✖


Jump to content

Трехцепочечная ДНК

Триплексная структура ДНК. Стрелки идут от 5-футового конца к 3-футовому концу. ( PDB : 1BWG )

Трехцепочечная ДНК (также известная как H-ДНК или триплекс-ДНК ) представляет собой структуру ДНК , в которой три олигонуклеотида закручиваются вокруг друг друга и образуют тройную спираль . В трехцепочечной ДНК третья цепь связывается с ДНК B-формы (посредством спаривания оснований Уотсона-Крика двойной спиралью ).путем образования пар оснований Хугстина или обратных водородных связей Хугстина.

Структура

[ редактировать ]

Примеры трехцепочечной ДНК из природных источников с необходимым сочетанием основного состава и структурных элементов описаны, например, в Satellite DNA . [1]

Наиболее стабильное спаривание трех оснований в трехцепочечной ДНК.Rx-Ry: связывание пар оснований Уотсона и Крика. Ry-Rz: связывание пары оснований Хугестина.

Спаривание оснований Хугстина

[ редактировать ]

тимина (Т) Нуклеиновое основание может связываться с парой оснований Уотсона-Крика ТА, образуя водородную связь Хугстина . Водородные связи тимина с аденозином (А) исходной двухцепочечной ДНК образуют триплет оснований ТА*Т. [2]

[3]

Межмолекулярные и внутримолекулярные взаимодействия

[ редактировать ]
Базовые триады триплексов H-ДНК: CG*G, TA*A, TA*T, an CG*A. + .

Существует два класса триплексной ДНК: межмолекулярные и внутримолекулярные образования. Межмолекулярный триплекс относится к образованию триплекса между дуплексом и другой (третьей) цепью ДНК. Третья цепь может происходить либо из соседней хромосомы, либо из триплекс-образующего олигонуклеотида (TFO). Внутримолекулярный триплекс ДНК образуется из дуплекса гомопуриновой и гомопиримидиновой цепей с зеркальной симметрией повторов. [4] Степень сверхспирализации ДНК влияет на степень образования внутримолекулярного триплекса. [5] Существует два разных типа внутримолекулярного триплекса ДНК: H-ДНК и H*-ДНК. Образование H-ДНК стабилизируется в кислых условиях и в присутствии двухвалентных катионов, таких как Mg. 2+ . В этой конформации гомопиримидиновая цепь дуплекса изгибается назад и параллельно связывается с пуриновой цепью. Базовые триады, используемые для стабилизации этой конформации, — это TA*T и CG*A. + . Цитозин этой базовой триады необходимо протонировать, чтобы сформировать внутримолекулярную тройную спираль, поэтому эта конформация стабилизируется в кислых условиях. [6] H*-ДНК имеет благоприятные условия образования при нейтральном pH и в присутствии двухвалентных катионов. [5] Эта внутримолекулярная конформация образуется в результате антипараллельного связывания гомопуриновой и пуриновой цепи дуплекса. Он стабилизирован тройками оснований TA*A и CG*G. [4] [6]

Функция

[ редактировать ]

Триплексообразующие олигонуклеотиды (TFO)

[ редактировать ]

TFO представляют собой короткие (≈15–25 нт) нити нуклеиновой кислоты, которые связываются в большой бороздке двухцепочечной ДНК с образованием внутримолекулярных структур тройной ДНК. Есть некоторые свидетельства того, что они также способны модулировать активность генов in vivo . В пептидной нуклеиновой кислоте (ПНК) сахарофосфатный остов ДНК заменен белковоподобным остовом. ПНК образуют P-петли при взаимодействии с дуплексной ДНК, образуя триплекс с одной цепью ДНК, вытесняя другую. Предполагалось, что под белком RecA в ходе гомологичной рекомбинации образуются очень необычные рекомбинации или параллельные триплексы, или R-ДНК. [7]

TFO специфически связываются с гомопурин-гомопиримидиновыми областями, которые часто встречаются в последовательностях промоторов и интронов генов, влияя на передачу сигналов в клетках. [8] TFO могут ингибировать транскрипцию путем связывания с высокой специфичностью со спиралью ДНК, тем самым блокируя связывание и функцию факторов транскрипции для определенных последовательностей. Вводя TFO в клетку (путем трансфекции или другими способами), можно контролировать экспрессию определенных генов. [9] Это приложение имеет новые последствия для сайт-специфического мутагенеза и генной терапии. В клетках рака простаты человека транскрипционный фактор Ets2 сверхэкспрессируется и считается, что в таком избытке он способствует росту и выживанию клеток. Карбоне и др. разработали специфичный для последовательности TFO для последовательности промотора Ets2, который подавлял экспрессию гена и приводил к замедлению роста клеток и их гибели. [10] Чангсянь и др. также представили TFO, нацеленный на промоторную последовательность bcl-2, гена, ингибирующего апоптоз. [11]

Наблюдаемое ингибирование транскрипции также может иметь негативные последствия для здоровья, например, его роль в рецессивном аутосомном гене атаксии Фридрейха . [12] При атаксии Фредрика образование триплексной ДНК нарушает экспрессию интрона 1 гена FXN . Это приводит к дегенерации нервной системы и спинного мозга, нарушению движений конечностей. [13] Было показано, что для борьбы с этой триплексной нестабильностью белки эксцизионной репарации нуклеотидов (NER) распознают и восстанавливают трехцепочечные структуры ДНК, восстанавливая полную доступность ранее ингибированного и нестабильного гена. [14]

Структура ПНА. Идентификатор PDB: 1PNN Протеопедия

Пептид-нуклеиновые кислоты (ПНК)

[ редактировать ]

Пептидные нуклеиновые кислоты представляют собой синтетические олигонуклеотиды, которые устойчивы к деградации протеаз и используются для индукции восстановления в специфических областях образования триплекса на геномных сайтах ДНК. ПНК способны связываться с высокой аффинностью и специфичностью последовательности с комплементарной последовательностью ДНК посредством связывания пар оснований Уотсона-Крика и способны образовывать тройные спирали за счет параллельных ориентационных связей Хугстина , при этом ПНК обращена к 5'-концу цепи ДНК. [15] Триплекс ПНК-ДНК стабильен, поскольку ПНК состоят из нейтрально заряженного псевдопептидного остова, который связывается с последовательностью двухцепочечной ДНК (дцДНК). [16] Подобно гомопиримидину в ТФО, гомопиримидин в ПНК способен образовывать связь с комплементарным гомопурином в целевой последовательности дцДНК. Эти аналоги ДНК способны связываться с дцДНК, используя условия окружающей среды ДНК и различные способы прогнозирования распознавания. Это отличается от TFO, которые связываются через распознавание основной бороздки дцДНК. [15]

