Аффинная хроматография
Аффинная хроматография — метод выделения биомолекулы из смеси, основанный на высокоспецифическом макромолекулярном связывающем взаимодействии между биомолекулой и другим веществом. Конкретный тип связывающего взаимодействия зависит от интересующей биомолекулы; антиген и антитело , фермент и субстрат , рецептор и лиганд или белок и нуклеиновая кислота [1] связывающие взаимодействия часто используются для изоляции различных биомолекул. Аффинная хроматография полезна благодаря своей высокой селективности и разрешению разделения. [2] [3] по сравнению с другими хроматографическими методами.
Принцип
[ редактировать ]Преимущество аффинной хроматографии заключается в специфических взаимодействиях связывания между интересующим аналитом (обычно растворенным в подвижной фазе ) и партнером по связыванию или лигандом (иммобилизованным на неподвижной фазе ). В типичном эксперименте по аффинной хроматографии лиганд прикрепляется к твердой нерастворимой матрице — обычно полимеру , такому как агароза или полиакриламид , — химически модифицированному для введения реакционноспособных функциональных групп , с которыми лиганд может реагировать, образуя стабильные ковалентные связи. [4] Неподвижную фазу сначала загружают в колонку, в которую вводят подвижную фазу. Молекулы, которые связываются с лигандом, останутся связанными с неподвижной фазой. Затем применяется промывной буфер для удаления нецелевых биомолекул путем разрушения их более слабых взаимодействий с неподвижной фазой, в то время как интересующие биомолекулы останутся связанными. Затем целевые биомолекулы можно удалить, применяя так называемый элюирующий буфер, который нарушает взаимодействие между связанными целевыми биомолекулами и лигандом. Таким образом, целевая молекула восстанавливается в элюирующем растворе. [5] [ нужна страница ]
Аффинная хроматография не требует знания молекулярной массы, заряда, гидрофобности или других физических свойств интересующего аналита, хотя знание его свойств связывания полезно при разработке протокола разделения. [5] Типы связывающих взаимодействий, обычно используемые в процедурах аффинной хроматографии, обобщены в таблице ниже.
| Сэр, нет | Типы лиганда | Целевая молекула |
|---|---|---|
| 1 | Аналог субстрата | Ферменты |
| 2 | антитело | Антиген |
| 3 | Лектин | Полисахарид |
| 4 | Нуклеиновая кислота | Дополнительная базовая последовательность |
| 5 | Гормон | Рецептор |
| 6 | Авидин | Биотин / молекула, конъюгированная с биотином |
| 7 | Кальмодулин | Партнер по связыванию кальмодулина |
| 8 | Глутатион | GST Слитый белок |
| 9 | Белок А или Белок G | Иммуноглобулины |
| 10 | Никель-НТА | слитый белок полигистидина |
Настройки партии и колонки
[ редактировать ]
Связывание с твердой фазой может быть достигнуто с помощью колоночной хроматографии, при которой твердая среда наносится на колонку, исходная смесь пропускается через колонку для осаждения, промывочный буфер пропускается через колонку, а элюирующий буфер затем наносится на колонку и собирается. . Эти этапы обычно выполняются при атмосферном давлении. Альтернативно, связывание может быть достигнуто с использованием периодической обработки, например, путем добавления исходной смеси к твердой фазе в сосуде, перемешивания, отделения твердой фазы, удаления жидкой фазы, промывания, повторного центрифугирования, добавления элюирующего буфера, повторное центрифугирование и удаление элюата.
Иногда используется гибридный метод, при котором связывание осуществляется периодическим методом, но твердая фаза со связанной целевой молекулой набивается на колонку, а на колонке выполняются промывка и элюирование.
