Вложенная полимеразная цепная реакция
Вложенная полимеразная цепная реакция ( вложенная ПЦР ) представляет собой модификацию полимеразной цепной реакции , предназначенную для уменьшения неспецифического связывания продуктов за счет амплификации неожиданных участков связывания праймеров. [1]
Полимеразная цепная реакция
[ редактировать ]Полимеразная цепная реакция сама по себе представляет собой процесс, используемый для амплификации образцов ДНК с помощью температурно-опосредованной ДНК-полимеразы . Продукты можно использовать для секвенирования или анализа, и этот процесс является ключевой частью многих генетических исследовательских лабораторий, а также используется для снятия отпечатков пальцев ДНК в судебно-медицинской экспертизе и других генетических исследованиях человека. Обычная ПЦР требует праймеров, комплементарных концам целевой ДНК. Количество продукта ПЦР увеличивается с увеличением количества температурных циклов, которым подвергается реакция. Часто встречающаяся проблема заключается в том, что праймеры связываются с неправильными участками ДНК, образуя неожиданные продукты. Эта проблема становится более вероятной при увеличении количества циклов ПЦР.
Праймеры
[ редактировать ]Вложенная полимеразная цепная реакция включает два набора праймеров, используемых в двух последовательных запусках полимеразной цепной реакции, причем второй набор предназначен для амплификации вторичной мишени в продукте первого запуска. Это позволяет проводить амплификацию при небольшом количестве прогонов в первом раунде, ограничивая неспецифические продукты. Второй вложенный набор праймеров должен амплифицировать только целевой продукт первого раунда амплификации, а не неспецифический продукт. Это позволяет выполнять больше полных циклов, минимизируя при этом неспецифические продукты. Это полезно для редких шаблонов или ПЦР с высоким фоном.
Процессы
[ редактировать ]Целевая ДНК подвергается первому запуску полимеразной цепной реакции с первым набором праймеров, показанных зеленым цветом. Выбор альтернативных и подобных сайтов связывания праймеров дает выбор продуктов, только один из которых содержит нужную последовательность.
Продукт первой реакции подвергается второму анализу со вторым набором праймеров, показанных красным. Очень маловероятно, что какой-либо из нежелательных продуктов ПЦР содержит сайты связывания для обоих новых праймеров, что гарантирует, что продукт второй ПЦР будет иметь небольшое загрязнение нежелательными продуктами.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Элизабет ван Пелт-Веркуил; Алекс ван Белкум; Джон П. Хейс (14 марта 2008 г.). Принципы и технические аспекты ПЦР-амплификации . Springer Science & Business Media. стр. 190–. ISBN 978-1-4020-6241-4 .
