Лечение ВИЧ нуклеазой цинковых пальцев

Поскольку антиретровирусная терапия требует пожизненного режима лечения, исследования по поиску более эффективных методов лечения ВИЧ- инфекции. в настоящее время проводятся ^{[ 1 ]} Можно синтезировать нуклеотиды «цинковых пальцев» с компонентами «цинковых пальцев», которые избирательно (почти избирательно) связываются с определенными участками ДНК . Концептуально, нацеливание и редактирование могут быть сосредоточены на корецепторах клеток хозяина ВИЧ или на провирусной ДНК ВИЧ.

Клеточные корецепторы ВИЧ-хозяина

Также было замечено, что 20% населения европеоидной расы обладают мутацией, называемой CCR5-Δ32 (частота 0,0808 для гомозиготного аллеля), которая предотвращает попадание рецептора CCR5 белка хемокинового , который является основным средством проникновения вируса в клетку. экспрессируется на поверхности их CD4 ⁺ Т-клетки . ^{[ 2 ]}^{[ 3 ]}^{[ 4 ]}^{[ 5 ]}^{[ 6 ]} Лица, гомозиготные по этой мутации, невосприимчивы к штаммам ВИЧ, которые используют рецептор CCR5 для доступа к клетке, в то время как было обнаружено, что лица, гетерозиготные по этой мутации, снижают вирусную нагрузку в плазме и замедляют прогрессирование СПИДа. ^{[ 7 ]}^{[ 8 ]} Объединив эти факты, исследователи предложили новый метод лечения ВИЧ . Этот метод пытается вылечить инфекцию путем разрушения гена CCR5, например, путем введения мутации CCR5-Δ32 с использованием рекомбинантного аденовирусного вектора или принудительной репарации ДНК путем негомологичного соединения концов, что подвержено ошибкам и приводит к нефункциональному гену. Как следствие, это приводит к экспрессии нефункциональных корецепторов CCR5 на CD4. ⁺ Т-клетки, обеспечивающие иммунитет против инфекции. ^{[ 9 ]}^{[ 7 ]}^{[ 10 ]}^{[ 11 ]}

Нуклеазы с цинковыми пальцами , синтезированные для этого лечения, производятся путем объединения FokI рестрикции эндонуклеаз типа II с сконструированными цинковыми пальцами. ^{[ 9 ]}^{[ 12 ]} Количество цинковых пальцев, прикрепленных к эндонуклеазе, контролирует специфичность ZFN, поскольку они сконструированы так, чтобы преимущественно связываться с определенными последовательностями оснований в ДНК . Каждый ZFN состоит из нескольких цинковых пальцев и одного нуклеазы фермента . ^{[ 9 ]}

Проверено на ДНК ВИЧ

Недавно появилось уникальное применение технологии ZFN для лечения ВИЧ, целью которого является воздействие не на геном хозяина, а на провирусную ДНК ВИЧ для мутагенеза. ^{[ 13 ]} Авторы этой работы черпали вдохновение из врожденного защитного механизма против вирусов, инфицирующих бактерии, называемых бактериофагами, присутствующих среди бактерий, наделенных системами модификации рестрикции (RM). Эти бактерии секретируют фермент рестрикции (REase), который распознает и многократно расщепляет палиндромные последовательности внутри ксеногенных ДНК бактериофагов или просто фагов, пока они не отключатся. Дополнительная поддержка этого подхода заключается в том, что геном человека в значительной степени состоит из остатков ретровирусных геномов, которые были инактивированы несколькими механизмами, некоторые из которых действуют сходно с действием ZFN. Поэтому неудивительно, что первоначальная работа, приведшая к такому применению технологии ZFN, вращалась вокруг выделения и тестирования REase бактериального происхождения, нацеленной на ВИЧ/SIV, неспецифичность которых (из-за их непродолжительного распознавания) последовательности), к сожалению, сделали их токсичными для генома хозяина. Последняя потенциальная токсичность генома хозяина, вызванная необработанными REases, полученными из бактерий, ограничивала их применение. методы ex-vivo профилактики ВИЧ, а именно синтетические или живые микробициды. Однако впоследствии уникальная специфичность, обеспечиваемая ZFN, была быстро признана и использована, открыв путь к новой стратегии борьбы с ВИЧ in vivo (посредством целевого мутагенеза провирусной ДНК ВИЧ), которая аналогична тому, с помощью которой бактерии оснащены системами RM. сделать, чтобы отключить чужеродные ДНК поступающих фаговых геномов. Поскольку латентная провирусная ДНК ВИЧ, находящаяся в покоящихся клетках памяти CD4, образует основной барьер на пути ликвидации ВИЧ с помощью высокоактивной противовирусной терапии (ВААРТ), предполагается, что этот подход может предложить «функциональное лечение» ВИЧ . манипуляции со стволовыми или аутологичными предшественниками Т-клеток) и платформы для доставки in vivo . Также есть надежда, что при применении к людям, не инфицированным ВИЧ, эта стратегия может предложить геномную вакцину против. ВИЧ и другие вирусы. Аналогичная работа продолжается в отношении ВПЧ высокого риска (с целью обратить вспять неоплазию шейки матки). ^{[ 14 ]} а также при ВПГ-2 (с целью достижения полного излечения от генитального герпеса) ^{[ 15 ]}^{[ 16 ]}^{[ 17 ]}^{[ 18 ]}^{[ 19 ]}^{[ 20 ]}^{[ 21 ]}^{[ 22 ]}^{[ 23 ]}

