Нуклеофекция
Нуклеофекция представляет собой электропорации на основе метод трансфекции , который позволяет переносить нуклеиновых кислот , таких как ДНК и РНК в клетки, путем применения определенного напряжения и реагентов. Nucleofection, также называемая технологией Nucleofector , была изобретена биотехнологической компанией Amaxa. «Нуклеофектор» и «нуклеофекция» - это товарные знаки, принадлежащие Lonza Cologne AG, часть группы Lonza .
Приложения
[ редактировать ]Нуклеофекция - это метод переноса субстратов в клетки млекопитающих до сих пор считается трудным или даже невозможным для трансфекции. Примерами таких субстратов являются нуклеиновые кислоты, как ДНК выделенного гена, клонированного в плазмиду , или небольшую интерферирующую РНК (siRNA) для сбивания экспрессии специфического эндогенного гена.
Первичные клетки, например, стволовые клетки , особенно попадают в эту категорию, хотя многие другие клеточные линии также трудно трансфицировать. Первичные клетки свежеприготовлены из ткани тела , и, следовательно, клетки неизменны, очень похожие на ситуацию in vivo и, следовательно, имеют особое значение для медицинских исследований . Напротив, клеточные линии часто культивировались в течение десятилетий и могут значительно отличаться от их происхождения.
Механизм
[ редактировать ]Основываясь на физическом методе электропорации , Nucleofection использует комбинацию электрических параметров, генерируемой устройством, называемом нуклеофетором, с специфическими реагентами типа ячеек. Субстрат переносится непосредственно в ядро клеток и цитоплазму . Напротив, другие обычно используемые невирусные методы трансфекции полагаются на деление клеток для переноса ДНК в ядро. Таким образом, нуклеофекция обеспечивает способность трансфицировать даже не дидизирующие клетки, такие как нейрон и покоящиеся клетки крови . До введения технологии нуклеофетора эффективная перенос генов в первичные клетки была ограничена использованием вирусных векторов , которые обычно включают недостатки, такие как риски безопасности, отсутствие надежности и высокая стоимость. Доступные методы переноса невирусных генов не подходили для эффективной трансфекции первичных клеток. Методы невирусной доставки могут потребовать деления клеток для завершения трансфекции, поскольку ДНК входит в ядро во время разрушения Ядерная оболочка на клеточном делении или с помощью конкретной последовательности локализации. Оптимальные условия нуклеофекции зависят от отдельного типа клеток , а не от трансфицированного субстрата. Это означает, что идентичные условия используются для нуклеофекции ДНК, РНК, миРНК, SRNAS , мРНК и пре-мРНК , BAC , пептидов , морфолино , PNA или других биологически активных молекул.
Смотрите также
[ редактировать ]References
[edit]- Kerima Maasho; Alina Marusina; Nicole M. Reynolds; John E. Coligan; Francisco Borrego (January 2004). "Efficient gene transfer into the human natural killer cell line, NKL, using the amaxa nucleofection system". Journal of Immunological Methods. 284 (1–2): 133–140. doi:10.1016/j.jim.2003.10.010. PMID 14736423.
- Pascal G. Leclere; Aliza Panjwani; Reginald Docherty; Martin Berry; John Pizzey; David A. Tonge (15 Mar 2005). "Effective gene delivery to adult neurons by a modified form of electroporation". Journal of Neuroscience Methods. 142 (1): 137–143. doi:10.1016/j.jneumeth.2004.08.012. PMID 15652627. S2CID 38463232.
- Michela Aluigi; Miriam Fogli; Antonio Curti; Alessandro Isidori; Elisa Gruppioni; Claudia Chiodoni; Mario P. Colombo; Piera Versura; Antonia D'Errico-Grigioni; Elisa Ferri; Michele Baccarani; Roberto M. Lemoli (February 2006). "Nucleofection is an efficient non-viral transfection technique for human bone marrow-derived mesenchymal stem cells". Stem Cells. 24 (2): 454–461. doi:10.1634/stemcells.2005-0198. PMID 16099993.