Репликация Holling Hairpin
Репликация ручной шпильки ( RHR ) представляет собой однонаправленную форму смещения цепи репликации ДНК, используемой парвовирусами, группа вирусов, которые составляют семейство Parvoviridae . Парвовирусы имеют линейные одноцепочечные геномы ДНК (SSDNA), в которых кодирующая часть генома окружает теломер на каждом конце, которые образуют петли шпильки . Во время RHR эти петли шпильки неоднократно разворачиваются и рефолд, чтобы изменить направление репликации ДНК, так что репликация непрерывно развивается взад и вперед по всему геному. RHR инициируется и завершается эндонуклеазой, кодируемой парвовирусами, которые по -разному называют NS1 или Rep, а RHR аналогичен репликации круга катания , которая используется вирусами ssDNA, которые имеют круглые геномы.
клетки-клеточной клетки Перед началом RHR полимераза ДНК- преобразует геном в дуплексную форму, в которой кодирующая часть является двухцепочечной и соединенной с терминальными шпильками. Оттуда мессенджер РНК (мРНК), которая кодирует белок вирусного инициатора, транскрибируется и транскрибируется для синтеза белка. Белок инициатора начинается с RHR путем связывания и проникновения генома в области, прилегающей к шпильке, называемой источником и устанавливая вилку репликации с его геликазной активностью. Никание приводит к разворачивающейся шпильке в линейную, расширенную форму. Затем теломер воспроизводится, и обе пряди теломерного рефолда вернулись к своим первоначальным формам поворота. Это изменяет вилку репликации, чтобы переключить шаблоны на другую прядь и двигаться в противоположном направлении. При достижении другого конца происходит тот же процесс разворачивания, репликации и рефлекции.
Парвовирусы различаются в зависимости от того, являются ли обе шпильки одинаковыми или разными. Гомотеломерные парвовирусы, такие как адено, ассоциированные вирусы (AAV), т.е. те, которые имеют идентичные или аналогичные теломер, имеют оба конца, реплицируются с помощью разрешения терминала, ранее описанного процесса. Гетеротеломерные парвовирусы, такие как мельчайший вирус мышей (MVM), т.е. те, которые имеют разные теломеры, имеют один конец, реплицируемый с разрешением терминала, а другой - асимметричным процессом, называемым разрешением соединения. Во время асимметричного разрешения соединения дуплексная расширенная форма теломер реорганизуется в перекрестку в крестообразной форме , а правильная ориентация теломер реплицируется от нижней руки крестообразного. В результате RHR синтезируется репликативная молекула, которая содержит многочисленные копии геномов. Инициаторный белок периодически вытекает геномы SSDNA Progeny из этого репликативного соглашения.
Фон
[ редактировать ]Парвовирусы представляют собой семейство вирусов ДНК , которые имеют одноцепочечные геномы ДНК (SSDNA), заключенные в бурные, икосаэдрические белковые капсиды 18–26 нанометров (нм) в диаметре. [ 1 ] В отличие от большинства других вирусов ssDNA, которые имеют круглые геномы, которые образуют петлю, парвовирусы имеют линейные геномы с краткосрочными терминальными последовательностями на каждом конце генома. Эти термины способны быть образованными в структуры, называемые шпильками или петлями шпильки и состоят из коротких, несовершенных палиндромов. [ 2 ] [ 3 ] В зависимости от вируса к вирусу кодирующая область генома составляет 4–6 килобаз (КБ) длиной, а термины - 116–550 нуклеотидов (NT) в длину. Последовательности шпильки предоставляют большую часть цис -фактической информации, необходимой для репликации ДНК и упаковки. [ 1 ] [ 4 ]
Парвовирусные геномы могут быть либо положительным, либо отрицательным смыслом . Некоторые виды, такие как аденоассоциированные вирусы (AAV), такие как AAV2, упаковывают примерно одинаковое количество нити с положительным смыслом и отрицательным смыслом в вирионы, другие, такие как минутный вирус мышей (MVM), демонстрируют предпочтения в отношении негативного упаковки. Sense Strands и другие имеют различные пропорции. [ 4 ] Из-за этого несоответствия 5'-конец (обычно произносится «пять простого конца») цепочки, которая кодирует неструктурные белки, называется «левый конец», а 3'-конец (обычно произносится «три простого конца ") называется« правый конец ». [ 3 ] По ссылке на прядь отрицательного смысла 3'-энд представляет собой левую сторону, а 5'-энд-правая сторона. [ 4 ] [ 5 ]
Парвовирусы повторяют свои геномы посредством процесса, называемой репликацией холмической шпильки (RHR), которая является однонаправленной формой смещения цепи репликации ДНК. Перед репликацией кодирующая часть генома ssDNA превращается в двойную ДНК (DSDNA), которая затем расщепляется вирусным белком для инициирования репликации. Последовательное развертывание и рефлектор терминах шпильки действует, чтобы обратить вспять направление синтеза, что позволяет репликации идти вперед и назад вдоль генома для синтеза непрерывной дуплексной репликативной формы (RF) ДНК. Затем геномы SSDNA потомства иссекаются из РЧ -промежуточного соединения. [ 4 ] [ 6 ] В то время как общие аспекты RHR сохраняются в родах и видах, точные детали, вероятно, различаются. [ 7 ]
Парвовирусные геномы имеют отчетливые начальные точки репликации, которые содержат палиндромические последовательности ДНК. Эти последовательности способны чередоваться между меж- и интратратрально-базовым рисунком на протяжении всей репликации, и они служат самопоглощающими теломерами на каждом конце генома. [ 2 ] Они также содержат два ключевых сайта, необходимые для репликации, используемой белком инициатора: сайт связывания и сайт расщепления. [ 8 ] Последовательности теломер имеют значительную сложность и разнообразие, что позволяет предположить, что они выполняют дополнительные функции для многих видов. [ 1 ] [ 9 ] Например, в MVM левая шпилька содержит сайты связывания для факторов транскрипции, которые модулируют экспрессию генов от соседнего промотора . Для AAV шпильки могут связываться с комплексами MRE11/RAD50/NBS1 (MRN) и гетеродимерами KU70/80, которые участвуют в определении и восстановлении ДНК. [ 5 ] В целом, однако, они имеют ту же основную структуру: несовершенные палиндромы, в которых полностью или в основном базовая область заканчивается в осевую симметрию. Эти палиндромы могут складываться в различные структуры, такие как Y-образная структура и структура в форме крестообразной. Во время репликации термины действуют как петли, в которых несовершенно базовые или частичные крестообразные области, окружающие ось [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]
Некоторые парвовирусы, такие как AAV2, являются гомотеломерскими, что означает, что два палиндромических теломер являются сходными или идентичными и формируют часть более крупных (инвертированных) терминальных повторных последовательностей ((i) TR). Поэтому репликация на каждом конце окончания аналогична. Другие парвовирусы, такие как MVM, являются гетеротеломерными, а это означает, что они имеют два физически разных теломер. В результате гетеротеломерные парвовирусы имеют тенденцию иметь более сложный процесс репликации, поскольку эти два теломеры имеют разные процессы репликации. [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] В целом, гомотеломерные парвовирусы повторяют оба конца через процесс, называемый терминальным разрешением, тогда как гетеротеломерные парвовирусы повторяют один конец с помощью терминального разрешения, а другой - асимметричным процессом, называемым разрешением соединения. [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] [ 10 ] Является ли род гетеро- или гомотеломерным, наряду с другими геномными характеристиками, показан в следующей таблице. [ 4 ]
Общий процесс
[ редактировать ]Весь процесс репликации шпильки, которая имеет различные последовательные этапы, может быть обобщен следующим образом: [ 4 ] [ 5 ] [ 7 ]
- 1. Кодирующая часть генома воспроизводится, начиная с 3'-конца 3'-шпильки, которая действует как праймер и продолжается до тех пор, пока вновь синтезированная нить не будет связана с 5'-конце 5'-шпильки , продуцируя дуплексную молекулу ДНК, которая имеет две нити кодирующей части генома.
