✖


Jump to content

перетасовка ДНК

Edit links
Точечные мутации приводят к изменению отдельных нуклеотидов, тогда как вставки и делеции приводят к добавлению или удалению нуклеотидов соответственно. [ 1 ] [ 2 ] Перетасовка ДНК позволяет рекомбинировать родительские гены, что резко увеличивает скорость направленной эволюции. [ 3 ] Перетасовка ДНК полезна для создания белков с новыми свойствами или комбинациями желаемых свойств. [ 1 ]

Перетасовка ДНК , также известная как молекулярная селекция, представляет собой метод случайной рекомбинации in vitro , позволяющий генерировать мутантные гены для направленной эволюции и обеспечивать быстрое увеличение размера библиотеки ДНК . [ 1 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] Тремя процедурами для осуществления перетасовки ДНК являются молекулярное скрещивание, основанное на гомологичной рекомбинации или сходстве последовательностей ДНК, ферменты рестрикции , основанные на общих сайтах рестрикции , и негомологичная случайная рекомбинация, требующая использования шпилек . [ 1 ] Во всех этих методах родительские гены фрагментируются, а затем рекомбинируются. [ 1 ] [ 4 ]

Перетасовка ДНК использует случайную рекомбинацию в отличие от сайт-направленного мутагенеза для создания белков с уникальными свойствами или комбинациями желаемых характеристик, закодированных в родительских генах, таких как термостабильность и высокая активность. [ 1 ] [ 8 ] Потенциал перетасовки ДНК для производства новых белков иллюстрируется рисунком, показанным справа, который демонстрирует разницу между точечными мутациями, инсерциями и делециями, а также перетасовкой ДНК. [ 1 ] В частности, на этом рисунке показано использование перетасовки ДНК в двух родительских генах, что позволяет генерировать рекомбинантные белки, имеющие случайную комбинацию последовательностей каждого родительского гена. [ 1 ] Это отличается от точечных мутаций , при которых один нуклеотид был изменен, вставлен или удален, а также от инсерций или делеций, при которых последовательность нуклеотидов была добавлена ​​или удалена соответственно. [ 1 ] [ 2 ] В результате случайной рекомбинации перетасовка ДНК способна производить белки с новыми качествами или множеством полезных свойств, полученных от родительских генов. [ 1 ] [ 4 ]

В 1994 году Виллем Стеммер опубликовал первую статью о перетасовке ДНК. [ 7 ] С момента появления этого метода перетасовка ДНК стала применяться к белковым и низкомолекулярным фармацевтическим препаратам, биоремедиации , вакцинам , генной терапии и эволюционировавшим вирусам. [ 3 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] Другие методы, которые дают результаты, аналогичные перетасовке ДНК, включают случайный химерагенез на временных матрицах (RACHITT), случайную печать, рекомбинацию in vitro (RPR) и процесс поэтапного удлинения (StEP). [ 4 ] [ 7 ] [ 13 ]  

История

[ редактировать ]

О перетасовке ДНК путем молекулярной селекции впервые сообщил в 1994 году Виллем Стеммер. [ 1 ] [ 7 ] Он начал с фрагментации гена β-лактамазы , который был амплифицирован с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием ДНКазы I , которая случайным образом расщепляет ДНК. [ 14 ] [ 15 ] Затем он завершил модифицированную реакцию ПЦР, в которой не использовались праймеры , что привело к отжигу гомологичных фрагментов или фрагментов со схожими последовательностями. [ 14 ] Наконец, эти фрагменты амплифицировали с помощью ПЦР. [ 14 ] Стеммер сообщил, что использование перетасовки ДНК в сочетании с обратным скрещиванием привело к устранению несущественных мутаций и увеличению производства антибиотика цефотаксима . [ 14 ] Он также подчеркнул потенциал молекулярной эволюции при перетасовке ДНК. [ 16 ] В частности, он указал, что эту технику можно использовать для модификации белков. [ 16 ]    

С тех пор перетасовку ДНК стали применять для создания библиотек гибридных или химерных генов , что послужило вдохновением для перетасовки семей, которая определяется как использование родственных генов при перетасовке ДНК. [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] Кроме того, перетасовка ДНК применялась к белковым и низкомолекулярным фармацевтическим препаратам, биоремедиации, генной терапии, вакцинам и эволюционировавшим вирусам. [ 3 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 20 ]

