✖


Jump to content

Фотоактивируемая локализационная микроскопия

Фотоактивируемая локализационная микроскопия ( PALM или FPALM ) [1] [2] и стохастическая оптическая реконструктивная микроскопия (STORM) [3] — это широкопольные (в отличие от методов точечного сканирования, такие как лазерная сканирующая конфокальная микроскопия ) методы визуализации флуоресцентной микроскопии , которые позволяют получать изображения с разрешением, выходящим за пределы дифракционного предела . Эти методы были предложены в 2006 году в связи с повсеместным появлением методов оптической микроскопии сверхвысокого разрешения как «Методы года» в 2008 году и были отмечены журналом Nature Methods . [4] Развитие PALM как целевого метода биофизической визуализации во многом было вызвано открытием новых видов и разработкой мутантов флуоресцентных белков, демонстрирующих контролируемый фотохромизм , таких как фотоактивируемый GFP . Однако в параллельной разработке STORM, основанной на том же фундаментальном принципе, первоначально использовались парные цианиновые красители.Одна молекула пары (называемая активатором) при возбуждении вблизи максимума поглощения служит для реактивации другой молекулы (называемой репортером) в флуоресцентное состояние.

Для PALM, STORM и связанных с ними методов используется все больше красителей, как органических флуорофоров, так и флуоресцентных белков. Некоторые из них совместимы с визуализацией живых клеток, другие позволяют ускорить сбор данных или более плотную маркировку. Выбор конкретного флуорофора в конечном итоге зависит от области применения и его основных фотофизических свойств. [5]

Обе технологии претерпели значительные технические усовершенствования. [6] в частности, позволяет получать многоцветные изображения и расширять их до трех измерений, при этом наилучшее текущее осевое разрешение 10 нм в третьем измерении получается с использованием интерферометрического подхода с двумя противоположными объективами, собирающими флуоресценцию образца. [7]

Принцип

[ редактировать ]
Схематическое изображение реконструкции изображения высокого разрешения путем локализации центроида многих изображений точечных излучателей света низкого разрешения.

Обычная флуоресцентная микроскопия выполняется путем избирательного окрашивания образца флуоресцентными молекулами, либо связанными с антителами, как в иммуногистохимии , либо с использованием флуоресцентных белков, генетически слитых с интересующими генами. Обычно чем выше концентрация флуорофоров, тем лучше контрастность флуоресцентного изображения.

Одиночный флуорофор можно визуализировать под микроскопом (или даже невооруженным глазом). [8] ), если количество испускаемых фотонов достаточно велико, а фон, напротив, достаточно низкий. Двумерное изображение точечного источника, наблюдаемое под микроскопом, представляет собой протяженное пятно, соответствующее диску Эйри (участку функции рассеяния точки ) системы формирования изображений.Возможность идентифицировать два близко расположенных флуорофора как два отдельных объекта ограничена дифракцией света . Это количественно определяется критерием Аббе , утверждающим, что минимальное расстояние который позволяет разрешить два точечных источника, определяется выражением

где — длина волны флуоресцентного излучения, а NA — числовая апертура микроскопа. Теоретический предел разрешения при самой короткой практической длине волны возбуждения составляет около 150 нм в поперечном измерении и приближается к 400 нм в аксиальном измерении (при использовании объектива с числовой апертурой 1,40 и длиной волны возбуждения 400 нм).

Однако если сделать излучение двух соседних флуоресцентных молекул различимым, т.е. фотоны, исходящие от каждой из двух, можно идентифицировать, то можно преодолеть дифракционный предел. [9] Как только набор фотонов от конкретной молекулы собирается, он образует пятно, ограниченное дифракцией, в плоскости изображения микроскопа. Центр этого пятна можно найти, подобрав наблюдаемый профиль излучения к известной геометрической функции, обычно функции Гаусса в двух измерениях. Ошибка, возникающая при локализации центра точечного излучателя, в первом приближении масштабируется как обратный квадратный корень из числа испускаемых фотонов, и если собрано достаточное количество фотонов, легко получить ошибку локализации, намного меньшую, чем исходная точка. функция распространения.

Множественные близко расположенные излучатели неразличимы. Положение точечного источника можно восстановить только в том случае, если излучаемые им фотоны идентифицированы среди фотонов, исходящих от соседних молекул.

Два этапа идентификации и локализации отдельных флуоресцентных молекул в плотной среде, где их много, лежат в основе PALM, STORM и их развития.