- 2. МРНК, которая кодирует белок инициатора репликации вируса транскрибируется и впоследствии транскрибируется как синтезирование белка.
- 3. Инициаторный белок связывается и расщепляет ДНК в пределах области, называемой началом, что приводит к разворачиванию шпильки в линейную, расширенную форму. В то же время белок инициатора устанавливает репликацию вилки с активностью геликазы.
- 4. Шпилька с расширенной формой воспроизводится для создания перевернутой копии теломер на недавно синтезированной цепи.
- 5. Две пряди этого конца рефолд обратно в две шпильки, которые перемещают вилку репликации, чтобы переключить шаблоны и двигаться в противоположном направлении.
- 6. Репликация ДНК продолжается линейно от одного конца к другому, используя противоположную цепь в качестве шаблона.
- 7. После достижения другого конца, шпилька этого конца разворачивается и рефолде, чтобы воспроизвести термин и еще раз обмениваться шаблонами и изменить направление репликации. Эта репликация с обратной стороны постоянно повторяется, создавая концерт из нескольких копий генома.
- 8. Белок вирусного инициатора периодически выпускает отдельные геномные нити ДНК из репликативного соглашения.
- 9. Исправленные геномы ssDNA упаковываются в недавно построенные вирусные капсиды.
Подготовка к репликации
[ редактировать ]После въезда в клеток привязка около 24 нуклеотидов длиной, которая прикрепляет вирусный белок NS1, необходимый в репликации, к вириону расщепляется от вириона, который будет привлечен позже. [ 3 ] После ввода клеток вирионы накапливаются в ядре клеток , в то время как геном все еще содержится в капсиде. Эти капсиды могут быть перенастроены в открытое или переходное состояние во время въезда. Точный механизм, с помощью которого геном покидает капсид, неясен. [ 9 ] Для AAV было высказано предположение, что ядерные факторы разбирают капсид, тогда как для MVM кажется, что геном выбрасывается в направлении от 3'-5 из отверстия в капсиде, называемом порталом. [ 5 ]
У парвовирусов не хватает генов, способных индуцировать покоящиеся клетки входить в фазу синтеза ДНК (S-фаза). Кроме того, обнаженная ssDNA, вероятно, будет нестабильной, воспринимается как иностранная клетка -хозяином или неправильно воспроизведена репарацией ДНК -хозяина . По этим причинам геном должен либо быстро преобразовать в его менее обструктивную, более стабильную дуплексную форму, либо сохранять в капсиде, пока он не будет не покрыт не покрытым во время S-фазы. Как правило, последнее происходит, и вирион остается молчаливым в ядре, пока клетка-хозяина не войдет в S-фазу сам по себе. В течение этого периода ожидания вирионы могут использовать определенные стратегии, чтобы уклониться от механизмов защиты хозяина, чтобы защитить свои шпильки и ДНК для достижения S-фазы, [ 9 ] Хотя неясно, как это происходит. [ 4 ] Поскольку геном упакован в виде SSDNA, перед экспрессией генов необходимо создание дополнительной цепи . [ 5 ] [ 9 ]
ДНК -полимеразы способны синтезировать ДНК только в направлении от 5 до 3 ', и они требуют базового праймера для начала синтеза. Парвовирусы рассматривают эти ограничения, используя их термины в качестве праймеров для дополнительного синтеза цепи. [ 9 ] 3'-гидроксильный конец левого (3 ') пары пары с внутренним основанием в основное начальное синтез ДНК, что приводит к преобразованию генома ssDNA в его первую дуплексную форму. [ 1 ] [ 7 ] Это мономерная двухцепочечная молекула ДНК, в которой две нити ковалентно связаны друг с другом в левом конце одной копией вирусного теломер. Синтез дуплексной формы предшествует экспрессии NS1, так что, когда вилка репликации во время начального синтеза комплементарных цепей достигает правого (5 ') конец, он не вытесняет и не копирует правую шпильку. Это позволяет ковалентному лигированию 3'-конца новой цепи ДНК до 5'-конца правой шпильки лигазой-хозяином, создавая тем самым дуплексную молекулу. На этом этапе последовательность привязки, которая присутствовала до вирусного входа в клетку, восстанавливается. [ 6 ]
Основные вирусные белки и инициация
[ редактировать ]Как только инфицированная клетка входит в S-фазу, геномы парвовируса превращаются в их дуплексную форму с помощью механизма репликации хозяина, а мРНК, которая кодирует неструктурные (NS) белки, транскрибируется, начиная с вирусного промотора (P4 для MVM). [ 4 ] [ 5 ] [ 9 ] Один из этих белков NS обычно называется NS1, но также Rep1 или Rep68/78 для рода Devestoparvovirus , которому принадлежит AAV. [ 4 ] NS1-специфичный для сайта ДНК-связывающий белок, который действует как белок инициатора репликации [ 9 ] через активность никазы. [ 15 ] Он также опосредует удаление обоих концов генома из дуплексных радиочастотных промежуточных продуктов посредством реакции трансэтерификации , которая вводит Ник в специфические последовательности дуплексного происхождения. [ 4 ] Ключевые компоненты NS1 включают эндонуклеазный домен HUH в направлении N-конце белка и суперсемейства 3 (SF3) геликазы к С-конце , [ 16 ] а также активность АТФазы. [ 1 ] Он связывается с SSDNA, RNA и Site-специфически на дуплексной ДНК при ретерикациях тетрануклеотидной последовательности 5'-ACCA-3 ′ 1–3 . [ 1 ] [ 9 ] Эти последовательности присутствуют в сайтах происхождения вирусной репликации и повторяются в нескольких местах по всему геному в более или менее дегенеративных формах. [ 15 ]
NS1 проклевает ковалентно закрытую правую часть теломер посредством реакции трансэтерификации, которая освобождает базовый 3'-нуклеотид в виде свободного гидроксила (-OH). [ 4 ] Этой реакции помогает ДНК-связывающий белок хозяина из семейства группы высокой подвижности 1/2 (HMG1/2) и выполняется в происхождении репликации, Orir , которая была создана последовательностями и непосредственно прилегающей к правой шпильке. Левая теломер MVM, гетеротеломерного парвовируса, содержит последовательности, которые могут вызывать происхождение репликации в дуплексных промежуточных соединениях более высокого порядка, но эти последовательности неактивны в правом конце мономерной молекулы, поэтому NS1 всегда инициирует репликацию справа. конец. [ 6 ]
