Анализ белка Лоури
Анализ белка Лоури — это биохимический анализ для определения общего уровня белка в растворе . Общая концентрация белка проявляется в изменении цвета раствора образца пропорционально концентрации белка, которую затем можно измерить с помощью колориметрических методов . Он назван в честь биохимика Оливера Х. Лоури , который разработал реагент в 1940-х годах. Его статья 1951 года, описывающая эту технику, является самой цитируемой статьей в научной литературе: ее цитировали более 300 000 раз. [1] [2] [3]
Механизм
[ редактировать ]Метод сочетает в себе реакции ионов меди с пептидными связями в щелочных условиях ( Биуретовый тест ) с окислением остатков ароматических белков . Метод Лоури основан на реакции Cu + , получаемый окислением пептидных связей реагентом Фолина-Чиокальтеу (смесь фосфорновольфрамовой и фосфорно-молибденовой кислот в реакции Фолина-Чокальтеу). реакции недостаточно изучен, но включает восстановление реагента Фолина-Чиокальтеу и окисление ароматических Механизм остатков (в основном триптофана , а также тирозина ).
Необходимо соблюдать осторожность при работе с реагентом Фолина, который активен только в кислой среде. Хотя это и правда, реакция восстановления, как упоминалось ранее, будет происходить только при основном pH 10. Таким образом, восстановление должно произойти до того, как реагент распадется. Смешивание раствора белка с одновременным добавлением реагента Фолина обеспечит протекание реакции желаемым образом. [4]
Эксперименты показали, что цистеин также реагирует на реагент. Следовательно, остатки цистеина в белке, вероятно, также вносят вклад в поглощение, наблюдаемое в анализе Лоури. [5] Результатом этой реакции является молекула интенсивного синего цвета, известная как гетерополимолибденовый синий. [6] Концентрацию восстановленного реагента Фолина (гетерополимолибденовый синий) измеряют по поглощению при 660 нм. [7] В результате об общей концентрации белка в образце можно судить по концентрации остатков триптофана и тирозина, восстанавливающих реагент Фолина-Чиокальтеу.
Этот метод был впервые предложен Лоури в 1951 году. Анализ бицинхониновой кислоты и анализ Хартри-Лоури являются последующими модификациями исходной процедуры Лоури.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Ван Ноорден, Р .; Махер, Б.; Нуццо, Р. (2014). «100 лучших статей» . Природа . 514 (7524): 550–553. Бибкод : 2014Natur.514..550V . дои : 10.1038/514550a . ПМИД 25355343 .
- ^ Кресге, Н.; Симони, РД; Хилл, РЛ (2005). «Самая цитируемая статья в истории издательского дела: определение белка Оливера Х. Лоури» . Журнал биологической химии . 280 (28): е25.
- ^ Гарфилд, Э. (1990). «Самые цитируемые статьи всех времен, SCI 1945–1988. Часть 1A. 100 лучших статей SCI - будет ли когда-нибудь уничтожен метод Лоури?» (PDF) . Текущее содержание . 7 :3–14.
- ^ Беккер, Джеффри М.; Колдуэлл, Гай А.; Зачго, Ева Энн (1990). Биотехнология: лабораторный курс . Сан-Диего: Академический проф. ISBN 978-0-12-084560-6 .
- ^ Эверетт, доктор юридических наук; Брайант, QM; Грин, AM; Эбби, Ю.А.; Вангила, GW; Уокер, РБ (28 июля 2010 г.). «Тщательное исследование реакционной способности различных классов соединений по отношению к реагенту Фолина-Чиокальтеу» . Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 58 (14): 8139–8144. дои : 10.1021/jf1005935 . ПМК 4075968 . ПМИД 20583841 .
- ^ Нинфа, Александр Дж. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, INC. с. 112. ИСБН 978-0-470-08766-4 .
- ^ Лоури, Огайо; Роузбро, Нью-Джерси; Фарр, Алабама; Рэндалл, Р.Дж. (1951). «Измерение белка с помощью фенольного реагента Фолина» (PDF) . Журнал биологической химии . 193 (1): 265–75. дои : 10.1016/S0021-9258(19)52451-6 . ПМИД 14907713 .
- Уокер, Дж. М. (2002). Справочник по белковым протоколам. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press.
Внешние ссылки
[ редактировать ]Аналитические реагенты и тесты |
|---|
Protein Estimation using Lowry Method in Acube Lifesciences
Аналитические реагенты и тесты |
|---|