Лиганды, используемые в аффинной хроматографии, получают как из органических, так и из неорганических источников. Примерами биологических источников являются сывороточные белки, лектины и антитела. Неорганическими источниками являются мороновая кислота, хелаты металлов и триазиновые красители. [7]
Также был разработан третий метод — абсорбция расширенным слоем, который сочетает в себе преимущества двух упомянутых выше методов. Частицы твердой фазы помещаются в колонну, куда жидкая фаза закачивается снизу и выходит сверху. Гравитация частиц гарантирует, что твердая фаза не выйдет из колонны с жидкой фазой.
Аффинные колонки можно элюировать путем изменения концентрации соли, pH, pI, заряда и ионной силы напрямую или через градиент для разделения интересующих частиц.
Совсем недавно были разработаны установки, в которых последовательно используется более одной колонки. Преимущество по сравнению с установками с одной колонкой заключается в том, что материал смолы может быть полностью загружен, поскольку несвязывающий продукт напрямую переносится в следующую колонку со свежим материалом колонки. Эти хроматографические процессы известны как периодическая противоточная хроматография (ПХХ). Таким образом, затраты на смолу на количество произведенного продукта могут быть значительно снижены. Поскольку одну колонку всегда можно элюировать и регенерировать, в то время как другая колонка загружена, уже двух колонок достаточно, чтобы в полной мере использовать преимущества. [8] Дополнительные колонки могут обеспечить дополнительную гибкость в отношении времени элюирования и регенерации за счет затрат на дополнительное оборудование и смолу.
Конкретное использование
[ редактировать ]Аффинную хроматографию можно использовать во многих областях, включая очистку нуклеиновых кислот, очистку белков. [9] из бесклеточных экстрактов и очистки крови.
Используя аффинную хроматографию, можно отделить белки, которые связываются с определенным фрагментом, от белков, которые не связываются с этим конкретным фрагментом. [10] Поскольку этот метод очистки основан на необходимых биологических свойствах белка, он является полезным методом, и белки можно очищать во много раз за один этап. [11] [ нужна страница ]
Различные средства массовой информации по интересам
[ редактировать ]Существует множество различных носителей сходства для самых разных возможных применений. [12] [9] [13] Вкратце, они (обобщенно) активированы/функционализированы и действуют как функциональный спейсер, поддерживают матрицу и исключают обработку токсичных реагентов.
Аминокислотные среды используются с различными сывороточными белками, белками, пептидами и ферментами, а также с рРНК и дцДНК. Авидин-биотиновая среда используется в процессе очистки биотина/авидина и их производных.
Углеводная связь чаще всего используется с гликопротеинами или любым другим углеводсодержащим веществом; углеводы используются с лектинами, гликопротеинами или любыми другими белками-метаболитами углеводов. Красящая лигандная среда неспецифична, но имитирует биологические субстраты и белки. Глутатион полезен для разделения рекомбинантных белков, меченных GST. Гепарин представляет собой обобщенный аффинный лиганд, и он наиболее полезен для разделения белков свертывания плазмы, а также ферментов нуклеиновых кислот и липаз.
Среды гидрофобного взаимодействия чаще всего используются для воздействия на свободные карбоксильные группы и белки.
В иммуноаффинных средах (подробно описанных ниже) для разделения антигенов и антител используется высокая специфичность; Аффинная хроматография с иммобилизованными металлами подробно описана ниже и использует взаимодействия между ионами металлов и белками (обычно специально помеченными) для разделения; нуклеотид/коэнзим, который разделяет дегидрогеназы, киназы и трансаминазы.
Нуклеиновые кислоты улавливают мРНК, ДНК, рРНК и другие нуклеиновые кислоты/олигонуклеотиды. Белковый метод A/G используется для очистки иммуноглобулинов.
Специальные среды предназначены для определенного класса или типа белка/кофермента; этот тип среды будет работать только для разделения определенного белка или кофермента.