3'-OH, который освобождается, выступая в качестве праймера для ДНК-полимеразы, чтобы начать синтез комплементарного цепи [ 8 ] в то время как NS1 остается ковалентно прикрепленным к 5'-концу через остаток тирозина . [ 1 ] Следовательно, копия NS1 остается прикрепленной к 5'-энд от всей ДНК RF и потомства на протяжении всей репликации, упаковки и высвобождения вириона. [ 4 ] [ 6 ] NS1 способен связываться только с этим конкретным сайтом, собирая в гомодимеры или мультимеры более высокого порядка, что происходит естественным образом с добавлением аденозинтрифосфата ( АТФ), который, вероятно, опосредован геликазой NS1. Исследования in vivo показали, что NS1 может образовываться в различных олигомерных состояниях, но он, скорее всего, собирается в гексамеры, чтобы выполнить функции как домена эндонуклеазы, так и геликазной домена. [ 15 ]
Начиная с места в Нике, считается, что NS1 организует репликационную вилку и действует как репликативная геликаза от 3'-5. Рядом с его C-конце NS1 содержит кислотный домен активации транскрипции. Этот домен действует для повышения регулирования транскрипции, начиная с вирусного промотора (P38 для MVM), когда NS1 связан с серией 5'-ACCA-3 'мотивов, называемых последовательности TAR , расположенной вверх по течению (к 5'-концу) Промоторная единица, и посредством взаимодействия с NS1 и различными факторами транскрипции. [ 15 ] NS1 также рекрутирует комплекс клеточного репликации белка A (RPA), который необходим для установления новой репликационной вилки и для связывания и стабилизации перемещенных отдельных нитей. [ 6 ]
Хотя NS1 является единственным неструктурным белком, необходимым для всех парвовирусов, у некоторых есть другие отдельные белки, которые необходимы для репликации. Для MVM NS2, по-видимому, перепрограммирует клетку-хозяина для эффективной амплификации ДНК, синтеза потомства с одной цепей, сборки капсида и экспорта вириона, хотя в этих процессах нет прямого участия. NS2 изначально накапливается в три раза быстрее, чем NS1 в ранней S-фазе, но быстро повернут протеасом-опосредованный путь. По мере развития инфекционного цикла NS2 становится реже, так как транскрипция, управляемая p38, становится более заметной. [ 15 ] Другим примером является ядерный фосфопротеин NP1 бокавирусов, который, если не синтезируется, приводит к нежизнеспособным геномам потомства. [ 5 ]
По мере того, как накапливаются вирусные белки NS, они командуют аппараты репликации клеток -хозяина, прекращая синтез ДНК клеток -хозяина и вызывая начало амплификации вирусной ДНК. Вмешательство в репликацию ДНК -хозяина может быть связано с прямым воздействием на белки репликации хозяина, которые не являются необходимыми для репликации вируса, путем обширного проникновения ДНК -хозяина или путем реструктуризации ядра во время вирусной инфекции. В начале инфекции парвовирусы устанавливают фокусы репликации в ядре, которые называются автономными телами репликации, ассоциированных с парвовирусом (APAR). NS1 совместно локализуется с реплицирующей вирусной ДНК в этих структурах с другими клеточными белками, необходимыми для синтеза вирусной ДНК, [ 15 ] в то время как другие комплексы, не требуемые для репликации, подвергаются секвестрии из тел апара. Точный способ, с помощью которого белки включены или исключены из тел апартамента, неясно и, по -видимому, варьируется от видов к видам и между типами клеток. [ 5 ] По мере развития инфекции микродомены APAR начинают объединяться с другими, ранее отчетливыми ядерными телами, образуя постепенно более крупные ядерные включения , где происходит вирусная репликация и сборка вириона. После начала S-фазы клетка-хозяина вынуждена синтезировать вирусную ДНК и не может оставить S-фазу. [ 17 ]
MVM Право-конца
[ редактировать ]Правая шпилька MVM содержит 248 нуклеотидов [ 10 ] организован в крестообразной форме. [ 1 ] Эта область почти идеально базовая, с тремя непарными основаниями на оси и несоответствующая область, расположенная 20 нуклеотидов от оси. Три нуклеотидная вставка, AGA или TCT, на одной цепи разделяют противоположные пары сайтов связывания NS1, создавая 36-базовый палиндром длиной, который может принять альтернативную конфигурацию крестообразной. Ожидается, что эта конфигурация дестабилизирует дуплекс, который облегчает его способность функционировать как шарнир. Несоответствие непарных оснований, а не сама трехнуклеотидной последовательности, может помочь способствовать нестабильности дуплексной ДНК. [ 10 ]
Полностью дуплексные линейные формы последовательности правой шпильки также функционируют как NS1-зависимое происхождение. Однако для многих парвовирусных теломер только сайт связывания инициатора рядом с сайтом NICK требуется для функции происхождения, так что минимальные последовательности, необходимые для проки, имеют длину менее 40 байсов. Для MVM минимальное правое происхождение составляет около 125 байсов в длину и включает в себя большую часть последовательности шпильки, потому что задействовано по меньшей мере три элемента распознавания: NICK Site 5'-CTWWTCA-3 '(элемент 1), расположенные семь нуклеотидов вверх по течению Из дуплексного NS1-связывающего сайта (элемент 2), который ориентирован на прикрепленный комплекс NS1, простирающийся над сайтом NICK, и второй NS1-связывающий сайт (элемент 3), который рядом с осью шпильки. [ 10 ]
Второй сайт связывания находится на расстоянии более 100 баллов от сайта NICK, но необходимо для NS1-опосредованного расщепления. [ 10 ] In vivo существует небольшая вариация в положении ника, плюс или минус один нуклеотид, с предпочтительным положением. Во время пропекания этот сайт, вероятно, подвергается воздействию как единая цепь и потенциально стабилизируется как минимальная петля с стеблем тетрануклеотидными перевернутыми повторами на стороны сайта. Оптимальные формы сайта связывания NS1 содержат не менее трех тандемных копий 5'-ACCA-3 '. Скромные изменения в этих мотивах оказывают только небольшое влияние на аффинность, что позволяет предположить, что каждый мотив тетрануклеотидов распознается различными молекулами в комплексе NS1. Сайт связывания NS1, который позиционирует NS1 над сайтом NICK в правом происхождении, является сайтом с высокой аффинностью. [ 18 ]
