✖


Jump to content

Визуализация живых клеток

Дополнительные исторические подробности см. в покадровой микроскопии .
Микроскоп живых клеток. Микроскопы для живых клеток обычно перевернуты . Чтобы сохранить клетки живыми во время наблюдения, микроскопы обычно помещают в инкубатор для микроклеток (прозрачный ящик).

Визуализация живых клеток — это исследование живых клеток с помощью покадровой микроскопии . Он используется учеными для лучшего понимания биологических функций посредством изучения клеточной динамики. [1] Визуализация живых клеток была впервые применена в первом десятилетии 21 века. Один из первых покадровых микрокинофильмов о клетках был снят Джулиусом Райсом и показывает оплодотворение и развитие яиц морского ежа . [2] С тех пор было разработано несколько методов микроскопии для более детального изучения живых клеток с меньшими усилиями. Был использован новый тип визуализации с использованием квантовых точек , поскольку они оказались более стабильными. [3] Развитие голотомографической микроскопии игнорировало фототоксичность и другие недостатки, связанные с окрашиванием, путем внедрения цифрового окрашивания на основе показателя преломления клеток. [4] [5]

Обзор

[ редактировать ]

Биологические системы существуют как сложное взаимодействие бесчисленных клеточных компонентов, взаимодействующих в четырех измерениях, создавая явление, называемое жизнью. Хотя обычно живые организмы превращают в неживые образцы, чтобы использовать традиционные инструменты статической визуализации, чем дальше образец отклоняется от естественных условий, тем больше вероятность того, что рассматриваемые деликатные процессы будут демонстрировать возмущения. [6] Поэтому обременительная задача по выявлению истинной физиологической идентичности живой ткани требует визуализации с высоким разрешением как в пространстве, так и во времени внутри родительского организма. [7] Технологические достижения в области визуализации живых клеток, предназначенные для получения пространственно-временных изображений внутриклеточных событий в реальном времени, играют важную роль в подтверждении биологической значимости физиологических изменений, наблюдаемых во время экспериментов. Из-за их тесной связи с физиологическими состояниями анализы живых клеток считаются стандартом для исследования сложных и динамических клеточных событий. [8] Поскольку динамические процессы, такие как миграция , развитие клеток и внутриклеточный трафик , все чаще становятся в центре внимания биологических исследований, методы, способные собирать трехмерные данные в реальном времени для клеточных сетей ( in situ ) и целых организмов ( in vivo ), станут незаменимыми инструментами. в понимании биологических систем. Общее признание методов визуализации живых клеток привело к быстрому увеличению числа специалистов-практиков и выявило необходимость увеличения пространственного и временного разрешения без ущерба для здоровья клетки. [9]

Используемые виды микроскопии

[ редактировать ]

Фазовый контраст

[ редактировать ]
Продолжительность: 1 минута 36 секунд.
Фазово-контрастная микроскопия : замедленное видео деления сперматоцитов погремушки кузнечика . Этот исторический фильм, популяризировавший фазово-контрастную микроскопию, был снят в начале 1940-х годов Куртом Мишелем из компании Carl Zeiss . [10]
Основная статья: Фазово-контрастная микроскопия

До появления фазово -контрастного микроскопа наблюдать живые клетки было сложно. Поскольку живые клетки полупрозрачны, их необходимо окрасить , чтобы их можно было увидеть в традиционный световой микроскоп . К сожалению, процесс окрашивания клеток обычно убивает их. С изобретением фазово-контрастной микроскопии стало возможным детально наблюдать неокрашенные живые клетки. После своего появления в 1940-х годах визуализация живых клеток с использованием фазово-контрастной микроскопии быстро стала популярной. [11] Фазово-контрастный микроскоп был популяризирован благодаря серии замедленных видеороликов (см. видео), снятых с помощью фотопленочной камеры. [12] Его изобретатель Фриц Цернике был удостоен Нобелевской премии в 1953 году. [13] Другие более поздние методы фазового контраста, используемые для наблюдения за неокрашенными клетками, - это модуляция Хоффмана и дифференциально-интерференционная контрастная микроскопия.

