✖


Jump to content

Световая листовая флуоресцентная микроскопия

Принципиальная установка светового флуоресцентного микроскопа.

Световая листовая флуоресцентная микроскопия ( LSFM ) представляет собой метод флуоресцентной микроскопии с диапазоном от среднего до высокого. [1] оптическое разрешение , но хорошие возможности оптического секционирования и высокая скорость. В отличие от эпифлуоресцентной микроскопии только тонкий срез (обычно от нескольких сотен нанометров до нескольких микрометров) образца освещается перпендикулярно направлению наблюдения. Для освещения используется лазерный световой лист, т.е. лазерный луч, фокусируемый только в одном направлении (например, с помощью цилиндрической линзы). Второй метод использует круговой луч, сканируемый в одном направлении, для создания светового листа. Поскольку освещается только фактически наблюдаемый участок, этот метод снижает фотоповреждения и стресс, вызываемый живым образцом. Кроме того, хорошие возможности оптического разделения уменьшают фоновый сигнал и, таким образом, создают изображения с более высокой контрастностью, сравнимой с конфокальной микроскопией . Поскольку световая листовая флуоресцентная микроскопия сканирует образцы, используя плоскость света вместо точки (как в конфокальной микроскопии), она может получать изображения со скоростью от 100 до 1000 раз быстрее, чем те, которые предлагаются методами точечного сканирования.

Сравнение различных способов освещения при микроскопии (LSFM: световая листовая флуоресцентная микроскопия, WF: широкопольная микроскопия, CF: конфокальная микроскопия). Световая листовая флуоресцентная микроскопия сочетает в себе хорошее Z-срезирование (как конфокальное) и освещает только наблюдаемую плоскость.

Этот метод используется в клеточной биологии. [2] и для микроскопии интактных, часто химически очищенных органов, эмбрионов и организмов. [3]

Начиная с 1994 года, световая листовая флуоресцентная микроскопия была разработана как флуоресцентная ортогональная плоскостная оптическая микроскопия срезов или томография (OPFOS). [4] в основном для больших образцов, а затем и для микроскопии с селективным/одноплоскостным освещением (SPIM), а также с субклеточным разрешением. [5] Это ввело в флуоресцентную микроскопию схему освещения, которая уже успешно использовалась в темнопольной микроскопии под названием ультрамикроскопия . [6]

Настраивать

[ редактировать ]

Базовая настройка

[ редактировать ]
Иллюстрация различных вариантов реализации светового флуоресцентного микроскопа. Подробности смотрите в тексте. Обозначения: CAM = камера, TL = трубчатая линза, F = фильтр, DO = объектив обнаружения, S = образец, SC = камера для образца, PO = проекционный объектив, CL = цилиндрическая линза, SM = сканирующее зеркало.

В этом типе микроскопии [7] освещение делается перпендикулярно направлению наблюдения (см. схематическое изображение вверху статьи). Расширенный луч лазера фокусируется только в одном направлении с помощью цилиндрической линзы или комбинации цилиндрической линзы и объектива микроскопа , поскольку последний доступен с лучшим оптическим качеством и с более высокой числовой апертурой , чем первый. Таким образом, в фокальной области создается тонкий световой лист или световой лист, который можно использовать для возбуждения флуоресценции только в тонком срезе (обычно толщиной в несколько микрометров) образца.

Флуоресцентный свет, излучаемый световым листом, затем собирается перпендикулярно стандартным объективом микроскопа и проецируется на датчик изображения (обычно ПЗС-матрицу , ПЗС-матрицу с электронным умножением или КМОП-камеру ). Чтобы оставить достаточно места для оптики возбуждения/светового листа, используется объектив наблюдения с большим рабочим расстоянием. В большинстве световых флуоресцентных микроскопов объектив обнаружения, а иногда и объектив возбуждения полностью погружены в буфер для образца, поэтому обычно образец и оптика возбуждения/детектирования встроены в заполненную буфером камеру для образца, которую также можно использовать для контроля условия окружающей среды (температура, уровень углекислого газа...) во время измерения. Монтаж образца в световой листовой флуоресцентной микроскопии более подробно описан ниже.

Поскольку для формирования изображения и световой лист возбуждения, и фокальная плоскость оптики обнаружения должны совпадать, фокусировку различных частей образца невозможно выполнить путем перемещения объектива обнаружения, но обычно вместо этого перемещается и вращается весь образец.

