✖


Jump to content

Обращенно-фазовая хроматография

Обращенно-фазовая жидкостная хроматография ( ОФ-ЖХ ) — это режим жидкостной хроматографии неполярная неподвижная фаза и полярные подвижные фазы . , в котором для разделения органических соединений используются [1] [2] [3] Подавляющее большинство разделений и анализов с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в последние годы выполняются с использованием обращенно-фазового режима. В обращенно-фазовом режиме компоненты пробы удерживаются в системе, тем более гидрофобными они являются. [4]

Факторами, влияющими на удерживание и разделение растворенных веществ в обращенно-фазовой хроматографической системе, являются следующие:

а. Химическая природа неподвижной фазы , т. е. лигандов, связанных на ее поверхности, а также плотность их связи, а именно степень их покрытия.

б. Состав подвижной фазы . Тип объемных растворителей, смеси которых влияют на полярность подвижной фазы, отсюда и название модификатора растворителя, добавляемого для воздействия на полярность подвижной фазы.

C. Добавки, такие как буферы, влияют на pH подвижной фазы , что влияет на состояние ионизации растворенных веществ и их полярность.

Для удержания органических компонентов в смесях неподвижные фазы, упакованные внутри колонок, состоят из гидрофобных подложек, связанных с поверхностью пористых частиц силикагеля различной геометрии (сферические, неправильные), разного диаметра (менее 2 , 3, 5, 7, 10 мкм) с различным диаметром пор (60, 100, 150, 300, А). Поверхность частицы покрыта химически связанными углеводородами , такими как C3, C4, C8, C18 и другими. Чем дольше углеводород связан с неподвижной фазой, тем дольше будут сохраняться компоненты пробы. Некоторые неподвижные фазы также состоят из гидрофобных полимерных частиц или частиц гибридизированных диоксида кремния и органических групп, в методе, в котором используются подвижные фазы при экстремальных значениях pH. В большинстве современных методов разделения биомедицинских материалов используются колонки C-18, иногда называемые торговыми названиями, например ODS (октадецилсилан) или RP-18. 

Подвижные фазы представляют собой смеси воды и полярных органических растворителей, подавляющее большинство из которых — метанол и ацетонитрил . Эти смеси обычно содержат различные добавки, такие как буферы ( ацетат , фосфат , цитрат ), поверхностно-активные вещества (алкиламины или алкилсульфонаты ) и специальные добавки ( ЭДТА ). Целью использования добавок того или иного типа является повышение эффективности, селективности и контроля удержания растворенных веществ. 

Стационарные фазы

[ редактировать ]
Идеализированный рисунок силикагеля до и после обработки октадецилтрихлорсиланом ( С 18 Н 37 SiCl 3 . Большинство силанольных групп (красные) превращаются в гидрофобные алкилсилоксигруппы. [5]

История и эволюция обращенно-фазовых стационарных фаз подробно описаны в статье Мейджорса, Долана, Карра и Снайдера. [6]

В 1970-х годах большинство анализов жидкостной хроматографии выполнялось с использованием твердых частиц в качестве неподвижных фаз, изготовленных из немодифицированного силикагеля или оксида алюминия . Этот тип метода теперь называется нормально-фазовой хроматографией . Поскольку в этом методе неподвижная фаза гидрофильна , а подвижная фаза неполярна (состоит из органических растворителей, таких как гексан и гептан), биомолекулы с гидрофильными свойствами в образце сильно адсорбируются на неподвижной фазе. Более того, они с трудом растворялись в растворителях подвижной фазы. В то же время гидрофобные молекулы испытывают меньшее сродство к полярной неподвижной фазе и элюируются через нее раньше, не обладая достаточным удерживанием. Это было причиной того, что в 1970-х годах частицы на основе диоксида кремния обрабатывались углеводородами, иммобилизовались или связывались на их поверхности, а подвижные фазы были заменены на водные и полярные по своей природе для размещения биомедицинских веществ.

Использование гидрофобной неподвижной фазы и полярных подвижных фаз по сути является противоположностью нормально-фазовой хроматографии, поскольку полярность подвижной и неподвижной фаз инвертирована - отсюда и термин обращенно-фазовая хроматография. [7] [8] В результате гидрофобные молекулы полярной подвижной фазы стремятся адсорбироваться на гидрофобной неподвижной фазе, а гидрофильные молекулы в образце проходят через колонку и элюируются первыми. [7] [9] Гидрофобные молекулы можно элюировать из колонки, уменьшив полярность подвижной фазы с помощью органического (неполярного) растворителя, что снижает гидрофобные взаимодействия. Чем более гидрофобна молекула, тем сильнее она будет связываться с неподвижной фазой и тем выше концентрация органического растворителя потребуется для элюирования молекулы.

