NE-tag
NE -тег представляет собой синтетическую пептидную метку (NE-тег), разработанную в качестве эпитопной метки для обнаружения, количественного определения и очистки рекомбинантного белка. Эта запатентованная пептидная последовательность состоит из восемнадцати гидрофильных аминокислот. Этот короткий пептид не имеет значительной гомологии ни с одним из существующих белков, встречающихся в природе. Этот синтетический NE-пептид принимает конформацию случайного клубка и демонстрирует сильную иммуногенность (расчетный прогноз). Это выгодно, поскольку обеспечивает строгую специфичность к белкам, меченным NE, которые легко обнаружить, количественно оценить и очистить. [ 1 ]
Обнаружение
[ редактировать ]NE-метку можно специфически обнаружить с помощью моноклонального антитела против NE - аффинно-очищенного мышиного иммуноглобулина IgG1, который специфически связывается с белками, меченными NE. Эта конъюгация пептид-антитело подтверждена методами вестерн-блоттинга , иммунопреципитации (ИП), иммуноцитохимии (ИГХ) и аффинной очистки слитых белков NE (т. е. аффинной колонки). [ 2 ] [ 3 ]
Последовательности
[ редактировать ]- Последовательность ДНК NE-метки следующая: 5' АСС AAA gAA AAC CCg CgT AgC AAC Cag gAA gAA AgC TAT gAT gAT AAC gAA AgC 3'
- Соответствующая аминокислотная последовательность: TKENPRSNQEESYDDNES (Thr-Lys-Glu-Asn-Pro-Arg-Ser-Asn-Gln-Glu-Glu-Ser-Tyr-Asp-Asp-Asn-Glu-Ser).
Патенты
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Хо, Филип В.Л.; Це, Зеро ХМ.; Лю, Х.Ф.; Лу, С.; Хо, Джессика ВМ.; Кунг, Мишель Х.В.; Рамсден, Дэвид Б.; Хо, СЛ. (2013). «Оценка клеточной эстрогенной активности на основе опосредованного рецептором эстрогена снижения экспрессии растворимой формы катехол-О-метилтрансферазы (КОМТ) в системе на основе ИФА» . ПЛОС ОДИН . 8 (9): e74065. Бибкод : 2013PLoSO...874065H . дои : 10.1371/journal.pone.0074065 . ПМЦ 3765251 . ПМИД 24040167 .
- ^ Це, ХФ.; Хо, Джей Си; Чой, Юго-Запад; Ли, ЮК; Батлер, AW.; Нг, КМ.; Сиу, CW.; Симпсон, Массачусетс; Лай, штат Вашингтон; Чан, ЮК; Ау, КВт.; Чжан, Дж.; Лэй, КВ.; Эстебан, Массачусетс; Николлс, Дж. М.; Колман, А.; Шам, ПК. (2013). «Пациент-специфичные кардиомиоциты, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, повторяют патогенные фенотипы дилатационной кардиомиопатии из-за новой мутации DES, выявленной с помощью полноэкзомного секвенирования» . Молекулярная генетика человека . 22 (7): 1395–1403. дои : 10.1093/hmg/dds556 . ПМИД 23300193 .
- ^ Сюй, Е.Г.; Хо, Филип В.Л.; Це, Зеро ХМ.; Хо, СЛ.; Люнг, К.М. (2016). «Выявление экологических рисков, связанных с приоритетными химическими веществами, нарушающими работу эндокринной системы, в четырех морских охраняемых районах Гонконга с помощью интегративного подхода». Загрязнение окружающей среды . 215 : 103–112. дои : 10.1016/j.envpol.2016.04.090 . ПМИД 27179329 .