Одним из прогнозирующих способов распознавания, используемых для распознавания, является дуплексное вторжение. [17] [16] В пределах смешанной последовательности дцДНК A-T/G-C воздействует пара псевдокомплементарных (pc) ПНК, которые способны связываться с дцДНК посредством двойной инвазии посредством одновременного образования диаминопурина (D) и тиоурацила (U). с ), которые заменяют аденин и тимин соответственно. [17] Пара ПК PNA образует DT и U с -A и GC или CG Уотсона-Крика спарили спираль ПНК-ДНК с каждой из комплементарных цепей ДНК. Другая форма распознаваемой дуплексной инвазии в целевую последовательность может возникать в дцДНК, содержащей смешанные последовательности Т-С. [18] Эта форма дуплексной инвазии достигается за счет комплементарной последовательности гомопуриновых ПНК-олигомеров. Этот триплекс образуется из гибрида ПНК-ДНК, который антипараллельно связывается с комплементарной последовательностью ДНК и приводит к смещению некомплементарной цепи ДНК. [16]

Кроме того, ПНА можно модифицировать для формирования триплексных структур «зажима» в целевом сайте. [17] Одним из типов образующегося «зажима» является структура бис-ПНК, в которой две молекулы ПНК удерживаются вместе гибким линкером, таким как 8-амино-3,6-диоксаоктановая кислота (О). [19] Структура бис-ПНК образует триплекс ПНК-ДНК-ПНК в целевом сайте, где одна цепь образует пары оснований Уотсона-Крика с ДНК в антипараллельной ориентации, а другая цепь образует пары оснований Хугстина с гомопуриновой цепью ДНК в ДНК-цепи. ПНА дуплекс. [18] Хвостовой зажим PNA (tcPNA) также представляет собой еще одну форму тройного зажима, которую также можно сформировать. TcPNA содержат расширенный хвост длиной 5–10 пар оснований, который образует дуплекс ПНК/ДНК в дополнение к «зажиму» ПНК-ДНК-ПНК. Это позволяет более точно связывать ПНК без необходимости гомопиримиди/пиридинового растяжения. [16] Было показано, что эти зажимные структуры обладают высоким сродством и специфичностью. Добавление остатков лизина к одному или обоим концам ПНК можно использовать для увеличения клеточного поглощения и связывания. [17]

Генетическая регуляция

[ редактировать ]

Трехцепочечная ДНК участвует в регуляции нескольких генов. Например, ген c- myc был подвергнут обширным мутациям, чтобы изучить роль, которую триплексная ДНК по сравнению с линейной последовательностью играет в регуляции генов. Промоторный элемент c- myc , называемый нуклеазо-чувствительным элементом или NSE, может образовывать тандемные внутримолекулярные триплексы типа H-ДНК и имеет мотив повторяющейся последовательности (ACCCTCCCC) 4 . Мутантный NSE исследовали на транскрипционную активность, а также на его способность образовывать внутри- и межмолекулярный триплекс. Транскрипционную активность мутантных NSE можно предсказать по способности элемента образовывать H-ДНК, а не по количеству повторов, положению или количеству мутантных пар оснований. Таким образом, ДНК может быть динамическим участником транскрипции гена c-myc. [20]

Экспрессия генов

[ редактировать ]

Согласно нескольким опубликованным статьям, H-ДНК обладает способностью регулировать экспрессию генов в зависимости от таких факторов, как местоположение и близлежащие последовательности. Хотя в межгенных областях прокариотического генома обнаружено небольшое количество встречающихся в природе H-ДНК или триплексных мотивов, было показано, что структуры H-ДНК более распространены в эукариотическом геноме. Было показано, что H-ДНК особенно распространена в клетках млекопитающих, включая человека (1 на каждые 50 000 пар оснований). [15] Генетические последовательности, участвующие в регуляции генов, обычно обнаруживаются в промоторных областях генома эукариот. [15]

Следовательно, промоторная область проявляет способность образовывать H-ДНК с более высокой частотой. [15] Биоинформатический анализ генома S. cerevisiae выявил появление H-ДНК и других мотивов тройной ДНК в четырех организационных областях: интронах, экзонах, промоторных областях и разных областях. Биоинформатика выявила в общей сложности 148 возможных структур H-ДНК или триплета ДНК. На промоторную область приходится более высокая частота с 71 тройной структурой, в то время как на экзоны приходится 57 тройных структур, а на интроны и прочие структуры приходится 2 и 18 структур. [21]

Исследования экспрессии эукариотического генома in vitro и in vivo привели к одному из трех результатов: повышающая регуляция, понижающая регуляция или отсутствие изменений в присутствии мотивов H-ДНК. [15] Като и др. сообщили об усилении экспрессии lacZ при введении H-ДНК в промотор B-лактамазы . [22] [15] С другой стороны, аналогичное исследование (Brachmachari et al. ) не выявило статистически значимого ингибирования репортерного гена lacZ , когда H-ДНК была вставлена ​​в геном клеток COS млекопитающих. [15] Хотя исследования предполагают регуляцию H-ДНК, этот механизм все еще находится на стадии изучения. Потаман и др . связывает механизм регуляции генов с взаимодействиями между H-ДНК и ТАТА-боксом, обнаруженным в промоторной области Na,K-АТФазы . В образованиях H-ДНК, прилегающих к ТАТА-боксу, структура H-ДНК дестабилизирует связи ТА, необходимые для транскрипции. Вмешательство в ТАТА-бокс ингибирует транскрипционный аппарат и инициацию транскрипции, что мешает экспрессии генов. [15] [23] Другие механизмы, связанные с геномной экспрессией генетической последовательности в присутствии H-ДНК, включают TFO. Исследования in vitro выявили снижение экспрессии генов в присутствии ТФО в клетках млекопитающих. [24] Другой возможный механизм, представленный Валентиной и др. предполагают, что триплексный комплекс олигонуклеотидов с 13-мерным мотивом AG (комплекс TFO) подавляет транскрипцию мРНК посредством конкурентного ингибирования. [25] Прямое ингибирование экспрессии генов с помощью H-ДНК является ключом к мутагенезу, ингибированию репликации и даже рекомбинации ДНК в геноме. [15]

