Jump to content

Аффитин

дикого типа Излом ДНК Sac7d (синий и оранжевый) (сиреневый), из PDB : 1AZP

Аффитины [ 1 ] [ 2 ] (коммерческое название Нанофитины ) — искусственные белки , обладающие способностью избирательно связывать антигены . Структурно они происходят из ДНК- связывающего белка Sac7d , обнаруженного у Sulfolobus acidocaldarius , микроорганизма, принадлежащего архейному домену. Рандомизируя аминокислоты на связывающей поверхности Sac7d и подвергая полученную библиотеку белков циклам рибосомного дисплея , сродство можно направить на различные мишени, такие как пептиды , белки, вирусы и бактерии. [ 3 ] [ 4 ]

Аффитины являются миметиками антител и разрабатываются в качестве альтернативы антителам в качестве инструментов в биотехнологии . Их также использовали в качестве специфических ингибиторов различных ферментов. [ 1 ] Аффитины можно использовать в методах биохимической очистки, особенно в аффинной хроматографии. Способность аффитинов избирательно связывать антигены используется для нацеливания на специфические белки.

Ученым удалось очистить человеческий иммуноглобулин G (hIgG), бактериальный белок PulD и лизоцим куриного яйца с помощью колонок Affitin с высокой степенью чистоты. [ 5 ] Они обладают способностью действовать как специфические лиганды для представляющих интерес белков, которые необходимы, когда слияние белков с полипептидными метками невозможно или не несет никаких преимуществ, и, таким образом, создают аффинные колонки, как это происходит в производстве биофармацевтических препаратов. Они были иммобилизованы на агарозной матрице, и колонки обладали высокой степенью селективности. [ 5 ]

В дополнение к этому антитела и белки, не являющиеся иммуноглобинами, можно очистить с помощью аффининов посредством аффинной хроматографии. [ 5 ] Благодаря небольшому размеру и высокой растворимости их можно легко производить в больших количествах с использованием бактериальных систем экспрессии.

Характеристики

[ редактировать ]

Аффитины состоят из 66 аминокислот и имеют молекулярную массу около 7 кДа ; это немного по сравнению с антителами с массой около 130–150 кДа. Полученные из термофильного организма, они представляют собой необычайно термостойкие белки. Кроме того, Аффитины долговечны – они способны выдержать множество циклов очистки. [ нужна ссылка ] В отличие от антител, аффитины производятся in vitro и, следовательно, могут вырабатываться быстрее. [ 3 ] Благодаря небольшому размеру и высокой растворимости их можно легко производить в больших количествах с использованием бактериальных систем экспрессии.

Аффитины представляют собой сильно модифицированные реагенты, которые являются экстремофильными, поскольку они обнаружены у архей, таких как Sac7d, который является гипертермостабильным белком. Это искусственно связывающиеся белки с высоким сродством, небольшим размером и низкой структурной сложностью. У них есть два разных режима привязки. Для первого требуется плоская поверхность, тогда как для второго способа связывания требуется плоская поверхность и две короткие петли. Они являются термически и химически стабильными реагентами, и их стабильность можно дополнительно повысить с помощью методов мутации или прививки. Другие методы их стабилизации включают использование элементов последовательности из других белков, принадлежащих к тому же семейству, переключение поверхности связывания и, таким образом, обладание более длительной способностью связывания. Это было сделано путем трансплантации связывающей поверхности D1Sac7d на Sso7d, которая более стабильна, и введения точковых мутаций, ранее идентифицированных как стабилизирующие Sso7d дикого типа. [ 6 ]

  1. ^ Jump up to: а б Корреа А., Пачеко С., Мечали А.Е., Обаль Г., Бехар Г., Мурату Б. и др. (2014). «Мощное и специфическое ингибирование гликозидаз небольшими искусственными связывающими белками (аффитинами)» . ПЛОС ОДИН . 9 (5): е97438. Бибкод : 2014PLoSO...997438C . дои : 10.1371/journal.pone.0097438 . ПМК   4019568 . ПМИД   24823716 .
  2. ^ Пачеко С., Бехар Г., Майяссон М., Мурату Б., Пекорари Ф. (октябрь 2014 г.). «Аффинный перенос к архейному экстремофильному белку Sac7d путем вставки CDR» . Белковая инженерия, проектирование и отбор . 27 (10): 431–438. дои : 10.1093/протеин/gzu042 . ПМИД   25301962 .
  3. ^ Jump up to: а б Мурату Б., Шеффер Ф., Гильвоут И., Тельо-Манин Д., Пагсли А.П., Альзари П.М., Пекорари Ф. (ноябрь 2007 г.). «Ремоделирование ДНК-связывающего белка как специфического ингибитора бактериального секретина PulD in vivo» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 104 (46): 17983–17988. Бибкод : 2007PNAS..10417983M . дои : 10.1073/pnas.0702963104 . ПМК   2084283 . ПМИД   17984049 .
  4. ^ Креенбринк М., Чами М., Гильву И., Альзари П.М., Пекорари Ф., Пагсли А.П. (ноябрь 2008 г.). «Искусственно связывающие белки (аффитины) как зонды конформационных изменений секретина PulD». Журнал молекулярной биологии . 383 (5): 1058–1068. дои : 10.1016/j.jmb.2008.09.016 . ПМИД   18822295 .
  5. ^ Jump up to: а б с Бехар Дж., Ренодон-Корньер А., Мурату Б., Пекорари Ф. (апрель 2016 г.). «Аффитины как надежные специализированные реагенты для очистки антител и неиммуноглобулиновых белков аффинной хроматографией» . Журнал хроматографии А. 1441 : 44–51. дои : 10.1016/j.chroma.2016.02.068 . ПМИД   26952369 .
  6. ^ Бехар Дж., Пачеко С., Майяссон М., Мурату Б., Пекорари Ф. (декабрь 2014 г.). «Переключение сайта связывания анти-IgG между архейными экстремофильными белками приводит к получению аффитинов с повышенной pH-стабильностью» . Журнал биотехнологии . 192 Часть А: 123–9. дои : 10.1016/j.jbiotec.2014.10.006 . ПМИД   25450641 .
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 04996156e32b9edf5fb7721f1c78a8fc__1673028000
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/04/fc/04996156e32b9edf5fb7721f1c78a8fc.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Affitin - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)