Многие математические параметры теории хроматографии и экспериментальные соображения, используемые в других хроматографических методах, также применимы к ОФ-ЖХ (например, коэффициент селективности, хроматографическое разрешение, количество тарелок и т. д.). Его можно использовать для разделения широкий спектр молекул. Обычно используется для разделения белков. [10] потому что органические растворители, используемые в нормально-фазовой хроматографии, могут денатурировать многие белки.

Сегодня RP-LC является часто используемым аналитическим методом. Существует огромное разнообразие неподвижных фаз, доступных для использования в ОФ-ЖХ, что обеспечивает большую гибкость при разработке методов разделения. [11] [12]

Неподвижные фазы на основе кремнезема

[ редактировать ]

Частицы силикагеля обычно используются в качестве неподвижной фазы в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по нескольким причинам: [13] [14] включая:

  1. Большая площадь поверхности : частицы силикагеля имеют большую площадь поверхности, что обеспечивает прямое взаимодействие с растворенными веществами или после связывания различных лигандов для разносторонних взаимодействий с молекулами образца, что приводит к лучшему разделению.
  2. Химическая и термическая стабильность и инертность : [15] Силикагель химически стабилен, поскольку обычно не вступает в реакцию ни с растворителями подвижной фазы, ни с разделяемыми соединениями, что обеспечивает точные, повторяемые и надежные анализы.
  3. Широкая применимость : [16] Силикагель универсален и может быть модифицирован различными функциональными группами, что делает его пригодным для широкого спектра аналитов и применений.
  4. Эффективное разделение : уникальные свойства частиц силикагеля в сочетании с их большой площадью поверхности и контролируемым размером пор среднего диаметра частиц, [17] способствуют эффективному и точному разделению соединений в ВЭЖХ.
  5. Воспроизводимость : Частицы силикагеля могут обеспечивать высокую воспроизводимость от партии к партии, что имеет решающее значение для последовательного и надежного анализа ВЭЖХ на протяжении десятилетий.
  6. Контроль диаметра частиц и размера пор : [18] [19] Силикагель может быть спроектирован так, чтобы иметь поры определенного размера, что позволяет точно контролировать разделение в зависимости от размера молекул.
  7. Экономическая эффективность : кремнезем является наиболее распространенным элементом на Земле, поэтому его гель является экономичным выбором для применений ВЭЖХ, что делает его широко распространенным в лабораториях.

( Фармакопея США USP) классифицирует колонки для ВЭЖХ по типам L#. [20] Наиболее популярной колонкой в ​​этой классификации является диоксид кремния, связанный с октадециловой углеродной цепью (C18) (классификация USP L1). [21] За ним следуют диоксид кремния, связанный с C8 (L7), чистый диоксид кремния (L3), диоксид кремния, связанный цианогруппами (CN) (L10) и диоксид кремния, связанный фенилом (L11). Обратите внимание, что C18, C8 и фенил представляют собой стационарные фазы с обращенной фазой, тогда как колонки CN можно использовать в режиме с обращенной фазой в зависимости от аналита и условий подвижной фазы. Не все колонки C18 имеют одинаковые свойства удерживания. Функционализация поверхности кремнезема может быть выполнена в мономерной или полимерной реакции с различными органосиланами с короткой цепью, используемыми на втором этапе для покрытия оставшихся силанольных групп ( концевое блокирование ). Хотя общий механизм удерживания остается прежним, небольшие различия в химическом составе поверхности различных неподвижных фаз приведут к изменениям в селективности.

Современные колонки имеют разную полярность в зависимости от лиганда, связанного с неподвижной фазой. PFP – это пентафторфенил. CN — это циано. NH2 – амино. ODS — это октадецил или C18. ODCN представляет собой колонку смешанного типа, состоящую из C18 и нитрила. [22]

Последние разработки в области хроматографических подставок и приборов для жидкостной хроматографии (ЖХ) облегчают быстрое и высокоэффективное разделение с использованием стационарных фаз различной геометрии. [23] Были предложены различные аналитические стратегии, такие как использование монолитных носителей на основе диоксида кремния, повышенные температуры подвижной фазы и колонки, заполненные поверхностно пористыми частицами размером менее 3 мкм (плавленое или твердое ядро). [24] или с полностью пористыми частицами размером менее 2 мкм для использования в системах ЖХ сверхвысокого давления (СВЭЖХ). [25]