флуоресцентный

[ редактировать ]
Продолжительность: 9 секунд.
микроскопия Покадровая видеофлуоресцентная делящегося эмбриона фиолетового морского ежа . [14]
Основная статья: Флуоресцентная микроскопия

Фазово-контрастная микроскопия не позволяет наблюдать определенные белки или другие органические химические соединения, которые образуют сложный механизм клетки. синтетические и органические флуоресцентные красители , что позволяет наблюдать их с помощью флуоресцентной микроскопии (см. видео). Поэтому для маркировки таких соединений были разработаны [15] Однако флуоресцентные пятна фототоксичны , инвазивны и отбеливают при наблюдении. Это ограничивает их использование при наблюдении живых клеток в течение длительных периодов времени. Поэтому неинвазивные методы фазового контраста часто используются в качестве жизненно важного дополнения к флуоресцентной микроскопии при визуализации живых клеток. [16] [17] Однако методы флуоресцентной микроскопии с глубоким обучением помогают снизить световую нагрузку и фототоксичность и позволяют даже повторять живые изображения с высоким разрешением. [18]

Количественный фазовый контраст

[ редактировать ]
Видео количественной фазово-контрастной микроскопии делящихся клеток рака молочной железы. [19]
Основная статья: Количественная фазово-контрастная микроскопия

В результате быстрого увеличения плотности пикселей цифровых датчиков изображения количественная фазово-контрастная микроскопия стала альтернативным методом микроскопии для визуализации живых клеток. [20] [21] Количественная фазово-контрастная микроскопия имеет преимущество перед флуоресцентной и фазово-контрастной микроскопией в том, что она является одновременно неинвазивной и количественной по своей природе.

Из-за узкой глубины фокуса традиционной микроскопии визуализация живых клеток в настоящее время в значительной степени ограничивается наблюдением клеток в одной плоскости. Большинство реализаций количественной фазово-контрастной микроскопии позволяют создавать и фокусировать изображения в разных фокальных плоскостях за одну экспозицию. Это открывает будущие возможности трехмерной визуализации живых клеток с помощью методов флуоресценции. [22] Количественная фазово-контрастная микроскопия с вращательным сканированием позволяет получать замедленные трехмерные изображения живых клеток с высоким разрешением. [23] [24] [4]

Голотомография

[ редактировать ]

Голотомография (ГТ) — это лазерный метод измерения трехмерной томограммы показателя преломления (RI) микроскопического образца, такого как биологические клетки и ткани. Поскольку RI может служить внутренним контрастом изображений для прозрачных или фазовых объектов, измерения томограмм RI могут обеспечить количественное изображение микроскопических фазовых объектов без меток. Для измерения 3D-томограммы образцов HT использует принцип голографического изображения и обратного рассеяния . Обычно несколько двумерных голографических изображений образца измеряются под разными углами освещения, используя принцип интерферометрического изображения. Затем трехмерная RI-томограмма образца восстанавливается из этих нескольких двумерных голографических изображений путем обратного решения рассеяния света в образце.

Принцип ГТ очень похож на рентгеновскую компьютерную томографию (КТ) или компьютерную томографию . КТ измеряет несколько двумерных рентгеновских изображений человеческого тела под различными углами освещения, а затем получает трехмерную томограмму (поглощение рентгеновских лучей) с использованием теории обратного рассеяния. И рентгеновская КТ, и лазерная ВТ имеют одно и то же основное уравнение – уравнение Гельмгольца , волновое уравнение для монохроматической длины волны. HT также известна как оптическая дифракционная томография.

Сочетание голографии и вращательного сканирования позволяет осуществлять долговременную запись живых клеток без меток.

