✖


Jump to content

Вектор выражения

Бактериальный вектор экспрессии для экспрессии зеленого флуоресцентного белка из промотора Т7 .

Вектор экспрессии , иначе известный как конструкция экспрессии , обычно представляет собой плазмиду или вирус, предназначенный для экспрессии генов в клетках. Вектор для используется для введения определенного гена в клетку-мишень и может управлять клеточным механизмом синтеза белка производства белка , кодируемого этим геном. Векторы экспрессии являются основным инструментом биотехнологии для производства белков .

Вектор области сконструирован так, чтобы содержать регуляторные последовательности, которые действуют как энхансера и промотора и приводят к эффективной транскрипции гена, содержащегося в векторе экспрессии. [1] Целью хорошо разработанного вектора экспрессии является эффективное производство белка, и это может быть достигнуто за счет производства значительного количества стабильной информационной РНК , которая затем может быть транслирована в белок. Экспрессию белка можно жестко контролировать, и белок производится в значительных количествах только при необходимости за счет использования индуктора , однако в некоторых системах белок может экспрессироваться конститутивно. обычно используется Escherichia coli В качестве хозяина для производства белка , но можно использовать и другие типы клеток. Примером использования вектора экспрессии является производство инсулина , который используется для лечения диабета .

Элементы

[ редактировать ]

Вектор экспрессии имеет характеристики, которые может иметь любой вектор , такие как начало репликации , селектируемый маркер и подходящий сайт для вставки гена, например сайт множественного клонирования . Клонированный ген может быть перенесен из специализированного вектора клонирования в вектор экспрессии, хотя возможно клонирование непосредственно в вектор экспрессии. Процесс клонирования обычно осуществляется в Escherichia coli . Векторы, используемые для производства белка в организмах, отличных от E.coli , могут иметь, помимо подходящего источника репликации для его размножения в E.coli , элементы, которые позволяют им сохраняться в другом организме, и эти векторы называются челночными векторами .

Элементы для выражения

[ редактировать ]
Дополнительная информация: Транскрипция (генетика) и трансляция (биология).

Вектор экспрессии должен содержать элементы, необходимые для экспрессии гена. Они могут включать промотор , правильную последовательность инициации трансляции, такую ​​как сайт связывания рибосомы и стартовый кодон , терминирующий кодон и последовательность терминации транскрипции . [2] Между прокариотами и эукариотами существуют различия в механизме синтеза белка, поэтому векторы экспрессии должны содержать элементы экспрессии, подходящие для выбранного хозяина. Например, векторы экспрессии прокариот будут иметь последовательность Шайна-Дальгарно в сайте инициации трансляции для связывания рибосом, тогда как векторы экспрессии эукариот будут содержать консенсусную последовательность Козака .

Промотор и, следовательно, является инициирует транскрипцию точкой контроля экспрессии клонированного гена. Промоторы, используемые в векторе экспрессии, обычно являются индуцируемыми , а это означает, что синтез белка инициируется только тогда, когда это необходимо введением индуктора, такого как IPTG . Однако экспрессия генов также может быть конститутивной (т.е. белок экспрессируется постоянно) в некоторых векторах экспрессии. Низкий уровень синтеза конститутивного белка может наблюдаться даже в векторах экспрессии с жестко контролируемыми промоторами.

Белковые метки

[ редактировать ]
Основная статья: Белковая метка

После экспрессии продукта гена может возникнуть необходимость в очистке экспрессированного белка; однако отделение интересующего белка от подавляющего большинства белков клетки-хозяина может оказаться длительным процессом. Чтобы облегчить этот процесс очистки, метку очистки к клонированному гену можно добавить . Этой меткой может быть гистидиновая (His) метка , другие маркерные пептиды или партнеры слияния, такие как глутатион S-трансфераза или мальтозосвязывающий белок . [3] Некоторые из этих партнеров слияния могут также способствовать повышению растворимости некоторых экспрессируемых белков. Другие слитые белки, такие как зеленый флуоресцентный белок, могут выступать в качестве репортерного гена для идентификации успешно клонированных генов или могут использоваться для изучения экспрессии белка при визуализации клеток . [4] [5]

Другие элементы

[ редактировать ]

Вектор экспрессии трансформируют или трансфицируют в клетку-хозяина для синтеза белка. Некоторые векторы экспрессии могут содержать элементы для трансформации или вставки ДНК в хромосому хозяина, например vir гены для трансформации растений и сайты интегразы для хромосомной интеграции.

