✖


Jump to content

Ридж (биология)

    Add links

    Риджи ( регионы повышенной генов экспрессии — ; ) это домены генома с экспрессией генов высокой Противоположностью гребням являются антириджи . Этот термин был впервые использован Кэроном и др. в 2001 году. [1] Характеристики гребней: [1]

    Открытие

    [ редактировать ]

    Кластеризация генов у прокариот была известна давно. Их гены сгруппированы в опероны , гены внутри оперонов имеют общий промотор. Эти гены в основном функционально связаны. Геном прокариот относительно очень прост и компактен. У эукариот геном огромен, и лишь небольшая его часть функционально представляет собой гены, причем гены не организованы в опероны. За исключением нематод и трипаносом ; хотя их опероны отличаются от оперонов прокариот. У эукариот каждый ген имеет собственный сайт регуляции транскрипции. Следовательно, для совместной экспрессии генам не обязательно находиться в непосредственной близости. Поэтому долгое время предполагалось, что гены эукариот распределены по геному случайным образом из-за высокой скорости хромосомных перестроек. Но поскольку стала доступна полная последовательность геномов, стало возможным точно определить местонахождение гена и измерить его расстояние до других генов.

    Первым когда-либо секвенированным геномом эукариот был геном Saccharomyces cerevisiae , или почкующихся дрожжей, в 1996 году. Через полгода после этого Velculescu et al. (1997) опубликовали исследование, в котором они объединили данные SAGE с доступной теперь картой генома. В течение клеточного цикла в клетке активны разные гены. Поэтому они использовали данные SAGE из трех моментов клеточного цикла (логарифмическая фаза, клетка с остановкой S-фазы и клетка с остановкой G2 / M -фазы). Поскольку у дрожжей все гены имеют собственную промоторную единицу, не предполагалось, что гены будут группироваться рядом друг с другом, но это произошло. Кластеры присутствовали на всех 16 хромосомах дрожжей. [2] Год спустя Чо и др. также сообщили (хотя и более подробно), что определенные гены у дрожжей расположены рядом друг с другом. [3]

    Характеристики и функции

    [ редактировать ]

    Совместное выражение

    [ редактировать ]

    Чо и др. были первыми, кто определил, что кластерные гены имеют одинаковый уровень экспрессии. Они идентифицировали транскрипты, которые демонстрируют периодичность, зависящую от клеточного цикла. Из этих генов 25% были расположены в непосредственной близости от других генов, которые были транскриптами того же клеточного цикла. Коэн и др. (2000) также идентифицировали кластеры совместно экспрессируемых генов.

    Кэрон и др. (2001) составили карту транскриптома человека 12 различных тканей (раковых клеток) и пришли к выводу, что гены не распределены по хромосомам случайным образом. Вместо этого гены имеют тенденцию группироваться в группы, иногда по 39 генов, находящихся в непосредственной близости. Кластеры были не только плотными по генам. Они идентифицировали 27 кластеров генов с очень высоким уровнем экспрессии и назвали их RIDGE. Обычный RIDGE насчитывает от 6 до 30 генов на сентирей. Однако были большие исключения: от 40 до 50% RIDGE не имели такой плотности генов; так же, как и у дрожжей, эти RIDGE располагались в областях теломер . [1]

    Лерчер и др. (2002) указали на некоторые недостатки подхода Кэрона. Кластеры генов, находящиеся в непосредственной близости и с высокими уровнями транскрипции, могут быть легко созданы с помощью тандемных дубликатов. Гены могут создавать свои дубликаты, которые включаются в соседство. Эти дубликаты могут либо стать функциональной частью пути своего родительского гена, либо (поскольку естественный отбор больше не поддерживает их) получить вредные мутации и превратиться в псевдогены. Поскольку эти дубликаты являются ложноположительными при поиске кластеров генов, их необходимо исключить. Лершер исключил соседние гены с высоким сходством друг с другом, после чего с помощью скользящего окна искал регионы с 15 соседними генами. [4]

    Было ясно, что существуют области с высокой плотностью генов. Была поразительная корреляция между плотностью генов и высоким содержанием CG. Некоторые кластеры действительно имели высокий уровень экспрессии. Но большинство регионов с высокой экспрессией состояло из генов домашнего хозяйства; гены, которые высоко экспрессируются во всех тканях, поскольку они кодируют базальные механизмы. Лишь небольшая часть кластеров содержала гены, которые были ограничены определенными тканями.