Неинвазивная оптическая наноскопия может достичь такого латерального разрешения, используя схему квази- 2π -голографического обнаружения и сложную деконволюцию. Пространственные частоты отображаемой клетки не имеют никакого смысла для человеческого глаза. Но эти рассеянные частоты преобразуются в голограмму и синтезируют полосу пропускания, разрешение которой вдвое превышает обычно доступное. Голограммы записываются с разных направлений освещения на плоскости образца и позволяют наблюдать субволновые томографические изменения образца. Наноразмерные апертуры служат для калибровки томографической реконструкции и характеристики системы визуализации с помощью когерентной передаточной функции. Это приводит к реалистичной обратной фильтрации и гарантирует настоящую сложную реконструкцию поля. [24]

В заключение, для трехмерной голотомографической микроскопии разделены две терминологии: (i) оптическое разрешение (реальное) и (ii) разрешение выборки (то, что на экране).

Приборы и оптика

[ редактировать ]

Визуализация живых клеток представляет собой осторожный компромисс между получением изображения с самым высоким разрешением и сохранением жизни клеток как можно дольше. [25] В результате специалисты по микроскопии живых клеток сталкиваются с уникальным набором проблем, которые часто упускаются из виду при работе с фиксированными образцами. Более того, для визуализации живых клеток часто используются специальные оптические системы и характеристики детектора. Например, в идеале микроскопы, используемые для визуализации живых клеток, должны иметь высокое соотношение сигнал/шум , высокую скорость получения изображений для захвата покадровой видео внеклеточных событий и поддерживать долгосрочную жизнеспособность клеток. [26] Однако оптимизация даже одного аспекта получения изображений может оказаться ресурсоемкой и ее следует рассматривать в каждом конкретном случае.

Конструкции линз

[ редактировать ]
А) Вертикальная конфигурация линз. Б) Конфигурация перевернутой линзы.

Малое увеличение «сухой»

[ редактировать ]

и образцом требуется дополнительное пространство В тех случаях, когда для работы с образцом между объективом , можно использовать сухую линзу, что потенциально требует дополнительной регулировки корректирующего воротника, который изменяет положение линзы в объективе для учета различий. в камерах визуализации. Специальные объективы имеют корректирующие кольца, которые корректируют сферические аберрации с учетом толщины покровного стекла. В сухих объективах с высокой числовой апертурой (NA) регулировочное кольцо корректирующего кольца изменяет положение подвижной группы линз, чтобы учесть различия в том, как внешняя часть линзы фокусирует свет относительно центра. Хотя аберрации присущи всем конструкциям линз, они становятся более проблематичными для сухих линз, где сохранение разрешения является ключевым моментом. [27]

Маслоиммерсионный с высокой числовой апертурой

[ редактировать ]

Масляная иммерсия — это метод, позволяющий повысить разрешение изображения путем погружения линзы и образца в масло с высоким показателем преломления . Поскольку свет преломляется, когда он проходит между средами с разными показателями преломления, помещая масло с тем же показателем преломления, что и стекло, между линзой и предметным стеклом, можно избежать двух переходов между показателями преломления. [28] Однако для большинства применений рекомендуется использовать масляную иммерсию с фиксированными (мертвыми) образцами, поскольку живым клеткам требуется водная среда, а смешивание масла и воды может вызвать серьезные сферические аберрации. В некоторых случаях силиконовое масло для более точной реконструкции изображения можно использовать . Силиконовое масло является привлекательной средой, поскольку оно имеет показатель преломления, близкий к показателю живых клеток, что позволяет создавать изображения с высоким разрешением при минимизации сферических аберраций. [27]

Погружение в воду

[ редактировать ]

Для визуализации живых клеток требуется образец в водной среде, который часто находится на расстоянии от 50 до 200 микрометров от покровного стекла. Следовательно, водно-иммерсионные линзы могут помочь достичь более высокой разрешающей способности за счет того, что и окружающая среда, и сами клетки будут близки по показателю преломления воды. Водоиммерсионные линзы разработаны с учетом показателя преломления воды и обычно имеют корректирующий воротник, позволяющий регулировать объектив. Кроме того, из-за более высокого показателя преломления воды водоиммерсионные линзы имеют высокую числовую апертуру и могут давать изображения, превосходящие масляно-иммерсионные линзы, при разрешении плоскостей глубиной более 0 мкм. [27]

окунание

[ редактировать ]