Некоторые векторы могут включать нацеливающую последовательность, которая может направлять экспрессируемый белок в определенное место, например, в периплазматическое пространство бактерий.

Системы экспрессии/производства

[ редактировать ]

Для экспрессии целевого белка гена можно использовать разные организмы, и поэтому используемый вектор экспрессии будет содержать элементы, специфичные для использования в конкретном организме. Наиболее часто используемым организмом для производства белка является бактерия Escherichia coli . Однако не все белки могут быть успешно экспрессированы в E. coli или экспрессированы с помощью правильной формы посттрансляционных модификаций, таких как гликозилирование, поэтому можно использовать другие системы.

Бактериальный

[ редактировать ]
Примером бактериального вектора экспрессии является плазмида pGEX-3x.

Хозяином выбора для экспрессии многих белков является Escherichia coli , поскольку производство гетерологичного белка в E. coli относительно просто и удобно, а также быстро и дешево. Также доступно большое количество экспрессирующих плазмид E. coli для самых разных нужд. Другие бактерии, используемые для производства белка, включают Bacillus subtilis .

Большинство гетерологичных белков экспрессируются в цитоплазме E. coli . Однако не все образующиеся белки могут быть растворимы в цитоплазме, а неправильно свернутые белки, образующиеся в цитоплазме, могут образовывать нерастворимые агрегаты, называемые тельцами включения . Такие нерастворимые белки потребуют рефолдинга, который может быть сложным процессом и не обязательно приведет к высокому выходу. [6] Белки, имеющие дисульфидные связи , часто не способны правильно сворачиваться из-за восстанавливающей среды в цитоплазме, которая предотвращает образование таких связей, и возможным решением является нацеливание белка в периплазматическое пространство с помощью N-концевой сигнальной последовательности . Другая возможность — манипулировать окислительно-восстановительной средой цитоплазмы. [7] Разрабатываются и другие, более сложные системы; такие системы могут обеспечить экспрессию белков, которые ранее считались невозможными в E. coli , таких как гликозилированные белки. [8] [9] [10]

Промоторы, используемые для этих векторов, обычно основаны на промоторе lac -оперона или промоторе Т7 . [11] и они обычно регулируются lac оператором . Эти промоторы также могут представлять собой гибриды различных промоторов, например, Tac-промотор представляет собой гибрид промоторов trp и lac . [12] Обратите внимание, что наиболее часто используемые промоторы lac или lac -производные основаны на мутанте lac UV5 , который нечувствителен к катаболитной репрессии . Этот мутант обеспечивает экспрессию белка под контролем lac- промотора, когда питательная среда -промотор дикого типа . lac содержит глюкозу, поскольку глюкоза будет ингибировать экспрессию гена, если использовать [13] Тем не менее присутствие глюкозы все еще может использоваться для снижения фоновой экспрессии за счет остаточного ингибирования в некоторых системах. [14]

Примерами векторов экспрессии E. coli являются серия векторов pGEX, в которых в качестве партнера по слиянию используется глутатион-S-трансфераза , а экспрессия генов находится под контролем промотора tac. [15] [16] [17] и серию векторов pET, в которых используется промотор Т7 . [18]

можно одновременно экспрессировать два или более разных белков, В E. coli используя разные плазмиды. Однако при использовании двух или более плазмид для каждой плазмиды необходимо использовать свой выбор антибиотика, а также разный источник репликации, в противном случае одна из плазмид может не поддерживаться стабильно. Многие обычно используемые плазмиды основаны на репликоне ColE1 и поэтому несовместимы друг с другом; для того чтобы плазмида на основе ColE1 могла сосуществовать с другой плазмидой в одной и той же клетке, другая должна иметь другой репликон, например, плазмиду на основе репликона p15A, такую ​​как серия плазмид pACYC. [19] Другой подход мог бы заключаться в использовании одного двухцистронного вектора или в тандемном проектировании кодирующих последовательностей в виде би- или полицистронной конструкции. [20] [21]

