Полосы (микробиология)
В микробиологии штамма штрихование — это метод, используемый для выделения чистого из одного вида микроорганизмов, часто бактерий . Затем из полученных колоний можно взять образцы и вырастить микробиологическую культуру на новой чашке, чтобы можно было идентифицировать, изучить или протестировать микроорганизм.
Современный метод штриховых пластинок развился из усилий Роберта Коха и других микробиологов по получению микробиологических культур бактерий для их изучения. Метод разведения или выделения штрихами был впервые разработан в лаборатории Коха двумя его помощниками Фридрихом Леффлером и Георгом Теодором Августом Гаффки . Этот метод включает разведение бактерий путем систематического нанесения их штрихами по внешней поверхности агара в чашке Петри для получения изолированных колоний, которые затем разрастаются в определенное количество клеток или изолированных колоний. Если на поверхности агара растут генетически одинаковые микроорганизмы, культуру рассматривают как микробиологическую культуру .
Техника
[ редактировать ]Нанесение штрихов – это быстрый и в идеале простой процесс разбавления изоляции. Этот метод заключается в разбавлении сравнительно большой концентрации бактерий до меньшей концентрации. Уменьшение количества бактерий должно показать, что колонии достаточно разбросаны, чтобы влиять на разделение различных типов микробов . Нанесение штрихов производится с помощью стерильного инструмента, например ватного тампона или обычно инокуляционной петли . Асептические методы используются для сохранения микробиологических культур и предотвращения загрязнения питательной среды . Существует множество различных методов нанесения полос на пластину. Выбор метода зависит от индивидуальных предпочтений и может также зависеть от количества микробов, содержащихся в образце.
Трехфазный рисунок полос, известный как T-Streak, рекомендуется новичкам. Нанесение штрихов выполняется с помощью стерильного инструмента, например, ватного тампона или обычно инокуляционной петли . Прививочную петлю сначала стерилизуют, пропуская ее через пламя. Когда петля остынет, ее погружают в инокулят, например, в бульон или образец пациента, содержащий множество видов бактерий. Затем инокуляционную петлю проводят по поверхности агара вперед и назад зигзагообразными движениями до тех пор, пока не будет покрыто примерно 30% чашки. Затем петлю повторно стерилизуют и пластину поворачивают на 90 градусов. Начиная с ранее прошитого участка, петлю протаскивают через него два-три раза, продолжая зигзагообразный узор. Затем процедура повторяется еще раз, стараясь не задеть ранее заштрихованные сектора. Каждый раз петля собирает все меньше и меньше бактерий, пока не соберутся только отдельные бактериальные клетки, которые могут вырасти в колонию. Пластина должна показывать самый сильный рост в первом разделе. Во второй секции будет меньше роста и несколько изолированных колоний, тогда как в последней секции будет наименьший рост и много изолированных колоний.
Среда роста
[ редактировать ]Образец распределяют по одному квадранту чашки Петри, содержащей питательную среду . Бактериям для роста необходимы различные питательные вещества. Сюда входит вода, источник энергии, источники углерода, серы, азота, фосфора, некоторых минералов и других витаминов и факторов роста. Очень распространенный тип среды, используемый в микробиологических лабораториях, известен как агар — желеобразное вещество, полученное из морских водорослей. Питательный агар содержит множество ингредиентов с неизвестным количеством питательных веществ. С одной стороны, это может быть очень селективная среда для использования, поскольку, как уже упоминалось, бактерии являются особенными. Если в среде есть определенное питательное вещество, бактерии наверняка не смогут расти и могут погибнуть . С другой стороны, эти средства массовой информации очень сложны. Сложные среды важны, поскольку они обеспечивают широкий диапазон роста микроорганизмов. Эта среда может поддерживать рост бактерий, отчасти благодаря большому количеству питательных веществ. Выбор используемой питательной среды зависит от того, какой микроорганизм культивируется или для которого выбран микроорганизм.
Инкубация
[ редактировать ]В зависимости от штамма чашку затем можно инкубировать , обычно в течение 24–36 часов, чтобы дать возможность бактериям размножиться. В конце инкубации бактерий должно быть достаточно, чтобы образовать видимые колонии на участках, соприкасающихся с инокуляционной петлей. Из этих смешанных колоний можно идентифицировать отдельные виды бактерий или грибов на основе их морфологических различий (размер/форма/цвет), а затем пересеять их на новую чашку со средой, чтобы получить чистую культуру для дальнейшего анализа.
Автоматизированное оборудование используется на промышленном уровне для нанесения штрихов на твердые среды с целью достижения лучшей стерилизации и постоянства нанесения штрихов, а также для надежного ускорения работы. При нанесении штрихов вручную важно избегать царапин на твердой среде, так как последующие штриховые линии будут повреждены, а неравномерное осаждение инокулята на поврежденных участках среды приведет к кластерному росту микробов, который может распространиться на близлежащие штриховые линии.
Важность
[ редактировать ]Бактерии существуют в воде, почве и пище, на коже и нормальной флоре кишечного тракта . Ассортимент микробов , существующих в окружающей среде и на организме человека, огромен. В организме человека обитают миллиарды бактерий, которые создают нормальную флору, борющуюся с вторгающимися патогенами. Бактерии часто встречаются в смешанных популяциях. Очень редко можно встретить один вид бактерий. Чтобы иметь возможность изучать культурные, морфологические и физиологические характеристики отдельного вида, жизненно важно отделить бактерии от других видов, которые обычно происходят из окружающей среды. Это важно при определении бактерии в клиническом образце. Когда бактерии выделены и изолированы, можно идентифицировать возбудителя бактериального заболевания.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- Кац, Сью (2008). «Протокол полосовой пластины» . Протоколы. Американское общество микробиологии (ASM) . S2CID 133454707 .
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Метод нанесения штрихов на агаровую пластинку для получения изолированных колоний (видео).