Рекомбинация

[ редактировать ]
A) Кристаллическая структура RecA-ДНК и образование D-петли B) Структура H-ДНК RecA, PDB: 7JY7

Было показано, что мотивы H-ДНК стимулируют гомологичную рекомбинацию с использованием различных механизмов. Первые выводы о роли H-ДНК в рекомбинации появились в начале 1990-х годов при наблюдении RecA , белка рекомбинации бактериальной ДНК, состоящего из тройной спирали ДНК. RecA проявляет ферментативную активность, необходимую для рекомбинации. [7] [26] Гомологичная рекомбинация с участием мотивов H-ДНК также была обнаружена у эукариот. Было показано, что RadA, белок, гомологичный RecA, обладает той же ферментативной активностью при рекомбинации, что и RecA. [27] Белок обладает способностью продвигать и обменивать гомологичные цепи через параллельные трехцепочечные спирали. [28] [29] Одноцепочечная ДНК (оцДНК) и комплементарная двухцепочечная ДНК (дцДНК) образуют структуру D-петли. [30] [15] Другой возможный механизм RecA включает в себя оцДНК из двух отдельных структур H-ДНК с образованием пар оснований Уотсона-Крика. Новая структура известна как соединение Холлидея, промежуточное звено в гомологичной рекомбинации. [15] H-ДНК также обнаруживается в других формах рекомбинации. В клетках млекопитающих последовательности H-ДНК демонстрируют высокую частоту рекомбинации. Например, исследование, проведенное на клеточной линии миеломы мышей, обнаружило структуры H-ДНК в Cγ2a и Cγ2b, которые участвуют в обмене сестринских хроматид. [15]

Биологические последствия

[ редактировать ]

Генетическая нестабильность

[ редактировать ]

Значительные исследования были направлены на изучение биологических последствий, связанных с присутствием H-ДНК в основных областях разрыва (Mbr) и двухцепочечных точках разрыва определенных генов. Недавние работы связали наличие структур, отличных от B-ДНК, со случаями генетической нестабильности. [31]

Полипуриновые последовательности, образующие H-ДНК с зеркальным повтором, были обнаружены рядом с промотором P1 гена c-MYC и связаны с основными «горячими точками» точки разрыва в этой области. Случаи генетической нестабильности наблюдались также у потомков F1 трансгенных мышей после включения в их геномы последовательностей, образующих H-ДНК человека, в паре с последовательностями Z-ДНК , где ранее о нестабильности не сообщалось. [32] Кроме того, R.RY. наблюдалось образование конформаций H-ДНК bcl-2 на Mbr гена Предполагается, что образование этих структур вызывает транслокацию t(14;18), наблюдаемую при многих видах рака и большинстве фолликулярных лимфом . Это наблюдение привело к исследованию, которое показало, что существенное уменьшение количества событий транслокации можно наблюдать после блокирования образования H-ДНК путем небольшого изменения последовательности этой области. [32] [33] Также было обнаружено, что длинные участки GAA·TTC образуют очень стабильные структуры H-ДНК. Было показано, что взаимодействие между этими двумя структурами H-ДНК, называемыми липкой ДНК, прерывает транскрипцию X25 или гена фратаксина . Поскольку снижение уровня белка фратаксина связано с атаксией Фридрейха , предполагается, что формирование этой нестабильности является основой этого генетического заболевания. [34] [35] Трехцепочечная ДНК наблюдалась в сверхспиральной сателлитной ДНК в регионах, где число копий микросателлитов сильно варьируется, а также структуры Z-ДНК с инвертированными повторами в более крупной повторной единице сателлитной ДНК размером 2,1 КБ. [36]

Кроме того, было показано, что H-ДНК вызывает мутации, связанные с критическими клеточными процессами, такими как ДНК репликация и транскрипция . [37] Важность этих процессов для выживания привела к развитию сложных механизмов репарации ДНК , которые позволяют клеткам распознавать и устранять повреждения ДНК. Неканонические структуры ДНК могут восприниматься клеткой как повреждение, и недавние работы показали повышенную распространенность мутаций вблизи последовательностей, не образующих B-ДНК. [37] Некоторые из этих мутаций происходят из-за взаимодействия между H-ДНК и ферментами, участвующими в репликации и транскрипции ДНК, где H-ДНК вмешивается в эти процессы и запускает различные механизмы репарации ДНК. Это может вызвать генетическую нестабильность и вовлечь H-ДНК в образование рака. [37]

репликация ДНК

[ редактировать ]

Было показано, что репликация ДНК влияет на функцию различных ферментов репарации ДНК. Образование H-ДНК включает образование одноцепочечной ДНК (оцДНК), которая более восприимчива к атаке нуклеаз . [37] Было показано, что различные нуклеазы взаимодействуют с H-ДНК зависимым или независимым от репликации образом. [37]

Исследование с использованием человеческих клеток показало, что нуклеазы эксцизионной репарации нуклеотидов (NER) ERCC1-XPF и ERCC1-XPG вызывают генетическую нестабильность. [38] Эти ферменты расщепляют H-ДНК по петле, образованной двумя водородными связями Хугстина и 5'-концом другой цепи Уотсона-Крика, соответственно. [38] Было показано, что это расщепление вызывает большие делеции , которые вызывают двухцепочечные разрывы (DSB) в ДНК, что может привести к генетической нестабильности. [37] [38] В клетках, дефицитных по ERCC1-XPF и ERCC1-XPG, эти делеции были менее распространены вблизи последовательностей, образующих H-ДНК. [38] Кроме того, больше мутаций было обнаружено в клетках с дефицитом ERCC1-XPF и ERCC1-XPG при отсутствии репликации ДНК, что позволяет предположить, что они обрабатывают H-ДНК независимым от репликации способом. [38]

Альтернативно, было обнаружено, что нуклеаза репарации репликации ДНК FEN1 подавляет генетическую нестабильность. [38] Подобно ERCC1-XPG, FEN1 расщепляет H-ДНК на 5'-конце цепи, не участвующей в образовании водородных связей Хугстина. [38] Клетки HeLa с дефицитом FEN1 показали более высокую распространенность делеций вблизи последовательностей, образующих H-ДНК, но мутагенез, индуцированный H-ДНК, был более выражен в клетках с дефицитом FEN1 в присутствии репликации ДНК. [38] Это предполагает, что FEN1 подавляет мутагенез, индуцированный H-ДНК, репликационно-зависимым образом. [38]

H-ДНК вовлечена в этиологию рака человека из-за преобладания последовательностей, образующих H-ДНК, вблизи точек разрыва транслокации в раковых геномах. [38] Опосредованная репликацией нуклеазная активность H-ДНК подчеркивает еще один способ мутагенеза, индуцированного H-ДНК, и приводящего к росту рака.