Процедуры

[ редактировать ]

Молекулярная селекция

[ редактировать ]

Во-первых, ДНКаза I используется для фрагментации набора родительских генов на сегменты двухцепочечной ДНК размером от 10-50 п.о. до более 1 т.п.н. [ 4 ] [ 16 ] Затем следует ПЦР без праймеров. [ 14 ] В ПЦР фрагменты ДНК с достаточно перекрывающимися последовательностями гибридизуются друг с другом, а затем удлиняются ДНК-полимеразой . [ 1 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 7 ] [ 14 ] [ 16 ] [ 21 ] Расширение ПЦР не произойдет, если не будут обнаружены последовательности ДНК с высоким сходством. [ 1 ] Важными факторами, влияющими на последовательности, синтезируемые при перетасовке ДНК, являются ДНК-полимераза, концентрации солей и температура отжига. [ 10 ] Например, использование Taq-полимеразы для амплификации фрагмента размером 1 т.п.н. в ПЦР из 20 циклов приводит к тому, что от 33% до 98% продуктов содержат одну или несколько мутаций. [ 21 ]

Для амплификации фрагментов можно использовать несколько циклов расширения ПЦР. [ 1 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 7 ] [ 14 ] [ 16 ] [ 21 ] Для дальнейшей амплификации последовательностей с помощью другой ПЦР добавляются праймеры, которые предназначены для комплементарности концам удлиненных фрагментов. [ 1 ] [ 14 ] [ 21 ] Праймеры могут быть выбраны так, чтобы к их 5'-концам были добавлены дополнительные последовательности, такие как последовательности для сайтов узнавания ферментов рестрикции , которые необходимы для лигирования в вектор клонирования . [ 1 ] [ 14 ]

Можно рекомбинировать части родительских генов для создания гибридов или химерных форм с уникальными свойствами, отсюда и термин «перетасовка ДНК». [ 22 ] Недостатком молекулярного скрещивания является требование сходства между последовательностями, что вдохновило на разработку других процедур перетасовки ДНК. [ 1 ]

Рестриктивные ферменты

[ редактировать ]

Ферменты рестрикции используются для фрагментации родительских генов. [ 1 ] [ 21 ] Затем фрагменты соединяются вместе посредством лигирования, которое можно осуществить с помощью ДНК-лигазы . [ 1 ] Например, если два родительских гена имеют три сайта рестрикции, можно создать четырнадцать различных гибридов полноразмерных генов. [ 1 ] Количество уникальных полноразмерных гибридов определяется тем, что ген с тремя сайтами рестрикции может быть разбит на четыре фрагмента . [ 1 ] Таким образом, существует два варианта для каждой из четырех позиций за вычетом комбинаций, которые воссоздали бы два родительских гена, давая 2 4 - 2 = 14 различных полноразмерных гибридных генов . [ 1 ]

Основное различие между перетасовкой ДНК с помощью рестрикционных ферментов и молекулярным скрещиванием заключается в том, что молекулярное скрещивание основано на гомологии последовательностей для отжига цепей и ПЦР для удлинения, тогда как с помощью рестрикционных ферментов создаются концы фрагментов, которые можно лигировать. [ 1 ] Основные преимущества использования ферментов рестрикции включают контроль количества событий рекомбинации и отсутствие необходимости ПЦР-амплификации. [ 1 ] [ 23 ] Основным недостатком является необходимость наличия общих сайтов рестрикции. [ 1 ]

Негомологичная случайная рекомбинация

[ редактировать ]

Для создания сегментов размером от 10-50 п.н. до более 1 т.п.н. используется ДНКаза I. [ 4 ] [ 16 ] [ 24 ] Концы фрагментов затупляются добавлением ДНК-полимеразы Т4. [ 1 ] [ 24 ] Затупление фрагментов важно для объединения фрагментов, поскольку несовместимые липкие концы или выступы предотвращают соединение концов. [ 1 ] [ 25 ] [ 26 ] Затем к смеси фрагментов добавляют шпильки со специфическим сайтом рестрикции. [ 1 ] [ 24 ] Затем ДНК-лигаза Т4 используется для лигирования фрагментов с образованием расширенных последовательностей. [ 1 ] [ 24 ] Лигирование шпилек с фрагментами ограничивает длину расширенных последовательностей, предотвращая добавление большего количества фрагментов. [ 1 ] Наконец, чтобы удалить шпильки, используется фермент рестрикции. [ 1 ] [ 24 ]

