемотаксиса сперматозоидов, Анну. Преподобный физиол. 70, 93–117.
^ "Профессор Майкл Эйзенбах из мембраны Вейцмана. Научно-исследовательский отдел был вдохновлен начать это исследование несколько лет назад, когда..." «Яйцо в сперму: не звоните нам, мы вам позвоним». Weizmann News (осень 1991 г., стр. 3) . 1991.
^ Jump up to: ^а ^б Айзенбах М. и Гиохалас Л.К. (2006) Направление спермы у млекопитающих – грунтовая дорога к яйцеклетке . Нат. Преподобный мол. Клеточная Биол. 7, 276–285.
^ Jump up to: ^а ^б Ральт Д., Мэнор М., Коэн-Даяг А., Тур-Каспа И., Маклер А., Юли И., Дор Дж., Блумберг С., Машиах С. и Айзенбах , М. (1994) Хемотаксис и хемокинез сперматозоидов человека к фолликулярным факторам . Биол. Репродукция. 50, 774–785.
^ Jump up to: ^а ^б Аль-Анзи Б. и Чандлер Д.Э. (1998) Хемоаттрактант спермы высвобождается из желе яиц Xenopus во время нереста . Дев. Биол. 198, 366–375.
^ Jump up to: ^а ^б Майер И. и Мюллер Д.Г. (1986) Половые феромоны в водорослях . Биол. Бык. 170, 145–175.
^ Старр, Р.К., Марнер, Ф.Дж. и Янике, Л. (1995) Хемоаттрактация мужских гамет феромоном, продуцируемым женскими гаметами хламидомонады . Учеб. Натл. акад. наук. США 92, 641–645.
^ Олсон, Дж. Х., Сян, XY, Зигерт, Т., Киттельсон, А., Ролз, А., Бибер, А. Л. и Чендлер, Д. Е. (2001) Аллурин, хемоаттрактант сперматозоидов с молекулярной массой 21 кДа из яичного желе Xenopus, связан с белки, связывающие сперму млекопитающих . Учеб. Натл. акад. наук. США 98, 11205–11210.
^ Йошида М., Инаба К. и Морисава М. (1993) Хемотаксис спермы в процессе оплодотворения у асцидий Ciona-Savigni и Ciona-Intestinalis . Дев. Биол. 157, 497–506.
^ Йошида М., Инаба К., Исида К. и Морисава М. (1994) Кальций и циклический АМФ опосредуют активацию сперматозоидов, но Ca ²⁺ сам по себе способствует хемотаксису сперматозоидов у асцидий Ciona savigniy . Дев. Рост Диф. 36, 589–595.
^ Йошида М., Мурата М., Инаба К. и Морисава М. (2002) Хемоаттрактантом для асцидийных сперматозоидов является сульфатированный стероид . Учеб. Натл. акад. наук. США 99, 14831–14836.
^ Колл, Дж. К. и Миллер, Р. Л. (1992) Природа хемоаттрактантов спермы у кораллов и морских звезд . В: Сравнительная сперматология: 20 лет спустя (Баччетти, Б., ред.), стр. 129–134. Рэйвен Пресс, Нью-Йорк.
^ Брокоу, CJ (1958) Хемотаксис сперматозоидов папоротника-орляка. Роль бималат-ионов . Дж. Эксп. Зоол. 35, 192–196.
^ Затыльный К., Марвин Л., Ганьон Дж. и Генри Дж. Л. (2002) Оплодотворение Sepia officinalis: первый пептид моллюсков, привлекающий сперму . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 296, 1186–1193.
^ Уорд, Дж. Э., Брокоу, С. Дж., Гарберс, Д. Л. и Вакье, В. Д. (1985) Хемотаксис сперматозоидов Arbacia punctulata для реакции на пептид из слоя яичного желе . Дж. Клеточная Биол. 101, 2324–2329.
^ Миллер Р.Д. и Фогт Р. (1996) N-концевая частичная последовательность хемоаттрактанта спермы Pycnopodia helianthoides массой 13 кДа «стартрак» обладает активностью по привлечению сперматозоидов . Дж. Эксп. Биол. 199, 311–318.
^ Айзенбах, М. (2004) Хемотаксис. Издательство Имперского колледжа, Лондон.
^ Миллер, Р.Л. (1997) Специфика хемотаксиса сперматозоидов у мелководных голотурий и офиуроидов Большого барьерного рифа . Дж. Эксп. Зоол. 279, 189–200.
^ Jump up to: ^а ^б ^с Каупп У.Б., Хильдебранд Э. и Вейанд И. (2006) Хемотаксис спермы у морских беспозвоночных - молекулы и механизм . Дж. Селл. Физиол. 208, 487–494.
^ Морисава, М. (1994). Механизмы клеточной сигнализации подвижности сперматозоидов . Зоол. наук. 11, 647–662.
^ Jump up to: ^а ^б Макнаб Р.М. и Кошланд Д.Э. (1972) Механизм восприятия градиента в бактериальном хемотаксисе . Учеб. Натл. акад. наук. США 69, 2509–2512.