Подвижные фазы

[ редактировать ]

Подробная статья о современных тенденциях и передовом опыте выбора подвижной фазы в обращенно-фазовой хроматографии была опубликована Бойсом и Донгом. [26] Подвижная фаза в обращенно-фазовой хроматографии состоит из смесей воды или водных буферов, к которым добавляются органические растворители для селективного элюирования аналитов из обращенно-фазовой колонки. [7] [27] Добавляемые органические растворители должны смешиваться с водой, а двумя наиболее распространенными органическими растворителями являются ацетонитрил и метанол . Также можно использовать другие растворители, такие как этанол или 2-пропанол ( изопропиловый спирт ) и тетрагидрофуран (ТГФ). Органический растворитель также называют модификатором, поскольку его добавляют к водному раствору подвижной фазы для изменения полярности подвижной фазы. Вода является наиболее полярным растворителем в обращенно-фазовой подвижной фазе; следовательно, снижение полярности подвижной фазы за счет добавления модификаторов увеличивает ее силу элюирования. Двумя наиболее широко используемыми органическими модификаторами являются ацетонитрил и метанол, хотя ацетонитрил является более популярным выбором. Также можно использовать изопропанол (2-пропанол) из-за его сильных элюирующих свойств, но его использование ограничено его высокой вязкостью, что приводит к более высокому противодавлению. И ацетонитрил, и метанол менее вязкие, чем изопропанол, хотя смесь метанола и воды в соотношении 50:50 также очень вязкая и вызывает высокое противодавление.

Все три растворителя по существу прозрачны для УФ-излучения. Это важнейшее свойство для обычной обращенно-фазовой хроматографии, поскольку компоненты пробы обычно обнаруживаются УФ-детекторами. Ацетонитрил более прозрачен, чем другие, в диапазоне низких длин волн УФ-излучения, поэтому его используют почти исключительно при разделении молекул со слабыми хромофорами или без них (группы, поглощающие УФ-ВИД), например пептидов. Большинство пептидов поглощают только низкие длины волн ультрафиолетового спектра (обычно менее 225 нм), а ацетонитрил обеспечивает гораздо более низкое фоновое поглощение при низких длинах волн, чем другие распространенные растворители.

pH подвижной фазы может играть важную роль в удерживании аналита и может изменять селективность некоторых аналитов. [28] [29] Для образцов, содержащих растворенные вещества с ионизированными функциональными группами, такими как амины , карбоксилы , фосфаты , фосфонаты , сульфаты и сульфонаты , ионизацию этих групп можно контролировать с помощью буферов для подвижной фазы. [30]

Например, карбоксильные группы в растворенных веществах становятся все более отрицательно заряженными по мере того, как pH подвижной фазы поднимается выше их pKa, следовательно, вся молекула становится более полярной и менее удерживаемой на a-полярной неподвижной фазе. В этом случае повышение pH подвижной фазы выше 4–5 = pH (что является типичным диапазоном pKa для карбоксильных групп) увеличивает их ионизацию и, следовательно, уменьшает их удерживание. И наоборот, использование подвижной фазы при pH ниже 4 [31] увеличит их удерживание, поскольку уменьшит степень их ионизации, сделав их менее полярными.

Те же соображения применимы и к веществам, содержащим основные функциональные группы, например аминам, диапазоны рКа которых составляют около 8 и выше, сохраняются больше, по мере увеличения рН подвижной фазы, приближаясь к 8 и выше, поскольку они менее ионизированы, следовательно, менее полярный. Однако в случае подвижных фаз с высоким pH большинство традиционных колонок с обращенной фазой на основе силикагеля обычно ограничены для использования с подвижными фазами при pH 8 и выше, поэтому контроль удерживания аминов в этом диапазоне ограничен. [32]

Выбор типа буфера является важным фактором при разработке метода ОФ-ЖХ, поскольку он может повлиять на удерживание, селективность и разрешение интересующих аналитов. [26] При выборе буфера для ОФ-ВЭЖХ необходимо учитывать ряд факторов, в том числе:

