Негативное пятно

При микроскопии отрицательное окрашивание является установленным методом, часто используемым в диагностической микроскопии, для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачной жидкостью . В этой технике фон окрашивается , оставляя фактический образец нетронутым и, таким образом, видимым. Это контрастирует с положительным окрашиванием , при котором фактический образец окрашивается.

Яркая полевая микроскопия

Для микроскопии яркого поля отрицательное окрашивание обычно выполняется с использованием черной чернильной жидкости, такой как нигрозин и индийские чернила . Образец, такой как влажная бактериальная культура, распространяющаяся на стеклянном горке, смешивается с негативным пятном и дает высохнуть. При просмотре с микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры , выглядят легкими на темном окружающем фоне. Альтернативный метод был разработан с использованием обычной водонепроницаемой маркирующей ручки для доставки отрицательного пятна. ^{[ 1 ]}

Пропишетная электронная микроскопия

В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность на электроны связана с атомным числом , т. Е. Количество протонов. Некоторые подходящие негативные пятна включают аммоний -молибдат , уранилацетат , уранильный формат , фосфотунгстиновую кислоту , тетроксид осмия , феррицианид осмия , феррицианид осмия ^{[ нужно разъяснения ]}^{[ 2 ]} и auroglucothionate . Они были выбраны потому, что они сильно разбросают электроны, а также хорошо адсорбируются по биологическому веществу. Структуры, которые могут быть отрицательно окрашены, намного меньше, чем структура, изученные с помощью светового микроскопа. Здесь метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальной жгутики , биологических мембранных структур и белков или белковых агрегатов, которые имеют низкую электронную мощность. Некоторые пятна, такие как тетроксид осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Как сильные окислители, они сшивают липиды в основном, реагируя с ненасыщенными углеродными связями, и, таким образом, оба фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей и одновременно окрашивают их. ^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}

Выбор отрицательного пятна в электронной микроскопии может быть очень важен. В раннем исследовании вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных листьев провалов от больного растения показано только сферические вирусы с одним пятном и только вирусами в форме стержня с другим. Проверенный вывод заключался в том, что это растение страдало от смешанной инфекции двумя отдельными вирусами. Отрицательное окрашивание как на световом микроскопе, так и на уровне электронного микроскопа никогда не следует выполнять с помощью инфекционных организмов, если не соблюдаются строгие меры предосторожности. Отрицательное окрашивание обычно является очень легким методом подготовки и, следовательно, не уменьшает вероятность инфекции оператора.

Другие приложения

Идентификация пластинчатых (LE), обратного мицеллера (M) и обратного гексагонального H-II цилиндров (H) липидных фаз путем отрицательного окрашивания.

Электронная микроскопия отрицательного окрашивания также была успешно использована для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатые липосомы (LE), инвертированные сферические мицеллы (M) и инвертированные шестигранные цилиндрические (H) фазы (см. Рисунок). ^{[ 5 ]}

Ссылки

^ Woeste, S; Демкик, П (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . 57 (6). Американское общество микробиологии: 1858–1859. doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . PMC 183484 . PMID 1714705 .
^ Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматического ретикулума в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. С. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5 .
^ Bozzola, John J.; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образца для просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. С. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5 .
^ Ма Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические применения . Издательство Кембриджского университета. С. 45–61. ISBN 0-521-63287-0 .
^ Yashroy, RC (1990). «Пластичная дисперсия и фазовое разделение хлоропластских мембранных липидов с помощью электронной микроскопии отрицательного окрашивания». Журнал биологических наук . 15 (2). Springer Science and Business Media LLC: 93–98. doi : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .

Внешние ссылки

Библиотечные ресурсы о
Отрицательное окрашивание

«Отрицательное окрашивание на чайники» . Получено 2009-06-06 .
«Отрицательное окрашивание» . Архивировано из оригинала 2012-12-25 . Получено 2009-06-06 .

[1] Woeste, S; Демкик, П (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . 57 (6). Американское общество микробиологии: 1858–1859. doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . PMC 183484 . PMID 1714705 .

[2] Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматического ретикулума в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. С. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5 .

[Bozzola-3] Bozzola, John J.; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образца для просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. С. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5 .

[4] Ма Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические применения . Издательство Кембриджского университета. С. 45–61. ISBN 0-521-63287-0 .

[5] Yashroy, RC (1990). «Пластичная дисперсия и фазовое разделение хлоропластских мембранных липидов с помощью электронной микроскопии отрицательного окрашивания». Журнал биологических наук . 15 (2). Springer Science and Business Media LLC: 93–98. doi : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]