^ Девреотес, П.Н. и Зигмонд, С.Х. (1988) Хемотаксис в эукариотических клетках: фокус на лейкоцитах и Dictyostelium . Annu Rev Cell Biol 4, 649–86.
^ Каупп, УБ, Солцин, Дж., Хильдебранд, Э., Браун, Дж. Э., Хельбиг, А., Хаген, В., Бейерманн, М., Пампалони, Ф. и Вейанд, И. (2003) Поток сигналов и двигательный ответ, контролирующий хемотаксис сперматозоидов морского ежа . Природная клеточная биол. 5, 109–117.
^ Бёмер М., Ван К., Вейанд И., Хаген В., Бейерманн М., Мацумото М., Хоши М., Хильдебранд Э. и Каупп УБ (2005) Ca ²⁺ Шипы в жгутике контролируют хемотаксическое поведение сперматозоидов . ЭМБО Дж. 24, 2741–2752.
^ Абдельгалил, М., Аболекассем, Ю., Таха, Х. (2022) [1] Сперматозоиды морского ежа используют экстремум в поисках контроля, чтобы найти яйцеклетку . Физ. Ред. E 106, L062401
^ Jump up to: ^а ^б Ральт Д., Гольденберг М., Феттерольф П., Томпсон Д., Дор Дж., Машиах С., Гарберс Д.Л. и Айзенбах М. (1991) Привлечение спермы к фолликулярному фактору(ам) коррелирует с оплодотворяемостью яйцеклеток человека . Учеб. Натл. акад. наук. США 88, 2840–2844.
^ Вильянуэва-Диас, К., Вадильо-Ортега, Ф., Кабли-Амбе, А., Диас-Перес, М.А. и Кривицкий, С.К. (1990). Доказательства того, что фолликулярная жидкость человека содержит хемоаттрактант для сперматозоидов . Плодородный. Стерильный. 54, 1180–1182.
^ Оливейра, Р.Г., Томази, Л., Ровасио, Р.А. и Гиохалас, Л.К. (1999) Увеличение скорости и индукции хемотаксического ответа в сперматозоидах мышей фолликулярными и яйцеводовыми жидкостями . Дж. Репрод. Плодородный. 115, 23–27.
^ Фабро, Г., Ровасио, Р.А., Чивалеро, С., Френкель, А., Каплан, С.Р., Эйзенбах, М. и Гиохалас, Л.К. (2002). Хемотаксис капацитированных сперматозоидов кролика в фолликулярную жидкость, выявленный с помощью нового метода, основанного на направленности. анализ . Биол. Репродукция. 67, 1565–1571.
^ Наварро, М.К., Валенсия, Дж., Васкес, К., Козар, Э. и Вильянуэва, К. (1998) Сырая кобылья фолликулярная жидкость оказывает хемотаксическое воздействие на сперматозоиды жеребцов . Репродукция. Одомашненный. Аним. 33, 321–324.
^ Серрано, Х., Канчола, Э. и Гарсия-Суарес, доктор медицинских наук (2001) Активность по привлечению спермы в фолликулярной жидкости, связанная с белком массой 8,6 кДа . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 283, 782–784.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д Коэн-Даяг А., Тур-Каспа И., Дор Дж., Машиах С. и Айзенбах М. (1995) Капацитация спермы у людей носит временный характер и коррелирует с хемотаксической реакцией на фолликулярные факторы . Учеб. Натл. акад. наук. США 92, 11039–11043.
^ Jump up to: ^а ^б ^с Айзенбах, М. (1999) Хемотаксис сперматозоидов млекопитающих и его связь с капацитацией . Дев. Жене. 25, 87–94.
^ Джайсвал, Б.С. и Айзенбах, М. (2002) Капацитация . В: Оплодотворение (Харди, Д.М., ред.), стр. 57–117. Академическое издательство, Сан-Диего.
^ Коэн-Даяг, А., Ральт, Д., Тур-Каспа, И., Мэнор, М., Маклер, А., Дор, Дж., Машиах, С. и Эйзенбах, М. (1994). Последовательное приобретение Хемотаксическая реакция сперматозоидов человека . Биол. Репродукция. 50, 786–790.
^ Гиохалас, Л.К., Ровасио, Р.А., Фабро, Г., Гакамский, А. и Айзенбах, М. (2004). Время капацитации сперматозоидов, по-видимому, запрограммировано в зависимости от наличия яйцеклеток в женских половых путях . Плодородный. Стерильный. 82, 247–249.
^ Jump up to: ^а ^б ^с Сан Ф., Бахат А., Гакамский А., Гирш Э., Кац Н., Гиохалас Л.С., Тур-Каспа И. и Айзенбах М. (2005) Хемотаксис спермы человека: оба ооцита и окружающие его кумулюсные клетки секретируют хемоаттрактанты сперматозоидов . Хм. Репродукция. 20, 761–767.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и Тевес М.Э., Барбано Ф., Гвидобальди Х.А., Санчес Р., Миска В. и Гиохалас Л.С. (2006). Прогестерон в пикомолярном диапазоне является хемоаттрактантом для сперматозоидов млекопитающих . Плодородный. Стерильный. 86, 745–749.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д Орен-Бенароя Р., Орвието Р., Гакамский А., Пинчасов М. и Айзенбах М. (2008) Хемоаттрактантом спермы, секретируемым кумулюсными клетками человека, является прогестерон . Хм. Репродукция. 23, 2339–2345.