С АТФ NS1 асимметрично связывается по вышеупомянутой последовательности, защищая базовые бары области 41 от расщепления. Этот след простирается всего на пять нуклеотидов за пределами 3'-конца от повторного периода ACCA, но 22 нуклеотида за пределами 5'-конца, так что след заканчивается 15 нуклеотидами за пределами сайта, поместив NS1 в положение, чтобы зарегистрировать происхождение. Никание происходит только в том случае, если в начале происхождения также присутствует второй, отдаленный NS1-связывающий сайт, а весь комплекс активируется добавлением HMG1. [ 18 ]
При отсутствии NS1 HMG1 независимо связывает последовательность шпильки, вызывая ее изгибаться, не защищая какую -либо область от пищеварения. HMG1 также может непосредственно связываться с NS1 и опосредует взаимодействия между молекулами NS1, связанными с их элементами распознавания в начале координат, поэтому он важен для образования комплекса расщепления. Способность области оси перенастроить в крестообразное, по -видимому, не важна в этом процессе. Расщепление зависит от правильного расстояния элементов происхождения, поэтому дополнения и делеции могут быть смертельными, тогда как замены можно допустить. Добавление HMG1, по -видимому, лишь слегка регулирует последовательности, защищенные NS1, но конформация промежуточной ДНК изменяется, складываясь в двойную спиральную петлю, которая простирается примерно на 30 подборов через гуаниновый элемент в стебле шпильки. Между этим элементом и сайтом NICL в петлю включены пять остатков тимидина , а сайт имеет область на стороне, содержащая много чередующихся Остатки аденина и тимина , что, вероятно, повышает гибкость. Создание петли, вероятно, позволяет термину принять конкретную трехмерную структуру, необходимую для активации никазы, поскольку происхождение, которые не могут перенастроить в двойную спиртную петлю после добавления HMG1, не вырезаны. [ 18 ]
Терминальное разрешение
[ редактировать ]После пропекания репликационная вилка устанавливается на недавно открытом 3'-нуклеотиде, который продолжает разворачиваться и копировать правую шпильку через серию реакций плавления и повторения. [ 9 ] [ 18 ] Этот процесс начинается однажды, когда NS1 вырезает внутренний конец оригинальной шпильки. Затем терминальная последовательность копируется в противоположном направлении, которое дает перевернутую копию исходной последовательности. [ 9 ] Конечным результатом является дуплексная термин с расширенной формой, которая содержит две копии терминальной последовательности. [ 18 ] Хотя NS1 требуется для этого, неясно, опосредовано ли развертывание его геликазной активностью перед вилкой или путем дестабилизации дуплекса после связывания ДНК в одном из его 5' -(ACCA) N -3 'сайтов распознавания. [ 6 ] Этот процесс обычно называется терминальным разрешением, а также переносом шпильки или разрешением шпильки. [ 6 ] [ 9 ] Терминальное разрешение происходит при каждом раунде репликации, поэтому геномы потомства содержат равное количество каждой терминальной ориентации. Две ориентации называются «Flip» и «Flop», [ 5 ] [ 6 ] и может быть представлен как r и r, или b и b, для переворачивания и провалов правого теломера и L и L, или A и A, для переворачивания и флопа левша теломер. [ 7 ] [ 19 ] Поскольку парвовирусные терминальные палиндромы несовершенны, легко определить, какая ориентация является какой. [ 1 ]
Дуплексные теломер с расширенной формой, генерируемые во время разрешения терминала, расплавляются, опосредованы NS1 с гидролизом АТФ , что заставляет отдельные пряди складываться на себя, чтобы создать шпильку «кроличьи ухи», которые имеют переворачивание и провало Это требует активности NS1 геликазы, а также ее сайт-специфической активности связывания, последняя из которых позволяет NS1 связываться с симметричными копиями NS1-связывающих сайтов, которые окружают ось терминала расширенной формы. [ 10 ] [ 20 ]
Образование уха кролика позволяет 3'-нуклеотид вновь синтезированной цепи ДНК в сочетании с внутренним основанием, которое перемещает вилку репликации в маневрировании переключающих цепей, который использует синтез дополнительных линейных последовательностей. [ 10 ] Переключение от синтеза ДНК на образование кроличьего уха в конце терминального разрешения может потребовать различных типов комплексов NS1. В качестве альтернативы, комплекс NS1 может оставаться нетронутым во время этого переключателя, будучи готовым начать синтез смещения стойки после рефляции в уши кролика. [ 20 ] После того, как вилка репликации пересекается, репликация продолжается к левому концу, используя вновь синтезированную прядь ДНК в качестве матрицы. [ 7 ]
В левом конце генома NS1, вероятно, требуется для развертывания шпильки. NS1, по-видимому, непосредственно участвует в плавлении и реконфигурировании результирующих левых дуплексов в расширенной форме в структуры уха кролика, хотя эта реакция, по-видимому, менее эффективна, чем на правом конце. Димерные и тетрамерные соратники генома генерируются последовательно для MVM. В этих сознаниях чередующиеся геномы длины единицы сливаются через палиндромическое соединение в левом конце и правом и правом и правом ориентациях. [ 1 ] [ 10 ] В общей сложности RHR приводит к кодирующим последовательностям генома, копируемых в два раза чаще, чем терминами. [ 1 ] [ 7 ] [ 10 ] Как линейные, так и конфигурации шпильки правого инициации поддержки обработки теломерного теломеры, поэтому разрешение дуплексных правых до правых соединений может происходить симметрично на базовой дуплексной последовательности или после того, как этот комплекс расплавлен и перенастроен в две шпильки. Неясно, какая из этих двух реакций встречается чаще, поскольку оба, по -видимому, дают идентичные результаты. [ 20 ]