    Верстег и др. (2003) попытались с помощью более точной карты человеческого генома и более точных данных SAGE определить более конкретные характеристики RIDGE. Перекрывающиеся гены рассматривались как один ген, а гены без интронов отбраковывались как псевдогены. Они определили, что RIDGE имеют очень высокую плотность генов, высокую экспрессию генов, короткие интроны, высокую плотность повторов SINE и низкую плотность повторов LINE. Кластеры, содержащие гены с очень низким уровнем транскрипции, имели характеристики, противоположные RIDGE, поэтому такие кластеры были названы антириджами. [5] Повторы LINE представляют собой мусорную ДНК, содержащую сайт расщепления эндонуклеазой (TTTTA). Их нехватка в RIDGE может быть объяснена тем фактом, что естественный отбор благоприятствует нехватке повторов LINE в ORF, поскольку их сайты эндонуклеаз могут вызывать вредные мутации в генах. Почему повторов SINE так много, пока не понятно.

    Верстег и др. также пришел к выводу, что, вопреки анализу Лершера, уровни транскрипции многих генов в RIDGE (например, кластера на хромосоме 9) могут сильно различаться в разных тканях. Ли и др. (2003) проанализировали тенденцию кластеризации генов между разными видами. Они сравнили Saccharomyces cerevisiae , Homo sapiens , Caenorhabditis elegans , Arabidopsis thaliana и Drosophila melanogaster и обнаружили степень кластеризации, как долю генов в рыхлых кластерах, соответственно (37%), (50%), (74%), ( 52%) и (68%). Они пришли к выводу, что пути, в которых гены представляют собой кластеры у многих видов, редки. Они обнаружили семь универсально сгруппированных путей: гликолиз , биосинтез аминоацил-тРНК , АТФ-синтаза , ДНК-полимераза , деградация гексахлорциклогексана , метаболизм цианоаминокислот и фотосинтез ( синтез АТФ у нерастительных видов). Неудивительно, что это основные клеточные пути. [6]

    Ли и др. использовались самые разнообразные группы животных. Внутри этих групп кластеризация сохраняется, например, мотивы кластеризации Homo sapiens и Mus musculus более или менее одинаковы. [7]

    Спеллман и Рубин (2002) составили карту транскриптома дрозофилы . Из всех исследованных генов 20% были кластеризованы. Кластеры состояли из 10–30 генов размером около 100 килобаз. Члены кластеров не были функционально связаны, а расположение кластеров не коррелировало с известными структурами хроматина. [8]

    Это исследование также показало, что внутри кластеров уровни экспрессии в среднем 15 генов были практически одинаковыми во многих экспериментальных условиях, которые использовались. Эти сходства были настолько поразительными, что авторы пришли к выводу, что гены в кластерах не регулируются индивидуально их личным промотором, а связаны с изменениями в структуре хроматина. Аналогичная схема совместной регуляции была опубликована в том же году Роем и соавт. (2002) в C. elegans. [9]

    Многие гены, сгруппированные в кластеры, демонстрируют одинаковые профили экспрессии при инвазивной протоковой карциноме молочной железы человека. Примерно 20% генов демонстрируют корреляцию со своими соседями. Кластеры совместно экспрессируемых генов были разделены на области с меньшей корреляцией между генами. Эти кластеры могут охватывать целое плечо хромосомы.

    В отличие от ранее обсуждавшихся отчетов Johnidis et al. (2005) обнаружили, что (по крайней мере, некоторые) гены внутри кластеров не регулируются совместно. Aire представляет собой фактор транскрипции, который оказывает повышающее и понижающее действие на различные гены. Он действует в отрицательной селекции тимоцитов, которые реагируют на собственные эпитопы организма, медуллярными клетками. [10]

    Гены, которые контролировались aire, сгруппировались. 53 гена, наиболее активируемые aire, имели соседа, активируемого aire, в пределах 200 КБ или меньше, а 32 гена, наиболее репрессируемые aire, имели соседа, репрессируемого aire, в пределах 200 КБ; это меньше, чем ожидалось по изменениям. Они провели тот же скрининг на регулятор транскрипции CIITA.

