ТКЭП

ТКЭП
Имена
	Предпочтительное название ИЮПАК 3,3',3''-фосфантриилтрипропановая кислота
	Другие имена ТКЭП ; Трис(2-карбоксиэтил)фосфин
Идентификаторы
Номер CAS	51805-45-9 (соли хлористоводородная) ;
3D model ( JSmol )	Интерактивное изображение ;
ХимическийПаук	106653 ;
ПабХим CID	119411 ;
НЕКОТОРЫЙ	Х49ААМ893К ;
Панель управления CompTox ( EPA )	DTXSID90208290 ;
	показывать ИнЧИ
	показывать УЛЫБКИ
Характеристики
Химическая формула	С 9 Н 15 О 6 П
Молярная масса	250.187 g·mol −1
	Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа). проверить ( что такое ?) Ссылки на инфобоксы

TCEP ( трис(2-карбоксиэтил)фосфин ) представляет собой восстановитель, часто используемый в биохимии и молекулярной биологии . Его часто готовят и используют в виде гидрохлоридной соли (TCEP-HCl) с молекулярной массой 286,65 грамм/моль. Он растворим в воде, доступен в виде стабилизированного раствора при нейтральном pH и иммобилизован на агарозном носителе для облегчения удаления восстановителя.

Синтез

TCEP можно получить кислотным гидролизом трис(цианоэтил)фосфина . ^{[ 1 ]}

Приложения

TCEP часто используется в качестве восстановителя для разрыва дисульфидных связей внутри и между белками в качестве подготовительного этапа к гель-электрофореза .

По сравнению с двумя другими наиболее распространенными агентами, используемыми для этой цели ( дитиотреитом и β-меркаптоэтанолом ), TCEP имеет преимущества, заключающиеся в том, что он не имеет запаха, является более мощным восстановителем и необратимым восстановителем (в том смысле, что TCEP не регенерирует - конец продукт TCEP-опосредованного расщепления дисульфида на самом деле представляет собой два свободных тиола/цистеина), более гидрофильный и более устойчивый к окислению на воздухе. ^{[ 2 ]} Он также не восстанавливает металлы, используемые в аффинной хроматографии с иммобилизованными металлами .

TCEP особенно полезен при мечении остатков цистеина малеимидами . TCEP может препятствовать образованию дисульфидных связей цистеинами и, в отличие от дитиотреитола и β-меркаптоэтанола , он не так легко реагирует с малеимидом. ^{[ 2 ]} Однако сообщалось, что TCEP вступает в реакцию с малеимидом при определенных условиях. ^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}

TCEP также используется в процессе гомогенизации тканей для выделения РНК. ^{[ 5 ]}

Для приложений ультрафиолетовой и видимой спектроскопии TCEP полезен, когда важно избежать мешающего поглощения от 250 до 285 нанометров, которое может возникнуть при использовании дитиотреитола . Дитиотреитол будет медленно, с течением времени, поглощать все больше и больше света в этом спектре по мере возникновения различных окислительно-восстановительных реакций.

История

Восстановлению биомолекул с помощью трилкифосфинов на протяжении десятилетий уделялось мало внимания, поскольку исторически доступные фосфины имели чрезвычайно неприятный запах и/или нерастворимы в воде. ^{[ 6 ]} В 1969 году было сообщено о TCEP как о не имеющем запаха и водорастворимом трилкифосфине, пригодном для биохимического использования. ^{[ 7 ]} однако потенциальное использование TCEP для биохимических применений почти полностью игнорировалось на протяжении десятилетий. В 1991 году Бернс сообщил о новой удобной процедуре синтеза TCEP. ^{[ 8 ]} что привело к тому, что TCEP стал более широко доступным и продавался как «новый» восстановитель для биохимического использования, и, таким образом, TCEP стал более широко использоваться на протяжении 1990-х годов. ^{[ 6 ]}

Реакции

TCEPT восстанавливает дисульфиды до тиолов в присутствии воды:

С помощью аналогичного процесса он также может восстанавливать сульфоксиды и N-оксиды . ^{[ 9 ]} Сообщалось также о некоторых других побочных реакциях:

Превращение остатка цистеина в аланин в присутствии TCEP и нагревания (90°C). ^{[ 10 ]}
Медленное (но значительное, 40% расщепление зарегистрировано при двухнедельном хранении при 4˚C) расщепление основной цепи белка по остаткам цистеина в мягких условиях. ^{[ 11 ]}

