✖


Jump to content

Транспозонная система «Спящая красавица»

Транспозонная красавица» система « представляет собой синтетический транспозон ДНК, предназначенный для введения точно определенных последовательностей ДНК в хромосомы позвоночных Спящая животных с целью введения новых признаков и открытия новых генов и их функций. Это система типа Tc1/mariner , в которой транспозаза воскресла из множества неактивных последовательностей рыб.

Механизм действия

[ редактировать ]
Рисунок 1. Механизм транспозиции, опосредованной SB.
Верхняя линия: транспозон, обозначенный зеркальными наборами красных двойных стрелок (IR/DR), показан как содержащийся в другой молекуле ДНК (например, плазмиде, показанной синими линиями). Транспозон в этом примере содержит кассету экспрессии, состоящую из промотора (синий овал), который может управлять транскрипцией гена или другой последовательности ДНК, помеченной как «генетический груз». Средние линии: транспозаза «Спящей красавицы » (SB) связывается с IR/DR, как показано, и вырезает транспозон из плазмиды (места разреза обозначены двумя черными пунктирными линиями в оставшейся плазмиде). ​​Две нижние линии: еще одна молекула ДНК ( зеленый) с последовательностью ТА может стать реципиентом транспонированного транспозона. При этом последовательность ТА в месте вставки дублируется.

Транспозонная система «Спящая красавица» состоит из «Спящая красавица » (SB) транспозазы и транспозона , который был разработан в 1997 году для вставки определенных последовательностей ДНК в геномы позвоночных животных. ДНК-транспозоны перемещаются из одного участка ДНК в другой простым способом «вырезать и вставить» (рис. 1). Транспозиция — это точный процесс, при котором определенный сегмент ДНК вырезается из одной молекулы ДНК и перемещается в другой участок той же или другой молекулы ДНК или генома . [ 1 ]

Как и все другие транспозазы типа Tc1/mariner , транспозаза SB встраивает транспозон в пару оснований динуклеотида ТА в последовательности ДНК реципиента. [ 2 ] Сайт вставки может находиться в другом месте той же молекулы ДНК или в другой молекуле ДНК (или хромосоме). В геномах млекопитающих, включая человека, насчитывается около 200 миллионов сайтов ТА. Сайт вставки ТА дублируется в процессе интеграции транспозона. Такое дублирование последовательности ТА является признаком транспозиции и используется для выяснения механизма в некоторых экспериментах. Однако недавнее исследование показало, что SB также интегрируется в динуклеотиды, не относящиеся к ТА, с низкой частотой. [ 3 ] Транспозаза может кодироваться либо внутри транспозона (например, предполагаемого транспозона, показанного на фиг. 2), либо транспозаза может поступать из другого источника, и в этом случае транспозон становится неавтономным элементом. Неавтономные транспозоны (например, рис. 1) наиболее полезны в качестве генетических инструментов, поскольку после вставки они не могут самостоятельно продолжать вырезать и повторно вставлять. Все ДНК-транспозоны, идентифицированные в геноме человека и других млекопитающих, не являются автономными, поскольку, хотя они и содержат гены транспозазы, эти гены нефункциональны и не способны генерировать транспозазу, которая может мобилизовать транспозоны.

Строительство

[ редактировать ]
Рисунок 2: Структурные особенности транспозазы SB.
Полипептид, состоящий из 360 аминокислот, имеет три основных субдомена: аминоконцевой домен распознавания ДНК, который отвечает за связывание с последовательностями DR в зеркальных последовательностях IR/DR транспозона, последовательность ядерной локализации (NLS) и DDE. домен, который катализирует набор реакций «вырезать и вставить», включающих транспозицию. Домен распознавания ДНК имеет две парные боксерские последовательности, которые могут связываться с ДНК и связаны с различными мотивами, обнаруженными в некоторых факторах транскрипции; две парные коробки помечены PAI и RED. Каталитический домен имеет характерные аминокислоты DDE (иногда DDD), которые встречаются во многих ферментах транспозазах и рекомбиназах. Кроме того, существует область, которая сильно обогащена аминокислотами глицином (G).