Транскрипция

[ редактировать ]

Последовательности, образующие H-ДНК, также могут вызывать генетическую нестабильность, вмешиваясь в транскрипцию и преждевременно останавливая ее. [37] Раскручивание ДНК, участвующее в транскрипции, делает ее более восприимчивой к повреждениям. При репарации, связанной с транскрипцией (TCR), повреждение матричной цепи ДНК останавливает функцию РНК-полимеразы и сигнализирует факторам TCR о разрешении повреждения путем его вырезания. [39] H-ДНК можно рассматривать как одно из таких поражений.

Исследование, наблюдающее за транскрипцией РНК-полимеразой Т7 на стабильном аналоге последовательности, образующей H-ДНК, обнаружило блокировку транскрипции в месте соединения дуплекс-триплекс. Здесь матричной цепью была центральная цепь H-ДНК, и сложность разрыва ее водородных связей Уотсона-Крика и Хугстина остановила развитие транскрипции. [40]

Когда транскрипцию с помощью Т7 наблюдали на промоторе P0 ​​гена c-MYC , обнаруженные укороченные продукты транскрипции указывали на то, что транскрипция останавливалась в непосредственной близости от последовательности, образующей H-ДНК, ниже промотора. Образование H-ДНК в этой области предотвращает перемещение Т7 вниз по цепи матрицы из-за вызываемых им стерических затруднений. Это останавливает транскрипцию и сигнализирует факторам TCR о разрешении H-ДНК, что приводит к вырезанию ДНК, что может вызвать генетическую нестабильность. [39] Зеркальная симметрия и преобладание остатков гуанина в гене c-MYC придают ему высокую склонность к образованию неканонических структур ДНК. [41] Это в сочетании с активностью факторов TCR во время транскрипции делает его высокомутагенным, играя роль в развитии лимфомы Беркитта и лейкемии . [39] [41]

Приложения

[ редактировать ]

Области трехцепочечной ДНК могут быть созданы посредством ассоциации триплекс-образующих олигонуклеотидов (TFO) и пептидно-нуклеиновых кислот (PNA). Исторически было показано, что связывание TFO ингибирует транскрипцию, репликацию и связывание белка с ДНК. [17] Также было показано, что ТФО, связанные с мутагенами, способствуют повреждению ДНК и вызывают мутагенез. [15] Хотя известно, что TFO препятствует транскрипции и репликации ДНК, недавние исследования показали, что TFO может использоваться для опосредования сайт-специфических модификаций генов как in vitro , так и in vivo . [17] Другое недавнее исследование также показало, что ТФО можно использовать для подавления онкогенов и протоонкогенов, чтобы уменьшить рост раковых клеток. Например, в недавнем исследовании ТФО использовались для уменьшения гибели клеток в клетках гепатомы за счет снижения экспрессии МЕТ.

PNA TFO обладают способностью повышать частоту рекомбинации, что приводит к целенаправленному и специфическому редактированию генов. Триплексная спираль ПНА-ДНК-ПНК способна распознаваться собственным механизмом репарации ДНК клетки, который повышает чувствительность окружающей ДНК к гомологичной рекомбинации. Чтобы сайт-специфическая структура ПНК опосредовала рекомбинацию внутри последовательности ДНК, структура бис-ПНК может быть связана с фрагментом ДНК длиной 40 нуклеотидов, который гомологичен соседнему участку гена-мишени. [18] Было показано, что связывание TFO с цепью донорской ДНК индуцирует рекомбинацию целевого гена и целевой области соседнего гена. [42] Механизм этой формы рекомбинации и репарации связан с путем эксцизионной репарации нуклеотидов (NER), играющим роль в распознавании и восстановлении триплексных структур. [18] [17] Многочисленные исследования показывают, что пигментная группа А ксеродермы (XPA) и белок репликации А (RPA), которые являются факторами NER, способны специфически связываться в виде комплекса со сшитыми триплексными структурами. Известно, что этот механизм наряду с другими играет роль в распознавании и восстановлении триплексных структур.

Доставка ТФО in vivo была основным препятствием на пути использования ТФО для модификации генов. [43] В одном исследовании по нацеливанию на гемопоэтические стволовые клетки in vivo предложен новый метод конъюгации молекул ПНК с проникающим в клетку пептидом (CPP) вместе с наночастицами поли(молочной-ко-гликолевой кислоты) ( PLGA ), чтобы обеспечить модификации на 6 пар оснований в гене CCR5 . [42] Редактирование гена CCR5 связано с устойчивостью ВИЧ-1. [44] CPP — это белки, которые способны успешно переносить «груз», такой как небольшие белки или молекулы, в клетки. PGLA представляют собой биоразлагаемый материал, который инкапсулирует молекулы PNA в виде наночастиц для сайт-специфических модификаций генома. [42] Исследование показало, что наночастицы ПНК-ДНК PGLA способны эффективно редактировать гемопоэтические стволовые клетки с меньшей токсичностью и без вирусов, а конъюгация с CPP обеспечивает прямое нацеливание на гены для сайт-специфического мутагенеза в стволовых клетках.

В новом исследовании генной терапии муковисцидоза (CF) три пептидно-нуклеиновые кислоты (PNA) зажима хвоста были разработаны вместе с молекулой донорской ДНК для доставки с помощью наночастиц для коррекции мутаций F508 del в регуляторе трансмембранной проводимости муковисцидоза ( CFTR ) в эпителиальные клетки бронхов человека in vivo и in vitro. [45] Мутация F508 del является наиболее часто встречающейся мутацией, приводящей к развитию МВ. [46] Мутация F508 приводит к потере функции CFTR, который представляет собой хлоридный канал плазматической мембраны, регулируемый циклическим аденозинмонофосфатом (цАМФ). В этом исследовании им удалось создать новый подход к лечению CF за счет использования наночастиц для коррекции мутации F508 del CFTR как in vitro в клетках бронхиального эпителия человека (HBE), так и in vivo на мышиной модели CF, что привело к появление CFTR-зависимого транспорта хлоридов. [45]

История

[ редактировать ]
Ныне опровергнутая ранняя спекулятивная структура тройной спирали, предложенная Полингом и Кори в 1953 году.
Смотрите также: Устаревшие модели структуры ДНК.