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д Гвидобальди Х.А., Тевес М.Э., Унатес Д.Р., Анастасия А. и Гиохалас Л.С. (2008). Прогестерон из кумулюсных клеток является хемоаттрактантом сперматозоидов, секретируемым кумулюсным комплексом ооцитов кролика . ПЛОС Один 3, e3040.
^ Jump up to: ^а ^б Армон Л., Бен-Ами И., Рон-Эл Р. и Айзенбах М. (2014) Хемоаттрактант спермы, полученный из ооцитов человека, представляет собой гидрофобную молекулу, связанную с белком-носителем . Плодородный. Стерильный. 102, 885–890.
^ Кабальеро-Кампо, П., Буффоне, М.Г., Бененсия, Ф., Конехо-Гарсия, Дж.Р., Ринаудо, П.Ф. и Гертон, Г.Л. (2014) Роль хемокинового рецептора CCR6 в подвижности сперматозоидов и хемотаксисе млекопитающих . Дж. Селл. Физиол. 229, 68–78.
^ Замир Н., Ривен-Крейтман Р., Мэнор М., Маклер А., Блумберг С., Ральт Д. и Айзенбах М. (1993) Предсердный натрийуретический пептид привлекает человеческие сперматозоиды in vitro . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 197, 116–122.
^ Шпер, М., Гиссельманн, Г., Поплавски, А., Риффелл, Дж. А., Ветцель, Ч. Х., Циммер, Р. К. и Хатт, Х. (2003) Идентификация тестикулярного рецептора запаха, опосредующего хемотаксис сперматозоидов человека. ^{[ мертвая ссылка ]}'. Наука 299, 2054–2058.
^ Конг, Н., Сюй, X., Чжан, Ю., Ван, Ю., Хао, X., Чжао, Ю., Цяо, Дж., Ся, Г. и Чжан, М. (2017) Натрийуретический пептид тип C вызывает привлечение сперматозоидов для оплодотворения у мышей. наук. Реп.7, 39711.
^ Бернетт, Л.А., Андерсон, Д.М., Ролз, А., Бибер, А.Л. и Чендлер, Д.Э. (2011) Сперматозоиды мышей демонстрируют хемотаксис по отношению к аллурину, усеченному члену семейства секреторных белков, богатых цистеином . Дев. Биол. 360, 318–328.
^ Сан, Ф., Гиохалас, Л.К., Ровасио, Р.А., Тур-Каспа, И., Санчес, Р. и Айзенбах, М. (2003) Отсутствие видоспецифичности в хемотаксисе сперматозоидов млекопитающих . Дев. Биол. 255, 423–427.
^ Jump up to: ^а ^б Гакамский А., Армон Л. и Айзенбах М. (2009) Поведенческий ответ сперматозоидов человека на скачок концентрации хемоаттрактантов или внутриклеточных циклических нуклеотидов . Хм. Репродукция. 24, 1152–1163.
^ Jump up to: ^а ^б ^с Армон Л. и Айзенбах М. (2011) Поведенческий механизм во время хемотаксиса сперматозоидов человека: участие в гиперактивации . ПЛОС Один 6, e28359.
^ Сугияма, Х. и Чендлер, Д.Э. (2014) Направление спермы к яйцеклетке определяет кальций . Протоплазма 251, 461-475.
^ Стрюнкер Т., Гудвин Н., Бренкер К., Кашикар Н.Д., Вейанд И., Зайферт Р. и Каупп УБ (2011) Канал CatSper опосредует индуцированный прогестероном Ca ²⁺ приток человеческой спермы . Природа 471, 382–386.
^ Jump up to: ^а ^б Lishko, P.V., Botchkina, I.L. and Kirichok, Y. (2011) Progesterone activates the principal Ca ²⁺ канал человеческой спермы . Природа 471, 387–391.
^ Чанг, Х., Ким, Б.Дж., Ким, Ю.С., Суарес, С.С. и Ву, М. (2013) Различные модели миграции сперматозоидов морского ежа и мыши, выявленные с помощью микрофлюидного устройства хемотаксиса . ПЛОС Один 8, e60587.
^ Тевес, М.Э., Гвидобальди, Х.А., Унатес, Д.Р., Санчес, Р., Миска, В., Публиковер, С.Дж., Моралес Гарсия, А.А. и Гиохалас, Л. (2009) Молекулярный механизм хемотаксиса сперматозоидов человека, опосредованный прогестероном . ПЛОС Один 4, e8211.
^ Перес-Сересалес С., Борышполец С. и Айзенбах М. (2015) Поведенческие механизмы управления спермой млекопитающих . Азиат Дж. Андрол. 17, 628-632