Иммуноаффинность
[ редактировать ]Другое применение процедуры — аффинная очистка антител из сыворотки крови. Если известно, что сыворотка содержит антитела против определенного антигена (например, если сыворотка получена от организма, иммунизированного против соответствующего антигена), то ее можно использовать для аффинной очистки этого антигена. Это также известно как иммуноаффинная хроматография. Например, если организм иммунизирован против слитого белка GST, он будет вырабатывать антитела против слитого белка и, возможно, также антитела против метки GST. Затем белок можно ковалентно связать с твердой подложкой, такой как агароза, и использовать в качестве аффинного лиганда при очистке антитела от иммунной сыворотки.
Для полноты каждый белок GST и слитый с GST белок можно связать отдельно. Первоначально сыворотке позволяют связываться с аффинной матрицей GST. Это позволит удалить антитела против GST-части слитого белка. Затем сыворотку отделяют от твердой подложки и позволяют ей связаться с матрицей слитого белка GST. Это позволяет любым антителам, распознающим антиген, захватить твердую подложку. Элюцию интересующих антител чаще всего достигают с использованием буфера с низким pH, такого как глицин pH 2,8. Элюат собирают в нейтральный трис- или фосфатный буфер, чтобы нейтрализовать элюирующий буфер с низким pH и остановить любую деградацию активности антитела. Это хороший пример, поскольку аффинная очистка используется для очистки исходного слитого белка GST, удаления нежелательных антител против GST из сыворотки и очистки целевого антитела.
Моноклональные антитела также могут быть выбраны для связывания белков с высокой специфичностью, при этом белок высвобождается в довольно мягких условиях. Это может оказаться полезным для дальнейших исследований в будущем. [14]
, часто используется упрощенная стратегия Для очистки антител, вырабатываемых против пептидных антигенов . Когда пептидные антигены производятся синтетически, терминальный остаток цистеина добавляется либо к N-, либо к C-концу пептида. Этот остаток цистеина содержит сульфгидрильную функциональную группу, которая позволяет пептиду легко конъюгироваться с белком-носителем (например, гемоцианином улитки улитки (KLH)). Тот же самый цистеинсодержащий пептид также иммобилизуют на агарозной смоле через остаток цистеина и затем используют для очистки антитела.
Большинство моноклональных антител были очищены с использованием аффинной хроматографии на основе иммуноглобулин -специфического белка А или белка G , полученного из бактерий. [15]
Иммуноаффинная хроматография с моноклональными антителами, иммобилизованными на монолитной колонке, успешно использовалась для захвата внеклеточных везикул (например, экзосом и экзомеров) из плазмы крови человека путем воздействия на тетраспанины и интегрины, обнаруженные на поверхности ЭВ. [16] [17]
Иммуноаффинная хроматография также является основой для иммунохроматографических тест-полосок (ИКТ), которые обеспечивают быстрое средство диагностики при уходе за пациентами. Используя ИКТ, техник может сделать определение у постели пациента, без необходимости использования лаборатории. [18] Обнаружение ИКТ очень специфично для микроба, вызывающего инфекцию. [19]
Аффинная хроматография с иммобилизованными ионами металлов
[ редактировать ]Аффинная хроматография с иммобилизованными ионами металлов (IMAC) основана на специфической ковалентной ковалентной связи аминокислот, особенно гистидина, с металлами. Этот метод работает, позволяя белкам, имеющим сродство к ионам металлов, удерживаться в колонке, содержащей иммобилизованные ионы металлов, таких как кобальт, никель или медь, для очистки гистидинсодержащих белков или пептидов, железа, цинка или галлия для очистки. фосфорилированных белков или пептидов. Многие природные белки не обладают сродством к ионам металлов, поэтому можно использовать технологию рекомбинантной ДНК для введения такой белковой метки в соответствующий ген. Методы, используемые для элюирования интересующего белка, включают изменение pH или добавление конкурентной молекулы, такой как имидазол . [20] [21]
Рекомбинантные белки