Негомологичная случайная рекомбинация отличается от молекулярного скрещивания, поскольку не требуется гомологии лигированных последовательностей, что является преимуществом. [ 1 ] Однако , поскольку этот процесс рекомбинирует фрагменты случайным образом, вполне вероятно, что большая часть рекомбинированных последовательностей ДНК не будет иметь желаемых характеристик, что является недостатком. [ 1 ] Негомологичная случайная рекомбинация также отличается от использования ферментов рестрикции для перетасовки ДНК, поскольку не требуются общие сайты ферментов рестрикции на родительских генах и необходимо использование шпилек, что демонстрирует преимущество и недостаток негомологичной случайной рекомбинации перед использованием ферментов рестрикции. соответственно. [ 1 ]

Приложения

[ редактировать ]

Белковые и низкомолекулярные фармацевтические препараты

[ редактировать ]

Поскольку перетасовка ДНК обеспечивает рекомбинацию генов, можно повысить активность белков. [ 3 ] [ 20 ] Например, перетасовка ДНК использовалась для повышения эффективности рекомбинантных интерферонов, отображаемых фагом, на клетках мыши и человека. [ 3 ] Кроме того, улучшение зеленого флуоресцентного белка (GFP) было достигнуто за счет перетасовки ДНК путем молекулярного скрещивания, поскольку был получен сигнал в 45 раз больший, чем стандарт для флуоресценции цельных клеток. [ 20 ] Более того, синтез разнообразных генов может также привести к производству белков с новыми свойствами. [ 1 ] Поэтому перетасовка ДНК использовалась для разработки белков для детоксикации химических веществ. [ 3 ] [ 27 ] Например, метод гомологичной рекомбинации перетасовки ДНК путем молекулярного скрещивания использовался для усиления детоксикации атразина и арсената . [ 3 ] [ 27 ]  

Биоремедиация

[ редактировать ]

Перетасовка ДНК также использовалась для улучшения разложения биологических загрязнителей. [ 12 ] [ 28 ] В частности, был создан рекомбинантный штамм E. coli с использованием перетасовки ДНК путем молекулярного скрещивания для биоремедиации трихлорэтилена (ТХЭ), потенциального канцерогена , который менее восприимчив к токсичным эпоксидным промежуточным соединениям. [ 12 ] [ 21 ] [ 28 ]

Вакцина

[ редактировать ]

Возможность отбора желаемых рекомбинантов с помощью перетасовки ДНК использовалась в сочетании со стратегиями скрининга для улучшения кандидатов на вакцины против инфекций с упором на улучшение иммуногенности , производства вакцин, стабильности и перекрестной реактивности к множеству штаммов патогенов. [ 3 ] [ 10 ] некоторые вакцины-кандидаты против Plasmodium falciparum , вируса денге , энцефалитических альфавирусов (включая VEEV , WEEV и EEEV ), вируса иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1) и вируса гепатита B (HBV). Были исследованы [ 10 ]    

Генная терапия и эволюционировавшие вирусы

[ редактировать ]

Требования к генной терапии человека включают высокую чистоту, высокий титр и стабильность. [ 11 ] Перетасовка ДНК позволяет создавать ретровирусные векторы с этими атрибутами. [ 11 ] Например, перетасовка ДНК с помощью молекулярного селекции была применена к шести штаммам экотропного вируса мышиного лейкоза (MLV), что привело к составлению обширной библиотеки рекомбинантных ретровирусов и идентификации множественных клонов с повышенной стабильностью. [ 11 ] Кроме того, применение перетасовки ДНК путем молекулярного скрещивания на множественных векторах родительского аденоассоциированного вируса (AAV) было использовано для создания библиотеки из десяти миллионов химер. [ 29 ] Полученные преимущества включают повышенную устойчивость к внутривенному иммуноглобулину человека (ВВИГ) и продукцию клеточного тропизма в новых вирусах. [ 29 ]    

Сравнение с другими методами

[ редактировать ]

