Jump to content

Нуклеофекция

Нуклеофекция представляет собой электропорации на основе метод трансфекции , который позволяет переносить нуклеиновых кислот , таких как ДНК и РНК в клетки, путем применения определенного напряжения и реагентов. Nucleofection, также называемая технологией Nucleofector , была изобретена биотехнологической компанией Amaxa. «Нуклеофектор» и «нуклеофекция» - это товарные знаки, принадлежащие Lonza Cologne AG, часть группы Lonza .

Приложения

[ редактировать ]

Нуклеофекция - это метод переноса субстратов в клетки млекопитающих до сих пор считается трудным или даже невозможным для трансфекции. Примерами таких субстратов являются нуклеиновые кислоты, как ДНК выделенного гена, клонированного в плазмиду , или небольшую интерферирующую РНК (siRNA) для сбивания экспрессии специфического эндогенного гена.

Первичные клетки, например, стволовые клетки , особенно попадают в эту категорию, хотя многие другие клеточные линии также трудно трансфицировать. Первичные клетки свежеприготовлены из ткани тела , и, следовательно, клетки неизменны, очень похожие на ситуацию in vivo и, следовательно, имеют особое значение для медицинских исследований . Напротив, клеточные линии часто культивировались в течение десятилетий и могут значительно отличаться от их происхождения.

Механизм

[ редактировать ]

Основываясь на физическом методе электропорации , Nucleofection использует комбинацию электрических параметров, генерируемой устройством, называемом нуклеофетором, с специфическими реагентами типа ячеек. Субстрат переносится непосредственно в ядро ​​клеток и цитоплазму . Напротив, другие обычно используемые невирусные методы трансфекции полагаются на деление клеток для переноса ДНК в ядро. Таким образом, нуклеофекция обеспечивает способность трансфицировать даже не дидизирующие клетки, такие как нейрон и покоящиеся клетки крови . До введения технологии нуклеофетора эффективная перенос генов в первичные клетки была ограничена использованием вирусных векторов , которые обычно включают недостатки, такие как риски безопасности, отсутствие надежности и высокая стоимость. Доступные методы переноса невирусных генов не подходили для эффективной трансфекции первичных клеток. Методы невирусной доставки могут потребовать деления клеток для завершения трансфекции, поскольку ДНК входит в ядро ​​во время разрушения Ядерная оболочка на клеточном делении или с помощью конкретной последовательности локализации. Оптимальные условия нуклеофекции зависят от отдельного типа клеток , а не от трансфицированного субстрата. Это означает, что идентичные условия используются для нуклеофекции ДНК, РНК, миРНК, SRNAS , мРНК и пре-мРНК , BAC , пептидов , морфолино , PNA или других биологически активных молекул.

Смотрите также

[ редактировать ]

References

[edit]
  • Kerima Maasho; Alina Marusina; Nicole M. Reynolds; John E. Coligan; Francisco Borrego (January 2004). "Efficient gene transfer into the human natural killer cell line, NKL, using the amaxa nucleofection system". Journal of Immunological Methods. 284 (1–2): 133–140. doi:10.1016/j.jim.2003.10.010. PMID 14736423.
  • Pascal G. Leclere; Aliza Panjwani; Reginald Docherty; Martin Berry; John Pizzey; David A. Tonge (15 Mar 2005). "Effective gene delivery to adult neurons by a modified form of electroporation". Journal of Neuroscience Methods. 142 (1): 137–143. doi:10.1016/j.jneumeth.2004.08.012. PMID 15652627. S2CID 38463232.
  • Michela Aluigi; Miriam Fogli; Antonio Curti; Alessandro Isidori; Elisa Gruppioni; Claudia Chiodoni; Mario P. Colombo; Piera Versura; Antonia D'Errico-Grigioni; Elisa Ferri; Michele Baccarani; Roberto M. Lemoli (February 2006). "Nucleofection is an efficient non-viral transfection technique for human bone marrow-derived mesenchymal stem cells". Stem Cells. 24 (2): 454–461. doi:10.1634/stemcells.2005-0198. PMID 16099993.
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: eee899257522224be7670f2876ba1eb2__1695678840
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/ee/b2/eee899257522224be7670f2876ba1eb2.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Nucleofection - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)