Цинковая переплетка пальцев

Каталитический домен FokI должен димеризоваться, чтобы расщепить ДНК в целевом сайте, и требует присутствия двух соседних нуклеаз с цинковыми пальцами (см. Рисунок), которые независимо связываются с определенным кодоном в правильной ориентации и на правильном расстоянии. В результате два события связывания нуклеазы с двумя цинковыми пальцами обеспечивают специфическое нацеливание на ДНК. ^{[ 24 ]} Специфика редактирования генома важна для успешного применения нуклеазы цинковых пальцев. Последствие нецелевого расщепления может привести к снижению эффективности целевой модификации в дополнение к другим нежелательным изменениям. ^{[ 24 ]}

Точный состав ZFN, которые будут использоваться для лечения ВИЧ, до сих пор неизвестен. Однако связывание ZFN для изменения генной связи Zif268 было хорошо изучено и описано ниже, чтобы проиллюстрировать механизм, с помощью которого домен цинкового пальца ZFN связывается с ДНК. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

Аминоконец части альфа-спирали цинковых пальцев нацелен на основные бороздки ДНК спирали и связывается рядом с геном CCR5, позиционируя FokI в подходящем месте для расщепления ДНК. ^{[ 9 ]}^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

Цинковые пальцы представляют собой повторяющиеся структурные белковые мотивы с функцией распознавания ДНК, которые помещаются в основные бороздки ДНК. ^{[ 25 ]} Три цинковых пальца расположены полукругом или С-образно. ^{[ 26 ]} Каждый цинковый палец состоит из антипараллельных бета-листов и альфа-спирали , скрепленных ионом цинка и гидрофобными остатками. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

Атом цинка удерживается в тетраэдрической конформации за счет координации Cys3, Cys6, His19 и His23, а также расстояния связи цинк-сера 2,30 +/- 0,05 ангстрем и расстояния связи цинк-азот 2,0 +/- 0,05 ангстрем. ^{[ 26 ]}^{[ 27 ]}^{[ 28 ]}

Каждый цинковый палец имеет аргинин (arg), аминокислоту выступающую из альфа-спирали , которая образует водородную связь с азотом 7 и кислородом 6 гуанина ( гуа), расположенного на 3'-конце сайта связывания. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}^{[ 28 ]} Связь arg-gua стабилизируется аспарагиновой кислотой из 2-го остатка, который позиционирует длинную цепь аргинина посредством водородной связи взаимодействия солевого мостика . ^{[ 25 ]}^{[ 29 ]}

В остатке 3 2-го (т.е. среднего) цинкового пальца гистидин 49 образует водородную связь с копланарным гуанином в паре оснований 6. Укладка гистидина против тимина в паре оснований 5 ограничивает конформационную способность гистидина 49, что приводит к гистидин-гуанин повышенная специфичность водородной связи . ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

В 6-м остатке пальцы 1 и 3 содержат аргинин, отдающий пару заряженных водородных связей азоту 7 и кислороду 6 гуанина на 5'-конце, что усиливает последовательность распознавания сайтов цинковых пальцев. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

Контакты с остовом ДНК

Гистидин , координированный с атомом цинка, который также является седьмым остатком в альфа-спирали цинковых пальцев, координирует ион цинка через его Nε и водородные связи с кислородом фосфодиэфира через Nδ на первичной цепи ДНК. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}^{[ 29 ]}

Помимо гистидина , консервативный аргинин на второй бета-цепи цинковых пальцев вступает в контакт с фосфодиэфирным кислородом на цепи ДНК . ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}^{[ 29 ]}

Также серин 75 на третьем пальце водородной связи с фосфатом между парами оснований 7 и 8, являясь единственным контактом основной цепи со вторичной цепью ДНК. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}^{[ 29 ]}

Димеризация и расщепление нуклеазы

Было обнаружено, что FokI не обладает внутренней специфичностью в расщеплении ДНК и что домен распознавания цинковых пальцев придает селективность нуклеазам с цинковыми пальцами. ^{[ 9 ]}^{[ 12 ]}

Специфичность обеспечивается димеризацией , которая снижает вероятность расщепления за пределами сайта. Каждый набор цинковых пальцев специфичен для нуклеотидной последовательности по обе стороны от целевого гена, расстояние между компонентами нуклеазы составляет 5-7 пар оснований . ^{[ 9 ]}

Димеризация двух ZFN необходима для создания необходимого двухцепочечного разрыва в гене CCR5 , поскольку взаимодействие между ферментом FokI и ДНК слабое. ^{[ 11 ]} Этот разрыв устраняется естественными механизмами восстановления клетки, в частности, негомологичным соединением концов . ^{[ 11 ]}

Представляем мутацию CCR5

Внесение изменений в геном зависит от любого из двух естественных механизмов восстановления клетки: негомологичного соединения концов (NHEJ) и репарации, направленной на гомологию (HDR). ^{[ 11 ]} Восстановление посредством NHEJ происходит путем перевязки концов разорванных нитей и в случае возникновения ошибки может привести к небольшим вставкам и делециям. HDR, с другой стороны, использует гомологичную цепь ДНК для восстановления, а ген, использующий этот механизм восстановления и обеспечивающий желаемую нуклеотидную последовательность, позволяет вставлять или модифицировать ген. ^{[ 11 ]}