Этот возрожденный ген транспозазы был назван « Спящая красавица (SB) », потому что он был возвращен к активности после длительного эволюционного сна. [ 4 ] Система транспозонов SB является синтетической, поскольку транспозаза SB была реконструирована из вымерших (ископаемых) последовательностей транспозаз, принадлежащих к классу транспозонов Tc1/mariner. [ 5 ] [ 6 ] обнаружен в геномах лососевых рыб. [ 7 ] Как и у людей, где около 20 000 инактивированных транспозонов типа Tc1/маринера составляют почти 3% человеческого генома , [ 8 ] [ 9 ] гены транспозазы, обнаруженные у рыб, были неактивны более 10 миллионов лет из-за накопленных мутаций. Реконструкция транспозазы SB была основана на представлении о существовании первичного Tc1-подобного транспозона, который был предком последовательностей, обнаруженных в геномах рыб. Хотя во всех изученных геномах рыб было много последовательностей, которые выглядели как транспозоны Tc-1, все последовательности транспозонов были неактивны из-за мутаций. Предположив, что вариации в последовательностях были вызваны независимыми мутациями, которые накапливались в различных транспозонах, был постулирован предполагаемый предковый транспозон (рис. 2). [ 10 ]

Конструирование транспозазы началось со слияния частей двух неактивных последовательностей транспозонов атлантического лосося ( Salmo salar ) и одной неактивной последовательности транспозонов радужной форели ( Oncorhynchus mykiss транспозазы ) с последующим восстановлением небольших дефицитов в функциональных доменах фермента (рис. 3). ). Каждая аминокислота в первой завершенной транспозазе, названной SB10, была определена с помощью « консенсусной последовательности по правилу большинства», основанной на 12 частичных генах, обнаруженных у восьми видов рыб. Первые шаги (1->3 на рис. 3) заключались в восстановлении полного белка путем заполнения пробелов в последовательности и изменения местами терминирующих кодонов, которые препятствовали бы синтезу предполагаемого полипептида из 360 аминокислот. Следующим шагом (4 на рис. 3) было обращение мутаций в сигнале ядерной локализации (NLS), который необходим для импорта фермента транспозазы из цитоплазмы , где он вырабатывается, в ядро , где он действует. Аминоконец транспозазы, содержащий ДНК-связывающие мотивы для распознавания прямых повторов (DR), восстанавливали на этапах 5->8. Последние два шага восстановили каталитический домен, характеристики которого сохранились. аспарагиновая кислота ( D ) и глутаминовая кислота ( E ) — аминокислоты со специфическим расположением, обнаруженные в интегразах и рекомбиназах . [ 11 ] Результатом стал SB10, который содержит все мотивы, необходимые для функционирования. [ 4 ]

Рисунок 3. Конструкция транспозазы SB.
Шаг 1: Схема вымерших Tc1/mariner -подобных транспозонов в геномах современных лососевых рыб; х — миссенс-мутации; S, терминационные мутации; F — мутации сдвига рамки считывания; G — основной пробел/отсутствующие аминокислоты.
Шаг 3: Устранение разрыва (G), а также мутаций терминации и сдвига рамки считывания.
Шаг 4: реконструкция двудольной последовательности NLS (подчеркнуто оранжевым цветом).
Шаги 5–8: реконструкция N-концевого ДНК-связывающего домена (подчеркнуто оранжевым).
Шаги 9–10: реконструкция каталитического домена (подчеркнуто оранжевым цветом), включая характерные остатки DDE (зеленые прямоугольники).

Транспозаза SB10 была улучшена за десять лет с момента ее создания за счет увеличения консенсуса за счет большего количества вымерших последовательностей транспозона Tc1 и тестирования различных комбинаций изменений. [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] Дальнейшая работа показала, что ДНК-связывающий домен состоит из двух парных последовательностей, которые гомологичны мотивам последовательностей, обнаруженным в некоторых факторах транскрипции. Парные субдомены транспозазы SB были обозначены PAI и RED. Субдомен PAI играет доминирующую роль в распознавании последовательностей DR в транспозоне. Субдомен RED перекрывается с сигналом ядерной локализации, но его функция остается неясной. [ 18 ] Самая последняя версия транспозазы SB, SB100X, имеет примерно в 100 раз большую активность, чем SB10, что было определено с помощью анализов транспозиции генов устойчивости к антибиотикам, проведенных в культивируемых тканевых клетках человека HeLa. [ 16 ] Международное общество молекулярной и клеточной биологии, а также биотехнологических протоколов и исследований (ISMCBBPR) назвало SB100X молекулой 2009 года за признание ее потенциала в будущей геномной инженерии. [ 19 ]

