Аффинная хроматография
Аффинная хроматография - это метод отделения биомолекулы от смеси, основанного на очень специфическом макромолекулярном взаимодействии между биомолекулой и другим веществом. Конкретный тип взаимодействия связывания зависит от интересующей биомолекулы; антиген и антитело , фермент и субстрат , рецептор и лиганд , или белок и нуклеиновая кислота [ 1 ] Взаимодействия связывания часто используются для выделения различных биомолекул. Аффинная хроматография полезна для его высокой селективности и разрешения разделения, [ 2 ] [ 3 ] по сравнению с другими хроматографическими методами.
Принцип
[ редактировать ]Аффинная хроматография имеет преимущество специфических связывающих взаимодействий между интересующим аналитом (обычно растворенным в подвижной фазе ), а также партнера по связыванию или лиганда (иммобилизована на стационарной фазе ). В типичном эксперименте с аффинной хроматографией лиганд прикреплен к твердой нерастворимой матрице - обычно полимер , такой как агароза или полиакриламид - химически модифицированный для введения реактивных функциональных групп , с которыми может реагировать лиганд, образуя стабильные ковалентные связи. [ 4 ] Стационарная фаза сначала загружается в столбец, в который вводится мобильная фаза. Молекулы, которые связываются с лигандом, останутся связанными со стационарной фазой. Затем применяется промывочный буфер для удаления нецелевых биомолекул, нарушая их более слабые взаимодействия со стационарной фазой, в то время как интересующие биомолекулы останутся связанными. Целевые биомолекулы могут быть затем удалены путем применения так называемого буфера элюирования, который нарушает взаимодействия между биомолекулами связанной цели и лигандом. Таким образом, целевая молекула восстанавливается в растворе элюирования. [ 5 ] [ страница необходима ]
Аффинная хроматография не требует, чтобы молекулярная масса, заряд, гидрофобность или другие физические свойства интересующего интереса аналита, хотя знание его связывающих свойств полезно при проектировании протокола разделения. [ 5 ] Типы связывающих взаимодействий, обычно используемых в процедурах аффинной хроматографии, обобщены в таблице ниже.
| Старший Хорошо | Типы лиганда | Целевая молекула |
|---|---|---|
| 1 | Аналог субстрата | Ферменты |
| 2 | Антитело | Антиген |
| 3 | Лектин | Полисахарид |
| 4 | Нуклеиновая кислота | Дополнительная базовая последовательность |
| 5 | Гормон | Рецептор |
| 6 | Авидин | Биотин /биотин-конъюгированная молекула |
| 7 | Кальмодулин | Партнер -кальмодулин |
| 8 | Глутатион | GST Fusion Protein |
| 9 | Белок А или белок g | Иммуноглобулины |
| 10 | Никель-нта | Полигистидиновый слитый белок |
Настройки партии и столбцов
[ редактировать ]
Связывание с твердой фазой может быть достигнуто с помощью колоночной хроматографии, при которой сплошная среда упакована на колонку, начальная смесь проходит через колонку, чтобы обеспечить оседание, промывочный буфер, пройденное через колонку и буфер элюирования впоследствии применяется к столбцу и собранный Полем Эти шаги обычно выполняются при давлении окружающей среды. Альтернативно, связывание может быть достигнуто с использованием пакетной обработки, например, путем добавления начальной смесью в твердую фазу в сосуде, смешивая, разделяя твердую фазу, удаляя жидкую фазу, промывку, повторное центрифугирование, добавление буфера элюирования, Повторное центрифугирование и удаление элюирования.
Иногда используется гибридный метод таким образом, что связывание выполняется методом партии, но сплошная фаза с границей целевой молекулы упакована на колонку, а промывание и элюирование выполняется на колонке.
Лиганды, используемые в аффинной хроматографии, получены как из органических, так и из неорганических источников. Примерами биологических источников являются сывороточные белки, лектины и антитела. Неорганическими источниками являются маринованная кислота, хелаты металлов и триазиновые красители. [ 7 ]
Был также разработан третий метод, расширенный поглощение слоя, которое сочетает в себе преимущества двух упомянутых выше методов. Частицы твердой фазы помещаются в колонну, где жидкая фаза перекачивается снизу и выходит сверху. Гравитация частиц гарантирует, что твердая фаза не выходит из колонны с жидкой фазой.