Еще одним решением для визуализации живых клеток является погружная линза. Эти линзы представляют собой разновидность водоиммерсионных линз, которые не требуют покровного стекла и могут быть погружены непосредственно в водную среду образца. Одним из основных преимуществ погружной линзы является то, что она имеет большое эффективное рабочее расстояние. [29] Поскольку покровное стекло не требуется, линзы этого типа могут приближаться к поверхности образца, и в результате разрешение ограничивается ограничениями, налагаемыми сферической аберрацией, а не физическими ограничениями покровного стекла. Хотя погружаемые линзы могут быть очень полезны, они не идеальны для всех экспериментов, поскольку «погружение» линзы может нарушить работу клеток в образце. Кроме того, поскольку инкубационная камера должна быть открыта для линзы, необходимо внимательно следить за изменениями в среде образца, вызванными испарением. [27]

Фототоксичность и фотообесцвечивание

[ редактировать ]

Сегодня большинство методов визуализации в реальном времени основаны либо на режимах высокой освещенности, либо на флуоресцентном мечении, что одновременно вызывает фототоксичность и ставит под угрозу способность сохранять клетки нетронутыми и живыми в течение долгого времени. Поскольку наши знания в области биологии основаны на наблюдениях, важно минимизировать возмущения, вызванные техникой визуализации.

Развитие конфокальной микроскопии тесно коррелирует с доступностью мощных лазеров, способных достигать высоких интенсивностей светового возбуждения. Однако высокая выходная мощность может повредить чувствительные флуорофоры , поэтому лазеры обычно работают значительно ниже своей полной выходной мощности. [30] Чрезмерное воздействие света может привести к фотоповреждениям из-за фотообесцвечивания или фототоксичности . Эффекты фотообесцвечивания могут значительно снизить качество флуоресцентных изображений, и в последние годы существует значительный спрос на коммерческие флуорофоры с более длительным сроком службы. Одно из решений, серия Alexa Fluor , практически не демонстрирует выцветания даже при высокой интенсивности лазера. [31]

В физиологических условиях многие клетки и типы тканей подвергаются воздействию лишь низкого уровня света. [32] В результате важно свести к минимуму воздействие на живые клетки высоких доз ультрафиолетового (УФ), инфракрасного (ИК) или возбуждающего флуоресценцию длин волн света, которые могут повредить ДНК , повысить клеточную температуру и вызвать фотообесцвечивание соответственно. [33] Фотоны высокой энергии, поглощаемые флуорофорами и образцом, испускаются с более длинными волнами, пропорциональными стоксову сдвигу . [34] Однако клеточные органеллы могут быть повреждены, когда энергия фотонов вызывает химические и молекулярные изменения, а не повторно излучается. [35] Считается, что основным виновником светоиндуцированной токсичности живых клеток являются свободные радикалы, образующиеся при возбуждении флуоресцентных молекул. [32] Эти свободные радикалы обладают высокой реакционной способностью и вызывают разрушение клеточных компонентов, что может привести к нефизиологическому поведению.