Для AAV каждый теломер составляет 125 основы в длину и способен складываться в T-образную шпильку. AAV содержит ген Rep, который кодирует четыре белка Rep, два из которых, Rep68 и Rep78, действуют как белки инициатора репликации и выполняют те же функции, такие как никаза и геликаза, как NS1. Они распознают и связываются с последовательности (GAGC) 3 в области ствола конца и Ника, сайт 20 оснований, называемых TRS . Тот же процесс разрешения терминала, что и MVM, выполняется для AAV, но на обоих концах. Два других белка Rep, Rep52 и Rep40, не участвуют в репликации ДНК, но участвуют в синтезе потомства. Репликация AAV зависит от вируса помощника, который является либо аденовирусом, либо герпесвирусом, который проводит клетку. В отсутствие коинфекции геном AAV интегрируется в ДНК клетки хозяина до тех пор, пока не произойдет коинфекция. [ 1 ]
Общее правило состоит в том, что парвовирусы с идентичными терминами, т. Е. Гомотеломерные парвовирусы, такие как AAV и B19, повторяют оба конца по разрешению терминала, генерируя равные числа заводов и провалов каждого теломер. [ 1 ] [ 4 ] [ 6 ] Парвовирусы, которые имеют разные термины, т.е. гетеротеломерные парвовирусы, такие как MVM, реплицируют один конец с помощью разрешения терминала, а другой конец асимметричным разрешением соединения, что сохраняет однопоследовательную ориентацию и требует различных структурных расположений и кофакторов для активации никазы NS1. [ 4 ] [ 10 ] Промежуточные соединения ДНК AAV, содержащие ковалентно связанные смысл и антисмысловые цепи, дают геномные конкатемы в условиях денатурирования, что указывает на то, что репликация AAV также синтезирует дуплексных конкатемеров, которые требуют некоторой формы разрешения соединения. [ 10 ]
MVM Left-Tond Origin
[ редактировать ]В геномах MVM с отрицательным смыслом левая шпилька составляет 121 нуклеотид по длине и существует в одной ориентации с последовательности FLIP. Этот теломер имеет Y-образный и содержит небольшие внутренние палиндромы, которые складываются в «уши» Y, дуплексные стволовые области 43 нуклеотиды длиной, которые прерывают асимметричным остатком тимидина, и несвязанную «пузырьковую» последовательность, в которой 5 ′ -GAA-3 'последовательность на внутренней руке противоположна 5'-GA-3' в внешней цепи. [ 1 ] [ 20 ] Последовательности в этой шпильке участвуют как в репликации, так и в регуляции транскрипции. Элементы, участвующие в этих двух функциях, разделяют две руки шпильки. [ 20 ]
Левая теломер MVM и, вероятно, из всех гетеротеломерных парвовирусов, не может функционировать как происхождение репликации в конфигурации шпильки. Вместо этого одно происхождение на нижней цепи создается, когда шпилька развернута, расширена и скопирована, чтобы сформировать дуплексную базовую последовательность, которая охватывает смежные геномы в димере RF. В рамках этой структуры последовательность из подвесной руки, которая окружает GA/TC [ 1 ] Динуклеотид служит происхождением, Oril TC . Эквивалентная последовательность GAA/TTC на внутренней руке, которая содержит тринуклеотид пузырька, называемый ORIL GAA , не служит происхождением. Конфигурация внутренней руки и шпильки конфигурации, по -видимому, функционируют как элементы управления вверх по течению для вирусного транскрипционного промотора P4. Кроме того, способность отделить одну руку от нитиков представляется необходимой для репликации. [ 20 ]
Минимальное линейное левое происхождение составляет около 50 бал длиной и простирается от двух 5'-ACGT-3 'мотива, расположенных на расстоянии пяти нуклеотидов на одном конце, до позиции в семи балках за пределами сайта. Сама последовательность GA пузырька относительно неважна, но пространство, которое он занимает, необходимо для функционирования координат. [ 1 ] [ 20 ] Внутри происхождения существует три последовательности распознавания: NS1-связывающий сайт, который ориентирует комплекс NS1 над 5'-CTWWTCA-3 ', который расположен, который расположен 17 нуклеотидов вниз по течению (к 3'-концу), и два ACGT мотивы. Эти мотивы связывают гетеродимерный клеточный фактор, называемый либо коэффициентом инициации парвовируса (PIF), либо белком связывающего элемента, модулирующего глюкокортикоидный модулирующий элемент (GMEB). [ 21 ]
PIF-это сайт-специфический ДНК-связывающий гетеродимерный комплекс, который содержит две субъединицы, P96 и P79, и функционирует как модулятор транскрипции в ячейке-хозяине. Он связывает ДНК через складку KDWK и распознает два половину ACGT. Расстояние между этими участками может значительно различаться для PIF, от одного до девяти нуклеотидов, с оптимальным расстоянием шести. PIF стабилизирует связывание NS1 в активной форме левого происхождения, ORIL TC , но не в неактивной форме, Oril GAA , потому что два комплекса способны устанавливать контакт через бинуклеотид пузырька. Левая шпилька всех других видов в роду протопарвовируса , [ Примечание 6 ] из которых MVM принадлежит, имеют пузырьковые асимметрии и PIF-связывающие сайты, хотя и с небольшим изменением расстояния. Это говорит о том, что все они имеют аналогичный механизм сегрегации происхождения. [ 21 ]
Асимметричное разрешение соединения
[ редактировать ]Из-за местоположения активного происхождения Oril TC в димерном соединении, синтез новых копий левой шпильки в правильном, IEFLIP, ориентация не является просты Новая ДНК в ориентации флопа. Вместо этого соединение димера MVM левой рукой асимметрично разрешается в процессе, который создает крестообразное промежуточное соединение. Этот маневр выполняет две вещи: он позволяет синтез новой ДНК в правильной ориентации последовательности, и создает структуру, которая может быть разрешена с помощью NS1. Эта «гетерокрацифонная» модель синтеза предполагает, что разрешение обусловлено активностью NS1 геликазы и зависит от неотъемлемой нестабильности дуплексного палиндрома, свойства, которое позволяет переключаться между его линейными и крестообразными конфигурациями. [ 21 ]
Первоначально NS1 представляет одноцепочечный ник в Oril TC в руке B («справа») соединения и становится ковалентно прикрепленным к ДНК на 5'-стороне ника, обнажая базовый 3'-нуклеотид. Затем могут произойти два результата, в зависимости от скорости, с которой собирается репликация вилка. Если сборка является быстрой, то в то время как соединение находится в линейной конфигурации, синтез «чтения» копирует верхнюю цепь, которая восстанавливает дуплексное соединение и вытесняет цепь с положительным смыслом, которая питается обратно в репликативный пул. Это способствует амплификации ДНК MVM, но не приводит к синтезу новых терминальных последовательностей в правильной ориентации или с разрешением соединения. [ 22 ]