Хотя перетасовка ДНК стала полезным методом случайной рекомбинации, для этой цели также были разработаны другие методы, включая RACHITT, RPR и StEP. [ 4 ] [ 13 ] Ниже приведены некоторые преимущества и недостатки этих других методов рекомбинации. [ 4 ] [ 7 ] [ 13 ]

РАЧИТТ

[ редактировать ]

В RACHITT фрагменты одноцепочечных (ss) родительских генов отжигаются на ss-матрице, что приводит к уменьшению несоответствия, что является преимуществом. [ 13 ] Кроме того, RACHIIT позволяет рекомбинировать гены с низким сходством последовательностей. [ 7 ] Однако основным недостатком является подготовка ss-фрагментов родительских генов и ss-матрицы. [ 7 ] [ 13 ]

РПР

[ редактировать ]

RPR использует случайные праймеры. [ 30 ] Эти случайные праймеры отжигаются с ДНК-матрицей, а затем удлиняются фрагментом Кленова . [ 30 ] Затем матрицы удаляются, а фрагменты собираются по гомологии в процессе, аналогичном ПЦР. [ 30 ] Некоторые основные преимущества включают меньшую потребность в родительских генах из-за использования ss-матриц и увеличение разнообразия последовательностей из-за неправильного прайминга и неправильного включения. [ 7 ] [ 30 ] Одним из недостатков RPR является подготовка шаблона. [ 30 ]  

Шаг

[ редактировать ]

В StEP для создания полноразмерных последовательностей используются короткие циклы отжига праймера с матрицей и удлинения с помощью полимеразы. [ 31 ] [ 32 ] Основными преимуществами СтЭП являются простота метода и отсутствие очистки фрагментов. [ 7 ] [ 13 ] К недостаткам StEP можно отнести то, что он требует много времени и требует гомологии последовательностей. [ 7 ] [ 13 ]

