Негативное пятно
В микроскопии — негативное окрашивание общепринятый метод, часто используемый в диагностической микроскопии для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачной жидкостью . В этом методе фон окрашивается , оставляя сам образец нетронутым и, следовательно, видимым. Это контрастирует с позитивным окрашиванием , при котором окрашивается реальный образец.
Светлопольная микроскопия
[ редактировать ]Для светлопольной микроскопии негативное окрашивание обычно выполняется с использованием черной чернильной жидкости, такой как нигрозин и тушь . Образец, такой как влажная бактериальная культура, нанесенная на предметное стекло, смешивается с негативным красителем и дает высохнуть. При рассмотрении под микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном окружающем фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водостойкого маркера для нанесения негативного пятна. [1]
Просвечивающая электронная микроскопия
[ редактировать ]В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность для электронов связана с атомным номером , т. е. числом протонов. Некоторые подходящие негативные красители включают молибдат аммония , ацетат уранила , формиат уранила , фосфорновольфрамовую кислоту , тетроксид осмия , феррицианид осмия. [2] и ауроглюкотионат . Они были выбраны потому, что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются биологическим веществом. Структуры, поддающиеся отрицательному окрашиванию, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь этот метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальных жгутиков , биологических мембранных структур, а также белков или белковых агрегатов, которые обладают низкой способностью рассеивать электроны. Некоторые красители, такие как тетраоксид осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Будучи сильными окислителями, они сшивают липиды главным образом за счет реакции с ненасыщенными углерод-углеродными связями и тем самым не только фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей, но и одновременно окрашивают их. [3] [4]
Выбор негативного пятна в электронной микроскопии может иметь очень важное значение. Раннее исследование вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним пятном и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод заключался в том, что это растение пострадало от смешанного заражения двумя отдельными вирусами. Негативное окрашивание как на уровне светового, так и электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры предосторожности. Негативное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.
Другие приложения
[ редактировать ]
Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применяется для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатые липосомы (le), инвертированные сферические мицеллы (M) и инвертированные гексагональные цилиндрические HII (H) фазы (см. рисунок). [5]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Весте, С; Демчик, П. (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . 57 (6). Американское общество микробиологии: 1858–1859. doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . ЧВК 183484 . ПМИД 1714705 .
- ^ Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматической сети в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. стр. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5 .
- ^ Боззола, Джон Дж.; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образцов к просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. стр. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5 .
- ^ М.А. Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические приложения . Издательство Кембриджского университета. стр. 45–61. ISBN 0-521-63287-0 .
- ^ Яшрой, Р.К. (1990). «Ламеллярная дисперсия и фазовое разделение липидов мембран хлоропластов методом негативной электронной микроскопии». Журнал биологических наук . 15 (2). ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа»: 93–98. дои : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .
Внешние ссылки
[ редактировать ]- «Негативное окрашивание для чайников» . Проверено 6 июня 2009 г.
- «Негативное окрашивание» . Архивировано из оригинала 25 декабря 2012 г. Проверено 6 июня 2009 г.