Транспозон, распознаваемый транспозазой SB, был назван Т, поскольку он был выделен из генома другой лососевой рыбы, Tanichthys albonubes . Транспозон состоит из представляющей интерес генетической последовательности, фланкированной инвертированными повторами (IR), которые сами содержат короткие прямые повторы (DR) (тандемные наконечники стрелок IR-DR на рис. 1 и 2). T имел последовательность IR/DR, наиболее близкую к консенсусной последовательности вымерших Tc-1-подобных транспозонов у рыб. Консенсусный транспозон имеет IR из 231 пары оснований. Самые внутренние DR имеют длину 29 пар оснований, тогда как самые внешние DR имеют длину 31 пару оснований. Разница в длине имеет решающее значение для максимальной скорости транспозиции. [ 20 ] Исходный компонент Т-транспозонов системы транспозонов SB был улучшен с небольшими изменениями, чтобы соответствовать консенсусу многих родственных вымерших и активных транспозонов. [ 20 ] [ 21 ]

Приложения

[ редактировать ]
Рисунок 4. Использование «Спящая красавица» . транспозонной системы

За последнее десятилетие транспозоны SB были разработаны как невирусные векторы для введения генов в геномы позвоночных животных и для генной терапии . Генетический груз может представлять собой кассету экспрессии — трансген и связанные с ним элементы, которые обеспечивают регуляцию транскрипции для экспрессии на желаемом уровне в конкретной ткани (тканях). Альтернативное использование транспозонов SB — обнаружение функций генов, особенно тех, которые вызывают рак . [ 22 ] [ 23 ] путем доставки последовательностей ДНК, которые максимально нарушают экспрессию генов вблизи места вставки. Этот процесс называется инсерционным мутагенезом или транспозонным мутагенезом . Когда ген инактивируется вставкой транспозона (или другим механизмом), этот ген «выключается». Нокаутные мыши и нокаутные крысы были получены с помощью системы SB. [ 24 ] [ 25 ] Рисунок 4 иллюстрирует эти два использования транспозонов SB.

Транспозоны SB сочетают в себе преимущества вирусов и голой ДНК как для доставки генов, так и для их разрушения. Вирусы были отобраны эволюционным путем на основе их способности инфицировать и размножаться в новых клетках-хозяевах. В то же время клетки развили основные механизмы молекулярной защиты, позволяющие защитить себя от вирусных инфекций. Для некоторых применений генной инженерии, таких как некоторые формы генной терапии, [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] отказ от использования вирусов также важен по социальным и нормативным причинам. Использование невирусных векторов позволяет избежать многих, но не всех, защитных механизмов, которые клетки используют против векторов.

Плазмиды , кольцевые ДНК, показанные на рис. 1, обычно используются для доставки невирусных генов. Однако у большинства методов доставки ДНК в клеточные хромосомы с использованием плазмид, наиболее распространенной формы невирусной доставки генов, есть две основные проблемы. Во-первых, экспрессия трансгенов из плазмид кратковременна из-за отсутствия интеграции и клеточных реакций, которые отключают экспрессию. Во-вторых, поглощение плазмидных молекул клетками затруднено и неэффективно. Транспозонная система «Спящая красавица» была разработана для решения первой проблемы. ДНК-транспозоны точно вставляют определенные последовательности ДНК (рис. 1) почти случайным образом в геномы хозяина, тем самым увеличивая продолжительность экспрессии генов (даже в течение нескольких поколений). Более того, транспозиция позволяет избежать образования множественных тандемных интеграций, что часто приводит к отключению экспрессии трансгена. В настоящее время вставка трансгенов в хромосомы с помощью плазмид гораздо менее эффективна, чем с помощью вирусов. Однако, используя мощные промоторы для регулирования экспрессии трансгена, доставка транспозонов в несколько клеток может обеспечить полезные уровни секретируемых генных продуктов для всего животного. [ 29 ] [ 30 ]