Одним из методов минимизации фотоповреждения является снижение концентрации кислорода в образце, чтобы избежать образования активных форм кислорода . [36] Однако этот метод не всегда возможен при визуализации живых клеток и может потребовать дополнительного вмешательства. Еще одним методом снижения воздействия свободных радикалов в образце является использование реагентов, препятствующих выцветанию. К сожалению, большинство коммерческих реагентов, препятствующих выцветанию, нельзя использовать для визуализации живых клеток из-за их токсичности. [37] естественные поглотители свободных радикалов, такие как витамин С или витамин Е, без существенного изменения физиологического поведения в более коротких временных масштабах. Вместо этого можно использовать [38] Недавно была разработана и коммерциализирована технология визуализации живых клеток без фототоксичности. Голотомографическая микроскопия позволяет избежать фототоксичности благодаря лазеру малой мощности (класс лазера 1: 0,2 мВт/мм). 2 ). [4] [5] [39]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Бейкер М. (август 2010 г.). «Клеточная визуализация: долгий и внимательный взгляд» . Природа . 466 (7310): 1137–1140. Бибкод : 2010Natur.466.1137B . дои : 10.1038/4661137а . ПМИД   20740018 . S2CID   205056946 .
  2. ^ Ландекер Х (октябрь 2009 г.). «Видеть вещи: от микрокинематографии до визуализации живых клеток». Природные методы . 6 (10): 707–709. дои : 10.1038/nmeth1009-707 . ПМИД   19953685 . S2CID   6521488 .
  3. ^ Джайсвал Дж.К., Голдман Э.Р., Маттусси Х., Саймон С.М. (октябрь 2004 г.). «Использование квантовых точек для визуализации живых клеток». Природные методы . 1 (1): 73–78. дои : 10.1038/nmeth1004-73 . ПМИД   16138413 . S2CID   13339279 .
  4. ^ Перейти обратно: а б с Полларо, Л.; Эквис, С.; Далла Пьяцца, Б.; Котт, Ю. (2016). «3D-наноскопия живых клеток без пятен». Оптик и Фотоник . 11 : 38–42. дои : 10.1002/opph.201600008 .
  5. ^ Перейти обратно: а б Полларо, Л.; Далла Пьяцца, Б.; Котт, Ю. (2015). «Цифровое окрашивание: микроскопия живых клеток без инвазивных химикатов» (PDF) . Микроскопия сегодня . 23 (4): 12–17. дои : 10.1017/S1551929515000590 . S2CID   135982205 .
  6. ^ Петролл, ВМ; Шут, СП; Кавана, HD (май 1994 г.). «Конфокальная визуализация in vivo: общие принципы и применение». Сканирование . 16 (3): 131–149. ISSN   0161-0457 . ПМИД   8038913 .
  7. ^ Мейеринг, Эрик; Дзюбачик Олег; Смаль, Игорь (1 января 2012 г.). «Методы отслеживания клеток и частиц». Визуализация и спектроскопический анализ живых клеток — оптические и спектроскопические методы . Методы энзимологии. Том. 504. стр. 183–200. дои : 10.1016/B978-0-12-391857-4.00009-4 . ISBN  9780123918574 . ISSN   0076-6879 . ПМИД   22264535 . Архивировано из оригинала 5 мая 2022 г. Проверено 2 декабря 2019 г.
  8. ^ Аллан, Виктория Дж.; Стивенс, Дэвид Дж. (4 апреля 2003 г.). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–86. Бибкод : 2003Sci...300...82S . CiteSeerX   10.1.1.702.4732 . дои : 10.1126/science.1082160 . ISSN   1095-9203 . ПМИД   12677057 . S2CID   33199613 .
  9. ^ Танец, Эмбер (27 марта 2018 г.). «Визуализация живых клеток: глубже, быстрее, шире» . Наука . АААС . Проверено 17 декабря 2018 г.
  10. ^ Мишель К. (июнь 2013 г.). «Исторический замедленный фильм доктора Курта Мишеля, Carl Zeiss Jena (ок. 1943 г.)» . Библиотека микроскопии Цейсса.
  11. ^ Берджесс М. (15 октября 2003 г.). «Празднование 50-летия создания изображений живых клеток» (PDF) . Carl Zeiss UK и Королевское микроскопическое общество . Лондон: Биохимическое общество.
