✖


Jump to content

Конструктивная нейтральная эволюция

Конструктивная нейтральная эволюция (CNE) — это теория, которая пытается объяснить, как сложные системы могут развиваться посредством нейтральных переходов и распространяться в популяции посредством случайной фиксации ( генетического дрейфа ). [1] Конструктивная нейтральная эволюция является конкурентом как адаптационистских объяснений возникновения сложных признаков, так и гипотез, утверждающих, что сложный признак возник как ответ на вредное развитие организма. [2] Конструктивная нейтральная эволюция часто приводит к необратимой или «неизлечимой» сложности. [3] и производит системы, которые вместо того, чтобы быть точно адаптированными для выполнения задачи, представляют собой чрезмерную сложность, которую описывают такими терминами, как «безудержная бюрократия» или даже « машина Руба Голдберга ». [4]

Основы концепции CNE были заложены в двух статьях 1990-х годов, хотя впервые они были явно предложены Арлином Штольцфусом в 1999 году. [1] [2] [5] Первые предположения о роли CNE касались эволюционного происхождения сложных макромолекулярных механизмов, таких как сплайсосомы , механизмы редактирования РНК , дополнительные рибосомальные белки, шапероны и многое другое. [4] [6] [7] С тех пор и в качестве нового направления исследований молекулярной эволюции , [8] CNE применялся к более широким аспектам биологии и эволюционной истории , включая некоторые модели эукариогенеза , возникновение сложной взаимозависимости в микробных сообществах и образование de novo функциональных элементов из нефункциональных транскриптов мусорной ДНК . [9] [10] Некоторые подходы предполагают сочетание нейтрального и адаптивного вклада в эволюционное происхождение различных признаков. [11]

Многие биологи-эволюционисты утверждают, что CNE должна быть нулевой гипотезой при объяснении возникновения сложных систем, чтобы избежать предположения, что признак возник для адаптивного преимущества. Черта могла возникнуть нейтрально, даже если позже была использована для выполнения другой функции. Этот подход подчеркивает необходимость строгой демонстрации адаптивных объяснений при описании возникновения черт. Это позволяет избежать «адаптационистской ошибки», которая предполагает, что все признаки возникают потому, что им адаптивно благоприятствует естественный отбор . [9] [12]

Принципы [ править ]

Избыточная мощность, предварительное подавление и храповой механизм [ править ]

Концептуально существует два компонента A и B (например, два белка), которые взаимодействуют друг с другом. А, выполняющий функцию для системы, по своей функциональности не зависит от ее взаимодействия с Б, а само взаимодействие может возникнуть случайно у индивида со способностью исчезать без влияния на приспособленность А. Это еще присутствует Поэтому ненужное в настоящее время взаимодействие называется «избыточной мощностью» системы. Затем может произойти мутация, которая ставит под угрозу способность А выполнять свою функцию независимо. Однако уже возникшее взаимодействие A:B поддерживает способность A выполнять свою первоначальную функцию. Таким образом, появление взаимодействия A:B «подавляет» вредную природу мутации, делая ее нейтральным изменением в геноме, способным распространяться среди популяции посредством случайного генетического дрейфа. Следовательно, А приобрел зависимость от своего взаимодействия с Б. [13] В этом случае потеря B или взаимодействия A:B окажет негативное влияние на приспособленность, и поэтому очищающий отбор приведет к исключению особей, у которых это происходит. Хотя каждый из этих этапов индивидуально обратим (например, A может восстановить способность функционировать независимо или взаимодействие A:B может быть потеряно), случайная последовательность мутаций имеет тенденцию еще больше снижать способность A функционировать независимо, и случайная Прохождение через пространство зависимостей вполне может привести к конфигурации, в которой возвращение к функциональной независимости A маловероятно, что делает CNE однонаправленным или «храповым» процессом. [14]

создании вариаций Предубеждения при

Модели систематического усложнения CNE могут в решающей степени полагаться на некоторую систематическую ошибку при генерации вариаций. Это объясняется относительно исходного набора моделей CNE следующим образом: [1]