Дрожжи

[ редактировать ]

Дрожжи, обычно используемые для производства белка, — это Pichia Pastoris . [22] Примерами векторов экспрессии дрожжей в Pichia являются векторы серии pPIC, и эти векторы используют промотор AOX1 , который индуцируется метанолом . [23] Плазмиды могут содержать элементы для вставки чужеродной ДНК в геном дрожжей и сигнальную последовательность для секреции экспрессируемого белка. Белки с дисульфидными связями и гликозилированием можно эффективно производить в дрожжах. Еще одними дрожжами, используемыми для производства белка, являются Kluyveromyces Lactis , и экспрессия гена осуществляется под действием варианта сильного промотора лактазы LAC4. [24]

Saccharomyces cerevisiae особенно широко используется для исследований экспрессии генов в дрожжах, например, в дрожжевой двугибридной системе для изучения белок-белкового взаимодействия. [25] Векторы, используемые в двухгибридной системе дрожжей, содержат партнеров по слиянию двух клонированных генов, которые позволяют транскрипцию репортерного гена при взаимодействии между двумя белками, экспрессируемыми из клонированных генов.

бакуловирус

[ редактировать ]

Бакуловирус , палочковидный вирус, поражающий клетки насекомых, используется в качестве вектора экспрессии в этой системе. [26] клеточные линии насекомых, полученные от чешуекрылых (мотыльков и бабочек), таких как Spodoptera frugiperda В качестве хозяина используют . Особый интерес представляет клеточная линия, полученная из капустной петельки , поскольку она была разработана для быстрого роста и без дорогостоящей сыворотки, которая обычно необходима для ускорения роста клеток. [27] [28] Челночный вектор называется бакмидой, а экспрессия генов находится под контролем сильного промотора pPolh. [29] Бакуловирус также использовался с клеточными линиями млекопитающих в системе BacMam . [30]

Бакуловирус обычно используется для производства гликопротеинов , хотя гликозилирование может отличаться от гликозилирования, обнаруженного у позвоночных. В целом его безопаснее использовать, чем вирус млекопитающих, поскольку он имеет ограниченный круг хозяев и не заражает позвоночных без модификаций.

Растение

[ редактировать ]

Многие векторы экспрессии растений основаны на Ti-плазмиде Agrobacterium tumefaciens . [31] В этих векторах экспрессии ДНК, которую необходимо вставить в растение, клонируется в Т-ДНК , участок ДНК, фланкированный последовательностью прямого повтора длиной 25 пар оснований на обоих концах, который может интегрироваться в геном растения. Т-ДНК также содержит селектируемый маркер. Agrobacterium также могут обеспечивает механизм трансформации и интеграции в геном растения, а промоторы ее генов vir использоваться для клонированных генов. Однако опасения по поводу переноса бактериального или вирусного генетического материала в растение привели к разработке векторов, называемых внутригенными векторами, в которых используются функциональные эквиваленты генома растения, чтобы не происходило переноса генетического материала от чужеродного вида в растение. [32]

В качестве векторов можно использовать вирусы растений, поскольку метод Agrobacterium не работает для всех растений. Примерами используемых растительных вирусов являются вирус табачной мозаики (TMV), вирус X картофеля и вирус мозаики вигны . [33] Белок может экспрессироваться в виде слитого с белком оболочки вируса и отображаться на поверхности собранных вирусных частиц или в виде неслитого белка, который накапливается внутри растения. Экспрессия в растениях с использованием растительных векторов часто является конститутивной. [34] и обычно используемым конститутивным промотором в векторах экспрессии растений является промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (CaMV). [35] [36]

млекопитающее

[ редактировать ]