В отсутствие гомологичной последовательности нуклеотидных оснований, которая может быть использована механизмом гомологичной рекомбинации , основной путь репарации DSB у млекопитающих осуществляется через негомологичное соединение концов (NHEJ). ^{[ 30 ]} NHEJ , хотя и способен восстановить поврежденный ген, подвержен ошибкам. ^{[ 30 ]} Таким образом, DSB вводятся в ген до тех пор, пока не произойдет ошибка в его репарации, после чего ZFN больше не смогут связываться и димеризоваться , и мутация не завершится. ^{[ 30 ]} Чтобы ускорить этот процесс, можно ввести экзонуклеазы , которые переваривают концы нитей, образующихся в DSB. ^{[ 30 ]}

Ограничения

Увеличение количества цинковых пальцев увеличивает специфичность за счет увеличения количества пар оснований, с которыми может связываться ZFN. ^{[ 9 ]} Однако слишком большое количество цинковых пальцев может привести к нецелевому связыванию и, следовательно, к расщеплению за пределами площадки. ^{[ 9 ]} Это связано с повышенной вероятностью связывания цинковых пальцев с частями генома за пределами интересующего гена.

Текущие методы лечения ZFN сосредоточены на гене CCR5 не приводит к каким-либо известным побочным эффектам , поскольку изменение CCR5 . ^{[ 31 ]} Существуют штаммы ВИЧ, которые способны использовать CXCR4 для проникновения в клетку-хозяина, полностью минуя CCR5 . ^{[ 31 ]} Та же технология редактирования генов была применена к CXCR4 отдельно и в сочетании с CCR5. ^{[ 32 ]}^{[ 33 ]}

С этим экспериментальным лечением существует несколько проблем. Одна из проблем заключается в обеспечении того, чтобы желаемый механизм восстановления был тем, который используется для восстановления DSB после добавления гена. ^{[ 34 ]} Другая проблема, связанная с разрушением гена CCR5 , заключается в том, что CXCR4 -специфичные или двухтропные штаммы все еще могут получить доступ к клетке. ^{[ 34 ]} Этот метод позволяет предотвратить прогрессирование ВИЧ- инфекции.

Для использования ZFN в клинических условиях должны быть соблюдены следующие критерии:

i) Высокая специфичность связывания ДНК – коррелирует с лучшей эффективностью и меньшей токсичностью ZFN. Разработанные ZFN учитывают позиционные и контекстно-зависимые эффекты цинковых пальцев для повышения специфичности. ^{[ 35 ]}

ii) Включить аллостерическую активацию FokI . после связывания с ДНК, чтобы он производил только необходимый DSB ^{[ 35 ]}

iii) Чтобы доставить в клетку две разные субъединицы нуклеазы с цинковыми пальцами и донорскую ДНК, используемые векторы необходимо усовершенствовать, чтобы снизить риск мутагенеза. ^{[ 35 ]} К ним относятся аденоассоциированные вирусные векторы, лентивирусные векторы с дефицитом интегразы и векторы аденовируса 5 типа. ^{[ 35 ]}

iv) Временная экспрессия ZFN предпочтительнее постоянной экспрессии этих белков, чтобы избежать «нецелевых» эффектов. ^{[ 35 ]}

v) Во время нацеливания на ген генотоксичность, связанная с высокой экспрессией ZFN, может привести к апоптозу клеток и, следовательно, должна быть тщательно проверена с помощью анализов трансформации in vitro и in vivo . ^{[ 35 ]}

Назначение лечения

Клетки, в которых индуцируются мутации ex vivo, отфильтровываются из лимфоцитов путем афереза с получением аналогичного лентивирусного сконструированного CD4. ⁺ Т-клетки . ^{[ 36 ]} Их повторно вводят в организм в виде разовой дозы 1 х 10. ¹⁰ генно-модифицированный аналог CD4 ⁺ Т-клетки. ^{[ 36 ]} Вирусный вектор используется для доставки ZFN, вызывающих желаемую мутацию, в клетки. Условия, способствующие этому процессу, тщательно контролируются, обеспечивая производство CCR5 штамма ВИЧ -резистентных Т-клеток . ^{[ 37 ]}

Берлинский пациент

Тимоти Рэй Браун , перенесший в 2007 году трансплантацию костного мозга для лечения лейкемии , одновременно заразился ВИЧ . ^{[ 38 ]} Вскоре после операции уровень ВИЧ упал до неопределяемого уровня. ^{[ 38 ]} Это результат того, что донор костного мозга гомозиготен по мутации CCR5-Δ32 . ^{[ 38 ]} устойчивость к ВИЧ , что в конечном итоге привело к почти полному исчезновению частиц ВИЧ в его организме. Эта новая мутация обеспечила реципиенту ^{[ 38 ]} Спустя почти два года без антиретровирусной терапии ВИЧ по-прежнему не обнаруживался ни в одной из его тканей. ^{[ 38 ]}^{[ 39 ]} Хотя этот метод оказался эффективным в снижении уровня инфекции, риски, связанные с трансплантацией костного мозга , перевешивают его потенциальную ценность в качестве лечения ВИЧ. ^{[ 3 ]}