Чтобы создать разрешаемую структуру, начальное зарезство должно сопровождаться плавлением и перестановкой димерного соединения в крестообразное. Это обусловлено 3'-5 'геликазной активностью 5'-связанного комплекса NS1. Как только эта крестообразная простирается, чтобы включить последовательности за пределами сайта NICK, открытый праймер на сайте NICL в Oril TC подвергается переключению шаблонов путем отжига с его дополнением в нижней руке крестообразного. Если вилка собирается после этой точки, то последующий синтез разворачивается и копирует нижнюю крестообразную руку. Это создает гетерокрациформное промежуточное соединение, которое содержит вновь синтезированный теломер в ориентации флип -последовательности, которая прикреплена к нижней цепей руки B. [ 22 ] Этот модифицированный соединение называется MJ2. [ 23 ]
Нижняя рука MJ2 является дуплексным палиндром с расширенной формой, которая по существу идентична тем, которые генерируются во время разрешения терминала. Как только MJ2 синтезируется, нижняя рука становится восприимчивой к образованию кролика-ух. Это изменяет 3' -нуклеотид вновь синтезированной копии нижней руки, так что он сочетается с внутренними последовательностями на руке B соединения с синтезом первичного смещения цепи. Если на этом 3' -нуклеотиде создается вилка репликации, то нижкая цепь БАРС, создавая промежуточное соединение, называемое MJ1, и постепенно вытесняет верхнюю цепь. Это приводит к выпуску недавно синтезированной последовательности поворота B (B-TA). Остаточная крестообраза, называемая ΔJ, частично одноцепочечная в верхней части руки B и содержит неповрежденную верхнюю цепь соединения, приготовленная на нижнюю цепь A («левый») с неповрежденной копией Левая шпилька, заканчивая 5'-NS1-комплексом. Поскольку ΔJ несет NS1 -геликазу, предполагается, что она периодически изменяет конфигурацию. [ 22 ] [ 23 ]
Следующий шаг менее уверен, но может быть выведен на основе того, что известно о процессе до сих пор. Ожидается, что NS1 Helicase создаст динамическую структуру, в которой сайт NICK в ΔJ в обычно неактивной стороне временно, но неоднократно обнажается в одноцепочечной форме во время перегруппировки дуплекс-доги в происхождении Орил Гаа без помощи кофактора. Ник оставит NS1 ковалентно прикрепленным к положительному нице «B» ΔJ и приведет к высвобождению этой пряди. Никинг также оставляет открытым базовым 3' -нуклеотидом на «А» цепь ΔJ с первичным синтезом ДНК. Если здесь установлена репликация вилка, то прядь разворачивается и копируется для создания своей дуплексной расширенной формы. [ 23 ]
Когда геномы MVM реплицируются in vivo , вышеупомянутый ник может не возникать, потому что оба конца репликативной формы димера содержат эффективное количество источников правой шпильки. Следовательно, репликационные вилки могут прогрессировать обратно к димерному соединению от правого конца генома, копируя верхнюю прядь руки B перед ником окончательного разрешения. Это обходит разрешение димерного моста и перерабатывает верхнюю прядь в реплицирующий дуплексный димер. В тесно связанном вирусе Luiii одноцепочечный ник выпускает нить положительного смысла с левой шпилькой в ориентации флопа. В отличие от MVM, пакеты Luiii пакеты обоих смысла с одинаковой частотой. В целях с отрицательным смыслом левые шпильки находятся в ориентации FLIP, в то время как в нити положительного смысла существует равное количество ориентаций FLIP и Flop. По сравнению с MVM, Luiii содержит двух базовую вставку сразу 3'-сайта в правом происхождении, что ухудшает ее эффективность. Из-за этого снижение эффективности сборки вилки репликации в правом конце генома может способствовать односторонней нити, давая ему больше времени. [ 23 ]
Синтез потомства
[ редактировать ]Отдельные геномы потомства иссекаются из геномных репликативных конкатемеров, начиная с введения разрывов в происхождение репликации, обычно из белка инициатора репликации. Это приводит к созданию новых вилок репликации, которые реплицируют теломеры в комбинации терминального разрешения и разрешения соединения и вытесняют отдельные геномы ssDNA из репликативной молекулы. [ 7 ] [ 20 ] В конце этого процесса теломеры сложены обратно внутрь, образуя шпильки на удаленных геномах. Термины с расширенной формой, созданные во время удаления, напоминают молекулы расширенной формы перед разрешением клемм, поэтому их можно расплавить и разоблачить в уши кролика для дополнительных раундов репликации. [ 1 ] Таким образом, внутри зараженной ячейки могут возникнуть многочисленные репликативные соглашения. [ 7 ]
Смещение геномов SSDNA потомства либо происходит: преимущественно или исключительно во время активной репликации ДНК, либо когда клетки собирают вирусные частицы. Следовательно, смещение отдельных цепей может быть связано с упаковочной вирусной ДНК в капсиды. Более ранние исследования показали, что предварительно собранная вирусная частица может секвестировать геном в направлении 5'-3 ', поскольку она вытесняется из вилки, но более поздние исследования показывают, что упаковка выполняется в управлении направлением 3'-5' NS1 Helicase с использованием вновь синтезированных отдельных прядей. [ 24 ]
Неясно, выпущены ли эти отдельные цепи в нуклеоплазму, так что упаковочные комплексы физически отделены от комплексов репликации или что промежуточные продукты репликации служат как подложки репликации, так и подложки упаковки. В последнем случае вновь смещенные геномы потомства будут храниться в репликационном комплексе посредством взаимодействий между их 5'-связанными молекулами NS1 и белками NS1 или капсидами, которые физически связаны с репликацией ДНК. [ 24 ] Геномы вставляются в капсид через вход, называемый порталом, расположенным на одной из икосаэдрических 5-кратных оси капсида, [ 4 ] что, возможно, противоположное отверстию, из которого геномы вытесняются на ранних этапах цикла репликации. [ 5 ]