Аффинные колонны могут быть элюированы путем изменения концентрации соли, pH, PI, заряда и ионной силы напрямую или через градиент для разрешения интересующих частиц.
Совсем недавно были разработаны настройки в серии более одного столбца. Преимущество по сравнению с настройками отдельных столбцов заключается в том, что материал смолы может быть полностью загружен, поскольку не связывающий продукт напрямую передается в последовательный столбец со свежим материалом столбца. Эти хроматографические процессы известны как периодическая контр-тока-хроматография (PCC). Таким образом, затраты на смолу на сумму производимого продукта могут быть резко снижены. Поскольку один столбец всегда может быть элюирован и регенерирован, в то время как другой столбец загружается, уже достаточно двух столбцов, чтобы полностью использовать преимущества. [ 8 ] Дополнительные столбцы могут обеспечить дополнительную гибкость для элюирования и времени регенерации за счет дополнительного оборудования и затрат на смолу.
Конкретное использование
[ редактировать ]Аффинная хроматография может использоваться в ряде применений, включая очистку нуклеиновых кислот, очистка белка [ 9 ] Из свободных экстрактов и очистки от крови.
Используя аффинную хроматографию, можно разделить белки, которые связываются с определенным фрагментом от белков, которые не связывают этот специфический фрагмент. [ 10 ] Поскольку этот метод очистки зависит от биологических свойств необходимого белка, это полезная методика, и белки могут быть очищены много складок за один шаг. [ 11 ] [ страница необходима ]
Различные аффинные СМИ
[ редактировать ]Многие различные аффинные медиа существуют для различных возможных применений. [ 12 ] [ 9 ] [ 13 ] Вкратце, они (обобщенные) активированы/функционализируются, что работа в качестве функциональной проставки, поддержки матрицы и устраняет обработку токсичных реагентов.
Аминокислотная среда используется с различными сывороточными белками, белками, пептидами и ферментами, а также с рРНК и дсДНК. Биотиновая среда Avidin используется в процессе очистки биотина/авидина и их производных.
Углеводы чаще всего используются с гликопротеинами или любым другим содержанием углеводов; углеводы используются с лектинами, гликопротеинами или любым другим углеводом метаболитным белком. Красивая лигандная среда неспецифична, но имитирует биологические субстраты и белки. Глутатион полезен для разделения рекомбинантных белков с мечами GST. Гепарин является обобщенным аффинным лигандом, и он наиболее полезен для разделения белков коагуляции плазмы, а также ферментов нуклеиновых кислот и липаз
Гидрофобные взаимодействия среды чаще всего используются для нацеливания на свободные карбоксильные группы и белки.
Иммуноаффинная среда (подробная ниже) использует высокую специфичность антигенов и антител для разделения; Иммобилизованная аффинная хроматография металлов подробно описана ниже и использует взаимодействия между ионами металлов и белками (обычно специально помеченными) для разделения; нуклеотид/коэнзим, который работает для отделения дегидрогеназ, киназ и трансаминаз.
Нуклеиновые кислоты функционируют для ловушки мРНК, ДНК, рРНК и других нуклеиновых кислот/олигонуклеотидов. Метод белка A/G используется для очистки иммуноглобулинов.
Специальные носители предназначены для конкретного класса или типа фермента белка/CO; Этот тип среда будет работать только для разделения конкретного белка или коэнзима.
Иммуноаффинность
[ редактировать ]Другим использованием для процедуры является аффинная очистка антител из крови сыворотки. Если известно, что сыворотка содержит антитела против специфического антигена (например, если сыворотка происходит от организма, иммунизированного против соответствующего антигена), то ее можно использовать для очистки аффинности этого антигена. Это также известно как иммуноаффинная хроматография. Например, если организм иммунизируется против белка GST-слита, он будет продуцировать антитела против слитого белка, а также, возможно, антитела против тега GST. Затем белок может быть ковалентно связан с твердой поддержкой, такой как агароза, и используется в качестве аффинного лиганда при очистке антител из иммунной сыворотки.