Дальнейшее чтение

Майкл Айзенбах (при участии Джозефа В. Ленгелера) (2004). «Хемотаксис». Издательство Имперского колледжа, Лондон.
Майкл Айзенбах и Лаура Сесилия Джохалас (2006). «Наведение спермы у млекопитающих - грунтовая дорога к яйцеклетке». Нат. Преподобный мол. Клеточная Биол. 7, 276–285.
Альварес Л., Фридрих Б.М., Гомппер Г., Каупп. УБ (2013). «Вычислительный сперматозоид». Тенденции клеточной биол.

[1] Пфеффер, В. (1884) Локомоторные направленные движения, вызванные химическими раздражителями . расследование. от д. Ботан. Инст. Тюбинген 1, 363–482.

[miller-2] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Миллер, Р.Л. (1985) Хемоориентация сперматозоидов у многоклеточных животных . В: Биология оплодотворения (Мец, С.Б. и Монрой, А., ред.), стр. 275–337. Академик Пресс, Нью-Йорк.

[cosson-3] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Коссон, член парламента (1990) Хемотаксис спермы . В: Контроль подвижности сперматозоидов: биологические и клинические аспекты (Ганьон, К., ред.), стр. 103–135. CRC Press, Бока-Ратон, Флорида.

[Ilan-4] Jump up to: ^а ^б Айзенбах М. и Тур-Каспа И. (1994) Хемотаксис сперматозоидов человека больше не является загадкой . Плодородный. Стерильный. 62, 233–235.

