Флаг III
| Фермент рестрикции типа 2 HaeIII | |||
|---|---|---|---|
 Кристаллическая структура фермента HaeIII, образующего конвалентный комплекс с ДНК: внеспиральный цитозин и перестроенная пара оснований. | |||
| Идентификаторы | |||
| Организм | |||
| Символ | завистьIIIR | ||
| RefSeq (защита) | WP_006996034.1 | ||
| ЮниПрот | О68584 | ||
| Другие данные | |||
| Номер ЕС | 3.1.21.4 | ||
| хромосома | Геномный: 0,7 - 0,7 Мб | ||
| |||
| ХэIIIR | |||
|---|---|---|---|
| Идентификаторы | |||
| Символ | RE_FlagIII | ||
| Пфам | PF09556 | ||
| ИнтерПро | ИПР019059 | ||
| |||
Hae III — один из многих ферментов рестрикции ( эндонуклеаз ), типа прокариотической ДНК, который защищает организмы от неизвестной чужеродной ДНК. [1] Это фермент рестрикции, используемый в лабораториях молекулярной биологии. Это была третья эндонуклеаза, выделенная из Haemophilus aegyptius бактерий . Сайт узнавания фермента — место, где он разрезает молекулы ДНК последовательность GGCC — представляет собой нуклеотидную , что означает, что он расщепляет ДНК в участке 5’-GG/CC-3. Сайт распознавания обычно составляет около 4-8 бит в секунду. [1] фермента .Ген этого секвенирован и клонирован. Это делается для того, чтобы фрагменты ДНК имели тупые концы. HaeIII не эффективен для расщепления одноцепочечной ДНК.
Характеристики
[ редактировать ]Hae III имеет молекулярную массу 37126. После того, как происходит 2-10-кратное увеличение Hae III, происходит переваривание ДНК-субстрата. В результате 100% фрагментов разрезается, более 50% фрагментов лигируется и более 95% фрагментов вырезается повторно. Тепловая инактивация наступает при температуре около 80°C в течение 20 минут. Локус фермента Hae III находится на AF05137 и имеет линейную структуру с 957 парами оснований.
История
[ редактировать ]Hae III вместе с другими ферментами рестрикции были открыты в 1970 году Вернером Арбером и Мэтью Мезельсоном. Метилтрансфераза Hae III, также известная как ген МТазы из Haemophilus aegyptius (последовательность распознавания: 5'-GGCC-3'), была введена в Escherichia coli (E.coli) в плазмидном векторе pBR322. Ген был экстрагирован из одного фрагмента EcoRI и одного Hind фрагмента фермента III. Было обнаружено, что клоны, несущие дополнительные соседние фрагменты, кодируют фермент рестрикции Hae III.
Функция
[ редактировать ]Фермент расщепляет ДНК в тех положениях, где находится последовательность GGCC. Расщепление происходит между вторым и третьим нуклеотидами ( G и C ). Полученные фрагменты ДНК известны как рестрикционные фрагменты . HaeIII разрезает обе цепи ДНК в одном и том же месте, образуя рестрикционные фрагменты с тупыми концами . Тепловая денатурация происходит при 80°С через 20 минут. [2]
Метилаза
[ редактировать ]Haemophilus aegyptius также несет метилазу, получившую название HaeIIIM ( P20589 ), которая метилирует внутренние цитозины в последовательности GGCC. Он защищает последовательности от разрезания HaeIII и образует систему модификации рестрикции . Фермент HaeIII происходит из штамма E. coli , который несет клонированный ген модификации HaeIII из Haemophilus aegyptius.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б «ИнтерПро» . www.ebi.ac.uk. Проверено 6 апреля 2020 г.
- ^ «Фермент рестрикции HaeIII» . theLabRat.com . 2005.
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Раун Джей Ди (1989). Биохимия (международное изд.). ISBN 0-89278-405-9 .
- Слатко Б.Е., Крофт Р., Моран Л.С., Уилсон Г.Г. (декабрь 1988 г.). «Клонирование и анализ генов метилтрансфераз HaeIII и HaeII». Джин . 74 (1): 45–50. дои : 10.1016/0378-1119(88)90248-x . ПМИД 3248732 .
- Блейксли Р.В., Доджсон Дж.Б., Нес И.Ф., Уэллс Р.Д. (октябрь 1977 г.). «Дуплексные участки в «одноцепочечной» ДНК phiX174 расщепляются эндонуклеазой рестрикции Haemophilus aegyptius» . Журнал биологической химии . 252 (20): 7300–6. дои : 10.1016/S0021-9258(19)66969-3 . ПМИД 71298 .
- Хоффман Дж. Л. (июль 1986 г.). «Хроматографический анализ хиральной и ковалентной нестабильности S-аденозил-L-метионина». Биохимия . 25 (15): 4444–9. дои : 10.1021/bi00363a041 . ПМИД 3530324 .