ПМСФ
| |
| |
| Имена | |
|---|---|
| Предпочтительное название ИЮПАК
Фенилметансульфонилфторид | |
| Идентификаторы | |
3D model ( JSmol )
|
|
| КЭБ | |
| ХЭМБЛ | |
| ХимическийПаук | |
| Информационная карта ECHA | 100.005.774 |
| КЕГГ | |
| МеШ | Фенилметилсульфонил+фторид |
ПабХим CID
|
|
| НЕКОТОРЫЙ | |
Панель управления CompTox ( EPA )
|
|
| Характеристики | |
| С 7 Ч 7 Ф О 2 С | |
| Молярная масса | 174.19 g·mol −1 |
| Появление | Пудра |
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа).
| |
В биохимии (инактиватор серингидролазы) , фенилметилсульфонилфторид ( ФМСФ ) представляет собой ингибитор сериновой протеазы обычно используемый при приготовлении клеточных лизатов . PMSF не инактивирует все сериновые протеазы . [ 1 ] Эффективная концентрация PMSF составляет 0,1–1 мМ. Период полувыведения в водных растворах короткий (110 минут при pH 7, 55 минут при pH 7,5 и 35 минут при pH 8, все при 25 °C). [ 2 ] При 4˚C и pH 8 PMSF практически полностью разлагается за 1 день. [ 2 ] Маточные растворы обычно готовят на безводном этаноле , изопропаноле или кукурузном масле и разбавляют непосредственно перед использованием.
в активном центре PMSF специфически реагирует с остатком серина серингидролаз. Он не связывается с другими остатками серина в белке. Это результат гиперактивности этого остатка серина, вызванной специфическими условиями окружающей среды в активном центре фермента ( каталитическая триада ). Поскольку PMSF ковалентно связывается с ферментом, комплекс можно наблюдать с помощью рентгеновской кристаллографии; поэтому его можно использовать в качестве химической метки для идентификации серина важного активного центра фермента.
- Фермент(активный)Ser-OH + F-SO 2 CH 2 C 6 H 5 → Фермент Ser-O-SO 2 CH 2 C 6 H 5 + HF
- Сериновая протеаза + ФМСФ → Необратимый комплекс фермент-ПМС + HF
Средняя смертельная доза составляет 150–215 мг/кг. [ 3 ] [ 4 ] ( инактиватор ацетилхолинэстеразы ). С PMSF следует обращаться только внутри вытяжного шкафа и в перчатках. ДМСО иногда рекомендуется в качестве растворителя для исходных растворов, но его не следует использовать, поскольку он делает неповрежденную кожу проницаемой для ПМСФ.
Стабильность
[ редактировать ]Стабильность ПМСФ в водных растворах низкая, так как он гидролизуется водой. Сообщается, что PMSF стабилен в течение ~ 6 месяцев при -20˚C в ДМСО . [ 5 ] и 9 месяцев при комнатной температуре в 100%-ном изопропаноле . [ 2 ] [ 6 ]
Нечувствительные сериновые ферменты
[ редактировать ]Структура некоторых белков ограничивает доступность сравнительно объемистого PMSF, и поэтому PMSF неактивен в отношении таких сериновых ферментов, как пальмитоилпротеинтиоэстераза . [ 7 ] Альтернативные сульфонилфторидные реагенты, такие как p-APMSF и HDSF , имеют измененный доступ к нативным складчатым белковым структурам и могут реагировать с сериновыми ферментами, с которыми PMSF не может эффективно реагировать. Эта измененная селективность между сульфонилфторидными реагентами использовалась для классификации и выделения определенных типов сериновых ферментов. [ 7 ]
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Дас, Амит К.; Беллицци, Джон Дж.; Тандель, Сагун; Биль, Эдвард; Кларди, Джон; Хофманн, Сандра Л. (2000). «Структурная основа нечувствительности серинового фермента (пальмитоилпротеинтиоэстеразы) к фенилметилсульфонилфториду» . Журнал биологической химии . 275 (31): 23847–23851. дои : 10.1074/jbc.M002758200 . ПМИД 10801859 .
- ^ Jump up to: а б с Г.Т. Джеймс (1978). «Инактивация ингибитора протеаз фенилметилсульфонилфторида в буферах». Аналитическая биохимия . 86 (2): 574–9. дои : 10.1016/0003-2697(78)90784-4 . ПМИД 26289 .
- ^ Майерс, ДК; Кемп, А. (январь 1954 г.). «Ингибирование эстеразы фторидами органических кислот» . Природа . 173 (4392): 33–34. Бибкод : 1954Натур.173...33М . дои : 10.1038/173033a0 . ISSN 1476-4687 . ПМИД 13119739 . S2CID 4164358 .
- ^ Пинский, К.; Дуа, АК; ЛаБелла, ФС (20–27 сентября 1982 г.). «Фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ), вводимый системно, вызывает обратимую налоксоном аналгезию и усиливает эффекты бета-эндорфина, вводимого централизованно» . Науки о жизни . 31 (12–13): 1193–1196. дои : 10.1016/0024-3205(82)90340-х . ISSN 0024-3205 . ПМИД 6292607 .
- ^ «Ингибиторы протеазы 101: лучшие практики использования в лаборатории» . Биоразмер укуса . 30 ноября 2021 г. Проверено 22 июня 2023 г.
- ^ «Полное руководство по ингибированию протеазы» (PDF) . Рош . Проверено 22 июня 2023 г.
- ^ Jump up to: а б Дас, Амит К.; Беллицци, Джон Дж.; Тандель, Сагун; Биль, Эдвард; Кларди, Джон; Хофманн, Сандра Л. (2000). «Структурная основа нечувствительности серинового фермента (пальмитоилпротеинтиоэстеразы) к фенилметилсульфонилфториду» . Журнал биологической химии . 275 (31). Эльзевир Б.В.: 23847–23851. дои : 10.1074/jbc.m002758200 . ISSN 0021-9258 . ПМИД 10801859 .
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Онлайн- база данных MEROPS по пептидазам и их ингибиторам : PMSF.