Хотя существует множество подходов к молекулярной идентификации, светоиндуцированный фотохромизм выбранных флуорофоров стал наиболее многообещающим подходом к различению соседних молекул путем разделения их флуоресцентного излучения во времени. Включив стохастически редкие подмножества флуорофоров светом определенной длины волны, отдельные молекулы можно затем возбуждать и отображать в соответствии с их спектрами. Чтобы избежать накопления активных флуорофоров в образце, которое в конечном итоге снова деградирует до дифракционно-ограниченного изображения, в PALM используется спонтанно возникающее явление фотообесцвечивания , тогда как обратимое переключение между флуоресцентным включенным состоянием и темным выключенным состоянием в STORM используется краситель.

Фотоактивация, локализация и отбеливание

Таким образом, PALM и STORM основаны на сборе под флуоресцентным микроскопом большого количества изображений, каждое из которых содержит всего несколько активных изолированных флуорофоров.Последовательность визуализации позволяет выполнить множество циклов излучения, необходимых для стохастической активации каждого флуорофора из неизлучающего (или менее излучающего) состояния в яркое состояние и обратно в неизлучающее или обесцвеченное состояние. Во время каждого цикла плотность активированных молекул поддерживается достаточно низкой, чтобы молекулярные изображения отдельных флуорофоров обычно не перекрывались.

Один кадр ПЗС, отображающий отдельные флуоресцентные белки, возбужденные в условиях полного внутреннего отражения.
Последовательность кадров, содержащих изображения одиночных молекул

Локализация отдельных флуорофоров

[ редактировать ]

На каждом изображении последовательности положение флуорофора рассчитывается с точностью, обычно превышающей дифракционный предел - в типичном диапазоне от нескольких до десятков нм - и результирующая информация о положении центров всех локализованных молекулы используются для создания изображений PALM или STORM со сверхвысоким разрешением.

Точность локализации можно рассчитать по формуле:

где N — количество собранных фотонов, a — размер пикселя детектора изображения, – средний фоновый сигнал и — стандартное отклонение функции разброса точки. [10] Требование одновременной локализации нескольких флуорофоров на обширной площади определяет причину, по которой эти методы являются широкопольными, используя в качестве детектора ПЗС- , ЭМКД- или КМОП- камеру.

Требование к улучшенному соотношению сигнал/шум для максимизации точности локализации определяет частое сочетание этой концепции с широкопольными флуоресцентными микроскопами, позволяющими делать оптические срезы, такими как флуоресцентные микроскопы полного внутреннего отражения (TIRF) и флуоресцентные микроскопы с легким листом .

Изображение сверхвысокого разрешения

[ редактировать ]

Разрешение конечного изображения ограничено точностью каждой локализации и количеством локализаций, а не дифракцией. Таким образом, изображение со сверхвысоким разрешением представляет собой пуантилистическое представление координат всех локализованных молекул. Изображение со сверхвысоким разрешением обычно визуализируется путем представления каждой молекулы в плоскости изображения в виде двумерной гауссианы с амплитудой, пропорциональной количеству собранных фотонов, и стандартным отклонением, зависящим от точности локализации.

Самоорганизация сети хемотаксиса Escherichia coli , полученная с помощью световой микроскопии сверхвысокого разрешения. Масштабная линейка (A–E) указывает на 1 мкм. Масштабная линейка (F – H) указывает 50 нм. [11]

Приложения

[ редактировать ]

Многоцветный ПАЛЬМ/ШТОРМ

[ редактировать ]
Стратегии многоцветной локализационной микроскопии. Слева: спектральное разделение. В центре: множественные активаторы (STORM). Справа: Ратиометрическая визуализация.