Векторы экспрессии млекопитающих предлагают значительные преимущества для экспрессии белков млекопитающих по сравнению с бактериальными системами экспрессии - правильная укладка, посттрансляционные модификации и соответствующая ферментативная активность. Это также может быть более желательно, чем другие эукариотические системы, не относящиеся к млекопитающим, при этом экспрессируемые белки могут не содержать правильных гликозилирований. Он особенно полезен при производстве мембранассоциированных белков, которым необходимы шапероны для правильного сворачивания и стабильности, а также содержащих многочисленные посттрансляционные модификации. Однако недостатком является низкий выход продукта по сравнению с прокариотическими векторами, а также дорогостоящий характер используемых методов. Его сложная технология и потенциальное загрязнение вирусами животных, экспрессирующими клетки млекопитающих, также ограничивают его использование в крупномасштабном промышленном производстве. [37]

Культивируемые клеточные линии млекопитающих, такие как яичник китайского хомячка (CHO) , COS , включая клеточные линии человека, такие как HEK и HeLa, могут быть использованы для продукции белка. Векторы трансфицируются в клетки, и ДНК может быть интегрирована в геном путем гомологичной рекомбинации в случае стабильной трансфекции, или же клетки могут быть временно трансфицированы. Примеры векторов экспрессии млекопитающих включают аденовирусные векторы, [38] серии плазмидных векторов pSV и pCMV, вакцины и ретровирусов , векторов [39] также бакуловирус. [30] Промоторы цитомегаловируса (CMV) и SV40 обычно используются в векторах экспрессии млекопитающих для управления экспрессией генов. Также известен невирусный промотор, такой как промотор фактора элонгации (EF)-1. [40]

Бесклеточные системы

[ редактировать ]

E. coli лизат клеток используется in vitro В этом методе производства белка , содержащий клеточные компоненты, необходимые для транскрипции и трансляции. Преимущество такой системы состоит в том, что белок можно производить гораздо быстрее, чем тот, который производится in vivo, поскольку не требуется время для культивирования клеток, но это также и дороже. В этой системе можно использовать векторы, используемые для экспрессии E. coli , хотя также доступны специально разработанные векторы для этой системы. Экстракты эукариотических клеток также можно использовать в других бесклеточных системах, например, в зародышей пшеницы . бесклеточных системах экспрессии [41] Также были произведены бесклеточные системы млекопитающих. [42]

Приложения

[ редактировать ]

Лабораторное использование

[ редактировать ]

Вектор экспрессии в хозяине экспрессии в настоящее время является обычным методом, используемым в лабораториях для производства белков для исследований. Большинство белков производится в E. coli , но для гликозилированных белков и белков с дисульфидными связями можно использовать системы дрожжей, бакуловирусов и млекопитающих.

Производство пептидных и белковых фармацевтических препаратов

[ редактировать ]

Большинство белковых фармацевтических препаратов в настоящее время производятся с помощью технологии рекомбинантной ДНК с использованием векторов экспрессии. Этими пептидными и белковыми фармацевтическими препаратами могут быть гормоны, вакцины, антибиотики, антитела и ферменты. [43] Первый человеческий рекомбинантный белок, используемый для лечения заболеваний, инсулин, был представлен в 1982 году. [43] Биотехнология позволяет производить в больших количествах эти пептидные и белковые фармацевтические препараты, некоторые из которых ранее были редкими или труднодоступными. Это также снижает риск заражения такими загрязнителями, как вирусы-хозяева, токсины и прионы . Примеры из прошлого включают прионами загрязнение гормона роста, выделенного из гипофизов, полученных от человеческих трупов, что вызывало болезнь Крейтцфельдта-Якоба у пациентов, получавших лечение от карликовости . [44] и вирусные примеси фактора свертывания крови VIII, выделенные из человеческой крови, что привело к передаче вирусных заболеваний, таких как гепатит и СПИД . [45] [46] Такой риск снижается или полностью устраняется, когда белки производятся в клетках-хозяевах, отличных от человека.