[5] Каупп, У.Б., Кашикар, Н.Д. и Вейанд, И. (2008) Механизмы хемотаксиса сперматозоидов, Анну. Преподобный физиол. 70, 93–117.

[6] "Профессор Майкл Эйзенбах из мембраны Вейцмана. Научно-исследовательский отдел был вдохновлен начать это исследование несколько лет назад, когда..." «Яйцо в сперму: не звоните нам, мы вам позвоним». Weizmann News (осень 1991 г., стр. 3) . 1991.

[nature-7] Jump up to: ^а ^б Айзенбах М. и Гиохалас Л.К. (2006) Направление спермы у млекопитающих – грунтовая дорога к яйцеклетке . Нат. Преподобный мол. Клеточная Биол. 7, 276–285.

[ralt-8] Jump up to: ^а ^б Ральт Д., Мэнор М., Коэн-Даяг А., Тур-Каспа И., Маклер А., Юли И., Дор Дж., Блумберг С., Машиах С. и Айзенбах , М. (1994) Хемотаксис и хемокинез сперматозоидов человека к фолликулярным факторам . Биол. Репродукция. 50, 774–785.

[Al-Anzi,_B_1998-9] Jump up to: ^а ^б Аль-Анзи Б. и Чандлер Д.Э. (1998) Хемоаттрактант спермы высвобождается из желе яиц Xenopus во время нереста . Дев. Биол. 198, 366–375.

[Maier,_I_1986-10] Jump up to: ^а ^б Майер И. и Мюллер Д.Г. (1986) Половые феромоны в водорослях . Биол. Бык. 170, 145–175.

[11] Старр, Р.К., Марнер, Ф.Дж. и Янике, Л. (1995) Хемоаттрактация мужских гамет феромоном, продуцируемым женскими гаметами хламидомонады . Учеб. Натл. акад. наук. США 92, 641–645.

[12] Олсон, Дж. Х., Сян, XY, Зигерт, Т., Киттельсон, А., Ролз, А., Бибер, А. Л. и Чендлер, Д. Е. (2001) Аллурин, хемоаттрактант сперматозоидов с молекулярной массой 21 кДа из яичного желе Xenopus, связан с белки, связывающие сперму млекопитающих . Учеб. Натл. акад. наук. США 98, 11205–11210.

[13] Йошида М., Инаба К. и Морисава М. (1993) Хемотаксис спермы в процессе оплодотворения у асцидий Ciona-Savigni и Ciona-Intestinalis . Дев. Биол. 157, 497–506.

[14] Йошида М., Инаба К., Исида К. и Морисава М. (1994) Кальций и циклический АМФ опосредуют активацию сперматозоидов, но Ca ²⁺ сам по себе способствует хемотаксису сперматозоидов у асцидий Ciona savigniy . Дев. Рост Диф. 36, 589–595.

[15] Йошида М., Мурата М., Инаба К. и Морисава М. (2002) Хемоаттрактантом для асцидийных сперматозоидов является сульфатированный стероид . Учеб. Натл. акад. наук. США 99, 14831–14836.

[16] Колл, Дж. К. и Миллер, Р. Л. (1992) Природа хемоаттрактантов спермы у кораллов и морских звезд . В: Сравнительная сперматология: 20 лет спустя (Баччетти, Б., ред.), стр. 129–134. Рэйвен Пресс, Нью-Йорк.

[17] Брокоу, CJ (1958) Хемотаксис сперматозоидов папоротника-орляка. Роль бималат-ионов . Дж. Эксп. Зоол. 35, 192–196.

[18] Затыльный К., Марвин Л., Ганьон Дж. и Генри Дж. Л. (2002) Оплодотворение Sepia officinalis: первый пептид моллюсков, привлекающий сперму . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 296, 1186–1193.

[19] Уорд, Дж. Э., Брокоу, С. Дж., Гарберс, Д. Л. и Вакье, В. Д. (1985) Хемотаксис сперматозоидов Arbacia punctulata для реакции на пептид из слоя яичного желе . Дж. Клеточная Биол. 101, 2324–2329.