  12. ^ Гундлах Х. «50 лет назад: Фриц Цернике (1888-1966) получил Нобелевскую премию по физике за разработку метода фазового контраста» (PDF) (Пресс-релиз). Карл Цейсс АГ. Архивировано из оригинала (PDF) 22 марта 2014 г.
  13. ^ «Нобелевская премия по физике 1953 года» . Нобель Медиа АБ.
  14. ^ фон Дассов Г., Вербрюгге К.Дж., Миллер А.Л., Сидер Дж.Р., Бемент В.М. «Деление клеток эмбриона пурпурного ежа» . The Cell — библиотека изображений.
  15. ^ Стокерт Х.К., Бласкес-Кастро А. (2017). Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни . Издательство Bentham Science. ISBN  978-1-68108-519-7 . Проверено 24 декабря 2017 г.
  16. ^ Стивенс DJ, Аллан VJ (апрель 2003 г.). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–86. Бибкод : 2003Sci...300...82S . CiteSeerX   10.1.1.702.4732 . дои : 10.1126/science.1082160 . ПМИД   12677057 . S2CID   33199613 .
  17. ^ Ге Дж., Вуд Д.К., Вайнгейст Д.М., Прасонгтанакидж С., Навасумрит П., Ручирават М., Энгельвард Б.П. (июнь 2013 г.). «Стандартная флуоресцентная визуализация живых клеток очень генотоксична» . Цитометрия. Часть А. 83 (6): 552–560. doi : 10.1002/cyto.a.22291 . ПМЦ   3677558 . ПМИД   23650257 .
  18. ^ Велицкий П, Мигель Э, Михальска Дж. М., Людчик Дж., Вей Д., Лин З., Уотсон Дж. Ф., Троидл Дж., Бейер Дж., Бен-Саймон Ю., Соммер С., Яр В., Ченамери А., Бройххаген Дж., Грант С., Йонас П., Новарино Г., Пфистер Х., Бикель Б., Данцл Дж.Г. (июль 2023 г.). «Плотная 4D-наномасштабная реконструкция живой ткани мозга» . Природные методы 20 (8): 1256–1265. дои : 10.1038/ s41592-023-01936-6 ПМЦ   10406607 . ПМИД   37429995 .
  19. ^ Янике Б. «Видео цифровой голографической микроскопии, показывающее деление немеченых клеток рака молочной железы JIMT-1» . The Cell — библиотека изображений.
  20. ^ Пак И., Деперсинж С., Попеску Г. (2018). «Количественная фазовая визуализация в биомедицине». Природная фотоника . 12 (10): 578–589. Бибкод : 2018NaPho..12..578P . дои : 10.1038/s41566-018-0253-x . ПМИД   26648557 . S2CID   126144855 .
  21. ^ Куш Э., Бевилаква Ф., Деперсинж К. (1999). «Цифровая голография для количественной фазово-контрастной визуализации». Оптические письма . 24 (5): 291–293. Бибкод : 1999OptL...24..291C . дои : 10.1364/OL.24.000291 . ПМИД   18071483 . S2CID   38085266 .
  22. ^ Розен Дж., Брукер Дж. (2008). «Несканирующая неподвижная флуоресцентная трехмерная голографическая микроскопия». Природная фотоника . 2 (3): 190–195. Бибкод : 2008NaPho...2..190R . дои : 10.1038/nphoton.2007.300 . S2CID   17818065 .
  23. ^ Воншик С. , Фанг-Йен С., Бадизадеган К., О С., Лю Н., Дасари Р., Фельд М. (2007). «Томографическая фазовая микроскопия». Природные методы . 4 (9): 717–719. дои : 10.1038/nmeth1078 . ПМИД   17694065 . S2CID   205418034 .
  24. ^ Перейти обратно: а б Котт Й, Той Ф, Журден П, Павильон Н, Босс Д, Маджистретти П, Марке П, Деперсинж С (2013). «Безмаркерная фазовая наноскопия». Природная фотоника . 7 (2): 113–117. Бибкод : 2013NaPho...7..113C . дои : 10.1038/nphoton.2012.329 . S2CID   16407188 .
  25. ^ Дженсен ЕС (январь 2013 г.). «Обзор визуализации живых клеток: требования и используемые методы» . Анатомическая запись . 296 (1): 1–8. дои : 10.1002/ar.22554 . ПМИД   22907880 . S2CID   35790454 .
  26. ^ Уотерс Дж. К. (2013). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии. Том. 114. С. 125–150. дои : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00006-3 . ISBN  9780124077614 . ПМИД   23931505 .
  27. ^ Перейти обратно: а б с д Хиббс А.Р. (2004). Конфокальная микроскопия для биологов . Нью-Йорк: Издательство Kluwer Academic/Plenum. ISBN  978-0306484681 . OCLC   54424872 .