Для тщательности белок GST и GST-слизистый белок могут быть связаны отдельно. Сыворотка первоначально разрешено связываться с аффинной матрицей GST. Это удалит антитела против GST части слитого белка. Затем сыворотку отделяют от твердой поддержки и позволяют связываться с матрицей белка слияния GST. Это позволяет любым антителам, которые распознают антиген, быть захваченным на твердой поддержке. Элюирование интересующих антител чаще всего достигается с использованием буфера с низким pH, такого как глицин рН 2,8. Элуат собирается в нейтральный трис или фосфатный буфер, чтобы нейтрализовать буфер элюирования с низким pH и остановить любую деградацию активности антител. Это хороший пример, так как для очистки исходного белка GST-слита используется аффинная очистка для удаления нежелательных антител против GST из сыворотки и для очистки целевого антитела.
Моноклональные антитела также могут быть выбраны для связывания белков с большой специфичностью, где белок высвобождается в довольно мягких условиях. Это может стать необходимым для дальнейших исследований в будущем. [ 14 ]
Упрощенная стратегия часто используется для очистки антител, полученных против пептидных антигенов . Когда пептидные антигены продуцируются синтетически, терминальный остаток цистеина добавляется в N- или C-конце пептида. Этот остаток цистеина содержит функциональную группу сульфгидрила , которая позволяет легко конъюгировать пептид с белком -носителем (например, гемоцианин лимпового ливка (klh)). Тот же цистеинсодержащий пептид также иммобилизуется на агарозной смоле через остаток цистеина и затем используется для очистки антитела.
Большинство моноклональных антител были очищены с использованием аффинной хроматографии, основанной на белке иммуноглобулиновом A или белке G , полученном из бактерий. [ 15 ]
Иммуноаффинная хроматография с моноклональными антителами, иммобилизованными на монолитной колонне, была успешно использована для захвата внеклеточных везикул (например, экзосомы и экзомеров) из плазмы крови человека путем нацеливания на тетраспанины и интегрины, обнаруженные на поверхности EV. [ 16 ] [ 17 ]
Иммуноаффинная хроматография также является основой для иммунохроматографических тестов (ИКТ), которые обеспечивают быстрые средства диагностики при уходе за пациентами. Используя ИКТ, техник может определить у постели больного пациента без необходимости в лаборатории. [ 18 ] Обнаружение ИКТ очень специфична для микроба, вызывающего инфекцию. [ 19 ]
Иммобилизованная ионная аффинная хроматография металла
[ редактировать ]Иммобилизованная ионная аффинная хроматография (IMAC) основана на специфической координате ковалентной связи аминокислот, особенно гистидина, с металлами. Этот метод работает, позволяя белкам с аффинностью к сохранению ионов металлов в колонке, содержащей иммобилизованные ионы металлов, такие как кобальт, никель или медь для очистки гистидина, содержащих белки или пептиды, железо, цинк или галлия для очистки фосфорилированных белков или пептидов. Многие природные белки не имеют сродства к ионам металлов, поэтому рекомбинантная технология ДНК может использоваться для введения такой белковой метки в соответствующий ген. Методы, используемые для элюирования интересующего белка, включают изменение pH или добавление конкурентной молекулы, такой как имидазол . [ 20 ] [ 21 ]
Рекомбинантные белки
[ редактировать ]Возможно, наиболее распространенное использование аффинной хроматографии предназначено для очистки рекомбинантных белков. Белки с известным сродством являются белком, помеченными для того, чтобы помочь их очистке. Белок мог быть генетически модифицирован, чтобы позволить его выбрать для связывания аффинности; Это известно как слитый белок. Белковые метки включают гексагистидин ( HIS ), глутатион -S -трансферазу (GST), меж, связывающий мальтозу (MBP) и вариант Colicin E7 Cl7. Теги гистидина имеют сродство к никелевым , кобальту , цинку , медью и ионам железа , которые были иммобилизованы путем формирования координат ковалентных связей с хелатором, включенным в стационарную фазу. избыточное количество соединения, способного действовать в качестве ионного лиганда металла, такого как имидазол Для элюирования используется . GST имеет сродство к глутатиону, которая коммерчески доступна иммобилизована как глутатион агароза. Во время элюирования избыточный глутатион используется для вытеснения меченного белка. CL7 обладает сродством и специфичностью для белка иммунитета 7 (IM7), который коммерчески доступен иммобилизован в виде агарозной смолы IM7. Для элюирования активная и специфическая для участка протеаза применяется к смоле IM7 для высвобождения белка без метки. [ 22 ]
Лектины