Расширение основной идеи

[ редактировать ]

В последние годы было разработано несколько расширений этой схемы:

  • Использование двух встречных световых листов помогает уменьшить типичные артефакты микроскопии с выборочным плоскостным освещением, такие как затенение (см. первый z-стек выше). [8]
  • Помимо встречных световых листов в 2012 году была предложена установка с обнаружением с двух противоположных сторон. [9] [10] Это позволяет быстрее измерять z- и ротационные суммирования для полной трехмерной реконструкции образца.
  • Световой лист также можно создать путем сканирования обычного лазерного фокуса вверх и вниз. [11] Это также позволяет использовать самовосстанавливающиеся лучи (такие как лучи Бесселя или лучи Эйри ) для освещения, которые улучшают проникновение светового листа в толстые образцы, поскольку снижается негативное влияние рассеяния на световой лист. [12] [13] [14] [15] Эти самовосстанавливающиеся лучи можно модифицировать для противодействия потерям интенсивности с использованием методов компенсации затухания, что еще больше увеличивает сигнал, собираемый изнутри толстых образцов. [16]
  • В косой плоскостной микроскопии (OPM) [17] Объект обнаружения также используется для создания светового листа: световой лист теперь излучается из этого объектива под углом около 60 °. Дополнительная оптика используется для наклона фокальной плоскости, используемой для обнаружения, на тот же угол.
  • Световая листовая флуоресцентная микроскопия также сочетается с двухфотонным (2P) возбуждением , что улучшает проникновение в толстые и рассеивающие образцы. [18] Использование возбуждения 2P в длинах волн ближнего инфракрасного диапазона использовалось для замены возбуждения 1P в длинах волн синего и видимого диапазона в экспериментах по визуализации мозга, включающих реакцию на зрительные стимулы. [19]
  • Микроскопию с селективным плоским освещением также можно комбинировать с такими методами, как корреляционная спектроскопия флуоресценции , чтобы обеспечить измерение подвижности флуоресцентных частиц с пространственным разрешением (например, флуоресцентных шариков, квантовых точек или флуоресцентно меченных белков) внутри живых биологических образцов. [20] [21]
  • Также сообщалось о комбинации микроскопа с селективным плоским освещением и камерой со стробируемым усилителем изображения, которая позволила измерить карту времени жизни флуоресценции ( отображение времени жизни флуоресценции , FLIM). [22]
  • Световая листовая флуоресцентная микроскопия была объединена с методами микроскопии сверхвысокого разрешения, чтобы улучшить ее разрешение за пределами предела Аббе. [23] [24] комбинация микроскопии с обеднением стимулированного излучения (STED) и микроскопии с селективным плоским освещением, которая приводит к уменьшению толщины светового листа из-за эффекта микроскопии с обеднением стимулированного излучения. Также была опубликована [25] См. также раздел о разрешающей способности световой флуоресцентной микроскопии ниже.
  • Световая листовая флуоресцентная микроскопия была модифицирована для совместимости со всеми объективами, даже с объективами с масляной иммерсией на основе покровных стекол и высокой числовой апертурой для увеличения собственного пространственного разрешения и эффективности обнаружения флуоресценции. [26] Этот метод включает наклон светового листа относительно цели обнаружения под точным углом, чтобы позволить световому листу сформироваться на поверхности покровных стекол.
  • В 2012 году световая флуоресцентная микроскопия была объединена с методами адаптивной оптики для улучшения глубины визуализации толстых и неоднородных образцов на глубине 350 мкм. [27] Датчик волнового фронта Шака Хартмана был расположен на пути обнаружения, а опорные звезды использовались в замкнутом контуре обратной связи. В своей диссертации [28] автор обсуждает преимущества использования адаптивной оптики как в освещении, так и в пути обнаружения светового флуоресцентного микроскопа для коррекции аберраций, вызванных образцом.

Пример монтажа

[ редактировать ]
Различные типы крепления образцов для световой листовой флуоресцентной микроскопии: эмбрион, помещенный в подвесной цилиндр с гелем, выращивание растений в поддерживаемом цилиндре с гелем, прикрепившиеся клетки на стекле, жидкий образец в пакете для образцов.

Разделение путей освещения и детектирования в флуоресцентной микроскопии световых листов (за исключением микроскопии в наклонной плоскости ) создает необходимость в специализированных методах крепления образцов. На сегодняшний день большинство световых флуоресцентных микроскопов построены таким образом, что путь луча освещения и обнаружения лежит в горизонтальной плоскости (см. иллюстрации выше), поэтому образец обычно подвешивается сверху в камеру для образца или опирается на вертикальную опору. внутри камеры для образцов. Для крепления всевозможных образцов было разработано несколько методов:

  • Фиксированные (и, возможно, также очищенные) образцы можно приклеить к простой опоре или держателю и оставаться в фиксирующем растворе во время визуализации.
  • Более крупные живые организмы обычно вводят успокоительное и помещают в цилиндр из мягкого геля, который выдавливается из (стеклянного или пластикового) капилляра, свисающего сверху в камеру для проб.
  • Прикрепившиеся клетки можно выращивать на небольших стеклянных пластинках, подвешенных в камере для образцов.
  • Растения можно выращивать в прозрачных гелях, содержащих питательную среду. Гели обрезаются в месте визуализации, поэтому они не ухудшают световой лист и качество изображения из-за рассеяния и поглощения. [29]
  • Жидкие образцы (например, для флуоресцентной корреляционной спектроскопии ) можно поместить в небольшие пакеты, изготовленные из тонкой пластиковой фольги, показатель преломления которой соответствует показателю преломления окружающей иммерсионной среды в камере для образцов. [21]

