Электроблоттинг
Электроблоттинг – это метод в молекулярной биологии / биохимии / иммуногенетике, позволяющий перенести белки или нуклеиновые кислоты на мембрану с помощью ПВДФ или нитроцеллюлозы после гель-электрофореза . [2] [3] Затем белок или нуклеиновую кислоту можно дополнительно проанализировать с использованием зондов, таких как специфические антитела , лиганды, такие как лектины , или красители. Этот метод можно использовать со всеми полиакриламидными и агарозными гелями. Альтернативным методом переноса белков из геля является капиллярный блоттинг.
Разработка
[ редактировать ]Этот метод был запатентован в 1989 году Уильямом Дж. Литтлхейлсом под названием «Техника электроблоттинга для переноса образцов из полиакриламидного электрофореза или подобного геля на мембрану». [1] [4]
Процедура электроблоттинга
[ редактировать ]Этот метод основан на токе и буферном растворе для переноса белков или нуклеиновых кислот на мембрану. После электрофореза устанавливается стандартный резервуар или полусухая система переноса блоттинга. Стек собирается в следующем порядке от катода к аноду: губка | три листа фильтровальной бумаги, пропитанных буфером для переноса | гель | Мембрана из ПВДФ или нитроцеллюлозы | три листа фильтровальной бумаги, пропитанных буфером для переноса | губка. Необходимо, чтобы мембрана располагалась между гелем и положительно заряженным анодом, поскольку ток и образец будут двигаться в этом направлении. После того, как стопка подготовлена, ее помещают в систему передачи, и в течение подходящего периода времени в зависимости от используемых материалов подается ток подходящей величины.
Обычно после переноса гель для электрофореза окрашивают бриллиантовым синим Кумасси, чтобы убедиться, что перенесено достаточное количество материала. Поскольку белки могут сохранять или восстанавливать часть своей структуры во время блоттинга, они могут реагировать со специфическими антителами, что привело к появлению термина «иммуноблоттинг» . Альтернативно, белки могут реагировать с лигандами, такими как лектины, что дает начало термину аффинный блоттинг.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б РЦ Дубей (2014). Передовая биотехнология . Издательство С. Чанд. стр. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4 .
- ^ Дэвид Шиэн (30 апреля 2013 г.). Физическая биохимия: принципы и приложения . Джон Уайли и сыновья. стр. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2 .
- ^ Депутат Бансал (1 января 2013 г.). Молекулярная биология и биотехнология: основные экспериментальные протоколы . Институт энергетики и ресурсов (ТЕРИ). стр. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4 .
- ^ «Патент США 4840714» . Архивировано из оригинала 29 сентября 2007 г. Проверено 24 мая 2007 г.
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Белковый (вестерн) блоттинг – введение в мембранный перенос антител
- Подробная процедура электроблоттинга в ПВДФ - Лаборатория белковой химии
