Негативное пятно

В микроскопии — негативное окрашивание общепринятый метод, часто используемый в диагностической микроскопии для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачной жидкостью . В этом методе фон окрашивается , оставляя сам образец нетронутым и, следовательно, видимым. Это контрастирует с позитивным окрашиванием , при котором окрашивается реальный образец.

Светлопольная микроскопия

Для светлопольной микроскопии негативное окрашивание обычно выполняется с использованием черной чернильной жидкости, такой как нигрозин и тушь . Образец, такой как влажная бактериальная культура, нанесенная на предметное стекло, смешивается с негативным красителем и дает высохнуть. При рассмотрении под микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном окружающем фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водостойкого маркера для нанесения негативного пятна. ^{[ 1 ]}

Просвечивающая электронная микроскопия

В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность для электронов связана с атомным номером , т. е. числом протонов. Некоторые подходящие негативные красители включают молибдат аммония , ацетат уранила , формиат уранила , фосфорновольфрамовую кислоту , тетроксид осмия , феррицианид осмия. ^{[ 2 ]} и ауроглюкотионат . Они были выбраны потому, что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются биологическим веществом. Структуры, поддающиеся отрицательному окрашиванию, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь этот метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальных жгутиков , биологических мембранных структур, а также белков или белковых агрегатов, которые обладают низкой способностью рассеивать электроны. Некоторые красители, такие как тетраоксид осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Будучи сильными окислителями, они сшивают липиды главным образом за счет реакции с ненасыщенными углерод-углеродными связями и тем самым не только фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей, но и одновременно окрашивают их. ^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}

Выбор негативного пятна в электронной микроскопии может иметь очень важное значение. Раннее исследование вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним пятном и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод заключался в том, что это растение пострадало от смешанного заражения двумя отдельными вирусами. Негативное окрашивание как на уровне светового, так и электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры предосторожности. Негативное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.

Другие приложения

Идентификация ламеллярных (le), обратных мицеллярных (M) и обратно- гексагональных цилиндров H-II (H) липидных фаз путем негативного окрашивания.

Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применяется для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатые липосомы (le), инвертированные сферические мицеллы (M) и инвертированные гексагональные цилиндрические HII (H) фазы (см. рисунок). ^{[ 5 ]}

Ссылки

^ Весте, С; Демчик, П. (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . 57 (6). Американское общество микробиологии: 1858–1859. doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . ЧВК 183484 . ПМИД 1714705 .
^ Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматической сети в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. стр. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5 .
^ Боззола, Джон Дж.; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образцов к просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. стр. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5 .
^ М.А. Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические приложения . Издательство Кембриджского университета. стр. 45–61. ISBN 0-521-63287-0 .
^ Яшрой, Р.К. (1990). «Ламеллярная дисперсия и фазовое разделение липидов мембран хлоропластов с помощью электронной микроскопии с отрицательным окрашиванием». Журнал биологических наук . 15 (2). ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа»: 93–98. дои : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .

Внешние ссылки

Ресурсы библиотеки о
Негативное окрашивание

«Негативное окрашивание для чайников» . Проверено 6 июня 2009 г.
«Негативное окрашивание» . Архивировано из оригинала 25 декабря 2012 г. Проверено 6 июня 2009 г.

[1] Весте, С; Демчик, П. (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . 57 (6). Американское общество микробиологии: 1858–1859. doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . ЧВК 183484 . ПМИД 1714705 .

[2] Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматической сети в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. стр. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5 .

[Bozzola-3] Боззола, Джон Дж.; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образцов к просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. стр. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5 .

[4] М.А. Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические приложения . Издательство Кембриджского университета. стр. 45–61. ISBN 0-521-63287-0 .

[5] Яшрой, Р.К. (1990). «Ламеллярная дисперсия и фазовое разделение липидов мембран хлоропластов с помощью электронной микроскопии с отрицательным окрашиванием». Журнал биологических наук . 15 (2). ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа»: 93–98. дои : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]