Электроэлюция

Электроэлюция — это метод, используемый для извлечения нуклеиновой кислоты или образца белка из для электрофореза геля путем подачи отрицательного тока в плоскости наименьшего размера геля, вытягивая макромолекулу на поверхность для экстракции и последующего анализа. [ 2 ] Например, электроблоттинг и препаративный нативный ПААГ основаны на одном и том же принципе . [ 3 ] [ 4 ]
экстракция ДНК
[ редактировать ]Используя этот метод, фрагменты ДНК можно извлечь из определенной области агарозного или полиакриламидного геля. Кусочек геля, содержащий фрагмент, вырезают (вырезают из всего геля) и помещают в диализный мешок с буфером . Электрофорез заставляет ДНК мигрировать из геля в буфер диализного пакета. Фрагменты ДНК извлекают из этого буфера и очищают с помощью фенол-хлороформной экстракции с последующим осаждением этанолом . Этот метод прост, быстр и дает высокую степень извлечения (75%) фрагментов ДНК из кусочков геля. [ 3 ]
Экстракция белка
[ редактировать ]Белки непрерывно элюируются из колонки геля и разделяются на различные фракции в зависимости от их изоэлектрической точки . [ 1 ] Препаративный нативный ПААГ дает более 95% извлечения металлопротеинов . [ 4 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б Кастенхольц Б., Гарфин Д.Е. (2010). «Выделение кислых, основных и нейтральных металлопротеинов с помощью QPNC-PAGE» (PDF) . Предшественники природы : 1–4. дои : 10.1038/npre.2010.4617.1 .
- ^ Зелерт Х., Краузе Ф. (2008). «Препаратное выделение белковых комплексов и других биочастиц путем элюирования из полиакриламидных гелей». Электрофорез . 29 (12): 2617–36. дои : 10.1002/elps.200800061 . ПМИД 18494038 . S2CID 35874355 .
- ^ Перейти обратно: а б Сарсоса-Альварес, Ана Л.; и др. (2010). «Электроэлюирующие фрагменты ДНК» . Журнал визуализированных экспериментов . 43 (43): 2136. дои : 10.3791/2136 . ПМК 3157863 . ПМИД 20834225 .
- ^ Перейти обратно: а б Кастенхольц, Б (2004). «Препаративный непрерывный электрофорез в нативном полиакриламидном геле (PNC-PAGE): эффективный метод выделения кофакторов кадмия в биологических системах». Аналитические письма . 37 (4). Информа Великобритания Лимитед: 657–665. дои : 10.1081/al-120029742 . ISSN 0003-2719 . S2CID 97636537 .