[20] Миллер Р.Д. и Фогт Р. (1996) N-концевая частичная последовательность хемоаттрактанта спермы Pycnopodia helianthoides массой 13 кДа «стартрак» обладает активностью по привлечению сперматозоидов . Дж. Эксп. Биол. 199, 311–318.

[21] Айзенбах, М. (2004) Хемотаксис. Издательство Имперского колледжа, Лондон.

[22] Миллер, Р.Л. (1997) Специфика хемотаксиса сперматозоидов у мелководных голотурий и офиуроидов Большого барьерного рифа . Дж. Эксп. Зоол. 279, 189–200.

[kaupp-23] Jump up to: ^а ^б ^с Каупп У.Б., Хильдебранд Э. и Вейанд И. (2006) Хемотаксис спермы у морских беспозвоночных - молекулы и механизм . Дж. Селл. Физиол. 208, 487–494.

[24] Морисава, М. (1994). Механизмы клеточной сигнализации подвижности сперматозоидов . Зоол. наук. 11, 647–662.

[macnab-25] Jump up to: ^а ^б Макнаб Р.М. и Кошланд Д.Э. (1972) Механизм восприятия градиента в бактериальном хемотаксисе . Учеб. Натл. акад. наук. США 69, 2509–2512.

[26] Девреотес, П.Н. и Зигмонд, С.Х. (1988) Хемотаксис в эукариотических клетках: фокус на лейкоцитах и Dictyostelium . Annu Rev Cell Biol 4, 649–86.

[27] Каупп, УБ, Солцин, Дж., Хильдебранд, Э., Браун, Дж. Э., Хельбиг, А., Хаген, В., Бейерманн, М., Пампалони, Ф. и Вейанд, И. (2003) Поток сигналов и двигательный ответ, контролирующий хемотаксис сперматозоидов морского ежа . Природная клеточная биол. 5, 109–117.

[28] Бёмер М., Ван К., Вейанд И., Хаген В., Бейерманн М., Мацумото М., Хоши М., Хильдебранд Э. и Каупп УБ (2005) Ca ²⁺ Шипы в жгутике контролируют хемотаксическое поведение сперматозоидов . ЭМБО Дж. 24, 2741–2752.

[29] Абдельгалил, М., Аболекассем, Ю., Таха, Х. (2022) [1] Сперматозоиды морского ежа используют экстремум в поисках контроля, чтобы найти яйцеклетку . Физ. Ред. E 106, L062401

[Ralt,_D._1991-30] Jump up to: ^а ^б Ральт Д., Гольденберг М., Феттерольф П., Томпсон Д., Дор Дж., Машиах С., Гарберс Д.Л. и Айзенбах М. (1991) Привлечение спермы к фолликулярному фактору(ам) коррелирует с оплодотворяемостью яйцеклеток человека . Учеб. Натл. акад. наук. США 88, 2840–2844.

[31] Вильянуэва-Диас, К., Вадильо-Ортега, Ф., Кабли-Амбе, А., Диас-Перес, М.А. и Кривицкий, С.К. (1990). Доказательства того, что фолликулярная жидкость человека содержит хемоаттрактант для сперматозоидов . Плодородный. Стерильный. 54, 1180–1182.

[Oliveira1999-32] Оливейра, Р.Г., Томази, Л., Ровасио, Р.А. и Гиохалас, Л.К. (1999) Увеличение скорости и индукции хемотаксического ответа в сперматозоидах мышей фолликулярными и яйцеводовыми жидкостями . Дж. Репрод. Плодородный. 115, 23–27.

[Fabro2002-33] Фабро, Г., Ровасио, Р.А., Чивалеро, С., Френкель, А., Каплан, С.Р., Эйзенбах, М. и Гиохалас, Л.К. (2002). Хемотаксис капацитированных сперматозоидов кролика в фолликулярную жидкость, выявленный с помощью нового метода, основанного на направленности. анализ . Биол. Репродукция. 67, 1565–1571.

[34] Наварро, М.К., Валенсия, Дж., Васкес, К., Козар, Э. и Вильянуэва, К. (1998) Сырая кобылья фолликулярная жидкость оказывает хемотаксическое воздействие на сперматозоиды жеребцов . Репродукция. Одомашненный. Аним. 33, 321–324.