  • Желаемый pH подвижной фазы : Буферы наиболее эффективны при своем значении pKa, поэтому важно выбрать буфер с pKa, близким к желаемому необходимому pH подвижной фазы.
  • Растворимость буфера в органическом растворителе : Буфер должен быть совместим с органическим растворителем, который используется в подвижной фазе, в основном с обычными органическими растворителями, упомянутыми выше, ацетонитрилом, метанолом и изопропанолом.
  • Отсечка буфера УФ-излучением : В случае обнаружения УФ-излучения буфер должен иметь УФ-поглощение ниже длины волны обнаружения интересующих аналитов. Это предотвратит вмешательство буфера в обнаружение этих аналитов.
  • Совместимость буфера с детектором : Если для обнаружения используется масс-спектрометрия (МС), буфер должен быть совместим с прибором масс-спектрометрии (МС). [33] Некоторые буферы, например содержащие фосфатные соли, нельзя использовать с детекторами МС, поскольку они не являются летучими по мере необходимости и мешают детектированию МС, подавляя ионизацию аналитов, что делает их необнаруживаемыми МС.

Некоторые из наиболее распространенных буферов, используемых в ОФ-ВЭЖХ, включают: [34]

  • Фосфатные буферы : Фосфатный буфер универсален и может использоваться для достижения широкого диапазона значений pH благодаря значениям 3 pKa. Они также имеют очень низкий УФ-фон для обнаружения УФ-излучения. Однако они не подходят для обнаружения MS.
  • Ацетатные буферы . Ацетатные буферы также универсальны и могут использоваться для достижения диапазона значений pH, обычно используемого в ОФ-ЖХ. С точки зрения обнаружения УФ-излучения на длине волны менее 220 нм это не так благоприятно. Буфер ацетата аммония совместим с MS.
  • Формиатные буферы : Формиатные буферы аналогичны ацетатному буферу с точки зрения используемого диапазона pH и ограниченного УФ-детектирования при длине волны 225 нм. Его ацетат аммония также совместим с MS.
  • Аммониевые буферы : Аммониевые буферы летучи и часто используются в методах ЖХ-МС. Они также ограничены обнаружением слабого УФ-излучения.

Заряженные аналиты можно разделить на колонке с обращенной фазой с помощью спаривания ионов (также называемого взаимодействием ионов). Этот метод известен как обращенно-фазовая ионно-парная хроматография. [35]

Элюирование можно проводить изократически (состав водно-растворителя не меняется в процессе разделения) или с использованием градиента раствора (состав водно-растворителя меняется в процессе разделения, обычно за счет уменьшения полярности).

