Экстрагируемый ядерный антиген
Экстрагируемые ядерные антигены ( ЭНА ) представляют собой более 100 различных растворимых цитоплазматических и ядерных антигенов . Они известны как «экстрагируемые», поскольку их можно удалить из ядер клеток с помощью физиологического раствора и представляют собой шесть основных белков: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. Большинство ЭНА являются частью сплайсосом или нуклеосомных комплексов и представляют собой тип малого ядерного рибонуклеопротеина (мяРНПС). Расположение в ядре и ассоциация со сплайсосомами или нуклеосомами приводят к тому, что эти ENA связываются с дополнительными РНК и белками, такими как полимеразы. Такое качество ЭНА часто затрудняет очистку и количественную оценку их присутствия для клинического использования. [ 1 ]
Клинические применения
[ редактировать ]Панель экстрагируемых ядерных антигенов или панель ENA проверяет наличие в крови аутоантител, которые реагируют с белками в ядре клетки. Обычно это делается после положительного результата теста на антинуклеарные антитела ( АНА ) и при появлении симптомов аутоиммунного заболевания . ANA проверяет наличие или отсутствие аутоантител, а группа ENA оценивает, какие белки в ядре клетки распознаются аутоантителами. Панель ENA помогает диагностировать, различать и контролировать прогрессирование аутоиммунных заболеваний и выполняется с помощью простого забора крови. Хотя уровень аутоантител может меняться в течение жизни, если у человека появляются аутоантитела, они всегда будут у него. Аутоантитела к этим антигенам связаны с определенными заболеваниями соединительной ткани. Действительно, в 84,3% положительных анти-ЭНА проб были обнаружены также реагенты АНА. [ 1 ] Использование тестов на аутоантитела к ENA может служить дополнительной верификацией аутоиммунного заболевания, поскольку одного положительного теста на ANA недостаточно для постановки диагноза. Фактически, у здоровых пациентов можно обнаружить низкие уровни АНА. Применение тестирования на анти-ENA варьируется от исключения групп пациентов из определенных групп, заболеваний соединительной ткани и мониторинга активности заболевания. По сути, это позволяет клиницистам исключить определенные аутоиммунные нарушения, если определенные аутоантитела отсутствуют, и позволяет врачам отслеживать прогрессирование заболевания, если уровни этих аутоантител увеличиваются или уменьшаются. Для подтверждения наличия анти-ENA в настоящее время рекомендуется использовать два или более метода подтверждения анти-ENA, чтобы избежать ложноположительных результатов. Диагностика аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (ЗСТ) осуществляется путем анализа клинических симптомов и признаков, а также путем выявления аутоантител, направленных против ядерных антигенов. В статье 2002 года также делается попытка сравнить диагностические тесты, используемые в иммунологических лабораториях для измерения анти-ENA, и способы улучшения этого тестирования и отчетности. Двойная иммунодиффузия (ДИД) и контриммуноэлектрофорез (ЦИЭП), две формы методы на основе геля используются для получения информации о клинической значимости и роли этих антител у пациентов с ЗСТ. [ 2 ]
Техники
[ редактировать ]на гелевой основе
[ редактировать ]С момента открытия ЭНА их использовали в качестве диагностического инструмента при заболеваниях соединительной ткани. В ранних работах для выявления анти-ENA и их связи с заболеванием использовались два широко используемых метода на основе геля: двойная иммунодиффузия (DID). [ 3 ] и контриммуноэлектрофорез (CIEP). Оба этих метода требуют осаждения антигенов для получения достоверных результатов. В зависимости от исследуемого анти-ENA один метод может использоваться вместо другого. Например, антиген Scl-70 менее отрицательно заряжен, что может привести к тому, что антиген будет двигаться в том же направлении, что и антитело. Это приведет к тому, что комплекс антитело-антиген не будет осаждаться; приводящие к неверным результатам. [ 4 ] Кроме того, некоторые антитела против SS-B, обычно выявляемые при синдроме Шегрена, не могут быть обнаружены с помощью этого метода. Однако этот метод экономически целесообразен и специфичен для подтверждения диагноза. При просмотре данных этих методов на основе геля следует учитывать две чувствительности: чувствительность анализа и чувствительность к заболеванию. Чувствительность анализа — это способность распознавать наличие антител, тогда как чувствительность к заболеванию — это способность распознавать частоту, с которой антитела встречаются при заболевании. Из-за ограничений чувствительности методов на основе геля к заболеваниям были изучены другие методы, чтобы повысить чувствительность анализа без снижения чувствительности к заболеваниям. Например, у пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) только у 8–40% обнаруживаются анти-СМ при использовании гелевых анализов. Было показано, что CIEP более чувствителен, чем DID. [ 5 ]