Были разработаны некоторые световые флуоресцентные микроскопы, в которых образец монтируется, как в стандартной микроскопии (например, клетки растут горизонтально на дне чашки Петри ), а оптика возбуждения и обнаружения расположена в вертикальной плоскости сверху. Это также позволяет комбинировать световой флуоресцентный микроскоп со стандартным инвертированным микроскопом и позволяет избежать необходимости использования специальных процедур крепления образцов. [20] [30] [31] [32]

Свойства изображения

[ редактировать ]

Типичные режимы визуализации

[ редактировать ]

Большинство световых флуоресцентных микроскопов используются для создания трехмерных изображений образца путем перемещения образца через плоскость изображения. Если образец больше, чем поле зрения датчика изображения, образец также необходимо сместить вбок. Альтернативный подход — переместить плоскость изображения через образец для создания стека изображений. [32]

Можно проводить длительные эксперименты, например, со стопками, записываемыми каждые 10–10 минут в течение нескольких дней. Это позволяет изучать изменения с течением времени в 3D, или так называемой 4D-микроскопии.

После получения изображения различные стопки изображений регистрируются для формирования одного набора 3D-данных. Можно собрать несколько представлений выборки, меняя роли целей. [32] или путем вращения образца. [8] Наличие нескольких представлений может дать больше информации, чем один стек; например, можно устранить закупорку некоторых частей образца. Несколько представлений также улучшают разрешение 3D-изображения, устраняя плохое осевое разрешение, как описано ниже.

В некоторых исследованиях также используется микроскоп с селективным плоским освещением для изображения только одного среза образца, но с гораздо более высоким временным разрешением. Это позволяет, например, наблюдать за бьющимся сердцем эмбриона данио в режиме реального времени. [33] Вместе с этапами быстрого перемещения образца было реализовано высокоскоростное 3D-отслеживание частиц. [34]

Сила разрешения

[ редактировать ]

Латеральное разрешение микроскопа с селективным плоским освещением сравнимо с разрешением стандартного (эпи) флуоресцентного микроскопа, поскольку оно полностью определяется объективом обнаружения и длиной волны обнаруживаемого света (см. Предел Аббе ). Например, для обнаружения в зеленой области спектра около 525 нм можно достичь разрешения 250–500 нм. [7] Осевое разрешение хуже, чем латеральное (примерно в 4 раза), но его можно улучшить, используя более тонкий световой лист, и в этом случае возможно почти изотропное разрешение. [20] Более тонкие световые листы либо являются тонкими только в небольшой области (для гауссовых лучей ), либо необходимо использовать специальные профили лучей, такие как лучи Бесселя (помимо дополнительной сложности, такие схемы добавляют боковые лепестки, которые могут быть вредными). [13] Альтернативно, изотропное разрешение может быть достигнуто путем вычислительного объединения стопок трехмерных изображений, взятых из одного и того же образца под разными углами. Затем информация о разрешении по глубине, отсутствующая в одном стеке, поступает из другого стека; например, в случае двух ортогональных стопок осевое направление (с низким разрешением) в одной стопке является поперечным направлением (с высоким разрешением) в другой стопке.

Латеральное разрешение световой листовой флуоресцентной микроскопии может быть улучшено сверх предела Аббе, используя методы микроскопии сверхвысокого разрешения , например, используя тот факт, что отдельные флуорофоры могут быть расположены с гораздо более высокой пространственной точностью, чем номинальное разрешение используемой оптической системы ( см. методы стохастической локализационной микроскопии ). [23] В листовой микроскопии со структурированным освещением методы структурированного освещения были применены для дальнейшего улучшения оптической способности секционирования световой листовой флуоресцентной микроскопии. [24]

Полосатые артефакты

[ редактировать ]
Вверху: полосатые артефакты в световой флуоресцентной микроскопии. Внизу: уменьшение артефактов полос путем поворота.

Поскольку освещение обычно проникает в образец с одной стороны, препятствия, стоящие на пути светового листа, могут нарушить его качество, рассеивая и/или поглощая свет. Обычно это приводит к появлению темных и ярких полос на изображениях. Если части образцов имеют значительно более высокий показатель преломления (например, липидные везикулы в клетках), это также может привести к эффекту фокусировки, приводящему к появлению ярких полос позади этих структур. Чтобы преодолеть этот артефакт, световые листы могут, например, быть «поворотными». Это означает, что направление падения светового листа быстро меняется (с частотой ~1 кГц) на несколько градусов (~10°), поэтому свет также попадает в области за препятствиями. Освещение также можно выполнить с помощью двух (поворотных) световых листов (см. выше), чтобы еще больше уменьшить эти артефакты. [8] В качестве альтернативы был разработан алгоритм Variational Stationary Noise Remover (VSNR), который доступен в виде бесплатного плагина Fiji. [35]