В случаях скремблирования генов и панредактирования РНК, а также фрагментации интронов исходное состояние системы (нескремблированное, неотредактированное, нефрагментированное) является уникальным или редким по отношению к некоторому обширному набору комбинаторных возможностей (зашифрованное, отредактированное, нефрагментированное). фрагментированные), которые могут быть достигнуты путем мутации и (возможно, нейтральной) фиксации. Возникающая в результате системная предвзятость приводит к отходу от невероятного начального состояния к одному из многих альтернативных состояний. В модели редактирования мутационное смещение удаления:вставки играет второстепенную роль. В модели дупликации генов, а также при объяснении потери самосплайсинга и происхождения белковых зависимостей при сплайсинге предполагается, что мутации, снижающие активность, сродство или стабильность, встречаются гораздо чаще, чем мутации с противоположным эффектом. . В результате направленность состоит в том, что дублирующиеся гены подвергаются снижению активности, а интроны теряют способность к самосплайсингу, становясь зависимыми от доступных белков, а также транс-действующих фрагментов интронов.

То есть некоторые модели имеют компонент долгосрочной направленности, отражающий систематические отклонения в вариациях. Популяционно-генетический эффект предвзятости в процессе внедрения, который появился в виде словесной теории в первоначальном предложении CNE, [1] позднее было сформулировано и официально продемонстрировано [15] (см. «Смещение при введении вариаций »). Эффект такого рода не требует нейтральной эволюции, что подтверждает предположение [1] что компоненты моделей CNE можно рассматривать в общей теории комплексификации, не связанной конкретно с нейтральностью.

Субфункциональность [ править ]

Случай CNE – это субфункционализация . Концепция субфункционализации заключается в том, что один исходный (предковый) ген дает начало двум паралогичным копиям этого гена, причем каждая копия может выполнять только часть функции (или подфункции) исходного гена. Сначала ген подвергается событию дупликации гена . Это событие создает новую копию того же гена, известную как паралог. После дупликации в обеих копиях гена накапливаются вредные мутации. Эти мутации могут поставить под угрозу способность гена производить продукт, который может выполнять желаемую функцию, или могут привести к полной утрате продукта одной из своих функций. В первом сценарии желаемая функция все же может быть выполнена, поскольку две копии гена вместе (а не только одна) все еще могут производить достаточный продукт для этой работы. Теперь организм зависит от наличия двух копий этого гена, которые являются слегка дегенеративными версиями своего предка. Во втором сценарии гены могут подвергнуться мутациям, в результате которых они потеряют дополнительные функции. Другими словами, один белок может потерять только одну из своих двух функций, тогда как другой белок теряет только другую из двух своих функций. В этом случае два гена теперь выполняют только отдельные подфункции исходного гена, и организм зависит от наличия каждого гена для выполнения каждой отдельной подфункции. [1] [16]

Паралоги, которые функционально взаимодействуют для поддержания предковой функции, можно назвать «паралогичными гетеромерами». [17] Одно высокопроизводительное исследование подтвердило, что возникновение таких взаимодействий между паралогичными белками как одна из возможных долгосрочных судеб паралогов часто встречается у дрожжей , и в том же исследовании также было обнаружено, что паралогичные гетеромеры ответственны за эукариотические сети белок-белковых взаимодействий (PPI). Одним из конкретных механизмов эволюции паралогичных гетеромеров является дупликация предкового белка, взаимодействующего с другими его копиями (гомомерами). Чтобы изучить роль этого процесса в происхождении паралогичных гетеромеров, было обнаружено, что онологи (паралоги, возникающие в результате полногеномных дупликаций), которые образуют паралогичные гетеромеры у Saccharomyces cerevisiae (почкующиеся дрожжи), с большей вероятностью будут иметь гомомерные ортологи, чем онилоги у Saccharomyces cerevisiae (почкующиеся дрожжи). Шизосахаромицеты помбе . Подобные закономерности были обнаружены в сетях PPI человека и модельного растения Arabidopsis thaliana . [17]

Примеры CNE [ править ]

Идентификация и проверяемость [ править ]

