Буфер для радиоиммунопреципитации

Буфер для анализа радиоиммунопреципитации (буфер RIPA) представляет собой буфер для лизиса, используемый для лизиса клеток и тканей для радиоиммунопреципитации (RIPA ) анализа . ^{[ 1 ]}^{[ 2 ]} Этот буфер является более денатурирующим, чем NP-40 или Triton X-100, поскольку он содержит ионные детергенты SDS и дезоксихолат натрия в качестве активных компонентов и особенно полезен для разрушения ядерных мембран при приготовлении ядерных экстрактов. Более сильные детергенты в буфере RIPA (например, SDS) вызывают большую денатурацию белка и уменьшают белок-белковые взаимодействия.

Рецепт

Рецепты буферов RIPA немного различаются у разных авторов и могут включать:

10–50 мМ Трис 10 мМ фосфат натрия ), pH 7–8. -HCl ( вместо него можно использовать
150 мМ NaCl для поддержания осмотического давления вблизи физиологического.
неионогенные детергенты (1% Тритон Х-100 или NP-40 ) для предотвращения неспецифических взаимодействий между белками или с пробиркой.
анионные моющие средства (0,1-0,5% дезоксихолат , 0,1-0,5% ДСН ).

Следующие ингредиенты не являются обязательными и включаются по мере необходимости:

Ингибиторы протеазы (1 мМ PMSF (свежий из 1 М исходного раствора в изопропаноле), 1 мкг/мл каждого лейпептина , апротинина , пепстатина , 1–5 мМ ЭДТА , 0,5–1 мМ ЭГТА , 5 мМ аминокапроновой кислоты ) или коммерческий ингибитор протеазы коктейль (применять согласно инструкции производителя)
1 мМ Na ₃ VO ₄ и Na ₄ P ₂ O ₇ в качестве ингибитора фосфатазы (если важен статус фосфорилирования)
1 мМ NaF в качестве консерванта
5-10 мМ дитиотреит (ДТТ) или β-меркаптоэтанол в качестве восстановителя.

Ссылки

^ Алькарас С., Де Диего М., Пастор М.Дж., Эскрибано Дж.М. (июль 1990 г.). «Сравнение радиоиммунопреципитационного анализа с иммуноблоттингом и ИФА для обнаружения антител к вирусу африканской чумы свиней» . Дж. Вет. Диаг. Инвестируйте . 2 (3): 191–6. дои : 10.1177/104063879000200307 . ПМИД 2094444 .
^ Нгока LC (октябрь 2008 г.). «Подготовка образцов для протеомики рака молочной железы: протеомика и онтология генов выявляют резкие различия в предпочтениях солюбилизации белков при радиоиммунопреципитационном анализе и буферах для лизиса мочевины» . Протеомная наука . 6 (1): 30. дои : 10.1186/1477-5956-6-30 . ПМК 2600628 . ПМИД 18950484 .

Эта по биологии статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее .

[pmid2094444-1] Алькарас С., Де Диего М., Пастор М.Дж., Эскрибано Дж.М. (июль 1990 г.). «Сравнение радиоиммунопреципитационного анализа с иммуноблоттингом и ИФА для обнаружения антител к вирусу африканской чумы свиней» . Дж. Вет. Диаг. Инвестируйте . 2 (3): 191–6. дои : 10.1177/104063879000200307 . ПМИД 2094444 .

[pmid18950484-2] Нгока LC (октябрь 2008 г.). «Подготовка образцов для протеомики рака молочной железы: протеомика и онтология генов выявляют резкие различия в предпочтениях солюбилизации белков при радиоиммунопреципитационном анализе и буферах для лизиса мочевины» . Протеомная наука . 6 (1): 30. дои : 10.1186/1477-5956-6-30 . ПМК 2600628 . ПМИД 18950484 .

[ 1 ]

[ 2 ]