Индольный тест

Индоловый тест — это биохимический тест, проводимый на видах бактерий с целью определить способность организма превращать триптофан в индол . Это деление осуществляется цепочкой различных внутриклеточных ферментов , системой, которую обычно называют « триптофаназой ». ^{[ нужна ссылка ]}

Биохимия

Индол образуется путем восстановительного дезаминирования триптофана через промежуточную молекулу индолпировиноградной кислоты. Триптофаназа катализирует реакцию дезаминирования, в ходе которой удаляется аминная (-NH ₂ ) группа молекулы триптофана. Конечными продуктами реакции являются индол, пировиноградная кислота , аммоний (NH ₄⁺) и энергия. Пиридоксальфосфат необходим в качестве кофермента .

Выполнение теста

Как и во многих биохимических тестах на бактерии, результаты теста на индол определяются изменением цвета после реакции с добавленным реагентом.

Чистую бактериальную культуру перед проведением теста необходимо вырастить в стерильном триптофановом или пептонном бульоне в течение 24–48 часов. После инкубации пять капель реактива Ковача ( изоамиловый спирт , пара-диметиламинобензальдегид , концентрированная соляная кислота в культуральный бульон добавляют ).

Положительный результат показывает наличие красного или красновато-фиолетового цвета в поверхностном спиртовом слое бульона. Отрицательный результат отображается желтым цветом. Также может возникнуть переменный результат, в результате которого будет отображаться оранжевый цвет. Это связано с присутствием скатола , также известного как метилиндол или метилированный индол, еще одного возможного продукта деградации триптофана.

Положительный красный цвет образуется в результате ряда реакций. Пара-диметиламинобензальдегид реагирует с индолом , присутствующим в среде, с образованием красного розиндолового красителя. Изоамиловый спирт образует комплекс с красителем розиндолом, что приводит к его осаждению . Оставшийся спирт и осадок затем поднимаются на поверхность среды.

Вариант этого теста с использованием реагента Эрлиха (с использованием этилового спирта вместо изоамилового спирта, разработанного Паулем Эрлихом ) используется при проведении теста на неферментирующих микроорганизмах и анаэробах .

Индол-положительные бактерии

Бактерии, которые дали положительный результат на расщепление индола из триптофана, включают: Aeromonas Hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (кроме P. mirabilis и P. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Vibrio sp. и Lactobacillus reuteri .

Индол-отрицательные бактерии

Бактерии, дающие отрицательные результаты при индольном тесте, включают: Actinobacillus spp., Aeromonas Salmonicida , Alcaligenes sp., большинство видов Bacillus , Bordetella sp., Enterobacter sp., большинство видов Haemophilus , большинство видов Klebsiella , Neisseria sp., Mannheimia. haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. и Rhizobium sp.

Индоловый тест — один из четырех тестов серии IMViC , который проверяет наличие кишечных бактерий. Остальные три теста включают: тест с метиловым красным [M], тест Фогеса-Проскауэра [V] и тест с цитратом [C]. ^[1]

Ссылки

^ Бачун, Дэйв С. и Венди А. Дастман. Руководство микробиологической лаборатории. Эд. Майкл Странц. Мейсон, Огайо: Cengage Learning, 2008. Упражнение 15, «Нормальная флора кишечного тракта». Печать.

Макфаддин, Джин Ф. «Биохимические тесты для идентификации медицинских бактерий». Уильямс и Уилкинс, 1980, стр. 173–183.
Пример типичных индольных реакций
Анген, О.; Муттерс, Р.; Каугант, Д.А.; Олсен, Дж. Э.; Бисгаард, М. (1999). «Таксономические взаимоотношения комплекса [Pasteurella] haemolytica, оцененные с помощью гибридизации ДНК-ДНК и секвенирования 16S рРНК с использованием Mannheimia haemolytica gen. nov., comb, nov., Mannheimia granulomatis com. nov., Mannheimia nov. sp. guicos. Mannheimia ruminalis nov. и Mannheimia varigena nov.». Международный журнал систематической бактериологии. 49 (1): 67–86. дои : 10.1099/00207713-49-1-67 . ISSN 0020-7713 . PMID 10028248

[1] Бачун, Дэйв С. и Венди А. Дастман. Руководство микробиологической лаборатории. Эд. Майкл Странц. Мейсон, Огайо: Cengage Learning, 2008. Упражнение 15, «Нормальная флора кишечного тракта». Печать.

[1]