Чтобы однозначно идентифицировать особенности как созданные посредством CNE, возможно несколько подходов. Основная идея CNE заключается в том, что функции, развившиеся посредством CNE, являются сложными, но не дают преимущества в приспособленности по сравнению с их более простыми предками. То есть произошло ненужное усложнение. В некоторых случаях филогения может использоваться для проверки наследственных версий систем и выяснения, были ли эти предковые версии проще, и если да, то происходило ли увеличение сложности с преимуществом в приспособленности (т. е. действовало ли как адаптация). Хотя сложно определить, насколько адаптивным было появление сложной функции, существуют некоторые методы. Если более сложная система оказывает те же последующие эффекты на своем биохимическом пути, что и предковая и более простая система, это говорит о том, что усложнение не влекло за собой какого-либо увеличения приспособленности. Этот подход проще при анализе сложных признаков, которые развились совсем недавно и таксономически ограничены несколькими линиями, поскольку «производные признаки легче сравнивать с их сестрами и предполагаемыми предками». [18] Подход «золотого стандарта» для выявления случаев CNE включает прямое экспериментирование, в ходе которого реконструируются наследственные версии генов и систем и напрямую идентифицируются их свойства. [2] Первым примером этого был анализ компонентов протонного насоса V-АТФазы в грибковых линиях. [18]

Редактирование РНК [ править ]

Системы редактирования РНК имеют неоднородное филогенетическое распределение, что указывает на то, что они являются производными признаками. Редактирование РНК требуется, когда в геноме (чаще всего в митохондриях) необходимо отредактировать мРНК посредством различных замен, делеций и вставок перед трансляцией. Молекулы-направляющие РНК, полученные из отдельных полукруглых нитей ДНК, обеспечивают правильную последовательность для комплекса редактирования РНК, чтобы внести соответствующие изменения. Комплекс редактирования РНК у Kinetoplastida может включать более 70 белков в некоторых таксономически ограниченных линиях и опосредовать тысячи изменений. Еще один таксономически ограниченный случай другой формы системы редактирования РНК обнаружен у наземных растений. В кинетопластидах редактирование РНК включает добавление тысяч нуклеотидов и удаление нескольких сотен. Однако необходимость этой весьма сложной системы сомнительна. Подавляющее большинство организмов не полагаются на системы редактирования РНК, а в тех, у которых они есть, необходимость в них неясна, поскольку оптимальным решением было бы, чтобы последовательность ДНК не содержала неправильные (или отсутствующие) нуклеотиды на нескольких участках. тысяч сайтов для начала. Кроме того, трудно утверждать, что система редактирования РНК возникла только в ответ и для исправления дефектного до такой степени генома, поскольку такой геном был бы очень вреден для хозяина и был бы уничтожен через очистительный (негативный) отбор Для начала . Однако сценарий, в котором примитивная система редактирования РНК возникла безвозмездно еще до внесения ошибок в геном, является более экономным. Как только появится система редактирования РНК, исходный митохондриальный геном сможет выдерживать ранее вредные замены, делеции и добавления без влияния на приспособленность. Как только произойдет достаточное количество этих вредных мутаций, организм к этому моменту разовьет зависимость от системы редактирования РНК, которая точно исправит любые неточные последовательности. [4] [5]

Сплайсосомный комплекс [ править ]

Лишь немногие биологи-эволюционисты верят, что первоначальное распространение интронов по геному и среди множества генов могло служить эволюционным преимуществом для рассматриваемого организма. Скорее, распространение интрона в ген в организме без сплайсосомы было бы вредным, и очищающий отбор исключил бы особей, где это происходит. Однако если бы примитивная сплайсосома возникла до распространения интронов в геном хозяина, последующее распространение интронов не было бы вредным, поскольку сплайсосома была бы способна сплайсировать интроны и, таким образом, позволить клетке точно транслировать информационной РНК. транскрипт в функциональный белок. [19] Считается, что пять малых ядерных РНК (мяРНК), которые отделяют интроны от генов, происходят из интронов группы II , и поэтому вполне возможно, что эти интроны группы II сначала распространяются и фрагментируются на «пять простых частей» в организме хозяина, где они образовали небольшие транс-действующие предшественники пяти современных и основных мяРНК, используемых в сплайсинге. Эти предшественники обладали способностью соединять другие интроны в последовательности генов, что затем позволяло интронам распространяться в гены без вредного воздействия. [11] [20]

