ЛНКаП
 | Эта статья нуждается в дополнительных цитатах для проверки . ( декабрь 2007 г. ) |
LNCaP Клетки представляют собой клеточную линию клеток человека, обычно используемую в области онкологии . Клетки LNCaP представляют собой андроген человека предстательной железы -чувствительные клетки аденокарциномы левого надключичного лимфатического узла , полученные из метастазов 50-летнего мужчины европеоидной расы в 1977 году. Они представляют собой прикрепленные эпителиальные клетки, растущие агрегатами и в виде одиночных клеток. [1]
Одним из основных препятствий для проведения наиболее клинически значимых исследований рака простаты (РПЖ) является отсутствие клеточных линий, которые точно имитируют прогрессирование заболевания у человека. [2] Двумя отличительными чертами метастатического рака предстательной железы человека являются переход агрессивного РПЖ из состояния чувствительности к андрогенам в состояние нечувствительности к андрогенам (АН) и склонность РПЖ к метастазированию в кости. [3] Хотя создание клеточных линий AI было весьма успешным, как было продемонстрировано на «классических» клеточных линиях DU145 и PC3 , поведение этих клеток в кости не полностью имитирует клинические заболевания человека. Хорошо известно, что метастазы РПЖ в костях человека образуют остеобластические поражения, а не остеолитические поражения, наблюдаемые при других видах рака, таких как рак молочной железы. [4] [5] Аналогичным образом клетки PC-3 и DU145 образуют остеолитические опухоли. Для разработки модели клеток AI-PCa, которая более точно имитирует клиническое заболевание, были созданы сублинии LNCaP, которые на сегодняшний день предоставляют наиболее клинически значимые инструменты культуры тканей.
История
[ редактировать ]LNCaP ( узла простаты ) лимфатического карцинома человека . была Клеточная линия создана из метастатического поражения аденокарциномы предстательной железы Клетки LNCaP легко растут in vitro (до 8 x 10 5 клеток/кв. см; время удвоения 60 часов), образуют клоны и обладают высокой устойчивостью к интерферону фибробластов человека . [1] Клетки LNCaP имеют модальное число хромосом от 76 до 91, что указывает на мужской кариотип человека с несколькими маркерными хромосомами . [1] Злокачественные свойства клеток LNCaP сохраняются у бестимусных голых мышей, у которых в месте инъекции развиваются опухоли и наблюдается аналогичное время удвоения in vivo . [1]
Высокоаффинные специфические рецепторы андрогенов и эстрогенов присутствуют в цитозольной и ядерной фракциях. [1] Линия LNCaP гормонально чувствительна, о чем свидетельствует in vitro модуляция 5-альфа-дигидротестостероном роста клеток и выработки кислой фосфатазы. [1] Клетки LNCaP также экспрессируют специфический антиген простаты (PSA). [1] In vivo у самцов мышей опухоли развиваются раньше и с большей частотой, чем у самок, а гормональные манипуляции показывают, что частота развития опухолей коррелирует с уровнями андрогенов в сыворотке. [1] Однако скорость роста опухоли не зависит от пола или гормонального статуса хозяина. [1]
С4/С5 и С4-2
[ редактировать ]Ву и др. (1994) воспроизвели опухоли LNCaP человеческого происхождения у мышей с ослабленным иммунитетом путем совместной инъекции клеток LNCaP с костными фибробластами человека MS. [6] Клетки вводили подкожно в несколько участков бока мыши, и примерно через 4 недели роста опухоли легко обнаруживались при физическом осмотре и имели высокую скорость роста (17-33 мм3/день). [6]
Чтобы воспроизвести характерный сдвиг клеток РПЖ к AI, мышей-хозяев LNCaP кастрировали путем разреза средней мошонки примерно через 8 недель после инъекции. Опухоли сохраняли у кастрированных хозяев в течение 4-5 недель, после чего собирали оставшиеся опухоли. Всего от кастрированных хозяев были собраны две подгруппы клеток: C4 и C5, собранные на 4 и 5 неделе соответственно. [6]
Для дальнейшего отбора клеток AI-PCa сублинию C4 инъецировали совместно с человеческими фибробластами MS кастрированному хозяину. Полученные опухоли были изолированы и создана дополнительная сублиния C4-2. [6]
кариотипов Сравнение показывает, чтоКлетки LNCaP, выращенные в интактных хозяевах (сублиния M), имеют модальное число хромосомного распределения 83, сублинии C4 и C5 — 85, а сублиния C4-2 — 83. [6]
Для дальнейшей проверки того, что эти клетки имели человеческое происхождение, анализ кариотипа определил, что родительские клетки LNCaP имели 7 различных маркерных хромосом, по две копии каждой. Сублинии M, C4, C5 и C4-2 содержали большую часть маркерных хромосом, при этом сублиния M была наиболее похожа на родительские клетки LNCaP. C4, C5 и C4-2 лишь незначительно отличаются от LNCaP и сублинии M добавлением маркерной хромосомы в результате добавления сегмента к хромосоме 6. Y-хромосома отсутствует в большинстве клеток C4, C5 и C4-2. предполагая серьезные хромосомные изменения. [6]