Гемагглютинация, ИФА, Вестерн-блоттинг
[ редактировать ]Для идентификации ENA и связи их с конкретными заболеваниями можно использовать три дополнительных метода: пассивную гемагглютинацию, иммуноферментный анализ (ELISA) и вестерн-блоттинг (WB). Пассивная гемагглютинация была популярна в конце 1970-х годов, но с ее использованием было проведено очень мало исследований, и они ограничивались антителами против Sm и антирибонуклеарного белка (РНП). [ 5 ] Иммуноферментный анализ (ELISA) стал наиболее широко используемым методом тестирования на анти-ENA благодаря простоте выполнения, количественному результату и большому объему результатов. Хотя этот метод обладает повышенной чувствительностью анализа и эффективен для лабораторий с большим объемом работ, он обладает гораздо меньшей специфичностью к заболеванию, чем альтернативные методы. Это связано с невозможностью правильно и без больших затрат выделить ЭНА из-за их ассоциации с комплексами в ядре клетки. Еще одно беспокойство, связанное с методом ELISA, заключается в том, что у пациентов без СКВ были обнаружены антитела против Sm, что могло бы привести к чрезмерному исследованию, но могло быть связано с качеством используемого источника антигена. [ 5 ] Вестерн-блоттинг имеет существенный недостаток, заключающийся в том, что антитела, направленные против конформационных эпитопов, не могут быть обнаружены. Кроме того, могут возникать ложноположительные результаты, а специфичность заболевания ниже, чем при использовании других методов. Хотя каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, ELISA имеет наименее серьезные недостатки, связанные с возможностью ложноположительных результатов (которые менее опасны, чем ложноотрицательные результаты) и дороговизной. [ 5 ]
Многие лаборатории используют комбинацию обоих этих методов для повышения эффективности без ущерба для специфичности. Текущая рекомендация европейских консенсусных семинаров заключается в проверке положительных анти-ENA с помощью метода ELISA. Последует более специфический тест, такой как CIEP, и образцы будут признаны положительными. [ 6 ]
Шестью основными антигенами, используемыми в иммунологических лабораториях для обнаружения, являются Ro , La , Sm , RNP , Scl-70 и Jo1 . [ 7 ] которые проверяются методом двойной иммунодиффузии по Охтерлони и подтверждаются иммуноблоттингом . В тестах на антиядерные антитела эти антигены имеют крапчатый рисунок. [ 8 ]
Терминология
[ редактировать ]Первоначально ЭНА относились к белкам, обнаруженным в солевом экстракте клеточных ядер . [ 9 ] С тех пор компоненты были более четко идентифицированы и фактически включают множество цитоплазматических молекул. Однако неправильное название осталось. Эти белки тесно связаны с различными молекулами РНК и поэтому называются рибонуклеопротеинами , но используемая для них номенклатура часто является источником путаницы: Sm, Ro и La были названы по первым двум буквам фамилий пациентов, у которых они были впервые найден. Два белка, связанные с синдромом Шегрена, были независимо описаны как антигены A и B, но теперь известно, что они идентичны Ro и La соответственно, т.е. SS-A = Ro и SS-B = La.
Панельные тесты ENA (экстрагируемый ядерный антиген), тест на аутоантитела к белкам в ядре клетки. Термин «экстрагируемый» происходит от способности удалять аутоантитела из ядер с помощью физиологического раствора и обычных белков. Именно из-за метода идентификации этих образцов их также называют антителами к антигенам, экстрагированным физиологическим раствором. [ 9 ]
Вот этот
[ редактировать ]Анти-ENA — это группа антител, часто используемая для скрининга смешанного заболевания соединительной ткани (MCTD), синдрома Шегрена и системной красной волчанки , и обычно состоит из шести тестов: [ 10 ]
- анти-См (для СКВ)
- анти-РНП (для MCTD)
- анти-Ла/анти-СС-Б (для Шегрена)
- анти-Ро/анти-СС-А (для Шегрена)
- анти-Scl70 (от склеродермии)
- анти-Джо (от дерматомиозита)
Чувствительность и специфичность этих тестов зависят от типа используемого анализа и, следовательно, различаются в зависимости от лаборатории. Следующая таблица иллюстрирует чувствительность и специфичность антител ENA при обнаружении СКВ с помощью метода ELISA.
| Антитело (проверено с помощью ИФА) | Чувствительность (%) для СКВ | Специфичность (%) для СКВ |
|---|---|---|
| Анти-Ро (СС-А) | 61 | 80–93 |
| Анти-Ла (СС-Б) | 27–35 | 88–97 |
| Анти-См | 34–45 | 88–100 |
| Анти-РНП | 39–64 | 84–97 |
| Ссылка на все значения: [ 11 ] | ||
Кроме того, использование ENA-тестирования также использовалось для изучения заболеваний, связанных с пшеницей, таких как целиакия . В исследовании, проведенном в 2018 году, пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей, проверяли на наличие 10 антител против ENA.