Трансгенные растения и животные

[ редактировать ]

В последние годы векторы экспрессии используются для введения специфических генов в растения и животных с целью получения трансгенных организмов, например, в сельском хозяйстве они используются для получения трансгенных растений . Векторы экспрессии использовались для введения предшественника витамина А , бета-каротина , в растения риса. Этот продукт называется золотым рисом . Этот процесс также использовался для введения в растения гена, который производит инсектицид , называемый токсином Bacillus thuringiensis или токсином Bt , который снижает потребность фермеров в применении инсектицидов, поскольку он производится модифицированным организмом. Кроме того, векторы экспрессии используются для продления спелости томатов путем изменения растения таким образом, чтобы оно производило меньше химического вещества, вызывающего гниение томатов. [47] Были разногласия по поводу использования векторов экспрессии для модификации сельскохозяйственных культур из-за того, что могут быть неизвестные риски для здоровья, возможности патентования компаниями определенных генетически модифицированных пищевых культур и этические проблемы. Тем не менее, этот метод все еще используется и тщательно исследуется.

Трансгенных животных также выращивают для изучения биохимических процессов животных и болезней человека или используют для производства фармацевтических препаратов и других белков. Они также могут быть созданы с выгодными или полезными характеристиками. Зеленый флуоресцентный белок иногда используется в качестве метки, в результате чего животные могут флуоресцировать, и это было использовано в коммерческих целях для производства флуоресцентного GloFish .