Сублинии C4, C5 и C4-2 хорошо растут в тех же условиях культуры ткани, что и LNCaP, с аналогичными скоростями роста. Родительские сублинии LNCaP, M, C4 и C5 имеют сходные базовые уровни экспрессии генов орнитиндекарбоксилазы (ODC) и простатического специфического антигена (PSA), однако сублинии M, C4 и C5 экспрессируют в 5–10 раз больше мРНК PSA. M, C4, C5 и C4-2 также экспрессируют уменьшенную мРНК человеческого андрогенного рецептора , как и ожидалось, в клетках AI. [6]
Нечувствительность к андрогенам Все сублинии получали дигидротестостерон (ДГТ), лиганд с высоким сродством к АР. Лечение DHT вызывало заметное снижение роста клеток C4 и C5 и отсутствие роста клеток C4-2 по сравнению с высокой скоростью роста, наблюдаемой в клетках LNCaP, что позволяет предположить снижение чувствительности к андрогенам в C4 и C5 и AI в клетках C4-2. Анализ AR на цельных клетках также показал, что клетки LNCaP имеют форму AR с гораздо более высоким сродством (Kd = 159 пМ) по сравнению с C4-2 (Kd = 267 пМ). [6]
Туморогенность Сублинии C4 и C5 демонстрируют значительно повышенную онкогенность при инъекции интактным мышам-самцам, в отличие от родительских клеток LNCaP. C4 и C5 также были способны образовывать высоковаскуляризированные карциномы у кастрированных мышей при совместной инъекции фибробластов человека MS. Сублиния C4-2 легче образует опухоли у интактных хозяев, чем сублинии C4 и C5, и они являются единственными клетками, способными образовывать опухоли у кастрированного хозяина без совместной инъекции костных фибробластов человека MS. Эти же самые опухоли C4-2 окрашивались на ПСА и секретировали высокие уровни ПСА в питательную среду. [6]
С4-2Б
[ редактировать ]Для создания сублинии костных метастатических клеток клетки C4-2 ортотопически инъецировали кастрированным самцам мышей. Эти клетки образовывали крупные первичные опухоли простаты, лимфатических узлов, а также опухоли костей. Выделение этих опухолей кости привело к появлению сублинии C4-2B.Клетки C4-2B были положительными на ПСА и цитокератин 8 , что подтверждало их простатическое происхождение. Самое главное, что иммуногистохимическое окрашивание опухолей C4-2B было положительным в отношении активности остеобластов, что позволяет предположить индукцию образования остеобластических опухолей, отражающую прогрессирование РПЖ у человека. [2]
При культивировании в «среде для проминерализации», содержащей аскорбиновую кислоту (которая, как известно, способствует образованию скелетноподобного ЕСМ в остеобластах) и источник фосфата (для образования гидроксиапатита ), клетки C4-2B производят и сохраняют примерно в 8 раз больше минерализованного кальция, чем исходный LNCaP. клетки. Клетки C4-2B также экспрессируют более высокие уровни мРНК остеопротегерина (OPG), щелочной фосфатазы , костного сиалопротеина (BSP), остеокальцина (OCN), RANKL и остеонектина (OSN), которые в высокой степени экспрессируются остеобластами .Активность промотора остеобластов также выше в клетках C4-2B по сравнению с LNCaP, о чем свидетельствует экспрессия фактора транскрипции Cbfa1 . В то же время BMP7 , известный индуктор Cbfa1, также более высоко экспрессируется в клетках C4-2B, что дополнительно указывает на многие свойства, подобные остеобластам. [5]
Андрогенно-независимые варианты
[ редактировать ]Клетки LN95 были получены из LNCaP, культивированного в RPMI-1640 (без фенолового красного) с 10% очищенной от угля фетальной бычьей сывороткой. [7] Клетки LN95 отличаются от родительских клеток LNCaP морфологически, с выраженными дендритными расширениями, и молекулярно, с экспрессией варианта рецептора андрогена, сходной с таковой у AR-V7. Высокий ВСаП- клетки. [8] Примечательно, что клетки LN95 являются значительно более инициирующими опухоли, чем их родительские аналоги in vivo . [7]
Клетки LNCaP-AI (или LN-AI) получали из 6-месячной культуры родительских клеток LNCaP в сыворотке, очищенной углем. [9] Хотя LNCaP-AI полностью андрогеннезависимы, они сохраняют высокую экспрессию рецептора андрогена , низкую экспрессию AR-V7 и остаются чувствительными к андрогенам. [8] Механизм высокопролиферативного фенотипа клеток LNCaP-AI, по-видимому, заключается в потере экспрессии регулятора клеточного цикла (p21, p16) и повышении антиапоптотической экспрессии Bcl2 . [9] [10]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я Хорошевич Дж.С., Леонг С.С., Кавински Э., Карр Дж.П., Розенталь Х., Чу Т.М., Миранд Э.А., Мерфи Г.П. (апрель 1983 г.). «Модель LNCaP рака предстательной железы человека». Рак Рез . 43 (4): 1809–18. ПМИД 6831420 .