История

[ редактировать ]

В начале 20 в. Р. А. Жигмонди ввел ультрамикроскоп как новую схему освещения в темнопольную микроскопию. Здесь для освещения прецизионной щели используется солнечный свет или белая лампа. Затем щель отображается в образце с помощью конденсорной линзы, образуя световой лист. Рассеивающие (субдифракционные) частицы можно наблюдать перпендикулярно с помощью микроскопа. Эта установка позволила наблюдать частицы размером меньше разрешения микроскопа и привела к получению Жигмонди Нобелевской премии в 1925 году. [36]

Первое применение этой схемы освещения для флуоресцентной микроскопии было опубликовано в 1993 году Voie et al. под названием оптическое срез флуоресценции в ортогональной плоскости (OPFOS). [4] для визуализации внутренней структуры улитки . Разрешение в то время было ограничено 10 мкм в поперечном направлении и 26 мкм в продольном, но при размере образца в миллиметровом диапазоне. В ортогональном флуоресцентном оптическом секционном микроскопе для освещения использовалась простая цилиндрическая линза. Дальнейшая разработка и совершенствование микроскопа с селективным плоскостным освещением началась в 2004 году. [5] После этой публикации Huisken et al. этот метод нашел широкое применение и до сих пор адаптируется к новым ситуациям измерений (см. Выше). С 2010 года появился первый ультрамикроскоп с возбуждением флуоресценции и ограниченным разрешением. [37] а с 2012 года в продажу поступил первый микроскоп с селективным плоскостным освещением. [38] Хороший обзор развития микроскопии с селективным плоскостным освещением дан в ссылке. [39] В 2012 году также начали появляться проекты с открытым исходным кодом , которые бесплатно публикуют полные планы конструкции световых флуоресцентных микроскопов, а также необходимые пакеты программного обеспечения. [40] [41] [42] [43]

Приложения

[ редактировать ]

Микроскопия с селективным плоскостным освещением / флуоресцентная микроскопия со световым листом часто используется в биологии развития, где она позволяет проводить длительные (несколько дней) наблюдения за эмбриональным развитием (даже с полной реконструкцией древа линии). [5] [44] Микроскопию с селективным плоским освещением также можно комбинировать с такими методами, как корреляционная спектроскопия флуоресценции , чтобы обеспечить измерение подвижности флуоресцентных частиц с пространственным разрешением (например, флуоресцентных шариков, квантовых точек или флуоресцентных белков) внутри живых биологических образцов. [20] [21]

Сильно рассеивающая биологическая ткань, такая как мозг или почка, должна быть химически зафиксирована и очищена, прежде чем ее можно будет визуализировать в микроскопе с селективным плоскостным освещением. [45] Для этой цели были разработаны специальные методы очистки тканей, например 3DISCO , CUBIC и CLARITY . В зависимости от показателя преломления очищенного образца соответствующие иммерсионные жидкости во время визуализации необходимо использовать и специальные объективы для дальних расстояний.

  • Микроскопия с селективным плоскостным освещением живого сфероида, экспрессирующего H2B-HcRed. Z-стеки из 100 срезов с расстоянием между срезами 1 мкм записывали каждые три минуты (объектив 10×, NA = 0,3). Максимальная проекция z-стеков показана для каждого момента времени. [46]
  • Изображения свободно перемещающихся амеб, меченных DiI, полученные с помощью ezDSLM. [47]
  • Клетки HeLa, экспрессирующие тетрамеры зеленого флуоресцентного белка . Слева показано изображение просвечивающего освещения, а справа — изображение флуоресцентной микроскопии светового листа. Типичные артефакты микроскопии с селективным плоскостным освещением, такие как тени, могут быть четко видны. Световой лист был направлен снизу вверх.
  • Объемная реконструкция z-стека на изображении выше.
  • Мозг мыши (Thy-1 GFP-M), очищенный с использованием метода 3DISCO и визуализированный с помощью световой микроскопии.
    Мозг мыши (Thy-1 GFP-M), очищенный с использованием метода 3DISCO и визуализированный с помощью световой микроскопии.