[35] Серрано, Х., Канчола, Э. и Гарсия-Суарес, доктор медицинских наук (2001) Активность по привлечению спермы в фолликулярной жидкости, связанная с белком массой 8,6 кДа . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 283, 782–784.

[dayag1995-36] Jump up to: ^а ^б ^с ^д Коэн-Даяг А., Тур-Каспа И., Дор Дж., Машиах С. и Айзенбах М. (1995) Капацитация спермы у людей носит временный характер и коррелирует с хемотаксической реакцией на фолликулярные факторы . Учеб. Натл. акад. наук. США 92, 11039–11043.

[review1999-37] Jump up to: ^а ^б ^с Айзенбах, М. (1999) Хемотаксис сперматозоидов млекопитающих и его связь с капацитацией . Дев. Жене. 25, 87–94.

[38] Джайсвал, Б.С. и Айзенбах, М. (2002) Капацитация . В: Оплодотворение (Харди, Д.М., ред.), стр. 57–117. Академическое издательство, Сан-Диего.

[39] Коэн-Даяг, А., Ральт, Д., Тур-Каспа, И., Мэнор, М., Маклер, А., Дор, Дж., Машиах, С. и Эйзенбах, М. (1994). Последовательное приобретение Хемотаксическая реакция сперматозоидов человека . Биол. Репродукция. 50, 786–790.

[40] Гиохалас, Л.К., Ровасио, Р.А., Фабро, Г., Гакамский, А. и Айзенбах, М. (2004). Время капацитации сперматозоидов, по-видимому, запрограммировано в зависимости от наличия яйцеклеток в женских половых путях . Плодородный. Стерильный. 82, 247–249.

[sun2005-41] Jump up to: ^а ^б ^с Сан Ф., Бахат А., Гакамский А., Гирш Э., Кац Н., Гиохалас Л.С., Тур-Каспа И. и Айзенбах М. (2005) Хемотаксис спермы человека: оба ооцита и окружающие его кумулюсные клетки секретируют хемоаттрактанты сперматозоидов . Хм. Репродукция. 20, 761–767.

[Teves,_M.E._2006-42] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и Тевес М.Э., Барбано Ф., Гвидобальди Х.А., Санчес Р., Миска В. и Гиохалас Л.С. (2006). Прогестерон в пикомолярном диапазоне является хемоаттрактантом для сперматозоидов млекопитающих . Плодородный. Стерильный. 86, 745–749.

[Oren-Benaroya,_R._2008-43] Jump up to: ^а ^б ^с ^д Орен-Бенароя Р., Орвието Р., Гакамский А., Пинчасов М. и Айзенбах М. (2008) Хемоаттрактантом спермы, секретируемым кумулюсными клетками человека, является прогестерон . Хм. Репродукция. 23, 2339–2345.

[Guidobaldi,_H.A._2008-44] Jump up to: ^а ^б ^с ^д Гвидобальди Х.А., Тевес М.Э., Унатес Д.Р., Анастасия А. и Гиохалас Л.С. (2008). Прогестерон из кумулюсных клеток является хемоаттрактантом сперматозоидов, секретируемым кумулюсным комплексом ооцитов кролика . ПЛОС Один 3, e3040.

[Armon2014-45] Jump up to: ^а ^б Армон Л., Бен-Ами И., Рон-Эл Р. и Айзенбах М. (2014) Хемоаттрактант спермы, полученный из ооцитов человека, представляет собой гидрофобную молекулу, связанную с белком-носителем . Плодородный. Стерильный. 102, 885–890.

[46] Кабальеро-Кампо, П., Буффоне, М.Г., Бененсия, Ф., Конехо-Гарсия, Дж.Р., Ринаудо, П.Ф. и Гертон, Г.Л. (2014) Роль хемокинового рецептора CCR6 в подвижности сперматозоидов и хемотаксисе млекопитающих . Дж. Селл. Физиол. 229, 68–78.

[47] Замир Н., Ривен-Крейтман Р., Мэнор М., Маклер А., Блумберг С., Ральт Д. и Айзенбах М. (1993) Предсердный натрийуретический пептид привлекает человеческие сперматозоиды in vitro . Биохим. Биофиз. Рез. Коммун. 197, 116–122.