- ^ Jump up to: а б Тельманн Г.Н., Анезинис П.Е., Чанг С.М., Чжау Х.Э., Ким Э.Э., Хопвуд В.Л., Патак С., фон Эшенбах А.С., Чунг Л.В. (май 1994 г.). «Андрогеннезависимое прогрессирование рака и метастазы в кости в модели LNCaP рака простаты человека». Рак Рез . 54 (10): 2577–81. ПМИД 8168083 .
- ^ Фанелли, Алекс (2016). «Клеточная линия LNCaP: клеточная линия аденокарциномы простаты человека» . Проверено 3 декабря 2017 г.
- ^ Кунеман К.С., Юнг Ф., Чунг Л.В. (июнь 1999 г.). «Остеомиметические свойства клеток рака простаты: гипотеза, подтверждающая склонность к метастазированию рака простаты и росту в костной среде» . Простата . 39 (4): 246–61. doi : 10.1002/(SICI)1097-0045(19990601)39:4<246::AID-PROS5>3.0.CO;2-U . ПМИД 10344214 .
- ^ Jump up to: а б Лин Д.Л., Тарновски К.П., Чжан Дж., Дай Дж., Рон Э., Патель А.Х., Моррис М.Д., Келлер Э.Т. (май 2001 г.). «Костная метастатическая линия клеток рака простаты C4-2B, производная LNCaP, минерализуется in vitro» (PDF) . Простата . 47 (3): 212–21. дои : 10.1002/pros.1065 . hdl : 2027.42/34759 . ПМИД 11351351 . S2CID 31076493 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я Ву ХК, Се Дж. Т., Глив М. Е., Браун Н. М., Патак С., Чунг Л. В. (май 1994 г.). «Происхождение андроген-независимых сублиний клеток рака предстательной железы человека LNCaP: роль костных стромальных клеток». Инт Дж Рак . 57 (3): 406–12. дои : 10.1002/ijc.2910570319 . ПМИД 8169003 . S2CID 22056818 .
- ^ Jump up to: а б Пфлуг, БР; Рейтер, Р.Э.; Нельсон, Дж. Б. (1 сентября 1999 г.). «Экспрессия кавеолина снижается после лишения андрогенов в клеточных линиях рака простаты человека». Простата . 40 (4): 269–73. doi : 10.1002/(sici)1097-0045(19990901)40:4<269::aid-pros9>3.0.co;2-6 . ПМИД 10420156 . S2CID 19432542 .
- ^ Jump up to: а б Лю, LL; Се, Н; Солнце, С; Плимат, С; Мостагель, Э; Донг, X (12 июня 2014 г.). «Механизмы сплайсинга андрогенных рецепторов в клетках рака простаты» . Онкоген . 33 (24): 3140–50. дои : 10.1038/onc.2013.284 . ПМК 4553036 . ПМИД 23851510 .
- ^ Jump up to: а б Лу, С; Цай, С.Ю.; Цай, MJ (ноябрь 1999 г.). «Молекулярные механизмы андроген-независимого роста клеток LNCaP-AI рака предстательной железы человека» . Эндокринология . 140 (11): 5054–9. дои : 10.1210/endo.140.11.7086 . ПМИД 10537131 .
- ^ Сэмпсон, Н.; Нойвирт, Х; Пур, М; Клокер, Х; Эдер, ИП (апрель 2013 г.). «Модельные системы in vitro для изучения передачи сигналов андрогенных рецепторов при раке простаты» . Эндокринный рак . 20 (2): Р49–64. дои : 10.1530/ERC-12-0401 . ПМИД 23447570 .
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Ли Х, Ловчи М.Т., Квон Ю.С., Розенфельд М.Г., Фу XD, Йео Г.В. (2008). «Определение плотности меток, необходимой для анализа цифрового транскриптома: применение к андроген-чувствительной модели рака простаты» . Proc Natl Acad Sci США . 105 (51): 20179–84. Бибкод : 2008PNAS..10520179L . дои : 10.1073/pnas.0807121105 . ПМК 2603435 . ПМИД 19088194 .