Ссылки

^ Дикс, С.Г.; МакКьюн, Дж. М. (2010). «Можно ли вылечить ВИЧ с помощью терапии стволовыми клетками?». Природная биотехнология . 28 (8): 807–810. дои : 10.1038/nbt0810-807 . ПМИД 20697404 . S2CID 20312608 .
^ Алхатиб, Г (2009). «Биология CCR5 и CXCR4» . Современное мнение о ВИЧ и СПИДе . 4 (2): 96–103. doi : 10.1097/coh.0b013e328324bbec . ПМЦ 2718543 . ПМИД 19339947 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Хюттер, Г.; Новак, Д.; Мосснер, М.; Ганепола, С.; Мюсиг, А.; Аллерс, К.; Тиль, Э. (2009). «Долгосрочный контроль ВИЧ с помощью трансплантации стволовых клеток CCR5 Delta32/Delta32» . Медицинский журнал Новой Англии . 360 (7): 692–698. дои : 10.1056/nejmoa0802905 . ПМИД 19213682 . S2CID 14905671 .
^ Кэрролл, Д. (2008). «Прогресс и перспективы: нуклеазы цинковых пальцев как агенты генной терапии» . Генная терапия . 15 (22): 1463–1468. дои : 10.1038/gt.2008.145 . ПМЦ 2747807 . ПМИД 18784746 .
^ Перес, Э.Э.; Ван, Дж.; Миллер, Дж. К.; Жувено, Ю.; Ким, Калифорния; Лю, О.; Июнь, Швейцария (2008). «Установление устойчивости к ВИЧ-1 в CD4 + Т-клетках путем редактирования генома с использованием нуклеаз с цинковыми пальцами» . Природная биотехнология . 26 (7): 808–816. дои : 10.1038/nbt1410 . ПМЦ 3422503 . ПМИД 18587387 .
^ Чунг, Дж.; Росси, Джей-Джей; Юнг, У. (2011). «Современный прогресс и проблемы генной терапии ВИЧ» . Будущая вирусология . 6 (11): 1319–1328. дои : 10.2217/fvl.11.113 . ПМК 3383045 . ПМИД 22754586 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Лай, Ю. Подходы к лечению ВИЧ-инфекции с использованием генов гемопоэтических стволовых клеток, нацеленных на CCR5: текущий прогресс и будущие перспективы. Текущие исследования и терапия стволовыми клетками , 2012; 7 (4), стр. 310-317.
^ Де Сильва, Э., Штумпф, Майкл П.Х. (2004). «ВИЧ и аллель устойчивости CCR5-D32» . Письма FEMS по микробиологии . 241 (1): 1–12. дои : 10.1016/j.femsle.2004.09.040 . ПМИД 15556703 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час Кэрролл, Д. (2011). «Геномная инженерия с помощью нуклеаз с цинковыми пальцами» . Генетика . 188 (4): 773–782. дои : 10.1534/genetics.111.131433 . ПМК 3176093 . ПМИД 21828278 .
^ Дюран, Кристина. М. Силициано, Роберт Ф. (2014). «Двойные нуклеазы цинковых пальцев блокируют ВИЧ-инфекцию» . Кровь . 123 (1): 636–646. дои : 10.1182/blood-2013-11-535542 . ПМИД 24385492 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и Урнов, ФД; Ребар, Э.Дж.; Холмс, MC; Чжан, HS; Грегори, PD (2010). «Редактирование генома с помощью модифицированных нуклеаз с цинковыми пальцами». Обзоры природы Генетика . 11 (9): 636–646. дои : 10.1038/nrg2842 . ПМИД 20717154 . S2CID 205484701 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Урнов, ФД; Миллер, Дж. К.; Ли; Босежур; Рок, Дж. М.; Август, С.; Холмс, MC (2005). «Высокоэффективная эндогенная коррекция генов человека с использованием разработанных нуклеаз с цинковыми пальцами». Природа . 435 (7042): 646–651. Бибкод : 2005Natur.435..646U . дои : 10.1038/nature03556 . ПМИД 15806097 . S2CID 4390010 .
^ Вайенгера, М. «Провирусные нуклеазы цинковых пальцев, специфичные для всего генома ВИЧ, и специфичные для пол-гена нуклеазы цинковых пальцев: возможность использования для таргетной генной терапии ВИЧ. Модель Theor Biol Med , 2011; 8, стр. 26.
^ Вайенгера, М. Массивы цинковых пальцев, связывающие геномную ДНК вируса папилломы человека типов 16 и 18: предшественники генной терапии для обращения in-situ ассоциированной неоплазии шейки матки. Модель Theor Biol Med, (2011), 9, стр. 30.
^ Вайенгера, М. Идентичность нуклеаз с цинковыми пальцами, специфичных к геномной ДНК вируса простого герпеса типа II: новые предшественники вакцины / терапии ВПГ-2. Модель Theor Biol Med, (2011), 8, стр. 23.
^ Вайенгера, М. (2003). «ВИЧ и генная терапия: предлагаемая [ферментативная] модель RM для генной терапии против ВИЧ». Макерере Мед Дж . 38 : 28–30.
^ Вайенгера, М; Каджумбула, Х; Бяругаба, Вт (2007). «Частота и картирование сайтов расщепления последовательностей генов ВИЧ-1 / SIVcpz, ВИЧ-2 / SIVsmm и других SIV различными ферментами рестрикции бактерий: предшественники нового продукта, ингибирующего ВИЧ». Афр Дж. Биотехнологии . 6 (10): 1225–1232.
^ Вайенгера М., Каджумбула Х., Бьяругаба В.: Идентификация эндонуклеазы рестрикции с потенциальной способностью расщеплять геном HSV-2: присущий потенциал биосинтетических и живых микробицидов. Теория Биол Мед Модель. 2008, 5:18.
^ Вайенгера, М. (2008). «Нарезка генов перед интеграцией (PRINT-GSX) как альтернативный или дополнительный модем генной терапии к РНК-интерференции». J Appl Biol Sci . 1 (2): 56–63.
^ Вайенгера М.: Перенаправление первичного проникновения и репликации ВИЧ на вагинальные комменсальные лактобактерии, экспрессирующие нуклеиновые ферментативные пептиды RM с мощной активностью при расщеплении провирусной ДНК, в качестве новой стратегии живого микробицида ВИЧ. Микробицид – Нью-Дели, Индия, 2008 г. Abs-10.