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ ИЮПАК , Сборник химической терминологии , 2-е изд. («Золотая книга») (1997). Исправленная онлайн-версия: (2006–) « Обращенно-фазовая хроматография ». дои : 10.1351/goldbook.R05376
  2. ^ Жувела, Петар; Скочилас, Магдалена; Джей Лю, Дж.; Бачек, Томаш; Калисзан, Роман; Вонг, Минг Ва; Бушевский, Богуслав; Хебергер, К. (2019). «Системы определения характеристик колонок и выбора в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии». Химические обзоры . 119 (6): 3674–3729. doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ПМИД   30604951 . S2CID   58631771 .
  3. ^ Дорси, Джон Г.; Дилл, Кен А. (1989). «Молекулярный механизм удерживания в обращенно-фазовой жидкостной хроматографии». Химические обзоры . 89 (2): 331–346. дои : 10.1021/cr00092a005 .
  4. ^ Ганеш, В.; Пурна Басури, П.; Сахини, К.; Налини, Китай (2023). «Удерживание аналитов в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии - обзор» . Биомедицинская хроматография . 37 (7): e5482. дои : 10.1002/bmc.5482 . ISSN   0269-3879 . ПМИД   35962484 . S2CID   251540223 .
  5. ^ Пейп, Питер Г. (2017). «Силилирующие агенты». Энциклопедия химической технологии Кирка-Отмера . стр. 1–15. дои : 10.1002/0471238961.1909122516011605.a01.pub3 . ISBN  9780471238966 .
  6. ^ Мейджорс, Рональд; Долан, Джон; Карр, Питер; Снайдер, Ллойд (2010). «Новые горизонты обращенно-фазовой хроматографии» . LCGC Северная Америка . LCGC Северная Америка-01.06.2010. 28 (6): 418–430.
  7. ^ Jump up to: а б с Акул Мехта (27 декабря 2012 г.). «Принцип обращенно-фазовой хроматографии ВЭЖХ/УЭЖХ (с анимацией)» . ФармаXChange . Проверено 10 января 2013 г.
  8. ^ Я Молнар и К. Хорват (сентябрь 1976 г.). «Обратно-фазовая хроматография полярных биологических веществ: разделение катехоловых соединений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» . Клиническая химия . 22 (9): 1497–1502. дои : 10.1093/клинчем/22.9.1497 . ПМИД   8221 . Проверено 10 января 2013 г.
  9. ^ (Клиническая биохимия, TWHrubey, 54)
  10. ^ Эванс, Дэвид Р.Х.; Ромеро, Джонатан К.; Вестоби, Мэтью (2009), «Глава 9. Концентрация белков и удаление растворенных веществ», Руководство по очистке белков, 2-е издание , Методы энзимологии, том. 463, Elsevier, стр. 97–120, номер документа : 10.1016/s0076-6879(09)63009-3 , ISBN.  978-0-12-374536-1 , PMID   19892169 , получено 13 октября 2022 г.
  11. ^ Жувела, Петар; Скочилас, Магдалена; Джей Лю, Дж.; Бачек, Томаш; Калисзан, Роман; Вонг, Минг Ва; Бушевский, Богуслав (2019). «Системы определения характеристик колонок и выбора в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии» . Химические обзоры . 119 (6): 3674–3729. doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN   0009-2665 . ПМИД   30604951 . S2CID   58631771 .
  12. ^ Русли, Хандаджая; Путри, Риндиа М.; Ални, Анита (2022). «Последние разработки жидкостной хроматографии на неподвижных фазах для разделения соединений: от белков до небольших органических соединений» . Молекулы . 27 (3): 907. doi : 10,3390/molecules27030907 . ISSN   1420-3049 . ПМЦ   8840574 . ПМИД   35164170 .
  13. ^ «Преимущества силикагелей для упаковки ВЭЖХ - AGC Chemicals» . 10.11.2020 . Проверено 17 октября 2023 г.
  14. ^ Цю, Хундэн; Лян, Сяоцзин; Вс, Мин; Цзян, Шэнсян (2011). «Разработка неподвижных фаз на основе кремнезема для высокоэффективной жидкостной хроматографии» . Аналитическая и биоаналитическая химия . 399 (10): 3307–3322. дои : 10.1007/s00216-010-4611-x . ISSN   1618-2650 . ПМИД   21221544 . S2CID   40721088 .
  15. ^ Классенс, штат Ха; ван Стратен, Массачусетс (2004). «Обзор химической и термической стабильности неподвижных фаз для обращенно-фазовой жидкостной хроматографии» . Журнал хроматографии А. Стационарная фаза и хроматографическое удерживание: в честь Дж. Дж. Киркланда. 1060 (1): 23–41. дои : 10.1016/j.chroma.2004.08.098 . ISSN   0021-9673 .
  16. ^ Жувела, Петар; Скочилас, Магдалена; Джей Лю, Дж.; Бачек, Томаш; Калисзан, Роман; Вонг, Минг Ва; Бушевский, Богуслав (2019). «Системы определения характеристик колонок и выбора в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии» . Химические обзоры . 119 (6): 3674–3729. doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN   0009-2665 . ПМИД   30604951 . S2CID   58631771 .
  17. ^ Чеонг, Вон Джо (2014). «Частицы пористого кремнезема как среда хроматографического разделения: обзор» . Бюллетень Корейского химического общества . 35 (12): 3465–3474. дои : 10.5012/bkcs.2014.35.12.3465 . ISSN   0253-2964 .