Вероятно, наиболее интересным потенциальным применением транспозонов « Спящей красавицы» будет генная терапия человека. Широкое применение генной терапии на людях в странах первого мира, а также в странах с развивающейся экономикой можно предвидеть, если стоимость векторной системы будет доступной. Поскольку система SB состоит исключительно из ДНК, затраты на производство и доставку значительно снижаются по сравнению с вирусными векторами. Первые клинические испытания с использованием транспозонов SB в генетически модифицированных Т-клетках проверят эффективность этой формы генной терапии у пациентов с риском смерти от запущенных злокачественных опухолей. [ 31 ]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Пластерк Р.Х. (сентябрь 1993 г.). «Молекулярные механизмы транспозиции и ее контроль». Клетка . 74 (5): 781–786. дои : 10.1016/0092-8674(93)90458-3 . ПМИД   8397072 . S2CID   28784300 .
  2. ^ Пластерк Р.Х., Изсвак З., Ивикс З. (август 1999 г.). «Постоянные инопланетяне: суперсемейство мобильных элементов Tc1/mariner» . Тенденции в генетике . 15 (8): 326–332. дои : 10.1016/S0168-9525(99)01777-1 . ПМИД   10431195 .
  3. ^ Го Ю, Чжан Ю, Ху К (2018). «Транспозон «Спящей красавицы» интегрируется в динуклеотиды, отличные от ТА» . Мобильная ДНК . 9 :8. дои : 10.1186/s13100-018-0113-8 . ПМК   5801840 . ПМИД   29445422 .
  4. ^ Jump up to: а б Ивикс З., Хакетт П.Б., Пластерк Р.Х., Изсвак З. (ноябрь 1997 г.). «Молекулярная реконструкция Спящей красавицы, Tc1-подобного транспозона рыбы, и его транспозиция в клетках человека» . Клетка . 91 (4): 501–510. дои : 10.1016/S0092-8674(00)80436-5 . ПМИД   9390559 .
  5. ^ Доак Т.Г., Доердер Ф.П., Ян К.Л., Херрик Дж. (февраль 1994 г.). «Предлагаемое суперсемейство генов транспозазы: транспозоноподобные элементы у мерцательных простейших и общий мотив «D35E»» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 91 (3): 942–946. Бибкод : 1994PNAS...91..942D . дои : 10.1073/pnas.91.3.942 . ПМК   521429 . ПМИД   8302872 .
  6. ^ Радиче А.Д., Бугай Б., Фитч Д.Х., Эммонс С.В. (сентябрь 1994 г.). «Широко распространенное распространение семейства транспозонов Tc1: Tc1-подобные транспозоны костистых рыб». Молекулярная и общая генетика . 244 (6): 606–612. дои : 10.1007/bf00282750 . ПМИД   7969029 . S2CID   11381762 .
  7. ^ Гудье Дж.Л., Дэвидсон В.С. (август 1994 г.). «Транспозоноподобные последовательности Tc1 широко распространены у лососевых». Журнал молекулярной биологии . 241 (1): 26–34. дои : 10.1006/jmbi.1994.1470 . ПМИД   8051704 .
  8. ^ Вентер Дж.К., Адамс М.Д., Майерс Э.В., Ли П.В., Мурал Р.Дж., Саттон Г.Г. и др. (февраль 2001 г.). «Последовательность генома человека» . Наука . 291 (5507): 1304–1351. Бибкод : 2001Sci...291.1304V . дои : 10.1126/science.1058040 . ПМИД   11181995 .
  9. ^ Ландер Э.С., Линтон Л.М., Биррен Б., Нусбаум С., Зоди М.К., Болдуин Дж. и др. (февраль 2001 г.). «Первичное секвенирование и анализ генома человека» . Природа . 409 (6822): 860–921. Бибкод : 2001Natur.409..860L . дои : 10.1038/35057062 . hdl : 2027.42/62798 . ПМИД   11237011 .