Особые фотофизические свойства флуорофоров, используемых в визуализации сверхвысокого разрешения PALM/STORM, создают как ограничения, так и возможности для многоцветной визуализации.На данный момент возникли три стратегии: возбуждение спектрально разделенных флуорофоров.с использованием светоделителя излучения, [12] использование нескольких активаторов/репортеров в режиме STORM [13] [14] и логометрическое изображение спектрально близких флуорофоров. [15]

3D в PALM и STORM

[ редактировать ]

Первоначально разработанные как методы визуализации 2D (x,y), PALM и STORM быстро превратились в методы, поддерживающие 3D (x,y,z). Для определения осевого положения одиночного флуорофора в образце в настоящее время используются следующие подходы: модификация функции рассеяния точки для введения z-зависимых особенностей в 2D (x,y) изображение (наиболее распространенный подход — введение астигматизма). в ФПС); многоплоскостное обнаружение , где осевое положение определяется путем сравнения двух изображений одного и того же PSF, расфокусированных одно относительно другого; интерферометрическое определение осевого положения излучателя с использованием двух противоположных объективов и нескольких детекторов; [7] использование временной фокусировки для ограничения возбуждения/активации; использование возбуждения/активации светового листа для ограничения слоя толщиной в несколько сотен нанометров, произвольно расположенного вдоль плоскости z внутри образца.

Визуализация живых клеток

[ редактировать ]

Требование нескольких циклов активации, возбуждения и деактивации/обесцвечивания обычно подразумевает длительные периоды времени для формирования изображения PALM/STORM и, следовательно, работу с фиксированным образцом. Ряд работ опубликован еще в 2007 году. [16] выполнение PALM/STORM на живых клетках.Возможность создания изображений со сверхвысоким разрешением в реальном времени с использованием этих методов в конечном итоге зависит от технических ограничений, связанных с сбором достаточного количества фотонов от одного излучателя за очень короткое время. Это зависит как от фотофизических ограничений зонда, так и от чувствительности используемого детектора. Относительно медленные (от секунд до десятков секунд) процессы, такие как изменение организации фокальных спаек, были исследованы с помощью PALM. [17] тогда как STORM позволил визуализировать более быстрые процессы, такие как мембранная диффузия ямок, покрытых клатрином, или процессы деления / слияния митохондрий.Многообещающим применением PALM живых клеток является использование фотоактивации для отслеживания одиночных частиц с высокой плотностью (sptPALM). [18] ), преодолевая традиционное ограничение отслеживания одиночных частиц для работы с системами, отображающими очень низкую концентрацию флуорофоров.

Нанофотонные взаимодействия

[ редактировать ]

В то время как традиционные измерения PALM и STORM используются для определения физической структуры образца, а интенсивность флуоресцентных событий определяет уверенность в локализации, эти интенсивности также можно использовать для картирования взаимодействий флуорофора с нанофотонными структурами. Это было выполнено как на металлических ( плазмонных ) структурах, таких как золотые наностержни, так и на металлических (плазмонных) структурах. [19] [20] а также полупроводниковые структуры, такие как кремниевые нанопроволоки. [21] Эти подходы могут быть либо использованы для флуорофоров, функционализированных на поверхности интересующего образца (как в случае исследований плазмонных частиц, упомянутых здесь), либо случайным образом адсорбированы на подложке, окружающей образец, что позволяет полностью 2D картировать взаимодействия флуорофор-наноструктура во всех положениях. относительно конструкции. [21]

Эти исследования показали, что, помимо стандартной неопределенности локализации из-за подбора функции рассеяния точки , самоинтерференция со светом, рассеянным наночастицами, может привести к искажениям или смещениям функций рассеяния отображаемой точки. [20] [21] усложняет анализ таких измерений. Однако их можно ограничить, например, путем включения масок метаповерхностей, которые контролируют угловое распределение света, попадающего в измерительную систему. [22]

Отличия от ШТОРМА

[ редактировать ]

PALM и STORM имеют общий фундаментальный принцип, и многочисленные разработки привели к еще большему переплетению этих двух технологий. Тем не менее, они отличаются некоторыми техническими деталями и принципиальным моментом.С технической стороны PALM выполняется на биологическом образце с использованием флуорофоров, экспрессируемых экзогенно в виде генетических конструкций, слитых с фотоактивируемым флуоресцентным белком. Вместо этого STORM использует иммуномечение эндогенных молекул в образце антителами, меченными органическими флуорофорами.В обоих случаях флуорофоры переключаются между активным включенным и неактивным выключенным состояниями под действием света. Однако в PALM фотоактивация и фотообесцвечивание ограничивают срок службы флуорофора ограниченным интервалом времени, и в промежутках между ними желательно непрерывное излучение флуорофора без какой-либо прерывистости флуоресценции. В STORM стохастическое фотомигание органических флуорофоров (обычно более ярких, чем флуоресцентные белки) изначально использовалось для разделения соседних красителей. При этом чем сильнее мигание, тем выше вероятность различить два соседних флуорофора.