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Фадеро, TC; и др. (2018). «Микроскопия LITE: возбуждение модельных организмов наклонным световым лучом обеспечивает высокое разрешение и низкое фотообесцвечивание» . Журнал клеточной биологии . 217 (5): 1869–1882. дои : 10.1083/jcb.201710087 . ПМК   5940309 . ПМИД   29490939 .
  2. ^ Келлер, Филипп Дж.; Стельцер, Эрнст Х.К. (2006). «Световая листовая микроскопия в биофизике молекулярных клеток» (PDF) . Лабораторный мир . 7 (5): 18–21. Архивировано из оригинала (PDF) 20 января 2013 года . Проверено 23 апреля 2013 г.
  3. ^ Томер, Раджу; Ловетт-Бэррон, Мэтью; Каувар, Исаак; Андалман, Аарон; Бернс, Ванесса М.; Шанкаран, Сетураман; Гросеник, Логан; Брокстон, Майкл; Ян, Сэмюэл; Дейсерот, Карл (2015). «Световая листовая микроскопия SPED: быстрое картирование структуры и функций биологической системы» . Клетка . 163 (7): 1796–1806. дои : 10.1016/j.cell.2015.11.061 . ISSN   0092-8674 . ПМЦ   4775738 . ПМИД   26687363 .
  4. ^ Перейти обратно: а б А. Х. Войе; Д.Х. Бернс; Ф.А. Спелман (июнь 1993 г.). «Оптическое секционирование флуоресценции в ортогональной плоскости: трехмерное изображение макроскопических биологических образцов». Журнал микроскопии . 170 (3): 229–236. дои : 10.1111/j.1365-2818.1993.tb03346.x . ISSN   0022-2720 . ПМИД   8371260 . S2CID   2901024 .
  5. ^ Перейти обратно: а б с Хьюскен, Дж.; Свогер, Дж.; Дель Бене, Ф.; Витбродт, Дж.; Стельцер, Э.Х. (2004). «Оптическое срезы глубоко внутри живых эмбрионов с помощью микроскопии с селективным плоским освещением». Наука . 305 (5686): 1007–1009. Бибкод : 2004Sci...305.1007H . CiteSeerX   10.1.1.456.2250 . дои : 10.1126/science.1100035 . ПМИД   15310904 . S2CID   3213175 .
  6. ^ Тимо Маппес; Норберт год; Андреа Чаки; Надин Фоглер; Юрген Попп; Вольфганг Фриче (5 ноября 2012 г.). «Изобретение иммерсионной ультрамикроскопии в 1912 году - рождение нанотехнологий?». Международное издание «Прикладная химия» . 51 (45): 11208–11212. дои : 10.1002/anie.201204688 . ISSN   1433-7851 . ПМИД   23065955 .
  7. ^ Перейти обратно: а б Грегер, К; Свогер, Дж; Стельцер, Э.Х. (февраль 2007 г.). «Основные конструктивные элементы и свойства флуоресцентного одноплоскостного микроскопа с подсветкой» . Rev Sci Instrum . 78 (2): 023705–023705–7. Бибкод : 2007RScI...78b3705G . дои : 10.1063/1.2428277 . ПМИД   17578115 .
  8. ^ Перейти обратно: а б с Хейскен, Ян; Стейнье, Дидье Ю.Р. (2007). «Равномерное возбуждение флуоресценции с помощью многонаправленной микроскопии с селективным плоским освещением (mSPIM)». Оптические письма . 32 (17): 2608–10. Бибкод : 2007OptL...32.2608H . дои : 10.1364/OL.32.002608 . ISSN   0146-9592 . ПМИД   17767321 . S2CID   15231468 . (требуется подписка)
  9. ^ Томер, Раджу; Хайри, Халед; Амат, Фернандо; Келлер, Филипп Дж (3 июня 2012 г.). «Количественная высокоскоростная визуализация целых развивающихся эмбрионов с одновременной многопроекционной световой микроскопией». Природные методы . 9 (7): 755–763. дои : 10.1038/nmeth.2062 . ISSN   1548-7091 . ПМИД   22660741 . S2CID   14191130 . (требуется подписка)
  10. ^ Кржич, Урос; Гюнтер, Стефан; Сондерс, Тимоти Э; Стрейхан, Себастьян Дж; Хуфнагель, Ларс (3 июня 2012 г.). «Многоракурсный световой микроскоп для быстрого получения изображений in toto». Природные методы . 9 (7): 730–733. дои : 10.1038/nmeth.2064 . ISSN   1548-7091 . ПМИД   22660739 . S2CID   13388657 . (требуется подписка)
  11. ^ Келлер, П.Дж.; Шмидт, А.Д.; Витбродт, Дж.; Штельцер, EHK (14 ноября 2008 г.). «Реконструкция раннего эмбрионального развития рыбок данио с помощью листовой сканирующей световой микроскопии» (PDF) . Наука . 322 (5904): 1065–1069. Бибкод : 2008Sci...322.1065K . дои : 10.1126/science.1162493 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   18845710 . S2CID   7594561 .