- ССА (Румыния)
- SSB(Ла)
- РНП/См
- Потому что-1
- см
- СЦЛ-70
- хроматин
- Центромера
- Гистон
- РНК-полимераза III
У 73% пациентов с целиакией были обнаружены положительные антигистоновые тесты, и это было наиболее распространенным явлением, которое обычно связано с лекарственно-индуцированной красной волчанкой . Это предполагает высокую вероятность аутоиммунного заболевания у пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей. [ 12 ]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б Банхук, Фернанда Вейанд; Пахим, Бруна Корреа; Хорхе, Алекс Сандро; Менолли, Рафаэль Андраде (30 сентября 2018 г.). «Взаимосвязь между антителами против экстрагируемых ядерных антигенов, антинуклеарными антителами и аутоиммунными заболеваниями в государственной больнице Бразилии» . Аутоиммунные заболевания . 2018 : 1–8. дои : 10.1155/2018/9856910 . ПМК 6186355 . ПМИД 30364021 .
- ^ Фан, Три Джианг; Вонг, Ричард CW; Адельштейн, Стивен (2002). «Аутоантитела к экстрагируемым ядерным антигенам: повышение значимости обнаружения и интерпретации» . Клинико-диагностическая лаборатория иммунологии . 9 (1): 1–7. дои : 10.1128/CDLI.9.1.1-7.2002 . ПМК 119916 . ПМИД 11777822 .
- ^ «Аббекса - Антитела, белки, наборы ИФА» .
- ^ Банн, К.; Кведер, Т. (1996). «Контриммуноэлектрофорез и иммунодиффузия для обнаружения антител к растворимым клеточным антигенам». Ин ван Венрой, WJ; Майни, Р.Н. (ред.). Руководство по биологическим маркерам болезней . Спрингер Нидерланды. стр. 100-1 25–36. дои : 10.1007/978-94-011-1670-1_3 . ISBN 978-94-011-1670-1 .
- ^ Jump up to: а б с д Лок, Р.Дж.; Ансуорт, диджей (март 2001 г.). «Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам. Повлиял ли технологический сдвиг на клиническую интерпретацию?» . Журнал клинической патологии . 54 (3): 187–90. дои : 10.1136/jcp.54.3.187 . ПМЦ 1731369 . ПМИД 11253128 .
- ^ Яннаки, Э.Э.; Циуфас, АГ; Бахманн, М; Хантуми, Дж; Цикарис, В; Сакареллос-Дайциотис, М; Сакареллос, К; Мутсопулос, HM (1998). «Значение синтетических линейных аналогов эпитопа La/SSB для обнаружения аутоантител к La/SSB; специфичность, чувствительность и сравнение методов» . Клиническая и экспериментальная иммунология . 112 (1): 152–158. дои : 10.1046/j.1365-2249.1998.00558.x . ПМК 1904932 . ПМИД 9566804 .
- ^ Принц, ОН; Хогрефе, WR (1998). «Оценка линейного иммуноблота для обнаружения антител, распознающих экстрагируемые ядерные антигены» . Журнал клинического лабораторного анализа . 12 (5): 320–4. doi : 10.1002/(sici)1098-2825(1998)12:5<320::aid-jcla13>3.0.co;2-x . ПМК 6807698 . ПМИД 9773966 .
- ^ «Иммунопатология» .
- ^ Jump up to: а б «Панель экстрагируемых ядерных антигенных антител (ENA)» . Лабораторные тесты онлайн . 21 июня 2018 года . Проверено 10 апреля 2019 г.
- ^ Лист продукта теста ENA (QUANTA Lite). inovadx.com. URL: http://www.inovadx.com/Products/di_pdfs/708555/628555rEnglish.pdf ENA [ постоянная мертвая ссылка ] . Доступ: 5 ноября 2007 г.
- ^ Лок, Р; Ансворт, Д. (2001). «Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам. Повлиял ли технологический сдвиг на клиническую интерпретацию?» . Журнал клинической патологии . 54 (3): 187–190. дои : 10.1136/jcp.54.3.187 . ПМЦ 1731369 . ПМИД 11253128 .
- ^ Ян, Юаньюань; Кришна, Картик; Дешпанде, Паял; Ранганатан, Винод; Джаяраман, Васант; Ван, Тяньхао; Бэй, Канг; Кришнамурти, Хари (18 июня 2018 г.). «Высокая частота экстрагируемых ядерных аутоантител при заболеваниях, связанных с пшеницей» . Биомаркерная информация . 13 . дои : 10.1177/1177271918782893 . ПМК 6024268 . ПМИД 29977112 .
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Экстрагируемые + ядерные + антигены в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)