    Эти регуляторы транскрипции не оказывали одинакового влияния на все гены в одном кластере. Гены, которые были активированы, репрессированы или не затронуты, иногда присутствовали в одном кластере. В этом случае невозможно, чтобы гены, регулируемые aire, были кластеризованы, поскольку все они совместно регулируются.

    Поэтому не очень ясно, регулируются ли домены совместно или нет. Очень эффективный способ проверить это — вставить синтетические гены в RIDGE, антигребни и/или случайные места генома и определить их экспрессию. Эти уровни экспрессии необходимо сравнивать друг с другом. Гирман и др. (2007) были первыми, кто доказал совместное регулирование с использованием этого подхода. В качестве инсерционной конструкции они использовали флуоресцирующий ген GFP, управляемый повсеместно экспрессируемым промотором фосфоглицераткиназы человека (PGK). Они интегрировали эту конструкцию в 90 различных позиций генома клеток HEK293 человека . Они обнаружили, что экспрессия конструкции в Ridges действительно была выше, чем в антириджах (хотя все конструкции имеют один и тот же промотор). [11]

    Они исследовали, обусловлены ли эти различия в экспрессии генами, находящимися в непосредственной близости от конструкций, или доменом в целом. Они обнаружили, что конструкции рядом с высокоэкспрессируемыми генами были немного более выражены, чем другие. Но когда увеличили размер окна до окружающих 49 генов (уровень домена), они увидели, что конструкции, расположенные в доменах с общим высоким уровнем экспрессии, имели более чем в 2 раза более высокую экспрессию, чем конструкции, расположенные в доменах с низким уровнем экспрессии.

    Они также проверили, экспрессируется ли конструкция на тех же уровнях, что и соседние гены, и присутствует ли такая тесная совместная экспрессия исключительно внутри RIDGE. Они обнаружили, что экспрессии сильно коррелируют внутри RIDGE и почти отсутствуют ближе к концу и за пределами RIDGE.

    Предыдущие наблюдения и исследования Gierman et al. доказали, что активность домена оказывает большое влияние на экспрессию расположенных в нем генов. И гены внутри RIDGE экспрессируются совместно. Однако конструкции, использованные Gierman et al. регулировались всеми постоянными активными промоутерами. Гены исследования Johnidis et al. зависели от присутствия транскрипционного фактора aire. Странная экспрессия генов, регулируемых aire, могла быть частично вызвана различиями в экспрессии и конформации самого транскрипционного фактора aire.

    Функциональное отношение

    [ редактировать ]

    Еще до наступления геномной эры было известно, что кластерные гены имеют тенденцию быть функционально связанными. Абдеррахим и др. (1994) показали, что все гены главного комплекса гистосовместимости кластеризованы на хромосоме 6p21. Рой и др. (2002) показали, что у нематоды C. elegans гены, которые экспрессируются исключительно в мышечной ткани на личиночной стадии, имеют тенденцию группироваться в небольшие группы по 2–5 генов. Они выделили 13 кластеров.

    Ямасита и др. (2004) показали, что гены, связанные со специфическими функциями органов, имеют тенденцию группироваться. Шесть доменов, связанных с печенью, содержали гены метаболизма ксенобиотиков, липидов и алкоголя. Пять доменов, связанных с толстой кишкой, содержали гены апоптоза, пролиферации клеток, переносчика ионов и продукции муцина. Эти кластеры были очень маленькими, а уровни экспрессии были низкими. Гены, связанные с мозгом и грудью, не группировались. [12]

    Это показывает, что по крайней мере некоторые кластеры состоят из функционально связанных генов. Однако есть большие исключения. Спеллман и Рубин показали, что существуют кластеры совместно экспрессируемых генов, которые функционально не связаны. Похоже, что кластеры проявляются в очень разных формах.

    Регулирование

    [ редактировать ]

    Коэн и др. обнаружили, что из пары совместно экспрессируемых генов только один промотор имеет вышестоящую активирующую последовательность (UAS), связанную с этим паттерном экспрессии. Они предположили, что БПЛА могут активировать гены, которые не находятся с ними в непосредственной близости. Это объяснение могло бы объяснить совместную экспрессию небольших кластеров, но многие кластеры содержат множество генов, которые регулируются одним UAS.

