Дрожжевой дисплей
Дрожжевой дисплей (или дисплей на поверхности дрожжей ) — это метод белковой инженерии , который использует экспрессию рекомбинантных белков, встроенных в клеточную стенку дрожжей . Этот метод можно использовать для нескольких целей, таких как выделение и разработка антител. [1] и определение взаимодействия хозяин-микроб. [2]
Разработка
[ редактировать ]Техника дрожжевого дисплея была впервые опубликована лабораторией профессора К. Дейна Виттрупа и Эрика Т. Бодера. [3] Технология была продана Abbott Laboratories в 2001 году. [4]
Как это работает
[ редактировать ]Интересующий белок отображается в виде слияния с белком Aga2p на поверхности дрожжей. Белок Aga2p используется дрожжами для обеспечения межклеточных контактов во время спаривания дрожжевых клеток. Таким образом, отображение белка через Aga2p, вероятно, проецирует слитый белок с поверхности клетки, сводя к минимуму потенциальные взаимодействия с другими молекулами на клеточной стенке дрожжей. [ нужна ссылка ] . Использование магнитной сепарации и проточной цитометрии в сочетании с библиотекой дрожжевого дисплея может быть высокоэффективным методом выделения белковых лигандов с высоким сродством практически к любому рецептору посредством направленной эволюции . [ нужна ссылка ]
Преимущества и недостатки
[ редактировать ]Преимущества дрожжевого дисплея перед другими in vitro методами эволюции включают эукариотическую экспрессию и посттрансляционный процессинг, механизмы контроля качества секреторного пути эукариот, минимальные эффекты авидности и количественный скрининг библиотеки посредством сортировки клеток, активируемых флуоресценцией (FACS). [ нужна ссылка ] . Дрожжи — это эукариотические организмы, которые допускают сложные посттрансляционные модификации белков, которые не могут обеспечить никакие другие библиотеки отображения. [ нужна ссылка ] .
К недостаткам относятся меньшие размеры библиотеки мутантов по сравнению с альтернативными методами и дифференциальное гликозилирование в дрожжах по сравнению с клетками млекопитающих. Альтернативными методами эволюции белков in vitro являются дисплей млекопитающих , фаговый дисплей , рибосомный дисплей , бактериальный дисплей и дисплей мРНК. [ нужна ссылка ] .
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Гай, С. Энни; Виттруп, К. Дейн (2007). «Поверхностный дисплей дрожжей для инженерии и характеристики белков» . Современное мнение в области структурной биологии . 17 (4): 467–473. дои : 10.1016/j.sbi.2007.08.012 . ISSN 0959-440X . ПМК 4038029 . ПМИД 17870469 .
- ^ Зоннерт, Николь Д.; Розен, Коннор Э.; Гази, Эндрю Р.; Францоза, Эрик А.; Дункан-Лоуи, Брианна; Гонсалес-Эрнандес, Хайме А.; Гек, Джон Д.; Ян, И; Дай, Йиле; Райс, Тайлер А.; Нгуен, Митьен Т.; Сун, Дэгуан; Цао, Юнь; Мартин, Анжелика Л.; Белецка, Агата А. (апрель 2024 г.). «Интерактом хозяин-микробиота обнаруживает обширную связь между царствами» . Природа . 628 (8006): 171–179. дои : 10.1038/s41586-024-07162-0 . ISSN 1476-4687 . ПМИД 38509360 .
- ^ Бодер, Эрик Т.; Витруп, К. Дейн (1997). «Поверхностный дисплей дрожжей для скрининга комбинаторных полипептидных библиотек». Природная биотехнология . 15 (6): 553–557. дои : 10.1038/nbt0697-553 . ISSN 1087-0156 . ПМИД 9181578 . S2CID 23922281 .
- ^ http://www.news.uiuc.edu/NEWS/01/1221biodisplaytechnology.html.
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Бодер, Э.Т., Виттруп, К.Д.; Биотехнология. Прог., 1998, 14, 55–62.
- Бодер Э.Т., Мидельфорт К.С., Виттруп К.Д.; Proc Natl Acad Sci, 2000, 97(20):10701-10705.
- Графф, К.П., Честер, К., Бегент, Р., Виттруп, К.Д.; Прот. Луг. декабрь. Сел., 2004, 17, 293–304.
- Фельдхаус М., Сигел Р.; Методы молекулярной биологии 263:311–332 (2004).
- Уивер-Фельдхаус, Джейн М; Лу, Цзяньлун; Коулман, Джеймс Р.; Сигел, Роберт В.; Маркс, Джеймс Д.; Фельдхаус, Майкл Дж (2004). «Спаривание дрожжей для создания комбинаторной библиотеки Fab и отображения на поверхности». Письма ФЭБС . 564 (1–2): 24–34. дои : 10.1016/S0014-5793(04)00309-6 . ISSN 0014-5793 . ПМИД 15094038 . S2CID 29737912 .