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж к л м н тот п д р с т в v В х и С аа аб и объявление но из в ах есть Глик БР (2017). Молекулярная биотехнология: принципы и применение рекомбинантной ДНК . Шерил Л. Паттен (Пятое изд.). Вашингтон, округ Колумбия. ISBN  978-1-55581-936-1 . OCLC   975991667 . {{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка )
  2. ^ Перейти обратно: а б Леви Т., Слуцкин А., Калифа Р., Ювен-Гершон Т., Герлиц О. (14 июля 2020 г.). «Эффективное введение точечных мутаций in vivo с использованием ssODN и подхода Co-CRISPR» . Биологические процедуры онлайн . 22 (1): 14. дои : 10.1186/s12575-020-00123-7 . ПМЦ   7362497 . ПМИД   32684853 .
  3. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я Паттен П.А., Ховард Р.Дж., Стеммер В.П. (декабрь 1997 г.). «Применение перетасовки ДНК в фармацевтических препаратах и ​​вакцинах». Современное мнение в области биотехнологии . 8 (6): 724–733. дои : 10.1016/S0958-1669(97)80127-9 . ПМИД   9425664 .
  4. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж Чирино ПК, Цянь С. (01 января 2013 г.), Чжао Х (редактор), «Глава 2 - Белковая инженерия как дополнительный инструмент для синтетической биологии», Синтетическая биология , Бостон: Academic Press, стр. 23–42, doi : 10.1016/b978-0-12-394430-6.00002-9 , ISBN  978-0-12-394430-6
  5. ^ Перейти обратно: а б с Кларк Д.П., Паздерник, Нью-Джерси (2016), «Белковая инженерия», Биотехнология , Elsevier, стр. 365–392, doi : 10.1016/b978-0-12-385015-7.00011-9 , ISBN  978-0-12-385015-7
  6. ^ Камада Х (01 января 2013 г.), Парк К., Цунода С.И. (ред.), «5 - Генерация функциональных мутантных белков для создания высокобиоактивных противораковых биофармацевтических препаратов», Биоматериалы для терапии рака , Woodhead Publishing, стр. 95–112, doi : 10.1533/9780857096760.2.95 , ISBN  978-0-85709-664-7
  7. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я дж к л Биопереработка продуктов с добавленной стоимостью из возобновляемых ресурсов: новые технологии и приложения . Шан-Тянь Ян (1-е изд.). Амстердам: Эльзевир. 2007. ISBN  978-0-444-52114-9 . OCLC   162587118 . {{cite book}}: CS1 maint: другие ( ссылка )
  8. ^ Перейти обратно: а б Аркин М. (01.01.2001), «Мутагенез in vitro», в книге Бреннер С., Миллер Дж.Х. (ред.), Энциклопедия генетики , Нью-Йорк: Academic Press, стр. 1010–1014, номер документа : 10.1006/rwgn.2001.0714. , ISBN  978-0-12-227080-2
  9. ^ Маршалл С.Х. (ноябрь 2002 г.). «Перетасовка ДНК: индуцированная молекулярная селекция для производства вакцин нового поколения длительного действия». Достижения биотехнологии . 20 (3–4): 229–238. дои : 10.1016/s0734-9750(02)00015-0 . ПМИД   14550030 .
  10. ^ Перейти обратно: а б с д и Лохер К.П., Пайдхунгат М., Уэлен Р.Г., Пуннонен Дж. (апрель 2005 г.). «Стратегии перетасовки ДНК и скрининга для повышения эффективности вакцин». ДНК и клеточная биология . 24 (4): 256–263. дои : 10.1089/dna.2005.24.256 . ПМИД   15812242 .
  11. ^ Перейти обратно: а б с д и Пауэлл С.К., Калосс М.А., Пинкстафф А., Макки Р., Буримски И., Пенсьеро М. и др. (декабрь 2000 г.). «Селекция ретровирусов путем перетасовки ДНК для повышения стабильности и урожайности обработки». Природная биотехнология . 18 (12): 1279–1282. дои : 10.1038/82391 . ПМИД   11101807 . S2CID   1865270 .
  12. ^ Перейти обратно: а б с д Руи Л., Квон Ю.М., Рирдон К.Ф., Вуд Т.К. (май 2004 г.). «Инженерия метаболических путей для усиления аэробной деградации хлорированных этинов и снижения их токсичности путем клонирования новой глутатион-S-трансферазы, развитой толуол-о-монооксигеназы и гамма-глутамилцистеинсинтетазы». Экологическая микробиология . 6 (5): 491–500. дои : 10.1111/j.1462-2920.2004.00586.x . ПМИД   15049922 .
  13. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г Курцман А.Л., Говиндараджан С., Вале К., Джонс Дж.Т., Генрихс В., Паттен П.А. (август 2001 г.). «Достижения в направленной эволюции белков путем рекурсивной генетической рекомбинации: применение к терапевтическим белкам». Современное мнение в области биотехнологии . 12 (4): 361–370. дои : 10.1016/S0958-1669(00)00228-7 . ПМИД   11551464 .