Трехцепочечные структуры ДНК были распространенной гипотезой в 1950-х годах, когда ученые пытались открыть истинную структурную форму ДНК. Уотсон и Крик (которые позже получили Нобелевскую премию за свою модель двойной спирали) первоначально рассматривали модель тройной спирали, как и Полинг и Кори , которые опубликовали предложение по своей модели тройной спирали в 1953 году. [47] [48] а также коллега-ученый Фрейзер. [49] Однако вскоре Уотсон и Крик выявили несколько проблем с этими моделями:

  • Отрицательно заряженные фосфаты вблизи оси отталкивают друг друга, оставляя вопрос о том, как трехцепочечная структура остается целостной.
  • В модели тройной спирали (особенно в модели Полинга и Кори) некоторые расстояния Ван-дер-Ваальса кажутся слишком маленькими.

Модель Фрейзера отличалась от модели Полинга и Кори тем, что в его модели фосфаты находятся снаружи, а основания — внутри, и связаны друг с другом водородными связями. Однако Уотсон и Крик сочли модель Фрейзера слишком нечеткой, чтобы конкретно комментировать ее недостатки.

Альтернативная структура трехцепочечной ДНК была описана в 1957 году. [50] Фельзенфельд, Дэвис и Рич предсказали, что если одна цепь будет содержать только пурины, а другая — только пурины, то эта цепь претерпит конформационные изменения с образованием трехцепочечной спирали ДНК. Было предсказано, что трехцепочечная ДНК (H-ДНК) состоит из одной полипуриновой и двух полипиримидиновых нитей. [7] [50] Считалось, что он происходит только в одном биологическом процессе in vivo : в качестве промежуточного продукта при действии E. coli фермента рекомбинации RecA . [50] Ранние модели 1960-х годов предсказывали образование комплексов между полицетиловыми и гуаниновыми олигонуклеотидами. Модели предполагали взаимодействия, известные как спаривание Хугстена (не взаимодействия Ватсона-Крика), расположенные в большой бороздке. [7] Вскоре после этого были предсказаны тройные спирали, состоящие из одной пиримидиновой и двух пуриновых цепей. [7] Открытие участков H-ДНК в суперспирализированных плазмидах вызвало современный интерес к потенциальной функции триплексных структур в живых клетках. [51] Кроме того, вскоре было обнаружено, что гомопиримидин и некоторые богатые пуринами олигонуклеотиды способны образовывать стабильную структуру H-ДНК со структурами, специфичными для связывания гомопурин-гомопиримидина, на дуплексах ДНК. [52]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ [Фаулер, РФ; Скиннер, DM (5 июля 1986 г.). «ДНК эукариот расходится по длинному и сложному пиримидин-пуриновому тракту, который может принимать измененные конформации». Журнал биологической химии. 261 (19): 8994–9001. PMID 3013872.]
  2. ^ Ри С., Хан З., Лю К., Майлз Х.Т., Дэвис Д.Р. (декабрь 1999 г.). «Структура тройной спиральной ДНК с триплекс-дуплексным соединением». Биохимия . 38 (51): 16810–5. дои : 10.1021/bi991811m . ПМИД   10606513 .
  3. ^ Мергни Дж.Л., Сан Дж.С., Руже М., Монтене-Гарестье Т., Барсело Ф., Шомилье Ж., Элен К. (октябрь 1991 г.). «Специфичность последовательности при образовании тройной спирали: экспериментальные и теоретические исследования влияния несовпадений на стабильность триплекса». Биохимия . 30 (40): 9791–8. дои : 10.1021/bi00104a031 . ПМИД   1911764 .
  4. ^ Jump up to: а б Уссери Д.В., Синден Р.Р. (июнь 1993 г.). «Влияние окружающей среды на уровень внутримолекулярной триплексной ДНК in vivo в Escherichia coli». Биохимия . 32 (24): 6206–13. дои : 10.1021/bi00075a013 . ПМИД   8512930 .
  5. ^ Jump up to: а б Дайн А., Самадашвили ГМ, Миркин С.М. (декабрь 1992 г.). «Внутримолекулярные триплексы ДНК: необычные требования к последовательности и влияние на полимеризацию ДНК» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 89 (23): 11406–10. Бибкод : 1992PNAS...8911406D . дои : 10.1073/pnas.89.23.11406 . ПМЦ   50559 . ПМИД   1454828 .
  6. ^ Jump up to: а б Лямичев В.И., Миркин С.М., Франк-Каменецкий М.Д. (февраль 1986 г.). «Структуры гомопурин-гомопиримидинового тракта в суперспиральной ДНК». Журнал биомолекулярной структуры и динамики . 3 (4): 667–9. дои : 10.1080/07391102.1986.10508454 . ПМИД   3271043 .
  7. ^ Jump up to: а б с д и Франк-Каменецкий, М.Д., Миркин С.М. (1995-01-01). «Триплексные структуры ДНК». Ежегодный обзор биохимии . 64 : 65–95. дои : 10.1146/annurev.bi.64.070195.000433 . ПМИД   7574496 . S2CID   21426188 .
  8. ^ Браздова М, Тихий В, Хельма Р, Бажантова П, Полашкова А, Крейчи А и др. (2016). «p53 специфически связывает триплексную ДНК in vitro и в клетках» . ПЛОС ОДИН . 11 (12): e0167439. Бибкод : 2016PLoSO..1167439B . дои : 10.1371/journal.pone.0167439 . ПМК   5131957 . ПМИД   27907175 .
  9. ^ Грэм М.К., Браун Т.Р., Миллер П.С. (апрель 2015 г.). «Нацеливание на ген рецептора андрогенов человека с помощью платинированных триплекс-образующих олигонуклеотидов». Биохимия . 54 (13): 2270–82. дои : 10.1021/bi501565n . ПМИД   25768916 .
  10. ^ Карбоне ГМ, Наполи С, Валентини А, Кавалли Ф, Уотсон ДК, Катапано ЦВ (3 августа 2004 г.). «Подавление экспрессии Ets2, опосредованное триплексной ДНК, приводит к ингибированию роста и апоптозу в клетках рака простаты человека» . Исследования нуклеиновых кислот . 32 (14): 4358–67. дои : 10.1093/nar/gkh744 . ПМК   514370 . ПМИД   15314206 .
  11. ^ Шен С., Раттат Д., Бак А., Мерке Г., Полат Б., Рибберт Х. и др. (февраль 2003 г.). «Нацеливание на bcl-2 с помощью триплекс-образующего олигонуклеотида - многообещающий носитель для генной радиотерапии». Биотерапия рака и радиофармацевтические препараты . 18 (1): 17–26. дои : 10.1089/108497803321269296 . ПМИД   12667305 .
  12. ^ Сакамото Н., Честейн П.Д., Парневски П., Осима К., Пандольфо М., Гриффит Дж.Д., Уэллс Р.Д. (апрель 1999 г.). «Липкая ДНК: свойства самоассоциации длинных повторов GAA.TTC в триплексных структурах RRY от атаксии Фридрейха» . Молекулярная клетка . 3 (4): 465–75. дои : 10.1016/s1097-2765(00)80474-8 . ПМИД   10230399 .