Использование в биологических исследованиях

TCEP доступен от различных поставщиков химикатов в виде гидрохлоридной соли. При растворении в воде TCEP-HCl является кислым. Сообщаемый препарат представляет собой 0,5 М водный маточный раствор TCEP-HCl, pH которого доведен до почти нейтрального значения и хранится замороженным при -20°C. ^{[ 12 ]} Сообщается, что TCEP менее стабилен в фосфатных буферах. ^{[ 12 ]}

См. также

Ссылки

^ Йост Дж. М., Найт Дж. Д., Колтарт Д. М. (15 сентября 2008 г.). «Трис(2-карбоксиэтил)фосфина гидрохлорид». Энциклопедия реагентов для органического синтеза . дои : 10.1002/047084289X.rn00973 .
^ Jump up to: ^а ^б Техническая информация TCEP от Interchim
^ Шафер, Д.Э., Инман, Дж.К., Лис, А. (2002). «Реакция трис (2-карбоксиэтил) фосфина (TCEP) с малеимидом и α-галогенацильными группами: аномальное элюирование TCEP путем гель-фильтрации». Анальный. Биохим . 282 (1): 161–164. дои : 10.1006/abio.2000.4609 . ПМИД 10860517 . S2CID 37825047 .
^ Тьягараян К., Претцер Э., Викторович Дж.Е. (2003). «Тиол-реактивные красители для флуоресцентного мечения протеомных образцов». Электрофорез . 24 (14): 2348–2358. дои : 10.1002/elps.200305478 . ПМИД 12874870 . S2CID 20446141 .
^ Ри СС, Берк Д.Х. (2004). «Стабилизация РНК трис (2-карбоксиэтил) фосфином: сравнение с дитиотреитолом для использования в химии нуклеиновых кислот и тиофосфорилов». Анальный. Биохим . 325 (1): 137–143. дои : 10.1016/j.ab.2003.10.019 . ПМИД 14715294 .
^ Jump up to: ^а ^б Хан Дж, Хан Джи (1994). «Методика количественного определения трис (2-карбоксиэтил) фосфина, восстановителя без запаха, более стабильного и эффективного, чем дитиотреитол». Аналитическая биохимия . 220 (1). Эльзевир Б.В.: 5–10. дои : 10.1006/abio.1994.1290 . ISSN 0003-2697 . ПМИД 7978256 .
^ Левисон М.Е., Джозефсон А.С., Киршенбаум Д.М. (1969). «Восстановление биологических веществ водорастворимыми фосфинами: Гамма-глобулин (IgG)». Эксперименты . 25 (2). ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа»: 126–127. дои : 10.1007/bf01899076 . ISSN 0014-4754 . ПМИД 4182166 . S2CID 20548859 .
^ Бернс Дж. А., Батлер Дж. К., Моран Дж., Уайтсайдс GM (1991). «Селективное восстановление дисульфидов трис (2-карбоксиэтил) фосфином». Журнал органической химии . 56 (8). Американское химическое общество (ACS): 2648–2650. дои : 10.1021/jo00008a014 . ISSN 0022-3263 .
^ Фаушер А.М., Гранд-метр С (октябрь 2003 г.). «Трис (2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP) для восстановления сульфоксидов, сульфонилхлоридов, N-оксидов и азидов». Синтетические коммуникации . 33 (20): 3503–3511. дои : 10.1081/SCC-120024730 .
^ Ван З., Рейтар Т., Чжоу З.С., Каргер Б.Л. (4 января 2010 г.). «Десульфуризация цистеинсодержащих пептидов, полученных в результате подготовки проб для характеристики белков методом масс-спектрометрии» . Быстрая связь в масс-спектрометрии . 24 (3). Уайли: 267–275. дои : 10.1002/rcm.4383 . ISSN 0951-4198 . ПМК 2908508 . ПМИД 20049891 .
^ Лю П., О'Мара Б.В., Варрак Б.М., Ву В., Хуан Й., Чжан Й., Чжао Р., Линь М., Акерман М.С., Хокнелл П.К., Чен Г., Тао Л., Рибл С., Ван Дж., Ван-Айверсон Д.Б., Таймиак А.А., Грейс М.Дж., Рассел Р.Дж. (28 января 2010 г.). «Расщепление цистеинсодержащих белков, связанное с трис (2-карбоксиэтил) фосфином (TCEP)» . Журнал Американского общества масс-спектрометрии . 21 (5). Американское химическое общество (ACS): 837–844. дои : 10.1016/j.jasms.2010.01.016 . ISSN 1044-0305 . ПМИД 20189823 .
^ Jump up to: ^а ^б «Стратегии очистки белков» . Цитива . Проверено 24 февраля 2023 г.