    Изменения хроматина являются правдоподобным объяснением совместной регуляции, наблюдаемой в кластерах. Хроматин состоит из цепи ДНК и гистонов , прикрепленных к ДНК. Области, в которых хроматин очень плотно упакован, называются гетерохроматином. Гетерохроматин очень часто состоит из остатков вирусных геномов, транспозонов и другой мусорной ДНК. Из-за плотной упаковки ДНК практически недоступна для транскриптного аппарата, и клетка может защитить себя путем покрытия вредной ДНК белками. Хроматин, состоящий из функциональных генов, часто представляет собой открытую структуру, в которой доступна ДНК. Однако большинству генов не обязательно экспрессироваться постоянно.

    ДНК с ненужными генами может быть покрыта гистонами. Когда ген должен экспрессироваться, специальные белки могут изменить химическое вещество, прикрепленное к гистонам (модификации гистонов), что приводит к раскрытию структуры гистонов. Когда хроматин одного гена открывается, хроматин соседних генов открывается также до тех пор, пока эта модификация не встретит пограничный элемент. Таким образом, гены, находящиеся в непосредственной близости, экспрессируются одновременно. Итак, гены группируются в «центрах экспрессии». По сравнению с этой моделью Gilbert et al. (2004) показали, что RIDGE в основном присутствуют в структурах открытого хроматина. [13] [14]

    Однако Джонидис и др. (2005) показали, что гены в одном и том же кластере могут проявляться по-разному. Как именно работает эукариотическая регуляция генов и связанные с ней изменения хроматина, до сих пор очень неясно, и по этому поводу нет единого мнения. Чтобы получить четкое представление о механизме кластеров генов, сначала необходимо осветить работу хроматина и регуляцию генов.Более того, большинство статей, в которых идентифицировались кластеры совместно регулируемых генов, были сосредоточены на уровнях транскрипции, тогда как лишь немногие были сосредоточены на кластерах, регулируемых одними и теми же факторами транскрипции. Джонидес и др. обнаружили странные явления, когда они это сделали.

    Происхождение

    [ редактировать ]

    Первые модели, пытавшиеся объяснить кластеризацию генов, были, конечно, сосредоточены на оперонах, поскольку они были открыты раньше, чем кластеры генов эукариот. В 1999 году Лоуренс предложил модель происхождения оперонов. Эта модель эгоистичного оперона предполагает, что отдельные гены были сгруппированы вместе посредством вертикального и горизонтального переноса и сохранились как единое целое, потому что это было полезно для генов, а не для организма как такового. Эта модель предсказывает, что кластеры генов должны сохраняться между видами. Это не относится ко многим оперонам и кластерам генов, наблюдаемым у эукариот. [15]

    Согласно Эйхлеру и Санкоффу, двумя средними процессами в эволюции хромосом эукариот являются: 1) перестановки хромосомных сегментов и 2) локализованное дупликация генов. Кластеризацию можно объяснить тем, что все гены в кластере произошли от тандемных дубликатов общего предка. Если бы все совместно экспрессируемые гены в кластере произошли от общего предкового гена, можно было бы ожидать, что они будут совместно экспрессироваться, поскольку все они имеют сопоставимые промоторы. Однако кластеризация генов является очень распространенным явлением в геномах, и неясно, как эта модель дупликации может объяснить всю кластеризацию. Более того, многие гены, присутствующие в кластерах, не гомологичны.

    Как вообще эволюционно несвязанные гены оказались в непосредственной близости? Либо существует сила, которая сближает функционально связанные гены, либо гены сблизились в результате изменения. Сингер и др. предположил, что гены оказались в непосредственной близости в результате случайной рекомбинации сегментов генома. Когда функционально связанные гены оказывались в непосредственной близости друг от друга, эта близость сохранялась. Они определили все возможные сайты рекомбинации между генами человека и мыши. После этого они сравнили кластеризацию генома мыши и человека и посмотрели, произошла ли рекомбинация в потенциальных сайтах рекомбинации. Оказалось, что рекомбинация между генами одного кластера происходит очень редко. Итак, как только образуется функциональный кластер, клеткой подавляется рекомбинация. На половых хромосомах количество кластеров очень мало как у человека, так и у мыши. Авторы полагают, что это связано с низкой частотой хромосомных перестроек половых хромосом.