Генная терапия

[ редактировать ]
Основная статья: Векторы в генной терапии

Генная терапия является многообещающим методом лечения ряда заболеваний, когда «нормальный» ген, переносимый вектором, вставляется в геном, чтобы заменить «аномальный» ген или дополнить экспрессию определенного гена. Обычно используются вирусные векторы, но разрабатываются и другие невирусные методы доставки. Лечение по-прежнему остается рискованным вариантом из-за используемого вирусного вектора, который может вызвать вредные последствия, например, вызвать инсерционную мутацию , которая может привести к раку. [48] [49] Однако есть многообещающие результаты. [50] [51]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ sci.sdsu.edu
  2. ^ RW Старый; С.Б. Примроуз (1994). «Глава 8: Экспрессия E. coli клонированных молекул ДНК» . Принципы манипуляции генами . Научные публикации Блэквелла. ISBN  978-0-632-03712-4 .
  3. ^ Мишель Э. Кимпл; Эллисон Л. Брилл; Рене Л. Паскер (24 сентября 2013 г.). «Обзор аффинных меток для очистки белков» . Современные протоколы в науке о белках . 73 (Отдел-9.9): 9.9.1–9.9.23. дои : 10.1002/0471140864.ps0909s73 . ISBN  978-0-471-14086-3 . ПМЦ   4527311 . ПМИД   24510596 .
  4. ^ Эрик Снапп (июль 2005 г.). «Разработка и использование флуоресцентных слитых белков в клеточной биологии» . Современные протоколы клеточной биологии . 27 : 21.4.1–21.4.13. дои : 10.1002/0471143030.cb2104s27 . ПМК   2875081 . ПМИД   18228466 .
  5. ^ Джорджета Криват; Джастин В. Тараска (январь 2012 г.). «Визуализация белков внутри клеток с помощью флуоресцентных меток» . Тенденции в биотехнологии . 30 (1): 8–16. дои : 10.1016/j.tibtech.2011.08.002 . ПМЦ   3246539 . ПМИД   21924508 .
  6. ^ Берджесс Р.Р. (2009). «Глава 17. Рефолдинг растворимых белков телец включения». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы энзимологии. Том. 463. стр. 259–82. дои : 10.1016/S0076-6879(09)63017-2 . ISBN  978-0-12-374536-1 . ПМИД   19892177 .
  7. ^ Джули Лобштейн; Чарли Эмрих; Крис Джинс; Мелинда Фолкнер; Пол Риггс; Мехмет Беркмен (2012). «Shuffle, новый штамм, экспрессирующий белок Escherichia coli, способный правильно складывать белки с дисульфидными связями в своей цитоплазме» . Заводы по производству микробных клеток . 11:56 . дои : 10.1186/1475-2859-11-56 . ПМЦ   3526497 . ПМИД   22569138 .
  8. ^ Вакер М., Линтон Д., Хитчен П.Г., Нита-Лазар М., Хаслам С.М., Норт С.Дж., Панико М., Моррис Х.Р., Делл А., Рен Б.В., Эби М. (2002). «N-связанное гликозилирование у Campylobacter jejuni и его функциональный перенос в E. coli». Наука . 298 (5599): 1790–1793. Бибкод : 2002Sci...298.1790W . дои : 10.1126/science.298.5599.1790 . ПМИД   12459590 .
  9. ^ Хуан CJ, Линь Х, Ян X (2012). «Промышленное производство рекомбинантных терапевтических средств для Escherichia coli и его последние достижения» . J Ind Microbiol Biotechnol . 39 (3): 383–99. дои : 10.1007/s10295-011-1082-9 . ПМИД   22252444 . S2CID   15584320 .
  10. ^ Херман Л. Розано1; Эдуардо А. Чеккарелли (2014). «Экспрессия рекомбинантного белка в Escherichia coli: достижения и проблемы» . Границы микробиологии . 5 : 172. дои : 10.3389/fmicb.2014.00172 . ПМК   4029002 . ПМИД   24860555 . {{cite journal}}: CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
  11. ^ Дубендорф Дж.В., Студент Ф.В. (1991). «Контроль базальной экспрессии в индуцибельной системе экспрессии T7 путем блокирования целевого промотора T7 с помощью lac-репрессора». Журнал молекулярной биологии . 219 (1): 45–59. дои : 10.1016/0022-2836(91)90856-2 . ПМИД   1902522 .
  12. ^ деБоер Х.А., Комсток Л.Дж., Вассер М. (1983). «Промотор tac: функциональный гибрид, полученный из промоторов trp и lac» . Труды Национальной академии наук США . 80 (1): 21–25. Бибкод : 1983PNAS...80...21D . дои : 10.1073/pnas.80.1.21 . ПМЦ   393301 . ПМИД   6337371 .