[48] Шпер, М., Гиссельманн, Г., Поплавски, А., Риффелл, Дж. А., Ветцель, Ч. Х., Циммер, Р. К. и Хатт, Х. (2003) Идентификация тестикулярного рецептора запаха, опосредующего хемотаксис сперматозоидов человека. ^{[ мертвая ссылка ]}'. Наука 299, 2054–2058.

[49] Конг, Н., Сюй, X., Чжан, Ю., Ван, Ю., Хао, X., Чжао, Ю., Цяо, Дж., Ся, Г. и Чжан, М. (2017) Натрийуретический пептид тип C вызывает привлечение сперматозоидов для оплодотворения у мышей. наук. Реп.7, 39711.

[50] Бернетт, Л.А., Андерсон, Д.М., Ролз, А., Бибер, А.Л. и Чендлер, Д.Э. (2011) Сперматозоиды мышей демонстрируют хемотаксис по отношению к аллурину, усеченному члену семейства секреторных белков, богатых цистеином . Дев. Биол. 360, 318–328.

[51] Сан, Ф., Гиохалас, Л.К., Ровасио, Р.А., Тур-Каспа, И., Санчес, Р. и Айзенбах, М. (2003) Отсутствие видоспецифичности в хемотаксисе сперматозоидов млекопитающих . Дев. Биол. 255, 423–427.

[Anna-52] Jump up to: ^а ^б Гакамский А., Армон Л. и Айзенбах М. (2009) Поведенческий ответ сперматозоидов человека на скачок концентрации хемоаттрактантов или внутриклеточных циклических нуклеотидов . Хм. Репродукция. 24, 1152–1163.

[Leah2011-53] Jump up to: ^а ^б ^с Армон Л. и Айзенбах М. (2011) Поведенческий механизм во время хемотаксиса сперматозоидов человека: участие в гиперактивации . ПЛОС Один 6, e28359.

[54] Сугияма, Х. и Чендлер, Д.Э. (2014) Направление спермы к яйцеклетке определяет кальций . Протоплазма 251, 461-475.

[55] Стрюнкер Т., Гудвин Н., Бренкер К., Кашикар Н.Д., Вейанд И., Зайферт Р. и Каупп УБ (2011) Канал CatSper опосредует индуцированный прогестероном Ca ²⁺ приток человеческой спермы . Природа 471, 382–386.

[Lishko,_P.V._2011-56] Jump up to: ^а ^б Lishko, P.V., Botchkina, I.L. and Kirichok, Y. (2011) Progesterone activates the principal Ca ²⁺ канал человеческой спермы . Природа 471, 387–391.

[57] Чанг, Х., Ким, Б.Дж., Ким, Ю.С., Суарес, С.С. и Ву, М. (2013) Различные модели миграции сперматозоидов морского ежа и мыши, выявленные с помощью микрофлюидного устройства хемотаксиса . ПЛОС Один 8, e60587.

[58] Тевес, М.Э., Гвидобальди, Х.А., Унатес, Д.Р., Санчес, Р., Миска, В., Публиковер, С.Дж., Моралес Гарсия, А.А. и Гиохалас, Л. (2009) Молекулярный механизм хемотаксиса сперматозоидов человека, опосредованный прогестероном . ПЛОС Один 4, e8211.

[aja-59] Перес-Сересалес С., Борышполец С. и Айзенбах М. (2015) Поведенческие механизмы управления спермой млекопитающих . Азиат Дж. Андрол. 17, 628-632

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 23 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[ 27 ]

[ 28 ]

[ 29 ]

[ 30 ]

[ 31 ]

[ 32 ]

[ 33 ]

[ 34 ]

[ 35 ]

[ 36 ]

[ 37 ]

[ 38 ]

[ 39 ]

[ 40 ]

[ 41 ]

[ 42 ]

[ 43 ]

[ 44 ]

[ 45 ]

[ 46 ]

[ 47 ]

[ 48 ]

[ 49 ]

[ 50 ]

[ 51 ]

[ 52 ]

[ 53 ]

[ 54 ]

[ 55 ]

[ 56 ]

[ 57 ]

[ 58 ]

[ 59 ]