Микробные сообщества [ править ]

В ходе эволюции появилось множество микробных сообществ, в которых отдельные виды не являются самодостаточными и требуют взаимного присутствия других микробов для производства необходимых для них питательных веществ. Эти зависимые микробы пережили «адаптационную потерю генов», получив возможность получать определенные сложные питательные вещества из окружающей среды вместо того, чтобы синтезировать их напрямую. По этой причине у многих микробов возникли сложные потребности в питании, которые не позволяют их культивировать в лабораторных условиях. Это сильно зависимое состояние многих микробов от других организмов похоже на то, как паразиты претерпевают значительное упрощение, когда их хозяева обеспечивают большое разнообразие их пищевых потребностей. Дж. Джеффри Моррис и соавторы объяснили это с помощью «гипотезы Черной Королевы». [21] В качестве коллеги У. Форд Дулиттл и TDP Брюне предложили «гипотезу Серой Королевы», чтобы объяснить появление этих сообществ с помощью CNE. Первоначально потеря генов, необходимых для синтеза важных питательных веществ, будет вредной для организма и поэтому будет устранена. Однако в присутствии других видов, у которых эти питательные вещества находятся в свободном доступе, мутации, вызывающие дегенерацию генов, ответственных за синтез важных питательных веществ, больше не являются вредными, поскольку эти питательные вещества могут быть просто импортированы из окружающей среды. Таким образом, происходит «пресупрессия» вредной природы этих мутаций. Поскольку эти мутации больше не являются вредными, вредные мутации в этих генах свободно накапливаются и делают эти организмы теперь зависимыми от присутствия дополнительных микробов для удовлетворения своих потребностей в питании. Такое упрощение отдельных видов микробов в сообществе приводит к повышению сложности и взаимозависимости на уровне сообщества. [9]

Нулевая гипотеза [ править ]

CNE также был выдвинут в качестве нулевой гипотезы для объяснения сложных структур, и поэтому адаптационистские объяснения возникновения сложности должны быть тщательно проверены в каждом конкретном случае на соответствие этой нулевой гипотезе, прежде чем они будут приняты. Основания для использования CNE в качестве нулевого включают в себя то, что он не предполагает, что изменения предлагали адаптивную выгоду хозяину или что они были целенаправленно выбраны, сохраняя при этом важность более строгой демонстрации адаптации при вызове, чтобы избежать чрезмерных недостатков адаптационизм, подвергшийся критике со стороны Гулда и Левонтина. [12] [9] [22]

Юджин Кунин утверждал, что для того, чтобы эволюционная биология была строго «точной» наукой с прочной теоретической основой, необходимо включить нулевые гипотезы, а альтернативы должны фальсифицировать нулевую модель, прежде чем они будут приняты. В противном случае для объяснения какой-либо черты или особенности могут быть предложены «просто так» адаптивные истории. Для Кунина и других роль этого нуля играет конструктивная нейтральная эволюция. [12]

См. также [ править ]

Ссылки [ править ]