  13. ^ Баколла А., Уэллс Р.Д. (апрель 2009 г.). «Конформации ДНК, отличные от B, как детерминанты мутагенеза и болезней человека». Молекулярный канцерогенез . 48 (4): 273–85. дои : 10.1002/mc.20507 . ПМИД   19306308 . S2CID   5493647 .
  14. ^ Каушик Тивари М., Адаку Н., Пирт Н., Роджерс Ф.А. (сентябрь 2016 г.). «Триплексные структуры вызывают двухцепочечные разрывы ДНК посредством коллапса репликационной вилки в клетках с дефицитом NER» . Исследования нуклеиновых кислот . 44 (16): 7742–54. дои : 10.1093/nar/gkw515 . ПМК   5027492 . ПМИД   27298253 .
  15. ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж к л м н Джайн А., Ван Г., Васкес К.М. (август 2008 г.). «Тройные спирали ДНК: биологические последствия и терапевтический потенциал» . Биохимия . 90 (8): 1117–30. дои : 10.1016/j.biochi.2008.02.011 . ПМК   2586808 . ПМИД   18331847 .
  16. ^ Jump up to: а б с д Хансен М.Е., Бентин Т., Нильсен П.Е. (июль 2009 г.). «Высокоаффинное триплексное нацеливание на двухцепочечную ДНК с использованием химически модифицированных пептидных олигомеров нуклеиновых кислот» . Исследования нуклеиновых кислот . 37 (13): 4498–507. дои : 10.1093/нар/gkp437 . ПМК   2715256 . ПМИД   19474349 .
  17. ^ Jump up to: а б с д и ж г Риккарди А.С., Макнир Н.А., Анандалингам К.К., Зальцман В.М., Глейзер П.М. (2014). «Направленная модификация генома посредством образования тройной спирали». В Ваджапи Н. (ред.). Геномика и протеомика рака . Методы молекулярной биологии. Том. 1176. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Springer New York. стр. 89–106. дои : 10.1007/978-1-4939-0992-6_8 . ISBN  978-1-4939-0991-9 . ПМК   5111905 . ПМИД   25030921 .
  18. ^ Jump up to: а б с д Роджерс Ф.А., Васкес К.М., Эгхольм М., Глейзер П.М. (декабрь 2002 г.). «Сайт-направленная рекомбинация через бифункциональные конъюгаты ПНК-ДНК» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 99 (26): 16695–700. Бибкод : 2002PNAS...9916695R . дои : 10.1073/pnas.262556899 . ПМК   139206 . ПМИД   12461167 .
  19. ^ Монтазерсахеб С., Хиджази М.С., Нозад Чарудех Х. (ноябрь 2018 г.). «Потенциал пептидно-нуклеиновых кислот в будущих терапевтических применениях» . Расширенный фармацевтический бюллетень . 8 (4): 551–563. дои : 10.15171/apb.2018.064 . ПМК   6311635 . ПМИД   30607328 .
  20. ^ Фирулли AB, Майбенко, округ Колумбия, Киннибург, Эй-Джей (апрель 1994 г.). «Способность промоторного элемента c-myc образовывать триплекс предсказывает силу промотора». Архив биохимии и биофизики . 310 (1): 236–42. дои : 10.1006/abbi.1994.1162 . ПМИД   8161210 .
  21. ^ Зейн Р., Сан Дж.С. (май 2003 г.). «Существуют ли природные трехспиральные структуры ДНК и функционируют ли они in vivo?» . Клеточные и молекулярные науки о жизни . 60 (5): 862–70. дои : 10.1007/s00018-003-3046-3 . ПМЦ   11138710 . ПМИД   12827276 . S2CID   6227195 .
  22. ^ Като М., Симидзу Н. (октябрь 1992 г.). «Влияние потенциальной области триплексной ДНК на экспрессию in vitro гена бактериальной бета-лактамазы в суперспиральных рекомбинантных плазмидах». Журнал биохимии . 112 (4): 492–4. doi : 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a123927 . ПМИД   1491004 .
  23. ^ Потаман В.Н., Ассери Д.В., Синден Р.Р. (июнь 1996 г.). «Формирование комбинированной структуры H-ДНК/открытого ТАТА-бокса в промоторной последовательности гена Na,K-АТФазы альфа2 человека» . Журнал биологической химии . 271 (23): 13441–7. дои : 10.1074/jbc.271.23.13441 . ПМИД   8662935 . S2CID   46550975 .
  24. ^ Зейдман М.М., Глейзер П.М. (август 2003 г.). «Возможность восстановления генов посредством образования тройной спирали» . Журнал клинических исследований . 112 (4): 487–94. дои : 10.1172/JCI19552 . ПМК   171401 . ПМИД   12925687 .
  25. ^ Рапоцци В., Когои С., Спессотто П., Риссо А., Бонора Г.М., Квадрифольо Ф., Ходо Л.Е. (январь 2002 г.). «Антигенный эффект в клетках K562 конъюгированного с ПЭГ триплекс-образующего олигонуклеотида, нацеленного на онкоген bcr/abl». Биохимия . 41 (2): 502–10. дои : 10.1021/bi011314h . ПМИД   11781088 .
  26. ^ Бертукат Г., Лавери Р., Прево С. (декабрь 1998 г.). «Модель образования параллельной тройной спирали с помощью RecA: одиночная ассоциация с гомологичным дуплексом через малую бороздку». Журнал биомолекулярной структуры и динамики . 16 (3): 535–46. дои : 10.1080/07391102.1998.10508268 . ПМИД   10052612 .
  27. ^ Чэнь Дж, Тан Ц, Го С, Лу С, Ле С, Ян Дж (сентябрь 2017 г.). «Параллельная триплексная структура, образованная между растянутой одноцепочечной ДНК и гомологичной дуплексной ДНК» . Исследования нуклеиновых кислот . 45 (17): 10032–10041. дои : 10.1093/нар/gkx628 . ПМЦ   5622322 . ПМИД   28973442 .
  28. ^ Камерини-Отеро Р.Д., Се П. (апрель 1993 г.). «Параллельные триплексы ДНК, гомологичная рекомбинация и другие взаимодействия ДНК, зависящие от гомологии». Клетка . 73 (2): 217–23. дои : 10.1016/0092-8674(93)90224-е . ПМИД   8477443 . S2CID   34585948 .
  29. ^ Бертукат Г., Лавери Р., Прево С. (сентябрь 1999 г.). «Молекулярная модель обмена цепей, стимулируемого RecA, через параллельные трехцепочечные спирали» . Биофизический журнал . 77 (3): 1562–76. Бибкод : 1999BpJ....77.1562B . дои : 10.1016/S0006-3495(99)77004-9 . ПМК   1300444 . ПМИД   10465767 .
  30. ^ Ян Х., Чжоу С., Дхар А., Павлетич Н.П. (октябрь 2020 г.). «Механизм обмена цепей из синаптических структур RecA-ДНК и D-петли» . Природа . 586 (7831): 801–806. Бибкод : 2020Natur.586..801Y . дои : 10.1038/s41586-020-2820-9 . ПМК   8366275 . ПМИД   33057191 . S2CID   222349650 .
  31. ^ МакКинни Дж.А., Ван Дж., Мукерджи А., Кристенсен Л., Субраманиан Ш., Чжао Дж., Васкес К.М. (январь 2020 г.). «Различные пути восстановления ДНК вызывают геномную нестабильность в альтернативных структурах ДНК» . Природные коммуникации . 11 (1): 236. Бибкод : 2020NatCo..11..236M . дои : 10.1038/s41467-019-13878-9 . ПМК   6957503 . ПМИД   31932649 .
  32. ^ Jump up to: а б Ван Г, Васкес К.М. (июль 2014 г.). «Влияние альтернативных структур ДНК на повреждение ДНК, репарацию ДНК и генетическую нестабильность» . Восстановление ДНК . 19 : 143–51. дои : 10.1016/j.dnarep.2014.03.017 . ПМК   4216180 . ПМИД   24767258 .
