Pfu ДНК-полимераза
| ДНК-полимераза Pfu | |||
|---|---|---|---|
| Идентификаторы | |||
| Организм | |||
| Символ | pol | ||
| ПДБ | 4ahc | ||
| ЮниПрот | P61875 | ||
| |||
Pfu ДНК-полимераза — это фермент, обнаруженный у гипертермофильных архей Pyrococcus Furiosus , где он копирует ДНК организма во время деления клеток ( термостабильная ДНК-полимераза ). В лабораторных условиях Pfu используется для амплификации ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), где фермент выполняет центральную функцию копирования новой цепи ДНК на каждом этапе удлинения.
Это ДНК-полимераза семейства B. Он имеет 3'-5' экзонуклеазный домен, подобный РНКазе H , типичный для полимеразы B-семейства, такой как ДНК-полимераза II . [1]
Корректирующая способность Pfu полимеразы
[ редактировать ]ДНК-полимераза Pfu обладает превосходной термостабильностью и корректурными свойствами по сравнению с Taq ДНК-полимеразой . В отличие от ДНК-полимеразы Taq , ДНК-полимераза Pfu от 3' до 5' обладает активностью проверки экзонуклеазы , что означает, что по мере сборки ДНК от 5'-конца к 3'-концу экзонуклеазная активность немедленно удаляет нуклеотиды , неправильно включенные на 3'-конце растущей ДНК. Нить ДНК. Следовательно, фрагменты ПЦР, генерируемые ДНК-полимеразой Pfu, будут иметь меньше ошибок, чем вставки ПЦР, генерируемые Taq .
Коммерчески доступный Pfu обычно приводит к частоте ошибок 1 на 1,3 миллиона пар оснований и может давать 2,6% мутированных продуктов при амплификации фрагментов размером 1 т.п.н. с помощью ПЦР. Однако Pfu работает медленнее и обычно требует 1–2 минут за цикл для амплификации 1 КБ ДНК при 72 ° C. Использование ДНК-полимеразы Pfu в реакциях ПЦР также приводит к получению продуктов ПЦР с тупыми концами. [2]
Таким образом, ДНК-полимераза Pfu превосходит ДНК-полимеразу Taq для методов, требующих высокоточного синтеза ДНК, но также может использоваться в сочетании с Taq полимеразой для получения точности Pfu со скоростью активности полимеразы Taq . [3]
История
[ редактировать ]В 1991 году ученые под руководством Эрика Матура из биотехнологической компании Stratagene, базирующейся в Ла-Хойе, Калифорния , обнаружили ДНК-полимеразу Pfu, которая демонстрирует значительно более высокую точность репликации, чем ДНК-полимераза Taq. [4] с дефицитом экзонуклеазы В 1996 году они получили патенты на Pfu и на полную Pfu . [5]
Другие полимеразы из штаммов Pyrococcus, такие как «Deep Vent» ( Q51334 ) из штамма GB-D и ДНК-полимераза Pwo, также нашли применение. [3]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Вид белка InterPro: P61875
- ^ Аджилент Технологии. «Руководство по эксплуатации ДНК-полимеразы PfuTurbo № 600250» (PDF) .
- ^ Jump up to: а б ван Пелт-Веркуил Э., ван Белкум А., Хейс Дж. П. (2008). «Taq и другие термостабильные ДНК-полимеразы». Принципы и технические аспекты ПЦР-амплификации . стр. 103–18. дои : 10.1007/978-1-4020-6241-4_7 . ISBN 978-1-4020-6240-7 .
- ^ Лундберг К.С., Шумейкер Д.Д., Адамс М.В., Шорт Дж.М., Зорге Дж.А., Матур Э.Дж. (декабрь 1991 г.). «Высокоточная амплификация с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, выделенной из Pyrococcus Furiosus». Джин . 108 (1): 1–6. дои : 10.1016/0378-1119(91)90480-у . ПМИД 1761218 .
- ^ Патент США 5 489 523 , патент США 5 545 552.