Выбор пряди для инкапдиации, вероятно, не включает конкретные сигналы упаковки, но может быть предсказуем математической моделью кинетической шпильки (KHT), которая объясняет распределение цепей и конечных конформаций упакованных геномов с точки зрения эффективности, с которыми может подвергаются реакциям, которые позволяют его копировать и реформировать. Другими словами, модель KHT постулирует, что относительная эффективность, с которой разрешены и реплицированы два геномных конечных конца быть упакованным с одинаковой эффективностью. [ 4 ] [ 24 ]
Преимущественное удаление определенных геномов очевидно только во время упаковки. Следовательно, среди парвовирусов, которые упаковывают пряди одного смысла, репликация кажется двухфазной. В ранние времена обе пряди вырезаны. За этим следует переключатель в режиме репликации, который позволяет сделать эксклюзивный синтез одного смысла для упаковки. Модифицированная форма модели KHT, называемая моделью предпочтительного смещения цепи, предлагает, чтобы вышеупомянутый переключатель в репликации вызван началом упаковки, поскольку подложка для упаковки, вероятно, является недавно вытесненной молекулой ДНК. [ 24 ] Для гетеротеломерных парвовирусов дисбаланс увольнения происхождения приводит к преимущественному смещению нити негативного смысла из правого происхождения. Поэтому относительная частота смысла цепей в упакованных вирионах может быть использована для определения типа механизма разрешения, используемого во время эксцизии. [ 5 ]
Вскоре после начала S-фазы трансляция вирусной мРНК приводит к накоплению капсидных белков в ядре. Эти белки образуются в олигомеры, которые собираются в неповрежденные пустые капсиды. После инкапсадации полные вирионы могут быть экспортированы из ядра на внешнюю часть клетки перед распадом ядра. Нарушение клеточной среды -хозяина также может произойти позже при инфекции. клеток Это приводит к лизису посредством некроза или апоптоза , который высвобождает вирионы снаружи клетки. [ 4 ] [ 17 ]
Сравнение с репликацией катящегося круга
[ редактировать ]Многие мелкие репликоны, которые имеют круглые геномы, такие как круговые вирусы ssDNA и круглые плазмиды, реплицируются посредством репликации круга катания (RCR), которая является однонаправленной формой смещения цепи репликации ДНК, сходной с RHR. В RCR последовательные раунды репликации, которые продолжаются в цикле вокруг генома, инициируются и прекращаются специфичными для одного цепча транстераза или белок репликации (Rep). Белок инициатора репликации парвовирусов генетически связан с этими другими эндонуклеазами. [ 17 ]
Белки инициатора RCR содержат три мотива, которые считаются важными для репликации. Два из них сохраняются в белках инициатора парвовируса: кластер Huhuuu, который предполагается, что связывается с Mg 2+
Ион, необходимый для пропекания, и мотив YXXXK, который содержит остаток тирозина активного сайта, который атакует фосфодиэфирную связь ДНК-мишени. В отличие от белков инициатора RCR, которые могут объединяться в цепи ДНК, белки инициатора RHR имеют только рудиментарные следы способности выполнять лигирование. [ 17 ]
RCR начинается, когда белок инициатора пропускает цепь ДНК в определенной последовательности в области репликации. Это делается с помощью реакции трансэтерификации, которая образует 5'-фосфатную связь, которая соединяет ДНК с тирозином активного сайта и освобождает 3'-эн-конец гидроксильного (3'-OH), прилегающего к сайту NIC. Затем 3'-конец используется в качестве праймера для ДНК-полимеразы-хозяина, чтобы начать репликацию, в то время как белок инициатора остается прикрепленным к 5'-конце «оригинальной» цепи. После одного цикла репликации вокруг кругового генома, белок инициатора возвращается на сайт NIC Средства топоизомеразы , похожей на реакцию, подготовленную к лике. [ 17 ]
Во время вышеупомянутой реакции белок инициатора расщепляет новый сайт NICK и переносится по всей аналогичной фосфодиэфирной связи. Таким образом, он прикрепляется к новому 5'-концу, в то же время лигируя 5'-конце первой цепи, к которой она была первоначально прикреплена к 3'-конце той же прямой. Этот второй механизм варьируется в зависимости от репликона. Некоторые копии, такие как вирус φx174, содержат второй активный остаток тирозина в белке инициатора. Другие используют аналогичный тирозин активного сайта во втором белке инициатора, который присутствует в рамках мультимерного никазного комплекса. [ 17 ]
Эта вторая реакция на прозвище может произойти после того, как может возникнуть одна петля или последовательные петли, в которых создается конкурс, содержащий несколько копий генома. Результатом этого Ника является то, что смещенные геномы становятся отделенными от репликативной молекулы. Эти копии генома лигируются и могут либо быть инкапсудированы в капсиды потомства, при условии, что они являются мономерными или преобразованы в ковалентно закрытую двухцепочечную форму с помощью ДНК-полимеразы хозяина для дальнейшей репликации. В то время как RHR обычно включает в себя репликацию обеих цепей в непрерывном процессе, RCR имеет комплементарный синтез цепей, а синтез геномных цепей происходит отдельно. [ 7 ]
Стратегии, используемые в RHR для привлечения сайта NICK, также присутствуют в RCR. Большинство истоков RCR находятся в форме дуплексной ДНК, которую нужно расплавлять перед проклятием. Инициаторы RCR достигают этого, связываясь со специфическими ДНК-связывающими последовательностями в исходном происхождении рядом с сайтом инициации. [ 17 ] Последний сайт затем расплавляется в процессе, который потребляет АТФ и способствует способности отделенных цепей перенастроить в структуры стволовых петлей. В этих структурах сайт NICK представлен на открытой петле. Подобно белкам инициаторам RHR, многие белки инициатора RCR содержат активность геликазы, которая позволяет им растопить ДНК перед прокаткой и служить 3'-5 'геликазой в вилке репликации. [ 19 ]
Примечания
[ редактировать ]- ^ В 2019 году род Амбиденсенсовирус был разделен на шесть родов с одноименными имени, префиксированным водными , блатт , полу , пефу- , прото- и scindo- . Эти роды включены в Cotmore, et al. (2019) под названием бывшего рода.