  28. ^ Мэнсфилд С.М., Кино GS (10 декабря 1990 г.). «Твердый иммерсионный микроскоп». Письма по прикладной физике . 57 (24): 2615–2616. Бибкод : 1990АпФЛ..57.2615М . дои : 10.1063/1.103828 .
  29. ^ Келлер Х.Э. (2006), «Объективные линзы для конфокальной микроскопии», Справочник по биологической конфокальной микроскопии , Springer US, стр. 145–161, doi : 10.1007/978-0-387-45524-2_7 , ISBN  9780387259215 , S2CID   34412257
  30. ^ Амос, Всемирный банк; Уайт, Дж. Г. (1 сентября 2003 г.). «Как конфокальный лазерный сканирующий микроскоп вошел в биологические исследования» . Биология клетки . 95 (6): 335–342. дои : 10.1016/S0248-4900(03)00078-9 . ПМИД   14519550 . S2CID   34919506 .
  31. ^ Андерсон ГП, Неруркар НЛ (20 декабря 2002 г.). «Улучшенные флюороиммуноанализы с использованием красителя Alexa Fluor 647 с волоконно-оптическим биосенсором RAPTOR 7». Журнал иммунологических методов . 271 (1–2): 17–24. дои : 10.1016/S0022-1759(02)00327-7 . ISSN   0022-1759 . ПМИД   12445725 .
  32. ^ Перейти обратно: а б Фриго М.М., Лакост Дж., Свифт Дж.Л., Браун К.М. (март 2009 г.). «Микроскопия живых клеток – советы и инструменты» . Журнал клеточной науки . 122 (Часть 6): 753–767. дои : 10.1242/jcs.033837 . ПМИД   19261845 .
  33. ^ Магидсон В., Ходжаков А. (2013). «Обход фотоповреждения в микроскопии живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии. Том. 114. С. 545–560. дои : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00023-3 . ISBN  9780124077614 . ПМЦ   3843244 . ПМИД   23931522 .
  34. ^ Рост Ф.В. (1992–1995). Флуоресцентная микроскопия . Кембридж: Издательство Кембриджского университета. ISBN  978-0521236416 . ОСЛК   23766227 .
  35. ^ Лайссу П.П., Альхамди Р.А., Томанчак П., Рейно Э.Г., Шрофф Х. (июнь 2017 г.). «Оценка фототоксичности с помощью живой флуоресцентной визуализации». Природные методы . 14 (7): 657–661. дои : 10.1038/nmeth.4344 . hdl : 21.11116/0000-0002-8B80-0 . ПМИД   28661494 . S2CID   6844352 .
  36. ^ Эттингер А, Виттманн Т (2014). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Количественная визуализация в клеточной биологии . Методы клеточной биологии. Том. 123. стр. 77–94. дои : 10.1016/B978-0-12-420138-5.00005-7 . ISBN  9780124201385 . ПМЦ   4198327 . ПМИД   24974023 .
  37. ^ Поли Дж. Б. (2006). Справочник по биологической конфокальной микроскопии (3-е изд.). Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Спрингер. ISBN  9780387455242 . OCLC   663880901 .
  38. ^ Вату А, Метуссин Н, Ясин Х.М., Усман А (2018). «Общая антиоксидантная способность и флуоресцентная визуализация листьев отдельных растений, обычно потребляемых в Брунее-Даруссаламе» . Материалы конференции AIP . 1933 (1): 020001. Бибкод : 2018AIPC.1933b0001W . дои : 10.1063/1.5023935 .
  39. ^ Сандоз, Патрик А.; Трамбле, Кристофер; Эквис, Себастьян; Поп, Сорин; Полларо, Лиза; Котте, Янн; ван дер Гут, Ф. Гису; Фрешен, Матье (4 сентября 2018 г.). «3D-анализ органелл в живых клетках без меток по показателю преломления показывает премитотическое вращение органелл в стволовых клетках млекопитающих». bioRxiv   10.1101/407239 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Live-cell_imaging&oldid=1233502603"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 0f1971775ae8f33391d37189e0c1e5e6__1720516080
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/0f/e6/0f1971775ae8f33391d37189e0c1e5e6.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Live-cell imaging - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)