  33. ^ Рагхаван С.К., Честейн П., Ли Дж.С., Хегде Б.Г., Хьюстон С., Ланген Р. и др. (июнь 2005 г.). «Доказательства тройной конформации ДНК в области основной точки разрыва bcl-2 транслокации t (14;18)» . Журнал биологической химии . 280 (24): 22749–60. дои : 10.1074/jbc.M502952200 . ПМИД   15840562 .
  34. ^ Ван Г., Васкес К.М. (сентябрь 2004 г.). «Природные последовательности, образующие H-ДНК, являются мутагенными в клетках млекопитающих» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (37): 13448–53. Бибкод : 2004PNAS..10113448W . дои : 10.1073/pnas.0405116101 . ПМК   518777 . ПМИД   15342911 .
  35. ^ Ветчер А.А., Напиерала М., Айер Р.Р., Честейн П.Д., Гриффит Дж.Д., Уэллс Р.Д. (октябрь 2002 г.). «Липкая ДНК, длинный триплекс GAA.GAA.TTC, образующийся внутримолекулярно, в последовательности интрона 1 гена фратаксина» . Журнал биологической химии . 277 (42): 39217–27. дои : 10.1074/jbc.M205209200 . ПМИД   12161437 .
  36. ^ Фаулер, РФ; Скиннер, DM (5 июля 1986 г.). «ДНК эукариот расходится по длинному и сложному пиримидин-пуриновому тракту, который может принимать измененные конформации». Журнал биологической химии . 38 (1–3): 145–152. ПМИД   3013872 .
  37. ^ Jump up to: а б с д и ж г Ван Г, Васкес К.М. (январь 2017 г.). «Влияние репликации и транскрипции на генетическую нестабильность, связанную со структурой ДНК» . Гены . 8 (1): 17. doi : 10.3390/genes8010017 . ПМК   5295012 . ПМИД   28067787 .
  38. ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж Чжао Дж., Ван Г., Дель Мундо И.М., МакКинни Дж.А., Лу X, Баколла А. и др. (январь 2018 г.). «Отличные механизмы индуцированной нуклеазой структуры ДНК генетической нестабильности в геномах рака» . Отчеты по ячейкам . 22 (5): 1200–1210. дои : 10.1016/j.celrep.2018.01.014 . ПМК   6011834 . ПМИД   29386108 .
  39. ^ Jump up to: а б с Белоцерковский Б.П., Де Сильва Э., Торналетти С., Ван Г., Васкес К.М., Ханавальт ПК (ноябрь 2007 г.). «Последовательность, образующая триплекс человеческого промотора c-MYC, препятствует транскрипции ДНК» . Журнал биологической химии . 282 (44): 32433–41. дои : 10.1074/jbc.M704618200 . ПМИД   17785457 . S2CID   24211097 .
  40. ^ Пандей С., Оглоблина А.М., Белоцерковский Б.П., Долинная Н.Г., Якубовская М.Г., Миркин С.М., Ханавальт ПК (август 2015 г.). «Блокировка транскрипции стабильными аналогами H-ДНК in vitro» . Исследования нуклеиновых кислот . 43 (14): 6994–7004. дои : 10.1093/нар/gkv622 . ПМЦ   4538819 . ПМИД   26101261 ​​.
  41. ^ Jump up to: а б Дель Мундо IM, Зеваил-Фут М, Кервин С.М., Васкес К.М. (май 2017 г.). «Альтернативное формирование структуры ДНК в мутагенном промоторе c-MYC человека» . Исследования нуклеиновых кислот . 45 (8): 4929–4943. дои : 10.1093/нар/gkx100 . ПМЦ   5416782 . ПМИД   28334873 .
  42. ^ Jump up to: а б с Макнир Н.А., Шлейфман Э.Б., Катберт А., Брем М., Джексон А., Ченг С. и др. (июнь 2013 г.). «Системная доставка триплекс-образующей ПНК и донорской ДНК с помощью наночастиц опосредует сайт-специфическое редактирование генома гемопоэтических клеток человека in vivo» . Генная терапия . 20 (6): 658–69. дои : 10.1038/gt.2012.82 . ПМЦ   3713483 . ПМИД   23076379 .
  43. ^ Гнедзко Д., Черуйот С.К., Рознерс Э. (сентябрь 2014 г.). «Использование пептидных нуклеиновых кислот, образующих тройную спираль, для селективного распознавания последовательности двухцепочечной РНК» . Современные протоколы химии нуклеиновых кислот . 58 : 4.60.1–23. дои : 10.1002/0471142700.nc0460s58 . ISSN   1934-9270 . ПМЦ   4174339 . ПМИД   25199637 .
  44. ^ Шлейфман Э.Б., Биндра Р., Лейф Дж., дель Кампо Дж., Роджерс Ф.А., Учил П. и др. (сентябрь 2011 г.). «Направленное разрушение гена CCR5 в гемопоэтических стволовых клетках человека, стимулированное пептидно-нуклеиновыми кислотами» . Химия и биология . 18 (9): 1189–98. doi : 10.1016/j.chembiol.2011.07.010 . ПМЦ   3183429 . ПМИД   21944757 .
  45. ^ Jump up to: а б Макнир Н.А., Анандалингам К., Филдс Р.Дж., Капуто С., Копич С., Гупта А. и др. (апрель 2015 г.). «Наночастицы, которые доставляют молекулы нуклеиновой кислоты, образующие триплекс, корректируют CFTR F508del в эпителии дыхательных путей» . Природные коммуникации . 6 (1): 6952. Бибкод : 2015NatCo...6.6952M . дои : 10.1038/ncomms7952 . ПМЦ   4480796 . ПМИД   25914116 .
  46. ^ Лукач Г.Л., Веркман А.С. (февраль 2012 г.). «CFTR: сворачивание, неправильное сворачивание и исправление конформационного дефекта ΔF508» . Тенденции молекулярной медицины . 18 (2): 81–91. doi : 10.1016/j.molmed.2011.10.003 . ПМЦ   3643519 . ПМИД   22138491 .
  47. ^ Полинг Л., Кори Р.Б. (февраль 1953 г.). «Предлагаемая структура нуклеиновых кислот» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 39 (2): 84–97. Бибкод : 1953ПНАС...39...84П . дои : 10.1073/pnas.39.2.84 . ПМЦ   1063734 . ПМИД   16578429 .
  48. ^ Полинг Л., Кори Р.Б. (февраль 1953 г.). «Строение нуклеиновых кислот» . Природа . 171 (4347): 346. Бибкод : 1953Natur.171..346P . дои : 10.1038/171346a0 . ПМИД   13036888 . S2CID   4151877 .
  49. ^ Фрейзер Р.Д. (март 2004 г.). «Строение нуклеиновой кислоты дезоксирибозы» . Журнал структурной биологии . 145 (3): 184–5. дои : 10.1016/j.jsb.2004.01.001 . ПМИД   14997898 .
  50. ^ Jump up to: а б с Фельзенфельд Г., Дэвис Д.Р., Рич А. (апрель 1957 г.). «Образование трехцепочечной полинуклеотидной молекулы». Журнал Американского химического общества . 79 (8): 2023–4. дои : 10.1021/ja01565a074 .
  51. ^ Хэнви Дж. К., Симидзу М., Уэллс Р. Д. (сентябрь 1988 г.). «Внутримолекулярные триплексы ДНК в суперспиральных плазмидах» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 85 (17): 6292–6. Бибкод : 1988PNAS...85.6292H . дои : 10.1073/pnas.85.17.6292 . ПМК   281955 . ПМИД   3413097 .
  52. ^ Миркин С.М., Лямичев В.И., Друшляк К.Н., Добрынин В.Н., Филиппов С.А., Франк-Каменецкий М.Д. (декабрь 1987 г.). «Н-форма ДНК требует зеркального повтора гомопурин-гомопиримидина». Природа . 330 (6147): 495–7. Бибкод : 1987Natur.330..495M . дои : 10.1038/330495a0 . ПМИД   2825028 . S2CID   4360764 .