- ^ Этот род включен в Cotmore, et al. (2019) в качестве вида ортоптеранового деновируса 1 , который был переименован и назначен в качестве единственного вида этого рода.
- ^ Этот род включен в Cotmore, et al. (2019) под его прежним именем Brevidensovirus .
- ^ Этот род включен в Cotmore, et al. (2019) под его прежним именем Hepadensovirus .
- ^ Этот род включен в Cotmore, et al. (2019) под его бывшим именем Penstyldensovirus .
- ^ Этот род включен в Kerr, et al. Под его прежним именем Парвовирус .
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k л м не а п Q. Котмор С.Ф., Таттерсолл П. (1996). «Репликация ДНК Парвовируса» (PDF) . Архив монографии Cold Spring Harbor . 31 : 799–813. doi : 10.1101/0,799-813 (неактивный 2024-09-19) . Получено 14 января 2021 года .
{{cite journal}}: CS1 Maint: doi неактивен по состоянию на сентябрь 2024 года ( ссылка ) - ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 171.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 172.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k л м не а п Q. ведущий с Т Cotmore SF, Agbanandje-McKenna M, Canati M, Chiorini JA, Eis-Hunder AM, Mietzsch M, Modha S, Ogliasstro M, Pintel DJ, Pintel DJ, Цю J, Содерлунд-Венерерм M, Tattress P, Tijssen P, Tijsen (Март 2019). "Профиль таксономии вируса ICTV: Parvoviridae " J Gen Virus 100 (3): 367–3 Doi : 10.1099/ jgv.0.0 6537627PMC PMID PMID Получено 14 января
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k л Котмор SF, Tattersall P (1 февраля 2013 г.). «Разнообразие парвовируса и ответы на повреждение ДНК» . Холодный весна Harb Perspect Biol . 5 (2): A012989. doi : 10.1101/cshperspect.a012989 . PMC 3552509 . PMID 23293137 .
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 177.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Мартин Д.П., Биагини П., Лефевр П., Голден М., Румагнек П., Варсани А (сентябрь 2011 г.). «Рекомбинация у эукариотических однократных вирусов ДНК» . Вирусы . 3 (9): 1699–1738. doi : 10.3390/v3091699 . PMC 3187698 . PMID 21994803 .
- ^ Jump up to: а беременный Wawrzyniak P, Plucienniczak G, Bartosik D (30 ноября 2017 г.). «Различные лица репликации вращающегося круга и ее многофункциональных белков инициатора» . Передний микробиол . 8 : 2353. DOI : 10.3389/fmicb.2017.02353 . PMC 5714925 . PMID 29250047 .
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 173.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 179
- ^ Ли К., Падула М.П., Пинелло Н., Уильямс Ш.Х., О'Рурк М.Б., смешная М.Дж., Оркин Дж.Д., Сонг Р., Шабан Б., Бреннер О., Венгер В., Соуза В.М., Мелин А.Д., Вонг Д.Д., Крим М.Дж., Монетт С. Roediger B, Jolly CJ (23 января 2020 года). «Мышиные и связанные с ними ча более нефро-тропические и производят новые вспомогательные белки в инфицированных почках » PLOS Pathog 16 (1): E1 Doi : 10.1371/ journal.pat.1 6999912PMC 31971979PMID
- ^ Pénzes JJ, De Souza WM, Agbandje-McKenna M, Gifford RJ (6 июня 2019 г.). «Древняя линия сильно расходящихся парвовирусов заражает как хозяев позвоночных, так и беспозвоночных» . Вирусы . 11 (6): 525. doi : 10.3390/v11060525 . PMC 6631224 . PMID 31174309 .
- ^ Canuti M, Eis-Huebinger AM, Dejs M, De Vries M, Drexler JF, Oppong SK, Müller MA, Klose SM, Wellinghausen N, Cottontail VM, Kalko EK, Drosten C, Van Der Hoek L (2011). «Два романа парвовируса в летучих мышах о новых и старых странах» . Plos один . 6 (12): E29140. Bibcode : 2011ploso ... 629140c . doi : 10.1371/journal.pone.0029140 . PMC 3246463 . PMID 22216187 .
- ^ Canati M, Williams CV, ниже SR, Jabbink MF, Oude Munnink BB, Jazaeri Farsani SM, Cullen JM, Van der Hoek L (1 декабря 2014 г.). «Постоянная виремия от нового парвовируса в медленной Лорис (Nycticebus coucang) с диффузной исторической саркомой » Передний микробиол 5 : 655. DOI : 10.3389/ fmicb.2014.0 4249460PMC 25520709PMID
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 174.
- ^ Koonin EV, Dolja VV, Krupovic M, Varsani A, Wolf Yi, Yutin N, Zerbini M, Kuhn JH (18 октября 2019 г.). «Создайте мегатаксическую структуру, заполняя все основные таксономические ряды, для вирусов ssDNA» (DOCX) . Международный комитет по таксономии вирусов . Получено 14 января 2021 года .
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 175.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 180.
- ^ Jump up to: а беременный Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 176
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 181.
- ^ Jump up to: а беременный в Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 182.
- ^ Jump up to: а беременный в Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 183.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 184.
- ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Kerr, Cotmore & Bloom 2005 , p. 185.
Библиография
[ редактировать ]- Kerr J, Cotmore S, Bloom Me (25 ноября 2005 г.). Парвовирусы . CRC Press. С. 171–185. ISBN 9781444114782 .