  18. ^ «Колонка ВЭЖХ - Размеры пор и диаметры частиц» . www.crawfordscientific.com . Проверено 17 октября 2023 г.
  19. ^ «Размер пор в зависимости от размера частиц в колонках ВЭЖХ» . Хром Тех, Инк . Проверено 17 октября 2023 г.
  20. ^ «Список колонок USP L — колонки для ВЭЖХ и нерасфасованные среды» . СМТ . Проверено 17 октября 2023 г.
  21. ^ Хроматографические реагенты USP 2007–2008: используются в USP-NF и Фармакопейном форуме . Фармакопея США. 2007.
  22. ^ Жувела, Петар; Скочилас, Магдалена; Джей Лю, Дж.; Бачек, Томаш; Калисзан, Роман; Вонг, Минг Ва; Бушевский, Богуслав (27 марта 2019 г.). «Системы определения характеристик колонок и выбора в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии» . Химические обзоры . 119 (6): 3674–3729. doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN   0009-2665 . ПМИД   30604951 . S2CID   58631771 .
  23. ^ Гийярме, Дэви; Рута, Жозефина; Рудаз, Серж; Вети, Жан-Люк (2010). «Новые тенденции в быстрой жидкостной хроматографии высокого разрешения: критическое сравнение существующих подходов» . Аналитическая и биоаналитическая химия . 397 (3): 1069–1082. дои : 10.1007/s00216-009-3305-8 . ISSN   1618-2642 . ПМИД   19998028 . S2CID   21218108 .
  24. ^ Фекете, Сабольч; Оль, Эржбет; Фекете, Джен (2012). «Быстрая жидкостная хроматография: доминирование ядра-оболочки и очень мелких частиц» . Журнал хроматографии А. 1228 : 57–71. дои : 10.1016/j.chroma.2011.09.050 . ПМИД   21982449 .
  25. ^ Фекете, Сабольч; Ганзлер, Каталин; Фекете, Йено (2011). «Эффективность новой колонки ядро-оболочка с размером частиц менее 2 мкм (Kinetex™) на практике, применяемой для разделения малых и крупных молекул» . Журнал фармацевтического и биомедицинского анализа . 54 (3): 482–490. дои : 10.1016/j.jpba.2010.09.021 . ПМИД   20940092 .
  26. ^ Jump up to: а б Бойс, Барри; Донг, Майкл (2018). «Современные тенденции и передовой опыт выбора подвижной фазы в обращенно-фазовой хроматографии» . LCGC Северная Америка . LCGC Северная Америка-01.10.2018. 36 (10): 752–768.
  27. ^ Бойс, Барри; Донг, Майкл (2018). «Современные тенденции и передовой опыт выбора подвижной фазы в обращенно-фазовой хроматографии» . LCGC Северная Америка . LCGC Северная Америка-01.10.2018. 36 (10): 752–768.
  28. ^ Хейрман, Эйми Н.; Генри, Ричард А. (1999). «Важность контроля pH подвижной фазы в обращенно-фазовой ВЭЖХ» . Технический бюллетень Keystone .
  29. ^ Шенмейкерс, Питер Дж.; ван Молле, Сильви; Хейс, Кармель М.Г.; Уунк, Луи GM (1991). «Влияние pH в обращенно-фазовой жидкостной хроматографии» . Аналитика Химика Акта . 250 : 1–19. Бибкод : 1991AcAC..250....1S . дои : 10.1016/0003-2670(91)85058-Z . ISSN   0003-2670 .
  30. ^ Долан, Джон (01 января 2017 г.). «Назад к основам: роль pH в удерживании и селективности» . LCGC Северная Америка . LCGC Северная Америка-01-01-2017. 35 (1): 22–28.
  31. ^ «Как кислый pH влияет на разделение обращенно-фазовой хроматографией?» . www.biotage.com . Проверено 18 октября 2023 г.
  32. ^ Киркланд, Джей-Джей; ван Стратен, Массачусетс; Классенс, ХА (1995). «Влияние подвижной фазы с высоким pH на высокоэффективные жидкостные хроматографические колонки с обращенной фазой на основе диоксида кремния» . Журнал хроматографии А. 18-й Международный симпозиум по колоночной жидкостной хроматографии. Часть I. 691 (1): 3–19. дои : 10.1016/0021-9673(94)00631-I . ISSN   0021-9673 . S2CID   53646741 .
  33. ^ Долан, Джон. «Руководство по выбору буфера для ВЭЖХ и ЖХ-МС» (PDF) .
  34. ^ В. Аграхари; М. Баджпай; С. Нанда (2013). «Основные концепции выбора подвижной фазы для обращенно-фазовой ВЭЖХ» . Исследования J. Pharm. И Тех . 6 (5): 459–464.
  35. ^ Гилар, Мартин; Фонтан, Кеннет Дж.; Будман, Ева; Нойе, Уве Д.; Ярдли, Курт Р.; Рейнвилл, Пол Д.; Рассел II, Реб Дж.; Геблер, Джон К. (2002). «Ионно-парный обращенно-фазовый высокоэффективный жидкостный хроматографический анализ олигонуклеотидов:: Прогнозирование удерживания» . Журнал хроматографии А. 958 (1): 167–182. дои : 10.1016/S0021-9673(02)00306-0 . ISSN   0021-9673 . ПМИД   12134814 .
[ редактировать ]
  • Таблицы, суммирующие различные типы обратных фаз, и информацию о процессе функционализации.
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Reversed-phase_chromatography&oldid=1230333666"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: d1e822fbfed1613d902905f34eeded91__1719017340
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/d1/91/d1e822fbfed1613d902905f34eeded91.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Reversed-phase chromatography - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)