  1. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с д и ж Штольцфус, Арлин (1999). «О возможности конструктивной нейтральной эволюции» . Журнал молекулярной эволюции . 49 (2): 169–181. Бибкод : 1999JMolE..49..169S . дои : 10.1007/PL00006540 . ISSN   0022-2844 . ПМИД   10441669 . S2CID   1743092 .
  2. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с Муньос-Гомес, Серхио А.; Билоликар, Гаурав; Уайдман, Джереми Г.; Гейлер-Самеротт, Керри (01 апреля 2021 г.). «Конструктивная нейтральная эволюция 20 лет спустя» . Журнал молекулярной эволюции . 89 (3): 172–182. Бибкод : 2021JMolE..89..172M . дои : 10.1007/s00239-021-09996-y . ISSN   1432-1432 . ПМЦ   7982386 . ПМИД   33604782 .
  3. ^ Грей, Майкл В.; Лукеш, Юлиус; Арчибальд, Джон М.; Килинг, Патрик Дж.; Дулиттл, В. Форд (12 ноября 2010 г.). «Непоправимая сложность?» . Наука . 330 (6006): 920–921. Бибкод : 2010Sci...330..920G . дои : 10.1126/science.1198594 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   21071654 . S2CID   206530279 .
  4. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с Лукеш, Юлиус; Арчибальд, Джон М.; Килинг, Патрик Дж.; Дулиттл, У. Форд; Грей, Майкл В. (2011). «Как нейтральный эволюционный храповик может усложнить клетку». ИУБМБ Жизнь . 63 (7): 528–537. дои : 10.1002/iub.489 . ПМИД   21698757 . S2CID   7306575 .
  5. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Ковелло, Патрик С.; Грей, Майкл В. (1993). «Об эволюции редактирования РНК» . Тенденции в генетике . 9 (8): 265–268. дои : 10.1016/0168-9525(93)90011-6 . ПМИД   8379005 .
  6. ^ Грей, Майкл В.; Лукеш, Юлиус; Арчибальд, Джон М.; Килинг, Патрик Дж.; Дулиттл, В. Форд (12 ноября 2010 г.). «Непоправимая сложность?» . Наука . 330 (6006): 920–921. Бибкод : 2010Sci...330..920G . дои : 10.1126/science.1198594 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   21071654 . S2CID   206530279 .
  7. ^ Ламех, Лилиан Т.; Маллам, Анна Л.; Ламбовиц, Алан М. (23 декабря 2014 г.). Хершлаг, Дэниел (ред.). «Эволюция взаимодействий РНК-белок: неспецифическое связывание привело к сплайсинговой активности РНК грибных митохондриальных тирозил-тРНК-синтетаз» . ПЛОС Биология . 12 (12): e1002028. дои : 10.1371/journal.pbio.1002028 . ISSN   1545-7885 . ПМК   4275181 . ПМИД   25536042 .
  8. ^ Либерлес, Дэвид А.; Чанг, Белинда; Гейлер-Самеротт, Керри; Гольдман, Аарон; Привет, Джоди; Качар, Бетюль; Мейер, Мишель; Мерфи, Уильям; Посада, Дэвид; Сторфер, Эндрю (2020). «Новые рубежи в изучении молекулярной эволюции» . Журнал молекулярной эволюции . 88 (3): 211–226. Бибкод : 2020JMolE..88..211L . дои : 10.1007/s00239-020-09932-6 . ISSN   0022-2844 . ПМЦ   7386396 . ПМИД   32060574 .
  9. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с д Брюне, TDP; Дулиттл, В. Форд (19 марта 2018 г.). «Общность конструктивной нейтральной эволюции» . Биология и философия . 33 (1): 2. doi : 10.1007/s10539-018-9614-6 . ISSN   1572-8404 . S2CID   90290787 .
  10. ^ Палаццо, Александр Ф.; Кунин, Евгений В. (25 ноября 2020 г.). «Функциональные длинные некодирующие РНК развиваются из мусорных транскриптов» . Клетка . 183 (5): 1151–1161. дои : 10.1016/j.cell.2020.09.047 . PMID   33068526 . S2CID   222815635 .
  11. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Воссеберг, Джулиан; Снел, Беренд (01 декабря 2017 г.). «Одомашнивание самосплайсинговых интронов во время эукариогенеза: появление сложного сплайсосомного аппарата» . Биология Директ . 12 (1): 30. дои : 10.1186/s13062-017-0201-6 . ISSN   1745-6150 . ПМК   5709842 . ПМИД   29191215 .