    Открытые области хроматина являются активными областями. Более вероятно, что гены будут перенесены в эти регионы. Гены из органелл и генома вируса чаще встраиваются в эти области. Таким образом, негомологичные гены могут быть объединены в небольшой домен. [16]

    Возможно, некоторые участки генома лучше подходят для важных генов. Для клетки важно, чтобы гены, отвечающие за базальные функции, были защищены от рекомбинации. У дрожжей и червей наблюдалось, что важные гены имеют тенденцию группироваться в регионах с небольшой скоростью репликации. [17]

    Возможно, гены оказались в непосредственной близости в результате изменений. Были предложены и другие модели, но ни одна из них не может объяснить все наблюдаемые явления. Понятно, что как только кластеры образуются, они сохраняются естественным отбором. Однако точная модель того, как гены оказались в непосредственной близости, до сих пор отсутствует.

    Основная часть нынешних кластеров, должно быть, образовалась относительно недавно, поскольку между типами консервативны только семь кластеров функционально связанных генов. Некоторые из этих различий можно объяснить тем фактом, что экспрессия генов очень по-разному регулируется разными типами. Например, у позвоночных и растений используется метилирование ДНК, тогда как у дрожжей и мух оно отсутствует. [18]

    См. также

    [ редактировать ]

    Примечания

    [ редактировать ]
    1. ^ Jump up to: а б с Кэрон Х., ван Шайк Б., ван дер Ми М. и др. (февраль 2001 г.). «Карта транскриптома человека: кластеризация высокоэкспрессируемых генов в хромосомных доменах» . Наука . 291 (5507): 1289–92. Бибкод : 2001Sci...291.1289C . дои : 10.1126/science.1056794 . ПМИД   11181992 .
    2. ^ Велкулеску В.Е., Чжан Л., Чжоу В. и др. (январь 1997 г.). «Характеристика транскриптома дрожжей» . Клетка . 88 (2): 243–51. дои : 10.1016/S0092-8674(00)81845-0 . ПМИД   9008165 .
    3. ^ Чо Р.Дж., Кэмпбелл М.Дж., Винзелер Е.А. и др. (июль 1998 г.). «Полногеномный транскрипционный анализ митотического клеточного цикла» . Мол. Клетка . 2 (1): 65–73. дои : 10.1016/S1097-2765(00)80114-8 . ПМИД   9702192 .
    4. ^ Лерчер М.Дж., Уррутия А.О., Херст Л.Д. (июнь 2002 г.). «Кластеризация генов домашнего хозяйства обеспечивает единую модель порядка генов в геноме человека». Нат. Жене . 31 (2): 180–3. дои : 10.1038/ng887 . ПМИД   11992122 . S2CID   5797987 .
    5. ^ Верстег Р., ван Шайк Б.Д., ван Батенбург М.Ф. и др. (сентябрь 2003 г.). «Карта транскриптома человека демонстрирует крайности в плотности генов, длине интронов, содержании GC и характере повторов для доменов высоко и слабо экспрессируемых генов» . Геном Рез . 13 (9): 1998–2004. дои : 10.1101/гр.1649303 . ПМК   403669 . ПМИД   12915492 .
    6. ^ Ли Дж. М., Зоннхаммер Э. Л. (май 2003 г.). «Кластерный анализ геномных генов у эукариот» . Геном Рез . 13 (5): 875–82. дои : 10.1101/гр.737703 . ПМК   430880 . ПМИД   12695325 .
    7. ^ Сингер Г.А., Ллойд А.Т., Гуминецкий Л.Б., Вулф К.Х. (март 2005 г.). «Кластеры совместно экспрессируемых генов в геномах млекопитающих сохраняются естественным отбором» . Мол. Биол. Эвол . 22 (3): 767–75. дои : 10.1093/molbev/msi062 . hdl : 2262/29227 . ПМИД   15574806 .