^ Вайенгера М.: Подготовка к доклиническому исследованию фазы 1 VRX-SMR: лентивирусный вектор, трансдуцированный ферментами рестрикции, расщепляющими провирусную ДНК ВИЧ, в качестве терапевтической вакцины: возможности и проблемы. Конгресс по вакцинам – Амстердам, Нидерланды, 2007 г., :24OR.
^ Wayengera M: xREPLAB: рекомбинантный штамм лактобактерий, продуцирующий ферменты рестрикции с мощной активностью против провирусной ДНК ВИЧ, в качестве стратегии живого микробицида. Вакцина против СПИДа. Вашингтон, Сиэтл, 2007 г.: P05-01.
^ Вайенгера, М. (2007). «PREX-1979: Моделирование первого в истории прототипа микробицидов 5-го поколения для профилактики ВИЧ-инфекции среди женщин из группы высокого риска». Афр Дж. Биотехнологии . 6 (10): 1221–1224.
^ Перейти обратно: ^а ^б Урнов, Ф.Д., Ребар, Э.Дж., Холмс, MC, Чжан, Х.С., и Грегори, П.Д. (2010). «Редактирование генома с помощью модифицированных нуклеаз цинковых пальцев». Обзоры природы Генетика . 11 (9): 636–646. дои : 10.1038/nrg2842 . ПМИД 20717154 . S2CID 205484701 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к Павлетич, Н.П.; Пабо, Колорадо (1991). «Распознавание цинкового пальца и ДНК: кристаллическая структура комплекса Zif268-ДНК при 2,1 А». Наука . 252 (5007): 809–817. Бибкод : 1991Sci...252..809P . дои : 10.1126/science.2028256 . ПМИД 2028256 . S2CID 38000717 .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к Клюг, А (2005). «Открытие цинковых пальцев и их разработка для практического применения в регуляции генов» . Труды Японской академии, серия B. 81 (4): 87–102. Бибкод : 2005PJAB...81...87K . дои : 10.2183/pjab.81.87 .
^ Франкель, AD; Берг, Дж. М.; Пабо, Колорадо (1987). «Металлозависимое сворачивание одного цинкового пальца из фактора транскрипции IIIA» . Труды Национальной академии наук . 84 (14): 4841–4845. Бибкод : 1987PNAS...84.4841F . дои : 10.1073/pnas.84.14.4841 . ПМК 305201 . ПМИД 3474629 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Ли, MS; Гипперт, врач общей практики; Соман, К.В.; Кейс, Д.А.; Райт, ЧП (1989). «Трехмерная структура раствора одного ДНК-связывающего домена с цинковым пальцем». Наука . 245 (4918): 635–637. Бибкод : 1989Sci...245..635L . дои : 10.1126/science.2503871 . ПМИД 2503871 .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Клюг, А.; Швабе, JW (1995). «Белковые мотивы 5. Цинковые пальцы» . Журнал ФАСЭБ . 9 (8): 597–604. дои : 10.1096/fasebj.9.8.7768350 . PMID 7768350 . S2CID 24135293 .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Стоун, Д.; Кием, HP; Джером, КР (2013). «Направленное разрушение генов для лечения ВИЧ» . Curr Opin ВИЧ СПИД . 8 (3): 217–23. дои : 10.1097/COH.0b013e32835f736c . ПМЦ 4226633 . ПМИД 23478911 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Коакли, Э.; Петропулос, CJ; Уиткомб, Дж. М. (2005). «Оценка использования корецептора ch-vbгемокина при ВИЧ». Курс. Мнение. Заразить. Дис . 18 (1): 9–15. дои : 10.1097/00001432-200502000-00003 . ПМИД 15647694 . S2CID 30923492 .
^ Вилен, CB; Ван, Дж.; Тилтон, Джей Си; и др. (2011). «Инженерия ВИЧ-резистентных CD4+ Т-клеток человека с помощью CXCR4-специфичных нуклеаз с цинковыми пальцами» . ПЛОС Патогены . 7 (4): е1002020. doi : 10.1371/journal.ppat.1002020 . ПМК 3077364 . ПМИД 21533216 .
^ Дидигу, Калифорния; Вилен, CB; Ван, Дж. (2013). «Одновременное редактирование нуклеазой цинковых пальцев корецепторов ВИЧ ccr5 и cxcr4 защищает CD4+ Т-клетки от инфекции ВИЧ-1» . Кровь . 123 (1): 61–69. дои : 10.1182/blood-2013-08-521229 . ПМЦ 3879906 . ПМИД 24162716 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Бартон, КМ; Берч, Б.Д.; Сориано-Сарабия, Северная Каролина; Марголис, ДМ (2013). «Перспективы лечения латентной ВИЧ» . Клиническая фармакология и терапия . 93 (1): 46–56. дои : 10.1038/clpt.2012.202 . ПМЦ 3942883 . ПМИД 23212106 .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Катомен Т. и Йонг Дж.К. Нуклеазы с цинковыми пальцами: появление следующего поколения. Молекулярная терапия, (2008) 16(7), стр. 1200-1207.
^ Перейти обратно: ^а ^б Левин, БЛ; Юмо, LM; Бойер, Дж.; МакГрегор, РР; Ребелло, Т.; Лу, Х.; Июнь, Швейцария (2006). «Перенос генов у человека с использованием условно реплицирующегося лентивирусного вектора» . Труды Национальной академии наук . 103 (46): 17372–17377. Бибкод : 2006PNAS..10317372L . дои : 10.1073/pnas.0608138103 . ПМК 1635018 . ПМИД 17090675 .
^ Варела-Роэна, А.; Карпенито, К.; Перес, Э.Э.; Ричардсон, М.; Парри, Р.В.; Милон, М.; Райли, JL (2008). «Генная инженерия Т-клеток для адоптивной иммунотерапии» . Иммунологические исследования . 42 (1–3): 166–181. дои : 10.1007/s12026-008-8057-6 . ПМЦ 2699549 . ПМИД 18841331 .
^ Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и Розенберг Т. «Человек, у которого был ВИЧ, а теперь нет» . Журнал Нью-Йорк. Проверено в январе 2013 г.
^ Хюттер Г., Ганепола С. (2011). «Ликвидация ВИЧ путем трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с дефицитом CCR5» . Научный мировой журнал . 11 : 1068–1076. дои : 10.1100/tsw.2011.102 . ПМК 5720062 . ПМИД 21552772 .