  12. ^ Фарбах, Флорида; Рорбах, А. (ноябрь 2010 г.). «Линейный сканирующий световой микроскоп с самовосстанавливающимися лучами фазовой формы» . Оптика Экспресс . 18 (23): 24229–24244. Бибкод : 2010OExpr..1824229F . дои : 10.1364/oe.18.024229 . ПМИД   21164769 .
  13. ^ Перейти обратно: а б Планшон, штат Техас; Гао, Л.; Милки, Делавэр; Дэвидсон, Миссури; Гэлбрейт, Дж.А.; Гэлбрейт, КГ; Бетциг, Э. (2011). «Быстрая трехмерная изотропная визуализация живых клеток с использованием плоскостного освещения лучом Бесселя» . Природные методы . 8 (5): 417–423. дои : 10.1038/nmeth.1586 . ПМЦ   3626440 . ПМИД   21378978 .
  14. ^ Веттенбург, Том; Далгарно, Хизер И.С.; Нилк, Джонатан; Коль-Льядо, Клара; Ферье, Дэвид ЭК; Чижмар, Томаш; Ганн-Мур, Фрэнк Дж; Дхолакия, Кишан (2014). «Световая микроскопия с использованием луча Эйри» (PDF) . Природные методы . 11 (5): 541–544. дои : 10.1038/nmeth.2922 . hdl : 10023/5521 . ПМИД   24705473 . S2CID   205422713 .
  15. ^ Кафиан, Хосейн; Лаленежад, Милад; Моради-Мехр, Сахар; Акбари Биргани, Шива; Абдоллахпур, Дариуш (2020). «Светолистовая флуоресцентная микроскопия со сканирующими недифрагирующими лучами» . Научные отчеты . 10 (1): 8501. Бибкод : 2020НатСР..10.8501К . дои : 10.1038/s41598-020-63847-2 . ПМЦ   7244762 . ПМИД   32444603 .
  16. ^ Нилк, Джонатан; Маккласки, Кейли; Пресиадо, Мигель А.; Мазилу, Майкл; Ян, Чжэнъи; Ганн-Мур, Фрэнк Дж.; Аггарвал, Санья; Телло, Хавьер А.; Ферье, Дэвид ЭК (1 апреля 2018 г.). «Световая микроскопия с компенсированными по затуханию пучками, инвариантными по распространению» . Достижения науки . 4 (4): eaar4817. arXiv : 1708.02612 . Бибкод : 2018SciA....4.4817N . дои : 10.1126/sciadv.aar4817 . ПМЦ   5938225 . ПМИД   29740614 .
  17. ^ Дансби, К. (2008). «Оптически секционные изображения с помощью косой плоскостной микроскопии». Оптика Экспресс . 16 (25): 20306–16. Бибкод : 2008OExpr..1620306D . дои : 10.1364/OE.16.020306 . hdl : 10044/1/53595 . ISSN   1094-4087 . ПМИД   19065169 .
  18. ^ Зенон Лаваньино; Франческа Селла Занакки; Эмилиано Ронцитти; Альберто Диаспро (2013). «Микроскопия плоского освещения с селективным двухфотонным возбуждением (2PE-SPIM) сильно рассеивающих образцов: характеристика и применение» . Оптика Экспресс . 21 (5): 5998–6008. Бибкод : 2013OExpr..21.5998L . дои : 10.1364/OE.21.005998 . ISSN   1094-4087 . ПМИД   23482168 .
  19. ^ Вольф С., Супатто В., Дебрегеас Г., Махоу П., Круглик С.Г., Синтес Дж., Борепер Э., Кандельер Р. (май 2015 г.). «Функциональная визуализация всего мозга с помощью двухфотонной световой микроскопии». Переписка. Природные методы . 12 (5): 379–80. дои : 10.1038/nmeth.3371 . ПМИД   25924070 . S2CID   19746295 .
  20. ^ Перейти обратно: а б с д Капулад, Дж.; Ваксмут, М.; Хуфнагель, Л.; Кноп, М. (2011). «Количественная флуоресцентная визуализация диффузии и взаимодействия белков в живых клетках». Природная биотехнология . 29 (9): 835–839. дои : 10.1038/nbt.1928 . ПМИД   21822256 . S2CID   10493584 .
  21. ^ Перейти обратно: а б с Воланд, Т.; Ши, Х.; Шанкаран, Дж.; Стельцер, Э.Х. (май 2010 г.). «Одноплоскостная корреляционная флуоресцентная спектроскопия освещения (SPIM-FCS) исследует неоднородные трехмерные среды» . Оптика Экспресс . 18 (10): 10627–10641. Бибкод : 2010OExpr..1810627W . дои : 10.1364/oe.18.010627 . ПМИД   20588915 .
  22. ^ Клаус Грегер; Мануэль Дж. Ниц; Эммануэль Г. Рейно; Эрнст Х.К. Стельцер (2011). «Трехмерная флуоресцентная визуализация в течение всего срока службы с помощью микроскопа с одноплоскостным освещением обеспечивает улучшенное соотношение сигнал/шум» . Оптика Экспресс . 19 (21): 20743–50. Бибкод : 2011OExpr..1920743G . дои : 10.1364/OE.19.020743 . ISSN   1094-4087 . ПМИД   21997084 .