  13. ^ Сильверстоун А.Е., Ардитти Р.Р., Магасаник Б. (1970). «Нечувствительные к катаболитам ревертанты мутантов lac-промотора» . Труды Национальной академии наук США . 66 (3): 773–9. Бибкод : 1970PNAS...66..773S . дои : 10.1073/pnas.66.3.773 . ПМК   283117 . ПМИД   4913210 .
  14. ^ Роберт Нови; Барбара Моррис. «Использование глюкозы для контроля базальной экспрессии в системе pET» (PDF) . Инновации (13): 6–7.
  15. ^ Смит Д.Б., Джонсон К.С. (1988). «Одноэтапная очистка полипептидов, экспрессируемых в Escherichia coli в виде слияний с глутатион S-трансферазой». Джин . 67 (1): 31–40. дои : 10.1016/0378-1119(88)90005-4 . ПМИД   3047011 .
  16. ^ «Система слияния генов GST» (PDF) . Биотехнологическая компания Amersham Pharmacia .
  17. ^ «Векторы pGEX» . GE Healthcare Lifesciences. Архивировано из оригинала 13 ноября 2016 г. Проверено 11 октября 2013 г.
  18. ^ «Руководство по системе ПЭТ» (PDF) . Новаген . Архивировано из оригинала (PDF) 19 августа 2019 г. Проверено 11 декабря 2012 г.
  19. ^ Никола Казали; Эндрю Престон (3 июля 2003 г.). Плазмидные векторы E. coli: методы и применение . Методы молекулярной биологии. Том. 235. с. 22. ISBN  978-1-58829-151-6 .
  20. ^ «Методы клонирования – ди- или мультицистронное клонирование» . ЭМБЛ .
  21. ^ Шонер Б.Е., Белагайе Р.М., Шонер Р.Г. (1986). «Трансляция синтетической двухцистронной мРНК в Escherichia coli» . Proc Natl Acad Sci США . 83 (22): 8506–10. Бибкод : 1986PNAS...83.8506S . дои : 10.1073/pnas.83.22.8506 . ПМЦ   386959 . ПМИД   3534891 .
  22. ^ Крегг Дж. М., Черегино Дж. Л., Ши Дж., Хиггинс Д. Р. (2000). «Экспрессия рекомбинантного белка у Pichia Pastoris» . Молекулярная биотехнология . 16 (1): 23–52. дои : 10.1385/МБ:16:1:23 . ПМИД   11098467 . S2CID   35874864 .
  23. ^ «Система экспрессии Pichia Pastoris» (PDF) . Инвитроген .
  24. ^ «Набор для экспрессии белка K. Lactis» (PDF) . Биолаборатории Новой Англии, Inc. Архивировано из оригинала (PDF) 4 марта 2016 г. Проверено 20 марта 2013 г.
  25. ^ Филдс С., Сонг О (1989). «Новая генетическая система для обнаружения белок-белковых взаимодействий». Природа . 340 (6230): 245–6. Бибкод : 1989Natur.340..245F . дои : 10.1038/340245a0 . ПМИД   2547163 . S2CID   4320733 .
  26. ^ Маккензи, Сэмюэл (26 февраля 2019 г.). «Система векторов экспрессии бакуловируса (BEVS)» . Новости-medical.net .
  27. ^ ХИНК, ВФ (2 мая 1970 г.). «Установленная клеточная линия насекомых из капустной петлительницы Trichoplusia ni». Природа . 226 (5244): 466–467. Бибкод : 1970Natur.226..466H . дои : 10.1038/226466b0 . ISSN   1476-4687 . ПМИД   16057320 . S2CID   4225642 .
  28. ^ Чжэн Г.Л., Чжоу Х.С., Ли С.И. (2014). «Бессывороточная культура суспензионной клеточной линии QB-Tn9-4s капустной петельки Trichoplusia ni высокопродуктивна для репликации вируса и экспрессии рекомбинантных белков» . Журнал науки о насекомых . 14 (1): 24. дои : 10.1093/jis/14.1.24 . ПМК   4199540 . ПМИД   25373171 .
  29. ^ «Руководство по векторным системам экспрессии бакуловируса (BEVS) и методам культивирования клеток насекомых» (PDF) . Инвитроген .
  30. ^ Jump up to: а б Кост, Т; Кондри, JP (2002). «Рекомбинантные бакуловирусы как векторы доставки генов в клетки млекопитающих». Тенденции в биотехнологии . 20 (4): 173–180. дои : 10.1016/S0167-7799(01)01911-4 . ПМИД   11906750 .
  31. ^ Уолден Р., Шелл Дж (1990). «Методы молекулярной биологии растений - прогресс и проблемы». Европейский журнал биохимии . 192 (3): 563–76. дои : 10.1111/j.1432-1033.1990.tb19262.x . ПМИД   2209611 .
  32. ^ Джордж Акваа (16 августа 2012 г.). Основы генетики и селекции растений . John Wiley & Sons Inc. ISBN  978-1-118-31369-5 .
  33. ^ г-жа Кармен Каньисарес; Лиз Николсон; Джордж П. Ломоносов (2005). «Использование вирусных векторов для производства вакцин на растениях» . Иммунология и клеточная биология . 83 (3): 263–270. дои : 10.1111/j.1440-1711.2005.01339.x . ПМЦ   7165799 . ПМИД   15877604 .
  34. ^ «Как сделать трансгенное растение?» . Кафедра почвоведения и растениеводства Университета штата Колорадо . Архивировано из оригинала 21 января 2013 г. Проверено 6 февраля 2013 г.