  10. ^ Ивикс З., Изсвак З., Минтер А., Хакетт П.Б. (май 1996 г.). «Идентификация функциональных доменов и эволюция Tc1-подобных мобильных элементов» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 93 (10): 5008–5013. Бибкод : 1996PNAS...93.5008I . дои : 10.1073/pnas.93.10.5008 . ПМК   39397 . ПМИД   8643520 .
  11. ^ Крейг Н.Л. (октябрь 1995 г.). «Единство в реакциях транспозиции». Наука . 270 (5234): 253–254. Бибкод : 1995Sci...270..253C . дои : 10.1126/science.270.5234.253 . ПМИД   7569973 . S2CID   29930180 .
  12. ^ Гертс А.М., Ян Й., Кларк К.Дж., Лю Г., Цуй З., Дюпюи А.Дж. и др. (июль 2003 г.). «Перенос генов в геномы клеток человека с помощью транспозонной системы спящей красавицы» . Молекулярная терапия . 8 (1): 108–117. дои : 10.1016/S1525-0016(03)00099-6 . ПМИД   12842434 .
  13. ^ Заид Х., Изсвак З., Валиско О., Ивикс З. (февраль 2004 г.). «Разработка векторов гиперактивных транспозонов спящей красавицы путем мутационного анализа» . Молекулярная терапия . 9 (2): 292–304. дои : 10.1016/j.ymthe.2003.11.024 . ПМИД   14759813 .
  14. ^ Янт С.Р., Пак Дж., Хуан Й., Миккельсен Дж.Г., Кей М.А. (октябрь 2004 г.). «Мутационный анализ N-концевого ДНК-связывающего домена транспозазы спящей красавицы: критические остатки для связывания ДНК и гиперактивности в клетках млекопитающих» . Молекулярная и клеточная биология . 24 (20): 9239–9247. дои : 10.1128/MCB.24.20.9239-9247.2004 . ПМК   517896 . ПМИД   15456893 .
  15. ^ Баус Дж., Лю Л., Хеггестад А.Д., Санс С., Флетчер Б.С. (декабрь 2005 г.). «Гиперактивные транспозазные мутанты транспозона Спящей красавицы» . Молекулярная терапия . 12 (6): 1148–1156. дои : 10.1016/j.ymthe.2005.06.484 . ПМИД   16150650 .
  16. ^ Jump up to: а б Матес Л., Чуа М.К., Белай Е., Джерчоу Б., Маной Н., Акоста-Санчес А. и др. (июнь 2009 г.). «Молекулярная эволюция новой гиперактивной транспозазы «Спящей красавицы» обеспечивает надежный стабильный перенос генов у позвоночных» (PDF) . Природная генетика . 41 (6): 753–761. дои : 10.1038/ng.343 . ПМИД   19412179 . S2CID   27373372 .
  17. ^ Грабундзия И., Ирганг М., Матеш Л., Белай Е., Матрай Дж., Гоголь-Деринг А. и др. (июнь 2010 г.). «Сравнительный анализ векторных систем мобильных элементов в клетках человека» . Молекулярная терапия . 18 (6): 1200–1209. дои : 10.1038/mt.2010.47 . ПМЦ   2889740 . ПМИД   20372108 .
  18. ^ Изсвак З., Харе Д., Бельке Дж., Хайнеманн У., Пластерк Р.Х., Ивикс З. (сентябрь 2002 г.). «Участие бифункционального парного ДНК-связывающего домена и транспозиционного энхансера в транспозиции Спящей красавицы» . Журнал биологической химии . 277 (37): 34581–34588. дои : 10.1074/jbc.M204001200 . ПМИД   12082109 .
  19. ^ Вэнс Т. « Спящая красавица названа молекулой года» . mdc-berlin.de . Проверено 10 мая 2011 г.
  20. ^ Jump up to: а б Цуй З., Гертс А.М., Лю Г., Кауфман К.Д., Хакетт П.Б. (май 2002 г.). «Структурно-функциональный анализ инвертированных концевых повторов транспозона спящей красавицы». Журнал молекулярной биологии . 318 (5): 1221–1235. дои : 10.1016/S0022-2836(02)00237-1 . ПМИД   12083513 .
  21. ^ Изсвак З., Ивикс З., Пластерк Р.Х. (сентябрь 2000 г.). «Спящая красавица, транспозонный вектор широкого спектра хозяев для генетической трансформации позвоночных». Журнал молекулярной биологии . 302 (1): 93–102. дои : 10.1006/jmbi.2000.4047 . ПМИД   10964563 .