[ редактировать ]Возможно, наиболее распространенным применением аффинной хроматографии является очистка рекомбинантных белков. Белки с известным сродством помечаются белками , чтобы облегчить их очистку. Белок мог быть генетически модифицирован, чтобы его можно было выбрать для аффинного связывания; это известно как гибридный белок. Белковые метки включают гексагистидин ( His ), глутатион -S-трансферазу (GST), мальтозосвязывающий белок (MBP) и метку CL7 варианта колицина E7. Гистидиновые метки обладают сродством к ионам никеля , кобальта , цинка , меди и железа , которые иммобилизованы путем образования ковалентных ковалентных связей с хелатором, включенным в неподвижную фазу. избыточное количество соединения, способного действовать как лиганд иона металла, такого как имидазол Для элюирования используют . GST имеет сродство к глутатиону, который коммерчески доступен в виде иммобилизованной глутатион-агарозы. Во время элюирования избыток глутатиона используется для вытеснения меченого белка. CL7 обладает сродством и специфичностью к белку иммунитета 7 (Im7), который коммерчески доступен в виде иммобилизованной агарозной смолы Im7. Для элюирования на смолу Im7 наносится активная и сайт-специфическая протеаза для высвобождения белка, не содержащего меток. [22]
Лектины
[ редактировать ]Аффинная хроматография с лектинами — это форма аффинной хроматографии, при которой лектины используются для разделения компонентов в образце. Лектины, такие как конканавалин А, представляют собой белки, которые могут связывать специфические молекулы углеводов альфа-D-маннозы и альфа-D-глюкозы. Некоторыми распространенными углеводными молекулами, которые используются в аффинной хроматографии с лектинами, являются Con A-сефароза и WGA-агароза. [23] Другим примером лектина является агглютинин зародышей пшеницы, который связывает ДН-ацетилглюкозамин. [24] Наиболее распространенным применением является отделение гликопротеинов от негликозилированных белков или отделение одной гликоформы от другой гликоформы. [25] Хотя существуют различные способы проведения аффинной хроматографии с лектинами, цель состоит в том, чтобы извлечь сахарный лиганд желаемого белка. [23]
Специальность
[ редактировать ]Другое применение аффинной хроматографии — очистка конкретных белков с использованием гелевой матрицы, уникальной для конкретного белка. Например, очистку β-галактозидазы E. coli осуществляют с помощью аффинной хроматографии с использованием п-аминобенил-1-тио-β-D-галактопиранозилагарозы в качестве аффинной матрицы. В качестве аффинной матрицы используется п-аминобенил-1-тио-β-D-галактопиранозилагароза, поскольку она содержит галактопиранозильную группу, которая служит хорошим аналогом субстрата для β-галактозидазы E. coli. Это свойство позволяет ферменту связываться с неподвижной фазой аффинной матрицы, и β-галактозидаза элюируется при добавлении в колонку возрастающей концентрации соли. [26]
Щелочная фосфатаза
[ редактировать ]Щелочную фосфатазу из E. coli можно очистить с использованием матрицы DEAE-целлюлозы. А. фосфатаза имеет небольшой отрицательный заряд, что позволяет ей слабо связываться с положительно заряженными аминогруппами в матрице. Затем фермент можно элюировать путем добавления буфера с более высокими концентрациями соли. [27]
Борнатная аффинная хроматография
[ редактировать ]Борнатная аффинная хроматография заключается в использовании бороновой кислоты или боронатов для элюирования и количественного определения количества гликопротеинов . В клинических адаптациях этот тип хроматографии был применен для определения долгосрочной оценки пациентов с диабетом посредством анализа их гликированного гемоглобина . [24]
Очистка сывороточного альбумина
[ редактировать ]Аффинная очистка примесей альбумина и макроглобулина помогает удалить избыток альбумина и примесей α 2 -макроглобулина при выполнении масс-спектрометрии. При аффинной очистке сывороточного альбумина стационарным средством, используемым для сбора или привлечения сывороточных белков, может быть сибакрон-синяя сефароза. Затем белки сыворотки можно элюировать с адсорбента буфером, содержащим тиоцианат (SCN − ). [28]
Слабоаффинная хроматография
[ редактировать ]Слабоаффинная хроматография [29] ( WAC ) — метод аффинной хроматографии для скрининга аффинности при разработке лекарств. [30] [31] основанный на сродстве WAC — это метод жидкостной хроматографии, , который разделяет химические соединения на основе их различного слабого сродства к иммобилизованной мишени. Чем выше сродство соединения к мишени, тем дольше оно остается в установке разделения, и это будет выражаться в более длительном времени удерживания. Меру сродства и ранжирование сродства можно получить путем обработки полученных времен удерживания анализируемых соединений. Аффинная хроматография является частью более широкого набора методов, используемых для идентификации целевых лекарственных средств на основе хемопротеомики .