[1] Дикс, С.Г.; МакКьюн, Дж. М. (2010). «Можно ли вылечить ВИЧ с помощью терапии стволовыми клетками?». Природная биотехнология . 28 (8): 807–810. дои : 10.1038/nbt0810-807 . ПМИД 20697404 . S2CID 20312608 .

[2] Алхатиб, Г (2009). «Биология CCR5 и CXCR4» . Современное мнение о ВИЧ и СПИДе . 4 (2): 96–103. doi : 10.1097/coh.0b013e328324bbec . ПМЦ 2718543 . ПМИД 19339947 .

[stemcelltransplant-3] Перейти обратно: ^а ^б Хюттер, Г.; Новак, Д.; Мосснер, М.; Ганепола, С.; Мюсиг, А.; Аллерс, К.; Тиль, Э. (2009). «Долгосрочный контроль ВИЧ с помощью трансплантации стволовых клеток CCR5 Delta32/Delta32» . Медицинский журнал Новой Англии . 360 (7): 692–698. дои : 10.1056/nejmoa0802905 . ПМИД 19213682 . S2CID 14905671 .

[Prospectsprogress-4] Кэрролл, Д. (2008). «Прогресс и перспективы: нуклеазы цинковых пальцев как агенты генной терапии» . Генная терапия . 15 (22): 1463–1468. дои : 10.1038/gt.2008.145 . ПМЦ 2747807 . ПМИД 18784746 .

[perezhiv-5] Перес, Э.Э.; Ван, Дж.; Миллер, Дж. К.; Жувено, Ю.; Ким, Калифорния; Лю, О.; Июнь, Швейцария (2008). «Установление устойчивости к ВИЧ-1 в CD4 + Т-клетках путем редактирования генома с использованием нуклеаз с цинковыми пальцами» . Природная биотехнология . 26 (7): 808–816. дои : 10.1038/nbt1410 . ПМЦ 3422503 . ПМИД 18587387 .

[HIVgenetherapy-6] Чунг, Дж.; Росси, Джей-Джей; Юнг, У. (2011). «Современный прогресс и проблемы генной терапии ВИЧ» . Будущая вирусология . 6 (11): 1319–1328. дои : 10.2217/fvl.11.113 . ПМК 3383045 . ПМИД 22754586 .

[hematopoietic-7] Перейти обратно: ^а ^б Лай, Ю. Подходы к лечению ВИЧ-инфекции с использованием генов гемопоэтических стволовых клеток, нацеленных на CCR5: текущий прогресс и будущие перспективы. Текущие исследования и терапия стволовыми клетками , 2012; 7 (4), стр. 310-317.

[Durand-8] Де Сильва, Э., Штумпф, Майкл П.Х. (2004). «ВИЧ и аллель устойчивости CCR5-D32» . Письма FEMS по микробиологии . 241 (1): 1–12. дои : 10.1016/j.femsle.2004.09.040 . ПМИД 15556703 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[genomeengineering-9] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час Кэрролл, Д. (2011). «Геномная инженерия с помощью нуклеаз с цинковыми пальцами» . Генетика . 188 (4): 773–782. дои : 10.1534/genetics.111.131433 . ПМК 3176093 . ПМИД 21828278 .