  23. ^ Перейти обратно: а б Франческа Селла Занакки; Зенон Лаваньино; Микела Перроне Доннорсо; Алессио Дель Буэ; Лора Фьюри; Марио Фаретта; Альберто Диаспро (9 октября 2011 г.). «3D-визуализация живых клеток со сверхвысоким разрешением в толстых биологических образцах». Природные методы . 8 (12): 1047–1049. дои : 10.1038/nmeth.1744 . ISSN   1548-7091 . ПМИД   21983925 . S2CID   205420075 .
  24. ^ Перейти обратно: а б Джером Мерц; Джинхён Ким (2010). «Сканирующая световая микроскопия всего мозга мыши с подавлением фона HiLo» . Журнал биомедицинской оптики . 15 (1): 016027–016027–7. Бибкод : 2010JBO....15a6027M . дои : 10.1117/1.3324890 . ISSN   1083-3668 . ПМЦ   2917465 . ПМИД   20210471 .
  25. ^ Фридрих, Майк; Ган, Цян; Ермолаев Владимир; Хармс, Грегори С. (2011). «STED-SPIM: сокращение вынужденного излучения улучшает разрешение микроскопии при освещении листов» . Биофизический журнал . 100 (8): Л43–5. Бибкод : 2011BpJ...100L..43F . дои : 10.1016/j.bpj.2010.12.3748 . ПМК   3077687 . ПМИД   21504720 . .
  26. ^ Фадеро TC и др. 2017. « Микроскопия LITE: метод получения флуоресцентных изображений с высокой числовой апертурой и низким фотообесцвечиванием », bioRxiv, дои : 10.1101/181644 .
  27. ^ Джоранд Р. и др. 2012. «Глубокая и четкая оптическая визуализация толстых неоднородных образцов», PLOS one, дои : 10.1371/journal.pone.0035795 .
  28. ^ Йоран Р., 2013. « Усовершенствование каналов обнаружения и освещения SPIM-микроскопа для 3D-изображения сфероидов », тезисы.фр.
  29. ^ Майзель, Алексис; фон Вангенхайм, Даниэль; Федеричи, Фернан; Хаселофф, Джим; Стельцер, Эрнст Х.К. (октябрь 2011 г.). «Живое изображение роста растений с высоким разрешением в условиях, близких к физиологическому освещению, с использованием световой листовой флуоресцентной микроскопии» . Заводской журнал . 68 (2): 377–385. дои : 10.1111/j.1365-313X.2011.04692.x . ISSN   0960-7412 . ПМИД   21711399 .
  30. ^ Терренс Ф. Холекамп; Дивакар Турага; Тимоти Э. Холи (13 марта 2008 г.). «Быстрая трехмерная флуоресцентная визуализация активности нейронных популяций с помощью объективно-связанной микроскопии с плоским освещением» . Нейрон . 57 (5): 661–672. дои : 10.1016/j.neuron.2008.01.011 . ISSN   0896-6273 . ПМИД   18341987 . S2CID   9571663 .
  31. ^ Ю. Ву; А. Гитани; Р. Кристенсен; А. Сантелла; З. Ду; Г. Рондо; З. Бао; Д. Колон-Рамос; Х. Шрофф (25 октября 2011 г.). «Микроскопия с селективным освещением в инвертированной плоскости (iSPIM) позволяет выявить идентичность связанных клеток и визуализировать развитие нервной системы у Caenorhabditis elegans» . Труды Национальной академии наук . 108 (43): 17708–17713. Бибкод : 2011PNAS..10817708W . дои : 10.1073/pnas.1108494108 . ISSN   0027-8424 . ПМК   3203761 . ПМИД   22006307 .
  32. ^ Перейти обратно: а б с У, Иконг; Ваврзузин, Питер; Сенсени, Джастин; Фишер, Роберт С; Кристенсен, Райан; Сантелла, Энтони; Йорк, Эндрю Дж; Винтер, Питер В.; Уотерман, Клэр М; Бао, Чжирун; Колон-Рамос, Дэниел А; Маколифф, Мэтью; Шрофф, Хари (2013). «Пространственно-изотропное четырехмерное изображение с помощью микроскопии с двойным обзором и плоскостным освещением» . Природная биотехнология . 31 (11): 1032–1038. дои : 10.1038/nbt.2713 . ISSN   1087-0156 . ПМК   4105320 . ПМИД   24108093 .
  33. ^ «Веб-страница Huisken Lab» . Архивировано из оригинала 7 июля 2014 года.
  34. ^ Йорг Г. Риттер; Роман Вейт; Ян-Петер Зибрасс; Ульрих Кубичек (2008), «Высококонтрастное отслеживание одиночных частиц с помощью микроскопии с селективным освещением в фокальной плоскости», Optics Express , vol. 16, нет. 10, стр. 7142–52, Bibcode : 2008OExpr..16.7142R , doi : 10.1364/OE.16.007142 , ISSN   1094-4087 , PMID   18545417