    8. ^ Спеллман П.Т., Рубин Г.М. (2002). «Доказательства наличия больших доменов одинаково экспрессируемых генов в геноме дрозофилы » . Ж. Биол . 1 (1): 5. дои : 10.1186/1475-4924-1-5 . ПМК   117248 . ПМИД   12144710 .
    9. ^ Рой П.Дж., Стюарт Дж.М., Лунд Дж., Ким С.К. (август 2002 г.). «Хромосомная кластеризация генов, экспрессируемых мышцами, у Caenorhabditis elegans ». Природа . 418 (6901): 975–9. дои : 10.1038/nature01012 . ПМИД   12214599 . S2CID   4379384 .
    10. ^ Джоннидис Дж.Б., Венанци Э.С., Taxman DJ, Ting JP, Benoist CO, Mathis DJ (май 2005 г.). «Хромосомная кластеризация генов, контролируемая фактором транскрипции aire» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 102 (20): 7233–8. Бибкод : 2005PNAS..102.7233J . дои : 10.1073/pnas.0502670102 . ПМЦ   1129145 . ПМИД   15883360 .
    11. ^ Гирман Х.Дж., Индеманс М.Х., Костер Дж. и др. (сентябрь 2007 г.). «Общедоменная регуляция экспрессии генов в геноме человека» . Геном Рез . 17 (9): 1286–95. дои : 10.1101/гр.6276007 . ЧВК   1950897 . ПМИД   17693573 .
    12. ^ Ямасита Т., Хонда М., Такатори Х., Нишино Р., Хосино Н., Канеко С. (ноябрь 2004 г.). «Анализ картирования транскриптома по всему геному выявляет закономерности экспрессии органоспецифичных генов вдоль хромосом человека». Геномика . 84 (5): 867–75. дои : 10.1016/j.ygeno.2004.08.008 . ПМИД   15475266 .
    13. ^ Косак С.Т., Грудин М. (октябрь 2004 г.). «Порядок генов и динамические домены». Наука . 306 (5696): 644–7. Бибкод : 2004Sci...306..644K . дои : 10.1126/science.1103864 . ПМИД   15499009 . S2CID   7293449 .
    14. ^ Гилберт Н., Бойл С., Фиглер Х., Вудфайн К., Картер Н.П., Бикмор В.А. (сентябрь 2004 г.). «Хроматиновая архитектура генома человека: богатые генами домены обогащены открытыми волокнами хроматина» . Клетка . 118 (5): 555–66. дои : 10.1016/j.cell.2004.08.011 . ПМИД   15339661 .
    15. ^ Лоуренс Дж.Г. (сентябрь 1997 г.). «Эгоистичные опероны и видообразование путем переноса генов». Тенденции Микробиол . 5 (9): 355–9. дои : 10.1016/S0966-842X(97)01110-4 . ПМИД   9294891 .
    16. ^ Лефаи Э., Фернандес-Морено М.А., Кагуни Л.С., Гаресс Р. (июнь 2000 г.). «Очень компактная структура геномной области митохондриальной ДНК-полимеразы Drosophila melanogaster : функциональные и эволюционные последствия». Насекомое Мол. Биол . 9 (3): 315–22. дои : 10.1046/j.1365-2583.2000.00191.x . ПМИД   10886416 . S2CID   39243989 .
    17. ^ Пал С., Херст Л.Д. (март 2003 г.). «Доказательства совместной эволюции порядка генов и скорости рекомбинации». Нат. Жене . 33 (3): 392–5. дои : 10.1038/ng1111 . ПМИД   12577060 . S2CID   21567576 .
    18. ^ Регев А., Лэмб М.Дж., Яблонка Э. (июль 1998 г.). «Роль метилирования ДНК у беспозвоночных: регуляция развития или защита генома?» . Мол Биол Эвол . 15 (7): 880–891. doi : 10.1093/oxfordjournals.molbev.a025992 .
    Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Ridge_(biology)&oldid=1220983177"
    Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
    Arc.Ask3.Ru
    Номер скриншота №: bd4621da01adf3f5ed42a202e03d2e53__1714177800
    URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/bd/53/bd4621da01adf3f5ed42a202e03d2e53.html
    Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
    Ridge (biology) - Wikipedia
    Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)