lacUV5
Промотор lacUV5 представляет собой мутировавший промотор Escherichia coli lac-оперона , который используется в молекулярной биологии для управления экспрессией генов на плазмиде . lacUV5 очень похож на классический lac -промотор, содержащий всего 2 мутации пары оснований в гексамерной области -10 по сравнению с lac- промотором. [ 1 ] LacUV5 является одним из наиболее часто используемых промоторов в молекулярной биологии, поскольку он не требует дополнительных активаторов и обеспечивает высокий уровень экспрессии генов. [ 2 ]
Последовательность промотора lacUV5 более близко соответствует консенсусной последовательности, распознаваемой бактериальными сигма-факторами, чем традиционный промотор lac . [ 3 ] : 4б Благодаря этому lacUV5 более эффективно рекрутирует РНК-полимеразу , что приводит к более высокой транскрипции генов-мишеней. Кроме того, в отличие от промотора lac , lacUV5 работает независимо от белков- активаторов или других цис-регуляторных элементов (кроме областей промотора -10 и -35). [ 2 ] Хотя активаторы не требуются, экспрессия промотора lacUV5 может регулироваться репрессором LacI и индуцироваться с помощью IPTG , который является эффективным индуктором экспрессии белка при использовании в диапазоне концентраций от 100 мкМ до 1,5 мМ. Благодаря этому контролю промотор lacUV5 обычно обнаруживается в экспрессирующих плазмидах и используется, когда его можно контролировать, но желательны высокие уровни продукта. [ нужна ссылка ]
Мутация lacUV5 была впервые идентифицирована в 1970 году при исследовании мутантов lac -промотора, которые дают более высокие урожаи. Некоторые из них, включая UV5, потеряли катаболитную репрессию в CAP-сайте. [ 4 ] Разработка векторов для клонирования известна с 1982 года, когда геном фага, несущего UV5, известного как «λ h80 lac UV5 cI857», был сращен с HaeIII ферментом рестрикции для получения плазмид, несущих фрагмент с UV5. [ 5 ]
Последовательность
[ редактировать ]Современный lacUV5 наблюдается у штамма BL21 (DE3), который несет как оперон lac со стандартным промотором, так и оперон lacUV5, расщепленный профагом DE3 (и в результате вместо этого управляющий РНК-полимеразой T7 ). [ 1 ] Две важные мутации подчеркнуты.
lacUV5 TCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT[6] LacZ TCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGAAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT[7] position ^-35 ^-10 ^+1
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б Стьюдер, ФРВ; Моффатт, бакалавр (5 мая 1986 г.). «Использование РНК-полимеразы бактериофага Т7 для управления селективной экспрессией клонированных генов на высоком уровне». Журнал молекулярной биологии . 189 (1): 113–30. дои : 10.1016/0022-2836(86)90385-2 . ПМИД 3537305 .
- ^ Jump up to: а б Ноэль Р.Дж., Резников В.С. (10 марта 2000 г.). «Структурные исследования взаимодействий lacUV5-РНК-полимеразы in vitro» . Журнал биологической химии . 275 (11): 7708–7712. дои : 10.1074/jbc.275.11.7708 . ПМИД 10713082 .
- ^ Прибнов, Д. (1975). «Ранние промоторы бактериофага Т7: нуклеотидные последовательности двух сайтов связывания РНК-полимеразы». Журнал молекулярной биологии . 99 (3): 419–443. дои : 10.1016/S0022-2836(75)80136-7 . ПМИД 765476 .
- ^ Сильверстоун, AE; Ардитти, Р.Р.; Магасаник, Б. (июль 1970 г.). «Нечувствительные к катаболитам ревертанты мутантов lac-промотора» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 66 (3): 773–9. Бибкод : 1970PNAS...66..773S . дои : 10.1073/pnas.66.3.773 . ПМК 283117 . ПМИД 4913210 .
- ^ Фуллер, Ф. (1982). «Семейство векторов клонирования, содержащих промотор lacUV5». Джин . 19 (1): 43–54. дои : 10.1016/0378-1119(82)90187-1 . ПМИД 6292048 .
- ^ «Хромосома BLR (DE3) штамма Escherichia coli, полный геном» . ГенБанк . 13 апреля 2017 г. Проверено 21 апреля 2019 г.
- ^ «Хромосома BLR(DE3) штамма Escherichia coli, LacZ» . ГенБанк . Проверено 21 апреля 2019 г.
 | Эта о генетике статья незавершена . Вы можете помочь Википедии, расширив ее . |