В этом отношении в нескольких исследовательских работах изучались возможности PALM для количественного определения количества флуорофоров (и, следовательно, представляющих интерес белков), присутствующих в образце, путем подсчета активированных флуорофоров. [11] [23] [24] Подход, используемый для обработки флуоресцентной динамики флуоресцентной метки, использованной в экспериментах, будет определять окончательный вид изображения сверхвысокого разрешения и возможность определения однозначного соответствия между событием локализации и белком в образце.

Мультимедиа

[ редактировать ]
  • Иммобилизованные флуоресцентные белки фотоактивируются, возбуждаются и обесцвечиваются.
  • Динамическая визуализация дендритных шипов со сверхвысоким разрешением с использованием фотоконвертируемого актина с низким сродством [25]
  • Исследование динамики субпозвоночного актина в нейронах гиппокампа крысы с помощью оптической микроскопии сверхвысокого разрешения [26]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Э. Бетциг; Г.Х. Паттерсон; Р. Сугра; О.У. Линдвассер; С. Оленич; Дж. С. Бонифачино; М.В. Дэвидсон; Дж. Липпинкотт-Шварц; Х. Ф. Гесс (2006). «Визуализация внутриклеточных флуоресцентных белков с нанометровым разрешением» . Наука . 313 (5793): 1642–1645. Бибкод : 2006Sci...313.1642B . дои : 10.1126/science.1127344 . ПМИД   16902090 .
  2. ^ С.Т. Гесс; ТП Гириаджан; Доктор медицины Мейсон (2006). «Визуализация сверхвысокого разрешения с помощью флуоресцентной фотоактивационной локализационной микроскопии» . Биофизический журнал . 91 (11): 4258–4272. Бибкод : 2006BpJ....91.4258H . дои : 10.1529/biophysj.106.091116 . ПМЦ   1635685 . ПМИД   16980368 .
  3. ^ Эм Джей Раст; М. Бейтс; С. Чжуан (2006). «Визуализация в субдифракционном пределе с помощью стохастической оптической реконструкционной микроскопии (STORM)» . Природные методы . 3 (20): 793–796. дои : 10.1038/nmeth929 . ПМК   2700296 . ПМИД   16896339 .
  4. ^ «Метод года 2008» . Природные методы . 6 (1): 1–109. 2009. doi : 10.1038/nmeth.f.244 .
  5. ^ Ха, Тэкджип и Тиннефельд, Филип (2012). «Фотофизика флуоресцентных зондов для биофизики одиночных молекул и визуализации сверхразрешения» . Ежегодный обзор физической химии . 63 (1): 595–617. Бибкод : 2012ARPC...63..595H . doi : 10.1146/annurev-physchem-032210-103340 . ПМЦ   3736144 . ПМИД   22404588 .
  6. ^ Бо Хуан, Хазен Бэбкок и Сяовэй Чжуан (2010). «Преодоление дифракционного барьера: визуализация клеток со сверхразрешением» . Клетка . 143 (7): 1047–58. дои : 10.1016/j.cell.2010.12.002 . ПМК   3272504 . ПМИД   21168201 .
  7. ^ Перейти обратно: а б Штенгель, Глеб и Гэлбрейт, Джеймс А. и Гэлбрейт, Кэтрин Г. и Липпинкотт-Шварц, Дженнифер и Джилетт, Дженнифер М. и Мэнли, Сулиана и Суграт, Рашид и Уотерман, Клэр М. и Канчанавонг, Пакорн и Дэвидсон, Майкл В. и Феттер, Ричард Д. и Хесс, Харальд Ф. (2009). «Интерферометрическая флуоресцентная микроскопия сверхвысокого разрешения позволяет определить трехмерную ультраструктуру клетки» . Труды Национальной академии наук . 106 (9): 3125–3130. Бибкод : 2009PNAS..106.3125S . дои : 10.1073/pnas.0813131106 . ПМЦ   2637278 . ПМИД   19202073 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  8. ^ МЫ Мёрнер; Д. П. Фромм (2003). «Методы флуоресцентной спектроскопии одиночных молекул и индивидуальные зонды флуоресценции». Обзор научных инструментов . 74 (8): 3597–3619. Бибкод : 2003RScI...74.3597M . дои : 10.1063/1.1589587 . S2CID   11615310 .
