Дигоксигенин
| |
| Имена | |
|---|---|
| Название ИЮПАК
3β,12β,14-тригидрокси-5β-кард-20(22)-енолид
| |
| Систематическое название ИЮПАК
4-[( 1R ,3aS , 3bR , 5aR , 7S , 9aS , 9bS , 11R , 11aS ) -3а,7,11-Тригидрокси-9а,11а-диметилгексадекагидро-1Н - циклопента [ a ]фенантрен-1-ил]фуран-2(5 H )-он | |
| Идентификаторы | |
| КЭБ | |
| ХЭМБЛ | |
| ХимическийПаук | |
| Информационная карта ECHA | 100.015.279 |
ПабХим CID
|
|
| НЕКОТОРЫЙ | |
Панель управления CompTox ( EPA )
|
|
| Характеристики | |
| С 23 Н 34 О 5 | |
| Молярная масса | 390.51 g/mol |
| войти P | 2.57510 [ 1 ] |
Если не указано иное, данные приведены для материалов в стандартном состоянии (при 25 °C [77 °F], 100 кПа).
| |
Дигоксигенин ( DIG ) – это стероид, который содержится исключительно в цветах и листьях растений Digitalis purpurea , Digitalis orientalis и Digitalis lanata (наперстянки), где он присоединяется к сахарам с образованием гликозидов (например, дигоксина , ланатозида C ). [ 2 ]
Использование в биотехнологии
[ редактировать ]Дигоксигенин — это гаптен , небольшая молекула с высокой антигенностью , которая используется во многих приложениях молекулярной биологии подобно другим популярным гаптенам, таким как 2,4-динитрофенол , биотин и флуоресцеин . Обычно дигоксигенин вводят химическим путем ( конъюгация ) в биомолекулы (белки, нуклеиновые кислоты) для обнаружения в дальнейших анализах. K d взаимодействия дигоксигенин-антитело оценивается в ~ 12 нМ. [ 3 ] (сравните с K d ~0,1 пМ для взаимодействия биотин-стрептавидин [ 4 ] ).
- DIG-связывающие белки
Тинберг и др. разработал искусственные белки, связывающие DIG. Их лучшим связующим, DIG10.3, был белок из 141 аминокислоты, который связывал DIG с константой диссоциации (K d ) 541 (+/- 193) пМ. [ 5 ]
против дигоксигенина Антитела с высоким сродством и специфичностью используются в различных биологических иммуноанализах (например, ELISA ). Антитела метят красителями, ферментами или флуоресценцией, напрямую или вторично, для визуализации и обнаружения.
Таким образом, дигоксигенин является универсальной иммунометкой и, в частности, стандартным иммуногистохимическим маркером для гибридизации in situ . [ 6 ] [ 7 ] В этом случае он конъюгируется с нуклеозидтрифосфатом одного вида РНК ( обычно с уридином ), который затем включается в РНК (« рибозонд ») по мере ее синтеза клеточным механизмом.
Он позволяет сделать:
- чувствительные нерадиоактивные зонды гибридизации in situ для обнаружения нуклеиновых кислот в растениях, способные обнаружить 1 мкг плазмидной ДНК. [ 8 ]
- конъюгаты пептид-DIG, т.е. анализ брадикинина с помощью очень чувствительных хемилюминесцентных иммуноанализов. [ 9 ]
- флуоресцентные и меченные DIG индикаторы для конкурентных иммуноанализов, т.е. для ограничения обнаружения дигоксина, препарата, используемого для лечения сердечной аритмии, до 0,2 нг/мл. −1 . [ 10 ]
- Дигоксигенин можно конъюгировать с сахарами для изучения гликозилирования . событий [ 11 ] даже в биологических системах.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ «Дигоксигенин» . Паспорт безопасности материала . Химический институт.
- ^ Поля Г (2003). Биохимические мишени растительных биологически активных соединений . Нью-Йорк: CRC Press. ISBN 978-0-415-30829-8 .
- ^ Тетин С.Ю., Матаеши Э.Д. (август 2002 г.). «Измерение аффинности антител и проведение иммуноанализа на уровне одной молекулы». Аналитическая биохимия . 307 (1): 84–91. дои : 10.1016/S0003-2697(02)00011-8 . ПМИД 12137783 .
- ^ Дуань Икс (2012). «Количественная оценка сродства и кинетики белковых взаимодействий с использованием биосенсоров из кремниевых нанопроволок» . Природные нанотехнологии . 7 (6): 401–407. Бибкод : 2012НатНа...7..401Д . дои : 10.1038/nnano.2012.82 . ПМК 4180882 . ПМИД 22635097 .
- ^ Тинберг С.Э., Харе С.Д., Доу Дж., Дойл Л., Нельсон Дж.В., Шена А., Янковски В., Калодимос К.Г., Джонссон К., Стоддард Б.Л., Бейкер Д. (сентябрь 2013 г.). «Вычислительный дизайн лиганд-связывающих белков с высоким сродством и селективностью» . Природа . 501 (7466): 212–216. Бибкод : 2013Natur.501..212T . дои : 10.1038/nature12443 . ПМЦ 3898436 . ПМИД 24005320 .
- ^ Эйзель Д., Грюневальд-Янхо С., Крушен Б., ред. (2002). Руководство по применению DIG для нерадиоактивной in situ гибридизации (3-е изд.). Пенцберг: Диагностика Рош.
- ^ Гауптманн Г., Герстер Т. (август 1994 г.). «Двухцветная гибридизация in situ с эмбрионами позвоночных и дрозофилы». Тенденции в генетике . 10 (8): 266. дои : 10.1016/0168-9525(90)90008-T . ПМИД 7940754 .
- ^ Харт С.М., Басу С. (апрель 2009 г.). «Оптимизация системы иммуноанализа на основе дигоксигенина для обнаружения генов у Arabidopsis thaliana» . Журнал биомолекулярных методов . 20 (2): 96–100. ПМЦ 2685603 . ПМИД 19503620 .
- ^ Декари А., Драпо Дж., Клоссе Дж., Кутюр Р., Адам А. (1994). «Разработка пептида, меченного дигоксигенином: применение для хемилюминоферментного иммуноферментного анализа брадикинина в воспаленных тканях». Пептиды . 15 (3): 511–8. дои : 10.1016/0196-9781(94)90214-3 . ПМИД 7937327 . S2CID 19210640 .
- ^ Майило С., Элерс Б., Вундерлих М., Клар Т.А., Джозель Х.П., Хайндль Д., Нихтль А., Курцингер К., Фельдманн Дж. (июль 2009 г.). «Конкурентный гомогенный иммуноанализ дигоксигенина на основе тушения флуоресценции наночастицами золота». Аналитика Химика Акта . 646 (1–2): 119–22. Бибкод : 2009AcAC..646..119M . дои : 10.1016/j.aca.2009.05.023 . ПМИД 19523564 .
- ^ Гударзи М.Т., Рафик М., Тернер Г. (май 1995 г.). «Улучшенный многолуночный иммуноанализ с использованием меченных дигоксигенином лектинов для изучения гликозилирования очищенных гликопротеинов». Труды Биохимического общества . 23 (2): 168с. дои : 10.1042/bst023168s . ПМИД 7672194 .