  35. ^ Джером Ференбах ; Пьер Вайс; Коринн Лоренцо (2012). «Вариационные алгоритмы для удаления стационарного шума: приложения к микроскопии» (PDF) . Транзакции IEEE при обработке изображений . 21 (10): 4420–4430. Бибкод : 2012ITIP...21.4420F . дои : 10.1109/TIP.2012.2206037 . ISSN   1057-7149 . ПМИД   22752131 . S2CID   6828193 .
  36. ^ Нобелевская лекция Р. А. Жигмонди: Свойства коллоидов (включая краткое объяснение ультрамикроскопа)
  37. ^ пресс-релиз LaVision Biotech. Архивировано 24 декабря 2013 г. в Wayback Machine (по состоянию на 4 ноября 2012 г.).
  38. ^ Пресс-релиз Carl Zeiss о системе микроскопов Lightsheet Z.1 Light Sheet (по состоянию на 15 ноября 2012 г.)
  39. ^ П.А. Санти (1 февраля 2011 г.). «Световая листовая флуоресцентная микроскопия: обзор» . Журнал гистохимии и цитохимии . 59 (2): 129–138. дои : 10.1369/0022155410394857 . ISSN   0022-1554 . ПМК   3201139 . ПМИД   21339178 .
  40. ^ Веб-страница проекта OpenSPIM (по состоянию на 8 июня 2013 г.)
  41. ^ Питер Дж. Питроне; Йоханнес Шинделин; Люк Стайвенберг; Стефан Прейбиш; Майкл Вебер; Кевин В. Элисейри; Ян Хейскен; Павел Томанчак (9 июня 2013 г.). «OpenSPIM: платформа для световой микроскопии с открытым доступом» . Природные методы . 10 (7): 598–9. arXiv : 1302.1987 . дои : 10.1038/nmeth.2507 . ISSN   1548-7091 . ПМЦ   7450513 . ПМИД   23749304 .
  42. ^ Веб-страница проекта OpenSPIN (по состоянию на 8 июня 2013 г.)
  43. ^ Эмилио Дж. Гуальда, Тьяго Вейл, Педро Алмада, Хос А. Фейх, Габриэль Дж. Мартинс, Нуно Морено (9 июня 2013 г.). «OpenSpinMicroscope: интегрированная платформа микроскопии с открытым исходным кодом». Природные методы . 10 (7): 599–600. дои : 10.1038/nmeth.2508 . ISSN   1548-7091 . ПМИД   23749300 . S2CID   27935584 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  44. ^ Вервир, П.Дж.; Свогер, Дж.; Пампалони, Ф.; Грегер, К.; Марчелло, М.; Стельцер, Э.Х. (2007). «Трехмерная визуализация крупных образцов с высоким разрешением с помощью световой листовой микроскопии». Природные методы . 4 (4): 311–313. дои : 10.1038/nmeth1017 . ПМИД   17339847 . S2CID   12440781 .
  45. ^ Ярлинг, Нина; Беккер, Клаус; Вегенаст-Браун, Беттина М.; Гратволь, Стефан А.; Джакер, Матиас; Додт, Ганс-Ульрих (27 мая 2015 г.). Виторика, Хавьер (ред.). «Церебральный β-амилоидоз у мышей, исследованный с помощью ультрамикроскопии» . ПЛОС ОДИН . 10 (5): e0125418. Бибкод : 2015PLoSO..1025418J . дои : 10.1371/journal.pone.0125418 . ISSN   1932-6203 . ПМЦ   4446269 . ПМИД   26017149 .
  46. ^ Коринн Лоренцо; Селин Фронджа; Рафаэль Жоран; Жером Ференбах; Пьер Вайс; Амина Маандуи; Гийом Гей; Бернар Дюкоммен; Валери Лобжуа (2011). «Мониторинг динамики деления живых клеток в трехмерных моделях крупных сфероидных опухолей с использованием световой листовой микроскопии» . Отделение клеток . 6 (1): 22. дои : 10.1186/1747-1028-6-22 . ISSN   1747-1028 . ПМЦ   3274476 . ПМИД   22152157 .
  47. ^ Дайсуке Такао; Ацуши Танигучи; Такааки Такеда; Сейджи Сонобе; Сигенори Нонака; Александр Дж. Кабла (5 декабря 2012 г.), «Высокоскоростная визуализация амебоидных движений с использованием световой микроскопии», PLOS ONE , vol. 7, нет. 12, с. e50846, Bibcode : 2012PLoSO...750846T , doi : 10.1371/journal.pone.0050846 , ISSN   1932-6203 , PMC   3515486 , PMID   23227214

Дальнейшее чтение

[ редактировать ]
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Light_sheet_fluorescence_microscopy&oldid=1235014936"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: bb6485d04c13347f56de4222051ffdbf__1721193780
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/bb/bf/bb6485d04c13347f56de4222051ffdbf.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Light sheet fluorescence microscopy - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)