  9. ^ Э. Бетциг (1995). «Предлагаемый метод молекулярной оптической визуализации». Оптические письма . 20 (3): 237–239. Бибкод : 1995OptL...20..237B . дои : 10.1364/OL.20.000237 . ПМИД   19859146 .
  10. ^ К.И. Мортенсен; Л. С. Черчман; Дж. А. Спудич; Х. Фливбьерг (2010). «Оптимизированный анализ локализации для отслеживания одиночных молекул и микроскопии сверхвысокого разрешения» . Природные методы . 7 (5): 377–381. дои : 10.1038/nmeth.1447 . ПМК   3127582 . ПМИД   20364147 .
  11. ^ Перейти обратно: а б Гринфилд Д., МакЭвой А.Л., Шрофф Х., Крукс Г.Е., Вингрин Н.С. и др. (2009). «Самоорганизация сети хемотаксиса Escherichia coli, полученная с помощью световой микроскопии сверхразрешения» . ПЛОС Биология . 7 (6): e1000137. дои : 10.1371/journal.pbio.1000137 . ПМК   2691949 . ПМИД   19547746 .
  12. ^ Шрофф Х., Гэлбрейт К.Г., Гэлбрейт Дж.А., Уайт Х., Джилетт Дж., Оленич С., Дэвидсон М.В., Бетциг Э. (2007). «Двухцветная визуализация сверхвысокого разрешения генетически экспрессируемых зондов внутри отдельных адгезионных комплексов» . Труды Национальной академии наук . 104 (51): 20308–20313. Бибкод : 2007PNAS..10420308S . дои : 10.1073/pnas.0710517105 . ПМК   2154427 . ПМИД   18077327 .
  13. ^ М. Бейтс; Б Хуан; GT Демпси; Х Чжуан (2007). «Многоцветная визуализация со сверхвысоким разрешением с помощью флуоресцентных датчиков с фотопереключателем» . Наука . 317 (5845): 1749–1753. Бибкод : 2007Sci...317.1749B . дои : 10.1126/science.1146598 . ПМК   2633025 . ПМИД   17702910 .
  14. ^ Бок, Х.; и др. (2007). «Двухцветная флуоресцентная наноскопия в дальнем поле на основе фотопереключаемых излучателей». Прикладная физика Б . 88 (2): 161–165. Бибкод : 2007ApPhB..88..161B . дои : 10.1007/s00340-007-2729-0 . S2CID   122146697 .
  15. ^ Теста I, Вурм К.А., Медда Р., Ротермель Э., фон Миддендорф С., Фоллинг Дж., Якобс С., Шонле А., Хелл С.В., Эггелинг С. (2010). «Многоцветная флуоресцентная наноскопия в фиксированных и живых клетках путем возбуждения обычных флуорофоров одной длиной волны» . Биофизический журнал . 99 (8): 2686–2694. Бибкод : 2010BpJ....99.2686T . дои : 10.1016/j.bpj.2010.08.012 . ПМК   2956215 . ПМИД   20959110 .
  16. ^ Хесс, Сэмюэл Т. и Гулд, Трэвис Дж. и Гудети, Манаса В. и Маас, Сара А. и Миллс, Кевин Д. и Циммерберг, Джошуа (2007). «Динамическое кластерное распределение гемагглютинина, разрешенное при 40 нм в мембранах живых клеток, позволяет различать теории плотов» . Труды Национальной академии наук . 104 (44): 17370–17375. Бибкод : 2007PNAS..10417370H . дои : 10.1073/pnas.0708066104 . ПМК   2077263 . ПМИД   17959773 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  17. ^ Шрофф Х., К.Г. Гэлбрейт, Дж. А. Гэлбрейт и Э. Бетциг (2008). «Фотоактивируемая локализационная микроскопия живых клеток динамики наномасштабной адгезии» . Природные методы . 5 (44): 417–423. дои : 10.1038/nmeth.1202 . ПМК   5225950 . ПМИД   18408726 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  18. ^ С. Мэнли; Дж. М. Джилетт; Г.Х. Паттерсон; Х. Шрофф; Х.Ф. Гесс; Э. Бетциг; Дж. Липпинкотт-Шварц (2008). «Высокоплотное картирование траекторий одиночных молекул с помощью фотоактивируемой локализационной микроскопии» . Природные методы . 5 (2): 155–157. дои : 10.1038/nmeth.1176 . ПМИД   18193054 . S2CID   1101468 .