[DurandC-10] Дюран, Кристина. М. Силициано, Роберт Ф. (2014). «Двойные нуклеазы цинковых пальцев блокируют ВИЧ-инфекцию» . Кровь . 123 (1): 636–646. дои : 10.1182/blood-2013-11-535542 . ПМИД 24385492 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[genomeediting-11] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и Урнов, ФД; Ребар, Э.Дж.; Холмс, MC; Чжан, HS; Грегори, PD (2010). «Редактирование генома с помощью модифицированных нуклеаз с цинковыми пальцами». Обзоры природы Генетика . 11 (9): 636–646. дои : 10.1038/nrg2842 . ПМИД 20717154 . S2CID 205484701 .

[highlyefficient-12] Перейти обратно: ^а ^б Урнов, ФД; Миллер, Дж. К.; Ли; Босежур; Рок, Дж. М.; Август, С.; Холмс, MC (2005). «Высокоэффективная эндогенная коррекция генов человека с использованием разработанных нуклеаз с цинковыми пальцами». Природа . 435 (7042): 646–651. Бибкод : 2005Natur.435..646U . дои : 10.1038/nature03556 . ПМИД 15806097 . S2CID 4390010 .

[13] Вайенгера, М. «Провирусные нуклеазы цинковых пальцев, специфичные для всего генома ВИЧ, и специфичные для пол-гена нуклеазы цинковых пальцев: возможность использования для таргетной генной терапии ВИЧ. Модель Theor Biol Med , 2011; 8, стр. 26.

[14] Вайенгера, М. Массивы цинковых пальцев, связывающие геномную ДНК вируса папилломы человека типов 16 и 18: предшественники генной терапии для обращения in-situ ассоциированной неоплазии шейки матки. Модель Theor Biol Med, (2011), 9, стр. 30.

[15] Вайенгера, М. Идентичность нуклеаз с цинковыми пальцами, специфичных к геномной ДНК вируса простого герпеса типа II: новые предшественники вакцины / терапии ВПГ-2. Модель Theor Biol Med, (2011), 8, стр. 23.

[16] Вайенгера, М. (2003). «ВИЧ и генная терапия: предлагаемая [ферментативная] модель RM для генной терапии против ВИЧ». Макерере Мед Дж . 38 : 28–30.

[17] Вайенгера, М; Каджумбула, Х; Бяругаба, Вт (2007). «Частота и картирование сайтов расщепления последовательностей генов ВИЧ-1 / SIVcpz, ВИЧ-2 / SIVsmm и других SIV различными ферментами рестрикции бактерий: предшественники нового продукта, ингибирующего ВИЧ». Афр Дж. Биотехнологии . 6 (10): 1225–1232.

[18] Вайенгера М., Каджумбула Х., Бьяругаба В.: Идентификация эндонуклеазы рестрикции с потенциальной способностью расщеплять геном HSV-2: присущий потенциал биосинтетических и живых микробицидов. Теория Биол Мед Модель. 2008, 5:18.

[19] Вайенгера, М. (2008). «Нарезка генов перед интеграцией (PRINT-GSX) как альтернативный или дополнительный модем генной терапии к РНК-интерференции». J Appl Biol Sci . 1 (2): 56–63.

[20] Вайенгера М.: Перенаправление первичного проникновения и репликации ВИЧ на вагинальные комменсальные лактобактерии, экспрессирующие нуклеиновые ферментативные пептиды RM с мощной активностью при расщеплении провирусной ДНК, в качестве новой стратегии живого микробицида ВИЧ. Микробицид – Нью-Дели, Индия, 2008 г. Abs-10.

[21] Вайенгера М.: Подготовка к доклиническому исследованию фазы 1 VRX-SMR: лентивирусный вектор, трансдуцированный ферментами рестрикции, расщепляющими провирусную ДНК ВИЧ, в качестве терапевтической вакцины: возможности и проблемы. Конгресс по вакцинам – Амстердам, Нидерланды, 2007 г., :24OR.

[22] Wayengera M: xREPLAB: рекомбинантный штамм лактобактерий, продуцирующий ферменты рестрикции с мощной активностью против провирусной ДНК ВИЧ, в качестве стратегии живого микробицида. Вакцина против СПИДа. Вашингтон, Сиэтл, 2007 г.: P05-01.

[23] Вайенгера, М. (2007). «PREX-1979: Моделирование первого в истории прототипа микробицидов 5-го поколения для профилактики ВИЧ-инфекции среди женщин из группы высокого риска». Афр Дж. Биотехнологии . 6 (10): 1221–1224.

[Urnov-24] Перейти обратно: ^а ^б Урнов, Ф.Д., Ребар, Э.Дж., Холмс, MC, Чжан, Х.С., и Грегори, П.Д. (2010). «Редактирование генома с помощью модифицированных нуклеаз цинковых пальцев». Обзоры природы Генетика . 11 (9): 636–646. дои : 10.1038/nrg2842 . ПМИД 20717154 . S2CID 205484701 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[zincfingerrecognition-25] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к Павлетич, Н.П.; Пабо, Колорадо (1991). «Распознавание цинкового пальца и ДНК: кристаллическая структура комплекса Zif268-ДНК при 2,1 А». Наука . 252 (5007): 809–817. Бибкод : 1991Sci...252..809P . дои : 10.1126/science.2028256 . ПМИД 2028256 . S2CID 38000717 .