Дальнейшее чтение

[ редактировать ]
  • Рич А. (декабрь 1993 г.). «ДНК существует во многих формах». Джин . 135 (1–2): 99–109. дои : 10.1016/0378-1119(93)90054-7 . ПМИД   8276285 .
  • Сойфер В.Н., Потаман В.Н. (1995). Трехспиральные нуклеиновые кислоты . Нью-Йорк: Спрингер. ISBN  978-0-387-94495-1 .
  • Миллс М., Аримондо П.Б., Лакруа Л., Гарестье Т., Элен С., Кламп Х., Мергни Дж.Л. (сентябрь 1999 г.). «Энергетика реакций смещения цепи в тройных спиралях: спектроскопическое исследование». Журнал молекулярной биологии . 291 (5): 1035–54. дои : 10.1006/jmbi.1999.3014 . ПМИД   10518941 .
  • Уотсон Дж. Д., Крик Ф. Х. (апрель 1953 г.). «Молекулярная структура нуклеиновых кислот; структура нуклеиновой кислоты дезоксирибозы». Природа . 171 (4356): 737–8. Бибкод : 1953Natur.171..737W . дои : 10.1038/171737a0 . ПМИД   13054692 . S2CID   4253007 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Triple-stranded_DNA&oldid=1227021359"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: e8bf50732b021e5660939d7f4acc3cf4__1717382880
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/e8/f4/e8bf50732b021e5660939d7f4acc3cf4.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Triple-stranded DNA - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)