  19. ^ Чжоу, Сяочунь; Андой, Неша Мэй; Лю, Гокунь; Чоудхари, Эрик; Хан, Кю-Сон; Шен, Хао; Чен, Пэн (2012). «Количественная визуализация со сверхвысоким разрешением выявляет закономерности реакционной способности одиночных нанокатализаторов». Природные нанотехнологии . 7 (4): 237–241. Бибкод : 2012NatNa...7..237Z . дои : 10.1038/nnano.2012.18 . ISSN   1748-3387 . ПМИД   22343380 . S2CID   4654704 .
  20. ^ Перейти обратно: а б Линь, Хунчжэнь; Сентено, Сильвия П.; Су, Лян; Кененс, Барт; Роча, Сусана; Слива, Мишель; Хофкенс, Йохан; Уджи-и, Хироши (2012). «Картирование поверхностно-усиленной флуоресценции на металлических наночастицах с использованием локализационной микроскопии фотоактивации сверхразрешения». ХимияФизХим . 13 (4): 973–981. дои : 10.1002/cphc.201100743 . ISSN   1439-4235 . ПМИД   22183928 .
  21. ^ Перейти обратно: а б с Джолин, Эрик; Солари, Якопо; Манн, Сандер А.; Ван, Цзя; Симидзу, Томас С.; Гарнетт, Эрик К. (2016). «Визуализация взаимодействий света и материи со сверхвысоким разрешением вблизи одиночных полупроводниковых нанопроволок» . Природные коммуникации . 7 : 13950. Бибкод : 2016NatCo...713950J . дои : 10.1038/ncomms13950 . ISSN   2041-1723 . ПМК   5187462 . ПМИД   27996010 .
  22. ^ Баклунд, Микаэль П.; Арбаби, Амир; Петров, Петар Н.; Арбаби, Эхсан; Саурабх, Саумья; Фараон, Андрей; Мёрнер, МЫ (2016). «Устранение смещений локализации, вызванных ориентацией, в микроскопии одиночных молекул с использованием широкополосной маски метаповерхности» (PDF) . Природная фотоника . 10 (7): 459–462. Бибкод : 2016NaPho..10..459B . дои : 10.1038/nphoton.2016.93 . ISSN   1749-4885 . ПМК   5001689 . ПМИД   27574529 .
  23. ^ П Аннибале; С Ванни; М. Скарселли; У Ротлисбергера; Раденович (2011). «Количественная фотоактивируемая локализационная микроскопия: выяснение эффектов фотомигания» . ПЛОС ОДИН . 6 (7): стр.e22678, 07. Бибкод : 2011PLoSO...622678A . дои : 10.1371/journal.pone.0022678 . ПМК   3144238 . ПМИД   21818365 .
  24. ^ Ли, Сан-Хёк и Шин, Джэ Йен и Ли, Энтони и Бустаманте, Карлос (2012). «Подсчет одиночных фотоактивируемых флуоресцентных молекул с помощью фотоактивируемой локализационной микроскопии (PALM)» . Труды Национальной академии наук . 109 (43): 17436–17441. Бибкод : 2012PNAS..10917436L . дои : 10.1073/pnas.1215175109 . ПМЦ   3491528 . ПМИД   23045631 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  25. ^ Изеддин И., Шпехт К.Г., Лелек М., Дарзак Х., Триллер А. и др. (2011). «Динамическая визуализация дендритных шипов со сверхразрешением с использованием фотоконвертируемого актинового зонда с низким сродством» . ПЛОС ОДИН . 6 (1): e15611. Бибкод : 2011PLoSO...615611I . дои : 10.1371/journal.pone.0015611 . ПМК   3022016 . ПМИД   21264214 .
  26. ^ Татаварти В, Ким Э, Родионов В, Ю Дж (2009). «Исследование динамики актина подпозвоночного отдела в нейронах гиппокампа крысы с помощью оптической визуализации сверхразрешения» . ПЛОС ОДИН . 4 (11): е7724. Бибкод : 2009PLoSO...4.7724T . дои : 10.1371/journal.pone.0007724 . ПМЦ   2771285 . ПМИД   19898630 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Photoactivated_localization_microscopy&oldid=1224522459"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 245dbbc7d44a91f39b4c330567883b7b__1716059220
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/24/7b/245dbbc7d44a91f39b4c330567883b7b.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Photoactivated localization microscopy - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)