  35. ^ Фюттерер Дж.; Бонневиль Дж. М.; Хон Т. (май 1990 г.). «Вирус мозаики цветной капусты как вектор экспрессии генов растений». Физиология Плантарум . 79 (1): 154–157. дои : 10.1111/j.1399-3054.1990.tb05878.x .
  36. ^ Бенфей П.Н., Чуа Н.Х. (1990). «Промотор 35S вируса мозаики цветной капусты: комбинаторная регуляция транскрипции в растениях» (PDF) . Наука . 250 (4983): 959–66. Бибкод : 1990Sci...250..959B . дои : 10.1126/science.250.4983.959 . ПМИД   17746920 . S2CID   35471862 .
  37. ^ Кишвар Хаят Хан (2013). «Экспрессия генов в клетках млекопитающих и ее применение» . Адв Фарм Булл . 3 (2): 257–263. дои : 10.5681/apb.2013.042 . ПМЦ   3848218 . ПМИД   24312845 .
  38. ^ Беркнер К.Л. (1992). «Экспрессия гетерологичных последовательностей в аденовирусных векторах». Векторы вирусной экспрессии . Актуальные темы микробиологии и иммунологии. Том. 158. стр. 39–66. дои : 10.1007/978-3-642-75608-5_3 . ISBN  978-3-642-75610-8 . ПМИД   1582245 .
  39. ^ Груби, DE (1990). «Векторы вируса коровьей оспы: новые стратегии производства рекомбинантных вакцин» . Клин Микробиол Ред . 3 (2): 153–170. дои : 10.1128/cmr.3.2.153 . ПМК   358149 . ПМИД   2187593 .
  40. ^ Ким Д.В., Уэцуки Т., Казиро Ю., Ямагути Н., Сугано С. (1990). «Использование промотора человеческого фактора элонгации 1 альфа в качестве универсальной и эффективной системы экспрессии». Джин . 91 (2): 217–23. дои : 10.1016/0378-1119(90)90091-5 . ПМИД   2210382 .
  41. ^ Винаров Д.А., Ньюман К.Л., Тайлер Э.М., Маркли Дж.Л., Шахан М.Н. (2006). «Глава 5: Блок 5.18. Бесклеточная система экспрессии зародышей пшеницы для производства белка». Современные протоколы в науке о белках . Том. Глава 5. С. 5.18.1–5.18.18. дои : 10.1002/0471140864.ps0518s44 . ISBN  978-0-471-14086-3 . ПМИД   18429309 . S2CID   12057689 .
  42. ^ Бредель А.К., Вюстенхаген Д.А., Кубик С. (2015). «Системы бесклеточного синтеза белка, полученные из культивируемых клеток млекопитающих». Структурная протеомика . Методы молекулярной биологии. Том. 1261. стр. 129–40. дои : 10.1007/978-1-4939-2230-7_7 . ISBN  978-1-4939-2229-1 . ПМИД   25502197 .
  43. ^ Jump up to: а б Шейн Кокс Гад (2007). Справочник по фармацевтической биотехнологии . Джон Уайли и сыновья. п. 693. ИСБН  978-0-471-21386-4 .
  44. ^ Александр Дорожинский (2002). «Родители подают в суд из-за загрязненного человеческого гормона роста» . Британский медицинский журнал . 324 (7349): 1294. doi : 10.1136/bmj.324.7349.1294/b . ПМЦ   1123268 . ПМИД   12039815 .
  45. ^ Шейн Кокс Гад (25 мая 2007 г.). Справочник по фармацевтической биотехнологии . Джон Уайли и сыновья. п. 738. ИСБН  978-0-471-21386-4 .
  46. ^ Богданич В., Коли Э (22 мая 2003 г.). «Два пути продажи лекарств Bayer в 80-е годы: один, более рискованный, направлялся за границу» . Нью-Йорк Таймс : A1, C5. ПМИД   12812170 .
  47. ^ «bionetonline.org» . Архивировано из оригинала 17 июня 2010 г. Проверено 12 июня 2010 г.
  48. ^ «Генная терапия» . Проект «Геном человека» .
  49. ^ Ян Сэмпл (17 октября 2003 г.). «Врачи выяснили, почему генная терапия вызвала у мальчиков рак» . Хранитель .
  50. ^ Сара Бозли (30 апреля 2013 г.). «Новаторские испытания генной терапии дают надежду пациентам с сердечно-сосудистыми заболеваниями» . Хранитель .
  51. ^ Фишер, А.; Хасейн-бей-Абина, С.; Каваццана-Кальво, М. (2010). «20 лет генной терапии ТКИН». Природная иммунология . 11 (6): 457–460. дои : 10.1038/ni0610-457 . ПМИД   20485269 . S2CID   11300348 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Expression_vector&oldid=1215257890"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: db3d74abe8981a3512ffec5371982b3d__1711231620
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/db/3d/db3d74abe8981a3512ffec5371982b3d.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Expression vector - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)