Аллофикоцианин
Аллофикоцианин («другой синий белок водорослей»; от греческого : ἄλλος (аллос) означает «другой», φύκος (фикос) означает «водоросль» и κυανός (кианос) означает «синий») представляет собой белок светособирающих фикобилипротеинов. из семейства , наряду с фикоцианином , фикоэритрином и фикоэритроцианином . Это дополнительный хлорофилла . пигмент Все фикобилипротеины водорастворимы и поэтому не могут существовать внутри мембраны, как каротиноиды , а агрегируются, образуя кластеры, которые прикрепляются к мембране и называются фикобилисомами . Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет (максимум 650 и 660 нм соответственно) и легко обнаруживается в цианобактериях (также называемых сине-зелеными водорослями ) и красных водорослях . Пигменты фикобилина обладают флуоресцентными свойствами, которые используются в наборах для иммуноанализа . В проточной цитометрии его часто называют APC. Для эффективного использования в таких приложениях, как FACS , высокопроизводительный скрининг (HTS) и микроскопия , APC должен быть химически сшит.
Структурные характеристики
[ редактировать ]Аллофикоцианин можно выделить из различных видов красных или сине-зеленых водорослей, каждый из которых дает несколько разные формы молекулы. Он состоит из двух разных субъединиц (α и β), каждая из которых имеет один хромофор фикоцианобилина (ПХБ). Структура субъединиц APC была определена как (αβ) 3 . Молекулярная масса АПК составляет 105 000 дальтон.
Спектральные характеристики
[ редактировать ]| Максимум поглощения | 652 нм |
| Дополнительный пик поглощения | 625 нм |
| Максимум выбросов | 657,5 нм |
| Стоксов сдвиг | 5,5 нм |
| Коэффициент вымирания | 700 000 М −1 см −1 |
| Квантовый выход | 0.68 |
| Яркость | 1,6 х 10 5 М −1 см −1 |
Сшитый APC
Как упоминалось выше, для того, чтобы APC можно было использовать в иммуноанализах, его сначала необходимо химически сшить, чтобы предотвратить его диссоциацию на составляющие его субъединицы в обычных физиологических буферах. [1] Обычный метод достижения этого заключается в деструктивном процессе, при котором обработанный тример АРС химически разрушается в 8М мочевине, а затем ему дают возможность повторно ассоциироваться в физиологическом буфере. [2] Можно использовать альтернативный метод, который сохраняет структурную целостность тримера APC и позволяет получить более яркий и стабильный конечный продукт. [3]
Приложения
[ редактировать ]Многие приложения и инструменты были разработаны специально для аллофикоцианина. Он обычно используется в иммуноанализах, таких как FACS , проточная цитометрия и высокопроизводительный скрининг, в качестве акцептора европия с помощью анализов переноса энергии с помощью резонансного флуоресцентного переноса энергии с временным разрешением (TR-FRET) .
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Папагеоргиу Г.К., Лагоянни Т. (сентябрь 1983 г.). «Влияние хаотропных электролитов на структуру и взаимодействие электронного возбуждения фикобилисом, сшитых глутаровым альдегидом и диимидоэфиром». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Биоэнергетика . 724 (3): 323–32. дои : 10.1016/0005-2728(83)90091-9 .
- ^ Йе С.В., Онг Л.Дж., Кларк Дж.Х., Глейзер А.Н. (январь 1987 г.). «Флуоресцентные свойства аллофикоцианина и сшитого тримера аллофикоцианина». Цитометрия . 8 (1): 91–5. дои : 10.1002/cyto.990080113 . ПМИД 3100257 .
- ^ патент США 7256050 , Морсман, Джон Питер; Мосс, Марк Уэсли и Оллнатт, ФК Томас, «Сшитый аллофикоцианин высокой флуоресцентной интенсивности», опубликовано 14 августа 2007 г., передано Columbia Biosciences Corp.