Технология WAC продемонстрирована на ряде различных белковых мишеней – протеаз , киназ , шаперонов и мишеней белок-белкового взаимодействия (PPI). Было показано, что WAC более эффективен, чем традиционные методы скрининга на основе фрагментов. [31]
История
[ редактировать ]Аффинная хроматография была задумана и впервые разработана Педро Куатрекасасом и Меиром Вильчеком . [32] [33]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Айзпуруа-Олайсола, Ойер; Састре Торано, Хавьер; Пукин, Алексей; Фу, Оу; Бунс, Герт Ян; де Йонг, Герхардус Дж.; Питерс, Роланд Дж. (январь 2018 г.). «Аффинный капиллярный электрофорез для оценки аффинности связывания ингибиторов холерного токсина на основе углеводов». Электрофорез . 39 (2): 344–347. дои : 10.1002/elps.201700207 . hdl : 1874/362143 . ПМИД 28905402 . S2CID 33657660 .
- ^ Нинфа, Александр Дж.; Баллоу, Дэвид П.; Бенор, Мэрили (2009). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Уайли. п. 133. ИСБН 9780470087664 .
- ^ « Введение в аффинную хроматографию » . bio-rad.com . Био-Рад. 14 сентября 2020 г. Проверено 14 сентября 2020 г.
- ^ Захариу, Майкл, изд. (2008). Аффинная хроматография: методы и протоколы (2-е изд.). Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. стр. 1–2. ISBN 9781588296597 .
- ^ Jump up to: а б Боннер, Филип Л.Р. (2007). Очистка белков (2-е изд.). Тотова, Нью-Джерси: Группа Тейлора и Фрэнсиса. ISBN 9780415385114 .
- ^ Кумар, Пранав (2018). Биофизика и молекулярная биология . Нью-Дели: Публикация Pathfinder. п. 11. ISBN 978-93-80473-15-4 .
- ^ Фанали, Сальваторе; Хаддад, Пол Р.; Пул, Колин Ф.; Шенмейкерс, Питер; Ллойд, Дэвид, ред. (2013). Жидкостная хроматография: Применение . Справочники по разделению. Сент-Луис: Эльзевир. п. 3. ISBN 9780124158061 .
- ^ Баур, Дэниел; Ангарита, Моника; Мюллер-Шпет, Томас; Штайнебах, Фабиан; Морбиделли, Массимо (2016). «Сравнение периодического и непрерывного многоколоночного захвата белка А с использованием оптимальной конструкции». Биотехнологический журнал . 11 (7): 920–931. дои : 10.1002/biot.201500481 . hdl : 11311/1013726 . ПМИД 26992151 . S2CID 205492204 .
- ^ Jump up to: а б «Куб Биотех» . Куб Биотех . Проверено 11 сентября 2019 г.
- ^ Ахерн, Кевин; Раджагопал, Индира (12 февраля 2015 г.). Биохимия бесплатно и просто (3-е изд.). Да Винчи Пресс. п. 822. hdl : 10211.3/206119 .
- ^ Гришэм, Чарльз М. (1 января 2013 г.). Биохимия . Брукс/Коул, Cengage Learning. ISBN 978-1133106296 . OCLC 777722371 .