[ редактировать ]Аффинная хроматография лектина является формой аффинной хроматографии, в которой лектины используются для разделения компонентов внутри выборки. Лектины, такие как конканавалин А, являются белками, которые могут связывать специфические альфа-D-маннозы и альфа-D-глюкозу углеводов. Некоторые общие молекулы углеводов, которые используются в аффинной хроматографии лектина,-это конг-сефароза и wga-агароза. [ 23 ] Другим примером лектина является агглютинин зародышей пшеницы, который связывает DN-ацетил-глюкозамин. [ 24 ] Наиболее распространенным применением является отделение гликопротеинов от не гликозилированных белков или одного гликоформа от другой гликоформ. [ 25 ] Хотя существуют различные способы выполнения аффинной хроматографии лектина, целью является извлечение сахарного лиганда желаемого белка. [ 23 ]
Специальность
[ редактировать ]Другим использованием для аффинной хроматографии является очистка специфических белков с использованием гелевой матрицы, которая является уникальной для специфического белка. Например, очистка β-галактозидазы E. coli осуществляется с помощью аффинной хроматографии с использованием п-аминобенил-1-тио-β-D-галактопиранозильного агарозы в качестве аффинной матрицы. P-аминобенил-1-тио-β-D-галактопиранозильная агароза используется в качестве аффинной матрицы, поскольку она содержит галактопиранозильную группу, которая служит хорошим субстратом аналогом для β-галактозидазы E. coli. Это свойство позволяет ферменту связываться с стационарной фазой аффинной матрицы, а β-галактозидаза элюируется путем добавления увеличения концентрации соли в колонну. [ 26 ]
Щелочная фосфатаза
[ редактировать ]Щелочная фосфатаза из кишечной палочки может быть очищена с использованием матрицы DEAE-Cellulose. A. Фосфатаза имеет небольшой отрицательный заряд, позволяя ему слабо связываться с положительно заряженными группами амина в матрице. Затем фермент может быть элюирован, добавив буфер с более высокими концентрациями соли. [ 27 ]
Боронат аффинная хроматография
[ редактировать ]Аффинная хроматография борната состоит из использования борновой кислоты или боронатов для элюирования и количественной оценки количества гликопротеинов . Клиническая адаптация применила этот тип хроматографии для использования при определении долгосрочной оценки пациентов с диабетом путем анализа их гликированного гемоглобина . [ 24 ]
Очистка сывороточного альбумина
[ редактировать ]Affinity purification of albumin and macroglobulin contamination is helpful in removing excess albumin and α2-macroglobulin contamination, when performing mass spectrometry. In affinity purification of serum albumin, the stationary used for collecting or attracting serum proteins can be Cibacron Blue-Sepharose. Then the serum proteins can be eluted from the adsorbent with a buffer containing thiocyanate (SCN−).[28]
Weak affinity chromatography
[edit]Weak affinity chromatography[29] (WAC) is an affinity chromatography technique for affinity screening in drug development.[30][31] WAC is an affinity-based liquid chromatographic technique that separates chemical compounds based on their different weak affinities to an immobilized target. The higher affinity a compound has towards the target, the longer it remains in the separation unit, and this will be expressed as a longer retention time. The affinity measure and ranking of affinity can be achieved by processing the obtained retention times of analyzed compounds. Affinity chromatography is part of a larger suite of techniques used in chemoproteomics based drug target identification.
The WAC technology is demonstrated against a number of different protein targets – proteases, kinases, chaperones and protein–protein interaction (PPI) targets. WAC has been shown to be more effective than established methods for fragment based screening.[31]
History
[edit]Affinity chromatography was conceived and first developed by Pedro Cuatrecasas and Meir Wilchek.[32][33]
References
[edit]- ^ Aizpurua-Olaizola, Oier; Sastre Torano, Javier; Pukin, Aliaksei; Fu, Ou; Boons, Geert Jan; de Jong, Gerhardus J.; Pieters, Roland J. (January 2018). "Affinity capillary electrophoresis for the assessment of binding affinity of carbohydrate-based cholera toxin inhibitors". Electrophoresis. 39 (2): 344–347. doi:10.1002/elps.201700207. hdl:1874/362143. PMID 28905402. S2CID 33657660.
- ^ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2009). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology (2nd ed.). Wiley. p. 133. ISBN 9780470087664.
- ^ ""Introduction to Affinity Chromatography"". bio-rad.com. Bio-Rad. 14 September 2020. Retrieved 14 September 2020.