[aaronklug-26] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я ^дж ^к Клюг, А (2005). «Открытие цинковых пальцев и их разработка для практического применения в регуляции генов» . Труды Японской академии, серия B. 81 (4): 87–102. Бибкод : 2005PJAB...81...87K . дои : 10.2183/pjab.81.87 .

[27] Франкель, AD; Берг, Дж. М.; Пабо, Колорадо (1987). «Металлозависимое сворачивание одного цинкового пальца из фактора транскрипции IIIA» . Труды Национальной академии наук . 84 (14): 4841–4845. Бибкод : 1987PNAS...84.4841F . дои : 10.1073/pnas.84.14.4841 . ПМК 305201 . ПМИД 3474629 .

[threedimensionalstructure-28] Перейти обратно: ^а ^б Ли, MS; Гипперт, врач общей практики; Соман, К.В.; Кейс, Д.А.; Райт, ЧП (1989). «Трехмерная структура раствора одного ДНК-связывающего домена с цинковым пальцем». Наука . 245 (4918): 635–637. Бибкод : 1989Sci...245..635L . дои : 10.1126/science.2503871 . ПМИД 2503871 .

[proteinmotif-29] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Клюг, А.; Швабе, JW (1995). «Белковые мотивы 5. Цинковые пальцы» . Журнал ФАСЭБ . 9 (8): 597–604. дои : 10.1096/fasebj.9.8.7768350 . PMID 7768350 . S2CID 24135293 .

[targetedgenedisruption-30] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д Стоун, Д.; Кием, HP; Джером, КР (2013). «Направленное разрушение генов для лечения ВИЧ» . Curr Opin ВИЧ СПИД . 8 (3): 217–23. дои : 10.1097/COH.0b013e32835f736c . ПМЦ 4226633 . ПМИД 23478911 .

[coakley-31] Перейти обратно: ^а ^б Коакли, Э.; Петропулос, CJ; Уиткомб, Дж. М. (2005). «Оценка использования корецептора ch-vbгемокина при ВИЧ». Курс. Мнение. Заразить. Дис . 18 (1): 9–15. дои : 10.1097/00001432-200502000-00003 . ПМИД 15647694 . S2CID 30923492 .

[32] Вилен, CB; Ван, Дж.; Тилтон, Джей Си; и др. (2011). «Инженерия ВИЧ-резистентных CD4+ Т-клеток человека с помощью CXCR4-специфичных нуклеаз с цинковыми пальцами» . ПЛОС Патогены . 7 (4): е1002020. doi : 10.1371/journal.ppat.1002020 . ПМК 3077364 . ПМИД 21533216 .

[33] Дидигу, Калифорния; Вилен, CB; Ван, Дж. (2013). «Одновременное редактирование нуклеазой цинковых пальцев корецепторов ВИЧ ccr5 и cxcr4 защищает CD4+ Т-клетки от инфекции ВИЧ-1» . Кровь . 123 (1): 61–69. дои : 10.1182/blood-2013-08-521229 . ПМЦ 3879906 . ПМИД 24162716 .

[treatmentofhiv-34] Перейти обратно: ^а ^б Бартон, КМ; Берч, Б.Д.; Сориано-Сарабия, Северная Каролина; Марголис, ДМ (2013). «Перспективы лечения латентной ВИЧ» . Клиническая фармакология и терапия . 93 (1): 46–56. дои : 10.1038/clpt.2012.202 . ПМЦ 3942883 . ПМИД 23212106 .

[zincnextgeneration-35] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Катомен Т. и Йонг Дж.К. Нуклеазы с цинковыми пальцами: появление следующего поколения. Молекулярная терапия, (2008) 16(7), стр. 1200-1207.

[genetransfer-36] Перейти обратно: ^а ^б Левин, БЛ; Юмо, LM; Бойер, Дж.; МакГрегор, РР; Ребелло, Т.; Лу, Х.; Июнь, Швейцария (2006). «Перенос генов у человека с использованием условно реплицирующегося лентивирусного вектора» . Труды Национальной академии наук . 103 (46): 17372–17377. Бибкод : 2006PNAS..10317372L . дои : 10.1073/pnas.0608138103 . ПМК 1635018 . ПМИД 17090675 .

[37] Варела-Роэна, А.; Карпенито, К.; Перес, Э.Э.; Ричардсон, М.; Парри, Р.В.; Милон, М.; Райли, JL (2008). «Генная инженерия Т-клеток для адоптивной иммунотерапии» . Иммунологические исследования . 42 (1–3): 166–181. дои : 10.1007/s12026-008-8057-6 . ПМЦ 2699549 . ПМИД 18841331 .

[berlinpatient-38] Перейти обратно: ^а ^б ^с ^д ^и Розенберг Т. «Человек, у которого был ВИЧ, а теперь нет» . Журнал Нью-Йорк. Проверено в январе 2013 г.

[39] Хюттер Г., Ганепола С. (2011). «Ликвидация ВИЧ путем трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с дефицитом CCR5» . Научный мировой журнал . 11 : 1068–1076. дои : 10.1100/tsw.2011.102 . ПМК 5720062 . ПМИД 21552772 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 23 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[ 27 ]

[ 28 ]

[ 29 ]

[ 30 ]

[ 31 ]

[ 32 ]

[ 33 ]

[ 34 ]

[ 35 ]

[ 36 ]

[ 37 ]

[ 38 ]

[ 39 ]