- ^ Махмуди Гомари, Мохаммед; Сарайгорд-Афшари, Неда; Фарсимадан, Марзие; Ростами, Неда; Агамири, Шахин; Фарахоллахи, Мохаммад М. (1 декабря 2020 г.). «Возможности и проблемы методов очистки белков с помощью меток: применение в фармацевтической промышленности» . Достижения биотехнологии . 45 : 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653 . ISSN 0734-9750 . ПМИД 33157154 . S2CID 226276355 .
- ^ «Аффинная хроматография» .
- ^ Томпсон, Нэнси Э.; Фоли, Кэтрин М.; Сталдер, Элизабет С.; Берджесс, Ричард Р. (2009). «Глава 28 Идентификация, производство и использование полиол-чувствительных моноклональных антител для иммуноаффинной хроматографии». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы энзимологии. Том. 463. стр. 475–494. дои : 10.1016/s0076-6879(09)63028-7 . ISBN 9780123745361 . ПМИД 19892188 .
- ^ Улен М (2008). «Аффинити как инструмент в науке о жизни» . БиоТехники . 44 (5): 649–54. дои : 10.2144/000112803 . ПМИД 18474040 .
- ^ Multia E, Tear CJ, Palviainen M и др. (декабрь 2019 г.). «Быстрое выделение высокоспецифичной популяции внеклеточных везикул тромбоцитарного происхождения из плазмы крови с помощью аффинной монолитной колонки, иммобилизованной антителом против CD61 человека». Аналитика Химика Акта . 1091 : 160–168. Бибкод : 2019AcAC.1091..160M . дои : 10.1016/j.aca.2019.09.022 . hdl : 10138/321264 . ПМИД 31679569 . S2CID 203147714 .
- ^ Мультиа Э., Лиангсупри Т., Юссила М. и др. (сентябрь 2020 г.). «Автоматизированная оперативная система выделения и фракционирования наноразмерных биомакромолекул из плазмы человека» . Аналитическая химия . 92 (19): 13058–13065. дои : 10.1021/acs.analchem.0c01986 . ПМЦ 7586295 . ПМИД 32893620 .
- ^ Луппа, Питер (2018). Тестирование на месте оказания медицинской помощи: принципы и клиническое применение . Берлин, Германия: Шпрингер. стр. 71–72. ISBN 9783662544976 .
- ^ Дж. Д. Мюллер; Ч.Р. Уилкс; Кей Джей О'Райли; Р. Дж. Кондрон; Р. Булл; А. Матечун (2004). «Специфика иммунохроматографического теста на сибирскую язву». Австралийский ветеринарный журнал . 82 (4): 220–222. дои : 10.1111/j.1751-0813.2004.tb12682.x . ПМИД 15149073 .
- ^ Сингх, Навин К.; Д.Суза, Рой Н.; Биби, Нур С.; Фернандес-Лахор, Марсело (2015). «Прямой захват белков, меченных His6, с использованием мегапористых криогелей, разработанных для металл-ионной аффинной хроматографии» . В Райхельте, С. (ред.). Аффинная хроматография . Методы молекулярной биологии. Том. 1286. Нью-Йорк: Humana Press. стр. 201–212. дои : 10.1007/978-1-4939-2447-9_16 . ISBN 978-1-4939-2447-9 . ПМИД 25749956 .
- ^ Габерц-Порекар, Владка К.; Менарт, Виктор (2001). «Перспективы аффинной хроматографии с иммобилизованными металлами». J Biochem Биофизические методы . 49 (1–3): 335–360. дои : 10.1016/S0165-022X(01)00207-X . ПМИД 11694288 .