- ^ Zachariou, Michael, ed. (2008). Affinity Chromatography: Methods and Protocols (2nd ed.). Totowa, N.J.: Humana Press. pp. 1–2. ISBN 9781588296597.
- ^ Jump up to: a b Bonner, Philip L.R. (2007). Protein Purification (2nd ed.). Totowa, N.J.: Taylor & Francis Group. ISBN 9780415385114.
- ^ Kumar, Pranav (2018). Biophysics and Molecular Biology. New Delhi: Pathfinder Publication. p. 11. ISBN 978-93-80473-15-4.
- ^ Fanali, Salvatore; Haddad, Paul R.; Poole, Colin F.; Schoenmakers, Peter; Lloyd, David, eds. (2013). Liquid Chromatography: Applications. Handbooks in Separation Science. Saint Louis: Elsevier. p. 3. ISBN 9780124158061.
- ^ Baur, Daniel; Angarita, Monica; Müller-Späth, Thomas; Steinebach, Fabian; Morbidelli, Massimo (2016). "Comparison of batch and continuous multi-column protein A capture processes by optimal design". Biotechnology Journal. 11 (7): 920–931. doi:10.1002/biot.201500481. hdl:11311/1013726. PMID 26992151. S2CID 205492204.
- ^ Jump up to: a b "Cube Biotech". Cube Biotech. Retrieved 11 September 2019.
- ^ Ahern, Kevin; Rajagopal, Indira (12 February 2015). Biochemistry Free & Easy (3rd ed.). DaVinci Press. p. 822. hdl:10211.3/206119.
- ^ Grisham, Charles M. (1 January 2013). Biochemistry. Brooks/Cole, Cengage Learning. ISBN 978-1133106296. OCLC 777722371.
- ^ Mahmoudi Gomari, Mohammad; Saraygord-Afshari, Neda; Farsimadan, Marziye; Rostami, Neda; Aghamiri, Shahin; Farajollahi, Mohammad M. (1 December 2020). "Opportunities and challenges of the tag-assisted protein purification techniques: Applications in the pharmaceutical industry". Biotechnology Advances. 45: 107653. doi:10.1016/j.biotechadv.2020.107653. ISSN 0734-9750. PMID 33157154. S2CID 226276355.
- ^ "Affinity Chromatography".
- ^ Thompson, Nancy E.; Foley, Katherine M.; Stalder, Elizabeth S.; Burgess, Richard R. (2009). "Chapter 28 Identification, Production, and Use of Polyol-Responsive Monoclonal Antibodies for Immunoaffinity Chromatography". Guide to Protein Purification, 2nd Edition. Methods in Enzymology. Vol. 463. pp. 475–494. doi:10.1016/s0076-6879(09)63028-7. ISBN 9780123745361. PMID 19892188.
- ^ Uhlén M (2008). "Affinity as a tool in life science". BioTechniques. 44 (5): 649–54. doi:10.2144/000112803. PMID 18474040.
- ^ Multia E, Tear CJ, Palviainen M, et al. (December 2019). "Fast isolation of highly specific population of platelet-derived extracellular vesicles from blood plasma by affinity monolithic column, immobilized with anti-human CD61 antibody". Analytica Chimica Acta. 1091: 160–168. Bibcode:2019AcAC.1091..160M. doi:10.1016/j.aca.2019.09.022. hdl:10138/321264. PMID 31679569. S2CID 203147714.
- ^ Multia E, Liangsupree T, Jussila M, et al. (September 2020). "Automated On-Line Isolation and Fractionation System for Nanosized Biomacromolecules from Human Plasma". Analytical Chemistry. 92 (19): 13058–13065. doi:10.1021/acs.analchem.0c01986. PMC 7586295. PMID 32893620.
- ^ Luppa, Peter (2018). Point-of-care testing: principles and clinical applications. Berlin, Germany: Springer. pp. 71–72. ISBN 9783662544976.
- ^ J. D. Muller; C. R. Wilks; K. J. O'Riley; R. J. Condron; R. Bull; A. Mateczun (2004). "Specificity of an immunochromatographic test for anthrax". Australian Veterinary Journal. 82 (4): 220–222. doi:10.1111/j.1751-0813.2004.tb12682.x. PMID 15149073.