[1] Йост Дж. М., Найт Дж. Д., Колтарт Д. М. (15 сентября 2008 г.). «Трис(2-карбоксиэтил)фосфина гидрохлорид». Энциклопедия реагентов для органического синтеза . дои : 10.1002/047084289X.rn00973 .

[FT-242214-2] Jump up to: ^а ^б Техническая информация TCEP от Interchim

[3] Шафер, Д.Э., Инман, Дж.К., Лис, А. (2002). «Реакция трис (2-карбоксиэтил) фосфина (TCEP) с малеимидом и α-галогенацильными группами: аномальное элюирование TCEP путем гель-фильтрации». Анальный. Биохим . 282 (1): 161–164. дои : 10.1006/abio.2000.4609 . ПМИД 10860517 . S2CID 37825047 .

[4] Тьягараян К., Претцер Э., Викторович Дж.Е. (2003). «Тиол-реактивные красители для флуоресцентного мечения протеомных образцов». Электрофорез . 24 (14): 2348–2358. дои : 10.1002/elps.200305478 . ПМИД 12874870 . S2CID 20446141 .

[5] Ри СС, Берк Д.Х. (2004). «Стабилизация РНК трис (2-карбоксиэтил) фосфином: сравнение с дитиотреитолом для использования в химии нуклеиновых кислот и тиофосфорилов». Анальный. Биохим . 325 (1): 137–143. дои : 10.1016/j.ab.2003.10.019 . ПМИД 14715294 .

[Han1994-6] Jump up to: ^а ^б Хан Дж, Хан Джи (1994). «Методика количественного определения трис (2-карбоксиэтил) фосфина, восстановителя без запаха, более стабильного и эффективного, чем дитиотреитол». Аналитическая биохимия . 220 (1). Эльзевир Б.В.: 5–10. дои : 10.1006/abio.1994.1290 . ISSN 0003-2697 . ПМИД 7978256 .

[Levison1969-7] Левисон М.Е., Джозефсон А.С., Киршенбаум Д.М. (1969). «Восстановление биологических веществ водорастворимыми фосфинами: Гамма-глобулин (IgG)». Эксперименты . 25 (2). ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа»: 126–127. дои : 10.1007/bf01899076 . ISSN 0014-4754 . ПМИД 4182166 . S2CID 20548859 .

[Burns_Butler_Moran_Whitesides_1991_pp._2648–2650-8] Бернс Дж. А., Батлер Дж. К., Моран Дж., Уайтсайдс GM (1991). «Селективное восстановление дисульфидов трис (2-карбоксиэтил) фосфином». Журнал органической химии . 56 (8). Американское химическое общество (ACS): 2648–2650. дои : 10.1021/jo00008a014 . ISSN 0022-3263 .

[9] Фаушер А.М., Гранд-метр С (октябрь 2003 г.). «Трис (2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP) для восстановления сульфоксидов, сульфонилхлоридов, N-оксидов и азидов». Синтетические коммуникации . 33 (20): 3503–3511. дои : 10.1081/SCC-120024730 .

[Wang2010-10] Ван З., Рейтар Т., Чжоу З.С., Каргер Б.Л. (4 января 2010 г.). «Десульфуризация цистеинсодержащих пептидов, полученных в результате подготовки проб для характеристики белков методом масс-спектрометрии» . Быстрая связь в масс-спектрометрии . 24 (3). Уайли: 267–275. дои : 10.1002/rcm.4383 . ISSN 0951-4198 . ПМК 2908508 . ПМИД 20049891 .

[Liu2010-11] Лю П., О'Мара Б.В., Варрак Б.М., Ву В., Хуан Й., Чжан Й., Чжао Р., Линь М., Акерман М.С., Хокнелл П.К., Чен Г., Тао Л., Рибл С., Ван Дж., Ван-Айверсон Д.Б., Таймиак А.А., Грейс М.Дж., Рассел Р.Дж. (28 января 2010 г.). «Расщепление цистеинсодержащих белков, связанное с трис (2-карбоксиэтил) фосфином (TCEP)» . Журнал Американского общества масс-спектрометрии . 21 (5). Американское химическое общество (ACS): 837–844. дои : 10.1016/j.jasms.2010.01.016 . ISSN 1044-0305 . ПМИД 20189823 .

[cytiva-12] Jump up to: ^а ^б «Стратегии очистки белков» . Цитива . Проверено 24 февраля 2023 г.

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]