Прерывистый электрофорез
Прерывистый электрофорез (в просторечии дисковый электрофорез) . [а] ) — разновидность в полиакриламидном электрофореза геле . Его разработали Орнштейн и Дэвис. [2] [1] Этот метод обеспечивает высокое разрешение и хорошую четкость полосы. Это широко используемый метод разделения белков по размеру и заряду. [3]
Метод
[ редактировать ]В этом методе гель делится на две прерывистые части: растворяющийся и укладочный гель, оба имеют разные концентрации полиакриламида. [4] Тот, у которого концентрация ниже, кладется поверх того, у которого концентрация выше. Непрерывность зависит от четырех параметров: структуры геля, значения pH буфера, ионной силы буфера и природы ионов в геле и электродном буфере. Электродный буфер содержит глицин . Глицин имеет очень низкий чистый заряд при pH 6,8 накопительного геля, поэтому он имеет низкую подвижность . Белки разделяются по принципу изотахофореза и образуют стопки в порядке подвижности (эффект стэкинга). Мобильность зависит от суммарного заряда, а не от размера молекулы. Белки медленно движутся к аноду с постоянной скоростью, пока не достигнут предела разделения геля. Внезапно сопротивление трению увеличивается, но глицин не затрагивается, он проходит через белки и становится сильно заряженным в зоне разделения. Белки, находящиеся в гомогенном буфере, начинают разделяться по принципу зонного электрофореза. Теперь их мобильность зависит не только от размера, но и от заряда. Значение pH повышается до 9,5, а чистый заряд увеличивается. [5] [6]
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б Орнштейн, Леонард (16 декабря 2006 г.). «Дисковый электрофорез-I: предпосылки и теория». Анналы Нью-Йоркской академии наук . 121 (2). Уайли: 321–349. дои : 10.1111/j.1749-6632.1964.tb14207.x . ISSN 0077-8923 . ПМИД 14240533 . S2CID 28591995 .
- ^ Уильямс, Дональд Э. и Рейсфельд, Ральф А. (1964). «ДИСК-электрофорез В ПОЛИАКРИЛАМИДНЫХ ГЕЛЯХ». Анналы Нью-Йоркской академии наук . 121 (2): 372–381. Бибкод : 1964NYASA.121..373W . дои : 10.1111/j.1749-6632.1964.tb14210.x . ПМИД 14240536 . S2CID 46152998 .
- ^ Электрофорез в полиакриламидном геле (PDF) . Дэвидсон.edu.
- ^ «Принцип дискового электрофореза» . Архивировано из оригинала 29 июня 2016 года . Проверено 4 июля 2016 г.
- ^ Дисковый электрофорез и связанные с ним методы электрофореза в полиакриламидном геле, автор HR Maurer, издание 2, иллюстрированное издательство Walter de Gruyter, 1978. ISBN 3110836203 , 9783110836202
- ^ «МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА – Электрофорез» . Проверено 4 июля 2016 г.