- ^ Singh, Naveen K.; DSouza, Roy N.; Bibi, Noor S.; Fernández-Lahore, Marcelo (2015). "Direct Capture of His6-Tagged Proteins Using Megaporous Cryogels Developed for Metal-Ion Affinity Chromatography". In Reichelt, S. (ed.). Affinity Chromatography. Methods in Molecular Biology. Vol. 1286. New York: Humana Press. pp. 201–212. doi:10.1007/978-1-4939-2447-9_16. ISBN 978-1-4939-2447-9. PMID 25749956.
- ^ Gaberc-Porekar, Vladka K.; Menart, Viktor (2001). "Perspectives of immobilized-metal affinity chromatography". J Biochem Biophys Methods. 49 (1–3): 335–360. doi:10.1016/S0165-022X(01)00207-X. PMID 11694288.
- ^ Vassylyeva, Marina N.; Klyuyev, Sergiy; Vassylyev, Alexey D.; Wesson, Hunter; Zhang, Zhuo; Renfrow, Matthew B.; Wang, Hengbin; Higgins, N. Patrick; Chow, Louise T.; Vassylyev, Dmitry G. (27 June 2017). "Efficient, ultra-high-affinity chromatography in a one-step purification of complex proteins". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (26): E5138–E5147. Bibcode:2017PNAS..114E5138V. doi:10.1073/pnas.1704872114. ISSN 0027-8424. PMC 5495267. PMID 28607052.
- ^ Jump up to: a b Freeze, H. H. (May 2001). "Lectin affinity chromatography". Current Protocols in Protein Science. Vol. Chapter 9. pp. 9.1.1–9.1.9. doi:10.1002/0471140864.ps0901s00. ISBN 978-0471140863. ISSN 1934-3663. PMID 18429210. S2CID 3197260.
- ^ Jump up to: a b Hage, David (May 1999). "Affinity Chromatography: A Review of Clinical Applications" (PDF). Clinical Chemistry. 45 (5): 593–615. doi:10.1093/clinchem/45.5.593. PMID 10222345.
- ^ "GE Healthcare Life Sciences, Immobilized lectin". Archived from the original on 3 March 2012. Retrieved 29 November 2010.
- ^ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2006). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology (2nd ed.). Wiley. p. 153.
- ^ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2010). Fundamental laboratory approaches for biochemistry and biotechnology (2nd ed.). Hoboken, N.J.: John Wiley. p. 240. ISBN 9780470087664. OCLC 420027217.
- ^ Naval, Javier; Calvo, Miguel; Lampreave, Fermin; Piñeiro, Andrés (1 January 1983). "Affinity chromatography of serum albumin: An illustrative laboratory experiment on biomolecular interactions". Biochemical Education. 11 (1): 5–8. doi:10.1016/0307-4412(83)90004-3. ISSN 1879-1468.
- ^ Zopf, D.; S. Ohlson (1990). "Weak-affinity chromatography". Nature. 346 (6279): 87–88. Bibcode:1990Natur.346...87Z. doi:10.1038/346087a0. ISSN 0028-0836. S2CID 4306269.
- ^ Duong-Thi, M. D.; Meiby, E.; Bergström, M.; Fex, T.; Isaksson, R.; Ohlson, S. (2011). "Weak affinity chromatography as a new approach for fragment screening in drug discovery". Analytical Biochemistry. 414 (1): 138–146. doi:10.1016/j.ab.2011.02.022. PMID 21352794.
- ^ Jump up to: a b Meiby, E.; Simmonite, H.; Le Strat, L.; Davis, B.; Matassova, N.; Moore, J. D.; Mrosek, M.; Murray, J.; Hubbard, R. E.; Ohlson, S. (2013). "Fragment Screening by Weak Affinity Chromatography: Comparison with Established Techniques for Screening against HSP90". Analytical Chemistry. 85 (14): 6756–6766. doi:10.1021/ac400715t. PMID 23806099.
- ^ "Meir Wilchek - Wolf Foundation". Wolf Foundation. 9 December 2018. Retrieved 17 March 2021.
Affinity chromatography is a novel technique which was conceived by Cuatrecasas and Wilchek
- ^ P CuateRecasas; М Уилчек; CB Anfinsen (октябрь 1968 г.). «Селективная очистка фермента с помощью аффинной хроматографии» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 61 (2): 636–643. Bibcode : 1968pnas ... 61..636c . doi : 10.1073/pnas.61.2.636 . PMC 225207 . PMID 4971842 .
