Колориметрический анализ

Колориметрический анализ — метод определения концентрации или химического элемента химического соединения в растворе с помощью цветного реактива . Он применим как к органическим, так и к неорганическим соединениям и может использоваться с ферментативной стадией или без нее. Этот метод широко используется в медицинских лабораториях и в промышленных целях, например, при анализе проб воды при промышленной очистке воды .

Оборудование

Необходимое оборудование — колориметр , несколько кювет и подходящий цветной реагент. Процесс может быть автоматизирован, например, путем использования автоанализатора или анализа с нагнетанием потока . Недавно колориметрические методы анализа, разработанные для колориметров, были адаптированы для использования с планшетными считывателями, чтобы ускорить анализ и сократить поток отходов. ^{[ 1 ]}

Неферментативные методы

Примеры

Кальций

Кальций + о-крезолфталеин комплексон → цветной комплекс ^{[ 2 ]}

Медь

Медь + дисульфонат батокупроина → цветной комплекс ^{[ 3 ]}

Креатинин

Креатинин + пикрат → цветной комплекс ^{[ 4 ]}

Железо

Железо + дисульфонат батофенантролина → цветной комплекс ^{[ 5 ]}

Фосфат (неорганический)

Фосфат + молибдат аммония + аскорбиновая кислота → комплекс синего цвета. ^{[ 6 ]}

Ферментативные методы

В ферментативном анализе (который широко применяется в медицинских лабораториях ) цветной реакции предшествует реакция катализируемая ферментом , . Поскольку фермент специфичен к конкретному субстрату , можно получить более точные результаты. Ферментативный анализ всегда проводится в буферном растворе при определенной температуре (обычно 37°C), чтобы обеспечить оптимальные условия для действия ферментов. Далее следуют примеры.

Примеры

Холестерин (метод CHOD-PAP)

Холестерин + кислород --(фермент холестериноксидаза ) --> холестенон + перекись водорода
Перекись водорода + 4- аминофеназон + фенол --(фермент пероксидаза ) --> окрашенный комплекс + вода ^{[ 7 ]}

Глюкоза (метод ГОД-Перид)

Глюкоза + кислород + вода --(фермент глюкозооксидаза ) --> глюконат + перекись водорода
Перекись водорода + ABTS --(фермент пероксидаза ) --> цветной комплекс ^{[ 8 ]}

В этом случае обе стадии реакции катализируются ферментами.

Триглицериды (метод GPO-PAP)

Триглицериды + вода --(фермент эстераза ) --> глицерин + карбоновая кислота
Глицерин + АТФ --(фермент глицеринкиназа ) --> глицерин-3-фосфат + АДФ
Глицерол-3-фосфат + кислород --(фермент глицерин-3-фосфатоксидаза ) --> дигидроксиацетонфосфат + перекись водорода
Перекись водорода + 4- аминофеназон + 4- хлорфенол --(фермент пероксидаза ) --> цветной комплекс ^{[ 9 ]}

Мочевина

Мочевина + вода --(фермент уреаза ) --> карбонат аммония
Карбонат аммония + фенол + гипохлорит ----> цветной комплекс ^{[ 10 ]}

В этом случае ферментом катализируется только первая стадия реакции. Вторая стадия – неферментативная.

Сокращения

CHOD = холестериноксидаза
БОГ = глюкозооксидаза
ГПО = глицерин-3-фосфатоксидаза
ПАП = фенол + аминофеназон (в некоторых методах фенол заменяют 4-хлорфенолом , который менее токсичен)
ПОД = пероксидаза

Ультрафиолетовые методы

В ультрафиолетовых (УФ) методах видимого изменения цвета нет, но принцип тот же: измерение изменения оптической плотности раствора. УФ-методы обычно измеряют разницу в оптической плотности на длине волны 340 нм между никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) и его восстановленной формой (НАДН).

Примеры

Пируват

Пируват + НАДН --(фермент лактатдегидрогеназа ) --> L-лактат + НАД ^{[ 11 ]}

См. также

Содержание сахара в крови
Анализ MBAS — анализ , который определяет анионные поверхностно-активные вещества в воде с реакцией посинения.
Цилиндр Несслера

Ссылки

^ Гринан, Н.С., Р.Л. Малвейни и Г.К. Симс. 1995. "Микромасштабный метод колориметрического определения мочевины в почвенных экстрактах". Коммун. Почвоведение. Растительный анал. 26:2519-2529.
^ Рэй Саркар и Чаухан (1967) Анал. Биохим. 20:155
^ Зак, Б. (1958) Клин. Хим. Акта. 3:328
^ Хоук, Озер и Саммерсон, Практическая физиологическая химия , Черчилль, Лондон, 1947, стр. 839-844.
^ Ссылка для подражания
^ Хейдари-Бафруи, Ходжат; Рибейро, Бренно; Чарбаджи, амер; Анагностопулос, Константин; Фагри, Мохаммед (16 октября 2020 г.). «Портативный инфракрасный световой короб для улучшения пределов обнаружения фосфатных устройств на бумажной основе» . Измерение . 173 : 108607. doi : 10.1016/j.measurement.2020.108607 . ISSN 0263-2241 . S2CID 225140011 .
^ Ссылка для подражания
^ Рей и Вилингер (1970) З. аналит. хим. 252:224
^ Ссылка для подражания
^ Фосетт и Скотт (1960) Дж. Клин. Патол. 13:156
^ Ссылка для подражания

[1] Гринан, Н.С., Р.Л. Малвейни и Г.К. Симс. 1995. "Микромасштабный метод колориметрического определения мочевины в почвенных экстрактах". Коммун. Почвоведение. Растительный анал. 26:2519-2529.

[2] Рэй Саркар и Чаухан (1967) Анал. Биохим. 20:155

[3] Зак, Б. (1958) Клин. Хим. Акта. 3:328

[4] Хоук, Озер и Саммерсон, Практическая физиологическая химия , Черчилль, Лондон, 1947, стр. 839-844.

[5] Ссылка для подражания

[6] Хейдари-Бафруи, Ходжат; Рибейро, Бренно; Чарбаджи, амер; Анагностопулос, Константин; Фагри, Мохаммед (16 октября 2020 г.). «Портативный инфракрасный световой короб для улучшения пределов обнаружения фосфатных устройств на бумажной основе» . Измерение . 173 : 108607. doi : 10.1016/j.measurement.2020.108607 . ISSN 0263-2241 . S2CID 225140011 .

[7] Ссылка для подражания

[8] Рей и Вилингер (1970) З. аналит. хим. 252:224

[9] Ссылка для подражания

[10] Фосетт и Скотт (1960) Дж. Клин. Патол. 13:156

[11] Ссылка для подражания

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]