  22. ^ Карлсон CM, Ларгаэспада DA (июль 2005 г.). «Инсерционный мутагенез у мышей: новые перспективы и инструменты». Обзоры природы. Генетика . 6 (7): 568–580. дои : 10.1038/nrg1638 . ПМИД   15995698 . S2CID   3194633 .
  23. ^ Дюпюи AJ (август 2010 г.). «Скрининг на основе транспозонов для обнаружения генов рака на моделях мышей» . Семинары по биологии рака . 20 (4): 261–268. doi : 10.1016/j.semcancer.2010.05.003 . ПМЦ   2940989 . ПМИД   20478384 .
  24. ^ Ивикс З., Изсвак З. (январь 2005 г.). «Происходит много всего: новые транспозонные инструменты для функциональной геномики позвоночных». Тенденции в генетике . 21 (1): 8–11. дои : 10.1016/j.tig.2004.11.008 . ПМИД   15680506 .
  25. ^ Джейкоб Х.Дж., Лазар Дж., Дуинелл М.Р., Морено С., Гертс А.М. (декабрь 2010 г.). «Нацеливание на гены у крыс: достижения и возможности» . Тенденции в генетике . 26 (12): 510–518. дои : 10.1016/j.tig.2010.08.006 . ПМК   2991520 . ПМИД   20869786 .
  26. ^ Изсвак З., Ивичс З. (февраль 2004 г.). «Транспозиция спящей красавицы: биология и применение молекулярной терапии» . Молекулярная терапия . 9 (2): 147–156. дои : 10.1016/j.ymthe.2003.11.009 . ПМИД   14759798 .
  27. ^ Хакетт П.Б., Эккер С.С., Ларгаэспада Д.А., МакИвор Р.С. (2005). «Генная терапия, опосредованная транспозонами Спящей красавицы, для длительной экспрессии». Невирусные векторы для генной терапии, второе издание: Часть 2 . Достижения генетики. Том. 54. стр. 189–232. дои : 10.1016/S0065-2660(05)54009-4 . ISBN  978-0-12-017654-0 . ПМИД   16096013 .
  28. ^ Аронович Э.Л., МакИвор Р.С., Хакетт П.Б. (апрель 2011 г.). «Транспозонная система «Спящей красавицы»: невирусный вектор для генной терапии» . Молекулярная генетика человека . 20 (R1): R14–R20. дои : 10.1093/hmg/ddr140 . ПМК   3095056 . ПМИД   21459777 .
  29. ^ Аронович Э.Л., Белл Дж.Б., Белур Л.Р., Гюнтер Р., Кониар Б., Эриксон Д.С. и др. (май 2007 г.). «Длительная экспрессия лизосомального фермента в печени мышей после доставки гена, опосредованной транспозоном Спящей красавицы: значение для невирусной генной терапии мукополисахаридозов» . Журнал генной медицины . 9 (5): 403–415. дои : 10.1002/jgm.1028 . ПМЦ   1868578 . ПМИД   17407189 .
  30. ^ Аронович Э.Л., Белл Дж.Б., Хан С.А., Белур Л.Р., Гюнтер Р., Кониар Б. и др. (июль 2009 г.). «Системная коррекция болезни накопления у мышей MPS I NOD/SCID с использованием транспозонной системы «Спящая красавица»» . Молекулярная терапия . 17 (7): 1136–1144. дои : 10.1038/mt.2009.87 . ПМЦ   2835207 . ПМИД   19384290 .
  31. ^ Хакетт П.Б., Ларгаэспада Д.А., Купер Л.Дж. (апрель 2010 г.). «Система транспозонов и транспозаз для применения у человека» . Молекулярная терапия . 18 (4): 674–683. дои : 10.1038/mt.2010.2 . ПМЦ   2862530 . ПМИД   20104209 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Sleeping_Beauty_transposon_system&oldid=1230453482"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 35304fa64f95aff57bb42e67979b4376__1719075480
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/35/76/35304fa64f95aff57bb42e67979b4376.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Sleeping Beauty transposon system - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)