Это было бы испытание
В химии биуретовый тест IPA / ˌ b aɪ j ə ˈrate ə aɪ / , / ˈb j ˌrate / : ( [ 1 ] ), также известный как тест Пиотровского , представляет собой химический тест, используемый для обнаружения присутствия по крайней мере двух пептидных связей в молекуле. В присутствии пептидов меди (II) ион растворе образует лиловые комплексы координационные в щелочном . Реакция впервые наблюдалась в 1833 году; [ 2 ] В Польше биуретовый тест также известен как тест Пиотровского в честь польского физиолога Густава Пиотровского который независимо заново открыл его в 1857 году. [ 3 ] Было разработано несколько вариантов теста, такие как тест BCA и модифицированный тест Лоури. [ 4 ]
Биуретовую реакцию можно использовать для оценки концентрации белков, поскольку пептидные связи возникают с одинаковой частотой на каждую аминокислоту в пептиде. Интенсивность цвета и, следовательно, поглощение при 540 нм прямо пропорциональны концентрации белка в соответствии с законом Бера-Ламберта .
Несмотря на название, реагент на самом деле не содержит биурета. [(H 2 N-CO-) 2 NH] . Тест назван так потому, что он также дает положительную реакцию на пептидоподобные связи в молекуле биурета.
В этом анализе медь (II) связывается с атомами азота, присутствующими в пептидах белков. Во вторичной реакции медь(II) восстанавливается до меди(I). Буферы, такие как Трис и аммиак, мешают этому анализу, что делает этот анализ непригодным для образцов белка, очищенных от осаждения сульфатом аммония. Из-за своей нечувствительности и незначительного влияния свободных аминокислот этот анализ наиболее полезен для образцов цельных тканей и других источников с высокой концентрацией белка. [ 5 ]
Процедура
[ редактировать ]Водный образец обрабатывают равным объемом 1% сильного основания (гидроксида натрия или калия), а затем несколькими каплями водного раствора сульфата меди(II) . Если раствор становится фиолетовым, он содержит белок. 5–160 мг/ мл Может определяться . Пептиды правильной длины, состоящие как минимум из 3 аминокислот, необходимы для значительного и измеримого изменения цвета с помощью этих реагентов. [ 6 ]
Биуретовый реагент
[ редактировать ]Биуретовый реагент состоит из гидроксида натрия (NaOH) и гидратированного сульфата меди (II) вместе с тартратом калия-натрия . [ 7 ] последний из которых добавляется для хелатирования и, таким образом, стабилизирует ионы меди. Реакция ионов меди с атомами азота, участвующими в пептидных связях, приводит к смещению атомов водорода пептидов в щелочных условиях. Три- или тетрадентатное хелатирование с пептидным азотом дает характерный цвет. Это обнаруживается с помощью дипептидов. [ 8 ]
Реагент обычно используется в биуретовом белка анализе — колориметрическом тесте, используемом для определения концентрации белка с помощью УФ/ВИД-спектроскопии при длине волны 540 нм.
Высокочувствительные варианты биуретовой пробы
[ редактировать ]В современном колориметрическом анализе пептидов обычно применяются две основные модификации биуретового теста: анализ бицинхониновой кислоты (BCA) и анализ Лоури. В этих испытаниях Cu + образующийся в ходе биуретовой реакции далее вступает в реакцию с другими реагентами, приводя к более глубокому цвету.
В тесте BCA Cu + образует комплекс темно-фиолетового цвета с бицинхониновой кислотой (BCA), [ 9 ] который поглощает около 562 нм, создавая характерный лиловый цвет. Водорастворимый комплекс BCA/медь поглощает гораздо сильнее, чем комплекс пептид/медь, увеличивая чувствительность биуретового теста примерно в 100 раз: анализ BCA позволяет обнаруживать белки в диапазоне от 0,0005 до 2 мг/мл. . Кроме того, анализ белка BCA дает важное преимущество совместимости с такими веществами, как поверхностно-активные вещества, содержащиеся в образцах белка (до 5%).
В анализе белка Лоури Cu + окисляется обратно до Cu 2+ от Мо МЫ в реагенте Фолина-Чиокальтеу , образующем молибденовый синий (Mo IV ). Остатки тирозина в белке в этих обстоятельствах также образуют молибденовый синий. Таким образом, белки можно обнаружить в концентрациях от 0,005 до 2 мг/мл. [ 10 ] Молибденовый синий, в свою очередь, может связывать некоторые органические красители, такие как малахитовый зеленый и аурамин O , что приводит к дальнейшему усилению сигнала. [ 11 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ «Определение биурета | Dictionary.com» . www.dictionary.com . Архивировано из оригинала 11 мая 2021 г. Проверено 11 марта 2021 г.
- ^ Роза, Фердинанд (1833). «О соединениях альбумина с оксидами металлов» . Анналы физики и химии Поггендорфа (на немецком языке). 104 (5). Лейпциг, Германия: Дж. А. Барт: 132–142 . Бибкод : 1833АнП...104..132Р . дои : 10.1002/andp.18331040512 . OCLC 1481215 . Архивировано из оригинала 9 мая 2022 года.
- ^ Пиотровский, Г. (1857). «Новая реакция белков и родственных им производных» . Протоколы заседаний Математически-научного класса Императорской Академии наук (на немецком языке). 24 . Вена: 335–337. OCLC 166037616 . Архивировано из оригинала 9 мая 2022 года.
- ^ «Химия белкового анализа» . Библиотека научных белковых методов Thermo Fisher. Архивировано из оригинала 24 марта 2022 г. Проверено 8 мая 2022 г.
- ^ Нинфа, Александр; Баллу, Дэвид; Бенор, Мэрили (2009). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Уайли. п. 111. ИСБН 978-0470087664 . OCLC 1288381941 . Архивировано из оригинала 9 мая 2022 г. Проверено 9 мая 2022 г.
- ^ Фенк, CJ; Кауфман, Н.; и Гербиг, DGJ Chem. Образование. 2007, 84, 1676–1678.
- ^ «Химические реагенты» . Архивировано из оригинала 13 февраля 2010 г. Проверено 30 января 2010 г.
- ^ Датта, СП; Леберман, Р.; Рабин, БР (1959). «Хелирование ионов металлов дипептидами и родственными веществами. Часть 5. Медные комплексы саркозильных и лейциловых лигандов» . Пер. Фарадей Соц . 55 : 2141–2151. дои : 10.1039/TF9595502141 . ISSN 0014-7672 . Архивировано из оригинала 9 мая 2022 г. Проверено 29 августа 2020 г.
- ^ Смит, ПК и др.: Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты. Анальный. Биохим. 150 (1985) 76-85.
- ^ О.Г. Лоури, Н. Дж. Роузбро, А. Л. Фарр, Р. Дж. Рэндалл: Измерение белка с помощью фенольного реагента фолина, J. Biol. хим. 193 (1951) 265 – 275.
- ^ Сарджент, М.Г.: Пятидесятикратная амплификация анализа белка Лоури. Анальный. Биохим. 163 (1987) 476-481.
Внешние ссылки и примечания
[ редактировать ]
- Золото. 1990. Органические соединения в биологических системах, 2-е изд. Джон Уайли и сыновья, Inc.
- Химические реагенты
Аналитические реагенты и тесты |
|---|