- ^ Васильева Марина Н.; Клюев, Сергей; Васильев Алексей Дмитриевич; Вессон, Хантер; Чжан, Чжо; Ренфроу, Мэтью Б.; Ван, Хэнбинь; Хиггинс, Н. Патрик; Чоу, Луиза Т.; Васильев Дмитрий Георгиевич (27 июня 2017 г.). «Эффективная сверхвысокоаффинная хроматография для одностадийной очистки сложных белков» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 114 (26): E5138–E5147. Бибкод : 2017PNAS..114E5138V . дои : 10.1073/pnas.1704872114 . ISSN 0027-8424 . ПМЦ 5495267 . ПМИД 28607052 .
- ^ Jump up to: а б Фриз, Х.Х. (май 2001 г.). «Аффинная хроматография с лектинами». Современные протоколы в науке о белках . Том. Глава 9. С. 9.1.1–9.1.9. дои : 10.1002/0471140864.ps0901s00 . ISBN 978-0471140863 . ISSN 1934-3663 . ПМИД 18429210 . S2CID 3197260 .
- ^ Jump up to: а б Хейдж, Дэвид (май 1999 г.). «Аффинная хроматография: обзор клинического применения» (PDF) . Клиническая химия . 45 (5): 593–615. дои : 10.1093/клинчем/45.5.593 . ПМИД 10222345 .
- ^ «GE Healthcare Life Sciences, Иммобилизованный лектин» . Архивировано из оригинала 3 марта 2012 года . Проверено 29 ноября 2010 г.
- ^ Нинфа, Александр Дж.; Баллоу, Дэвид П.; Бенор, Мэрили (2006). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Уайли. п. 153.
- ^ Нинфа, Александр Дж.; Баллоу, Дэвид П.; Бенор, Мэрили (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Хобокен, Нью-Джерси: Джон Уайли. п. 240. ИСБН 9780470087664 . OCLC 420027217 .
- ^ Наваль, Хавьер; Кальво, Мигель; Ламприв, Фермин; Пинейро, Андрес (1 января 1983 г.). «Аффинная хроматография сывороточного альбумина: иллюстративный лабораторный эксперимент по биомолекулярным взаимодействиям». Биохимическое образование . 11 (1): 5–8. дои : 10.1016/0307-4412(83)90004-3 . ISSN 1879-1468 .
- ^ Цопф, Д.; С. Олсон (1990). «Слабоаффинная хроматография». Природа . 346 (6279): 87–88. Бибкод : 1990Natur.346...87Z . дои : 10.1038/346087a0 . ISSN 0028-0836 . S2CID 4306269 .
- ^ Дуонг-Ти, доктор медицины; Мейби, Э.; Бергстрем, М.; Фекс, Т.; Исакссон Р.; Олсон, С. (2011). «Слабоаффинная хроматография как новый подход к скринингу фрагментов при открытии лекарств». Аналитическая биохимия . 414 (1): 138–146. дои : 10.1016/j.ab.2011.02.022 . ПМИД 21352794 .
- ^ Jump up to: а б Мейби, Э.; Симмонит, Х.; Ле Страт, Л.; Дэвис, Б.; Матасова Н.; Мур, доктор медицинских наук; Мросек, М.; Мюррей, Дж.; Хаббард, Р.Э.; Олсон, С. (2013). «Скрининг фрагментов с помощью слабоаффинной хроматографии: сравнение с общепринятыми методами скрининга на HSP90». Аналитическая химия . 85 (14): 6756–6766. дои : 10.1021/ac400715t . ПМИД 23806099 .
- ^ «Меир Вильчек – Фонд Вольфа» . Фонд Волка . 9 декабря 2018 года . Проверено 17 марта 2021 г.
Аффинная хроматография — новый метод, разработанный Куатрекасасом и Вильчеком.
- ^ П Куатрекасас; М Вильчек; CB Анфинсен (октябрь 1968 г.). «Селективная очистка ферментов методом аффинной хроматографии» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 61 (2): 636–643. Бибкод : 1968PNAS...61..636C . дои : 10.1073/pnas.61.2.636 . ПМК 225207 . ПМИД 4971842 .