  12. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б с Кунин, Евгений В. (2016). «Великолепие и нищета адаптации, или важность нейтрального нуля для понимания эволюции» . БМК Биология . 14 (1): 114. дои : 10.1186/s12915-016-0338-2 . ISSN   1741-7007 . ПМК   5180405 . ПМИД   28010725 .
  13. ^ Спейер, Дэйв (2011). «Играет ли конструктивная нейтральная эволюция важную роль в возникновении клеточной сложности?: Осмысление происхождения и использования биологической сложности». Биоэссе . 33 (5): 344–349. doi : 10.1002/bies.201100010 . ПМИД   21381061 . S2CID   205470421 .
  14. ^ Штольцфус, Арлин (13 октября 2012 г.). «Конструктивная нейтральная эволюция: исследование любопытного противоречия эволюционной теории» . Биология Директ . 7 (1): 35. дои : 10.1186/1745-6150-7-35 . ISSN   1745-6150 . ПМЦ   3534586 . ПМИД   23062217 .
  15. ^ Л.Я. Ямпольский и А. Штольцфус (2001). «Предвзятость во введении вариаций как ориентирующий фактор эволюции». Эвол Дев . 3 (2): 73–83. дои : 10.1046/j.1525-142x.2001.003002073.x . ПМИД   11341676 . S2CID   26956345 .
  16. ^ Подагра, Жан-Франсуа; Линч, Майкл (2015). «Поддержание и потеря дуплицированных генов за счет субфункционализации дозировки» . Молекулярная биология и эволюция . 32 (8): 2141–2148. дои : 10.1093/molbev/msv095 . ISSN   0737-4038 . ПМЦ   4833079 . ПМИД   25908670 .
  17. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Дисс, Гийом; Ганьон-Арсено, Изабель; Дион-Коте, Анн-Мари; Виньо, Элен; Асенсио, Диана И.; Бергер, Кэролайн М.; Лэндри, Кристиан Р. (10 февраля 2017 г.). «Дупликация генов может придать хрупкость, а не надежность сети взаимодействия дрожжевых белков» . Наука . 355 (6325): 630–634. Бибкод : 2017Sci...355..630D . дои : 10.1126/science.aai7685 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   28183979 . S2CID   3726878 .
  18. ↑ Перейти обратно: Перейти обратно: а б Финниган, Грегори К.; Хэнсон-Смит, Виктор; Стивенс, Том Х.; Торнтон, Джозеф В. (9 января 2012 г.). «Эволюция повышенной сложности в молекулярной машине» . Природа . 481 (7381): 360–364. Бибкод : 2012Natur.481..360F . дои : 10.1038/nature10724 . ISSN   0028-0836 . ПМЦ   3979732 . ПМИД   22230956 .
  19. ^ Дулиттл, У. Форд; Лукеш, Юлиус; Арчибальд, Джон М.; Килинг, Патрик Дж.; Грей, Майкл В. (2011). «Комментарий к статье «Играет ли конструктивная нейтральная эволюция важную роль в возникновении клеточной сложности?» DOI 10.1002/bies.201100010». Биоэссе . 33 (6): 427–429. doi : 10.1002/bies.201100039 . ISSN   1521-1878 . ПМИД   21538416 .
  20. ^ Шарп, Филипп А. (1991). « Пять простых пьес » . Наука . 254 (5032): 663. Бибкод : 1991Sci...254..663S . дои : 10.1126/science.1948046 . ISSN   0036-8075 . ПМИД   1948046 . S2CID   508870 .
  21. ^ Моррис, Дж. Джеффри; Ленски, Ричард Э.; Зинсер, Эрик Р. (2 мая 2012 г.). «Гипотеза Черной Королевы: эволюция зависимостей посредством адаптивной потери генов» . мБио . 3 (2). дои : 10.1128/mBio.00036-12 . ISSN   2161-2129 . ПМЦ   3315703 . ПМИД   22448042 .
  22. ^ Гулд, С.Дж.; Левонтин, RC; Мейнард Смит, Дж.; Холлидей, Робин (21 сентября 1979 г.). «Спандрелы Сан-Марко и парадигма Панглосса: критика адаптационистской программы» . Труды Лондонского королевского общества. Серия Б. Биологические науки . 205 (1161): 581–598. Бибкод : 1979РСПСБ.205..581Г . дои : 10.1098/rspb.1979.0086 . ПМИД   42062 . S2CID   2129408 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Constructive_neutral_evolution&oldid=1209552970"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 20b49912a66cbe3043a6fa28a7d98e1d__1708596540
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/20/1d/20b49912a66cbe3043a6fa28a7d98e1d.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Constructive neutral evolution - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)