день HA
HA -тег представляет собой белковую метку, полученную из белка гемагглютинина (HA) вируса гриппа человека , который позволяет вирусу нацеливаться на клетки-хозяева и проникать в них. HA-метка состоит из пептида, полученного из молекулы HA, соответствующего аминокислотам 98–106, который может распознаваться и избирательно связываться коммерчески доступными антителами . Это делает ГК мощным инструментом в молекулярной биологии , обычно включаемым в векторы экспрессии и при производстве рекомбинантных белков . [ 1 ] Как и другие эпитопные метки, HA-тег имеет небольшие размеры и обычно не изменяет свойства белков, к которым он прикреплен. [ 2 ] В результате HA-метки часто используются для идентификации белок-белковых взаимодействий или для обнаружения экспрессии белка с использованием коиммунопреципитации или вестерн-блоттинга соответственно. [ 3 ] [ 4 ]
HA-метка не подходит для обнаружения или очистки белков из апоптотических клеток, поскольку она расщепляется каспазой-3 и/или каспазой-7 после ее последовательности DVPD, в результате чего она теряет свою иммунореактивность . [ 5 ] Мечение эндогенных белков HA-меткой с использованием CRISPR недавно было осуществлено in vivo в дифференцированных нейронах . [ 6 ]
Последовательность
[ редактировать ]Последовательности ДНК для метки HA включают: 5'-TAC-CCA-TAC-GAT-GTT-CCA-GAT-TAC-GCT-3' или 5'-TAT-CCA-TAT-GAT-GTT-CCA-GAT. -ТАТ-GCT-3'. Полученная аминокислотная последовательность представляет собой YPYDVPDYA (Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala). [ 7 ]
См. также
[ редактировать ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Филд Дж., Никава Дж., Брук Д., Макдональд Б., Роджерс Л., Уилсон И.А., Лернер Р.А., Виглер М. (1988). «Очистка RAS-чувствительного аденилатциклазного комплекса из Saccharomyces cerevisiae с использованием метода добавления эпитопа» . Мол Клеточная Биол . 8 (5): 2159–65. дои : 10.1128/mcb.8.5.2159-2165.1988 . ПМЦ 363397 . ПМИД 2455217 .
- ^ Кимпл, Мишель Э.; Брилл, Эллисон Л.; Паскер, Рене Л. (24 сентября 2013 г.). «Обзор аффинных меток для очистки белков» . Современные протоколы в науке о белках . 73 : Единица – 9.9. дои : 10.1002/0471140864.ps0909s73 . ISSN 1934-3655 . ПМЦ 4527311 . ПМИД 24510596 .
- ^ «Антитела к тегу HA, обновлено 28.10.2021» . Мерк Миллипор .
- ^ «Обзор мечения эпитопов - США» . www.thermofisher.com . Проверено 25 июля 2024 г.
- ^ Шембри Л., Далибар Р., Томаселло Ф., Легембре П., Ичас Ф., Де Джорджи Ф. (февраль 2007 г.). «Тег HA расщепляется и теряет иммунореактивность во время апоптоза». Природные методы . 4 (2): 107–8. дои : 10.1038/nmeth0207-107 . ПМИД 17264856 . S2CID 32173039 .
- ^ Микуни Т., Нисияма Дж., Сунь Ю., Камасава Н., Ясуда Р. (2016). «Высокопроизводительное картирование локализации белков в мозге млекопитающих с высоким разрешением путем редактирования генома in vivo» . Клетка . 165 (7): 1803–1817. дои : 10.1016/j.cell.2016.04.044 . ПМЦ 4912470 . ПМИД 27180908 .
- ^ «Аддген: HA-тег» . www.addgene.org . Проверено 25 июля 2024 г.
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Филд Дж., Никава Дж., Брук Д., Макдональд Б., Роджерс Л., Уилсон И.А., Лернер Р.А., Виглер М. (май 1988 г.). «Очистка RAS-чувствительного аденилатциклазного комплекса из Saccharomyces cerevisiae с использованием метода добавления эпитопа» . Молекулярная и клеточная биология . 8 (5): 2159–65. дои : 10.1128/MCB.8.5.2159 . ПМЦ 363397 . ПМИД 2455217 .