  14. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я Стеммер В.П. (август 1994 г.). «Быстрая эволюция белка in vitro путем перетасовки ДНК». Природа . 370 (6488): 389–391. Бибкод : 1994Natur.370..389S . дои : 10.1038/370389a0 . ПМИД   8047147 . S2CID   4363498 .
  15. ^ «ДНКаза I (без РНКазы) | NEB» . www.neb.com . Проверено 30 октября 2021 г.
  16. ^ Перейти обратно: а б с д и ж Стеммер В.П. (октябрь 1994 г.). «Перетасовка ДНК путем случайной фрагментации и повторной сборки: рекомбинация in vitro для молекулярной эволюции» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 91 (22): 10747–10751. Бибкод : 1994PNAS...9110747S . дои : 10.1073/pnas.91.22.10747 . ПМК   45099 . ПМИД   7938023 .
  17. ^ Кикучи М., Ониши К., Хараяма С. (8 февраля 2000 г.). «Эффективный метод семейной перетасовки с использованием одноцепочечной ДНК». Джин . 243 (1): 133–137. дои : 10.1016/S0378-1119(99)00547-8 . ISSN   0378-1119 . ПМИД   10675621 .
  18. ^ Крамери А., Райлард С.А., Бермудес Э., Стеммер В.П. (январь 1998 г.). «Перетасовка ДНК семейства генов разных видов ускоряет направленную эволюцию». Природа . 391 (6664): 288–291. Бибкод : 1998Natur.391..288C . дои : 10.1038/34663 . ПМИД   9440693 . S2CID   4352696 .
  19. ^ Коко В.М., Левинсон В.Е., Крист М.Дж., Гектор Х.Дж., Дарзинс А., Пиенкос П.Т. и др. (апрель 2001 г.). «Метод перетасовки ДНК для создания сильно рекомбинантных генов и эволюционировавших ферментов». Природная биотехнология . 19 (4): 354–359. дои : 10.1038/86744 . ПМИД   11283594 . S2CID   35360374 .
  20. ^ Перейти обратно: а б с Крамери А., Уайтхорн Э.А., Тейт Э., Стеммер В.П. (март 1996 г.). «Улучшенный зеленый флуоресцентный белок путем молекулярной эволюции с использованием перетасовки ДНК». Природная биотехнология . 14 (3): 315–319. дои : 10.1038/nbt0396-315 . ПМИД   9630892 . S2CID   22803570 .
  21. ^ Перейти обратно: а б с д и ж Чжао Х., Арнольд Ф.Х. (март 1997 г.). «Оптимизация перетасовки ДНК для высокоточной рекомбинации» . Исследования нуклеиновых кислот . 25 (6): 1307–1308. дои : 10.1093/нар/25.6.1307 . ПМК   146579 . ПМИД   9092645 .
  22. ^ Бахер Дж. М., Рейсс Б. Д., Эллингтон А. Д. (июль 2002 г.). «Упреждающая эволюция и перетасовка ДНК» . Геномная биология . 3 (8): ОБЗОРЫ1021. doi : 10.1186/gb-2002-3-8-reviews1021 . ПМК   139397 . ПМИД   12186650 .
  23. ^ Энглер С., Грюцнер Р., Кандзия Р., Марилоннет С. (14 мая 2009 г.). «Перетасовка Золотых ворот: метод перетасовки ДНК в одном горшке, основанный на ферментах рестрикции типа IIs» . ПЛОС ОДИН . 4 (5): е5553. Бибкод : 2009PLoSO...4.5553E . дои : 10.1371/journal.pone.0005553 . ПМЦ   2677662 . ПМИД   19436741 .
  24. ^ Перейти обратно: а б с д и Битткер Дж. А., Ле Б. В., Лю Дж. М., Лю Д. Р. (май 2004 г.). «Направленная эволюция белковых ферментов с помощью негомологичной случайной рекомбинации» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (18): 7011–7016. Бибкод : 2004PNAS..101.7011B . дои : 10.1073/pnas.0402202101 . ПМК   406457 . ПМИД   15118093 .
  25. ^ Чжу С, Пэн А (июнь 2016 г.). «Восстановление негомологичного концевого соединения в экстракте яиц Xenopus» . Научные отчеты . 6 (1): 27797. Бибкод : 2016NatSR...627797Z . дои : 10.1038/srep27797 . ПМЦ   4914968 . ПМИД   27324260 .
  26. ^ Огивара Х, Коно Т (14 декабря 2011 г.). «Основные факторы соединения несовместимых концов ДНК при разрывах двойной цепи хромосомной ДНК in vivo» . ПЛОС ОДИН . 6 (12): e28756. Бибкод : 2011PLoSO...628756O . дои : 10.1371/journal.pone.0028756 . ПМЦ   3237495 . ПМИД   22194904 .
  27. ^ Перейти обратно: а б Крамери А., Дауэс Г., Родригес Э., Сильвер С., Стеммер В.П. (май 1997 г.). «Молекулярная эволюция пути детоксикации арсената путем перетасовки ДНК». Природная биотехнология . 15 (5): 436–438. дои : 10.1038/nbt0597-436 . ПМИД   9131621 . S2CID   25669058 .
  28. ^ Перейти обратно: а б Канада К.А., Ивашита С., Шим Х., Вуд Т.К. (январь 2002 г.). «Направленная эволюция толуолортомонооксигеназы для усиления синтеза 1-нафтола и разложения хлорированного этена» . Журнал бактериологии . 184 (2): 344–349. дои : 10.1128/JB.184.2.344-349.2002 . ПМК   139589 . ПМИД   11751810 .
  29. ^ Перейти обратно: а б Кербер Дж.Т., Джанг Дж.Х., Шаффер Д.В. (октябрь 2008 г.). «Перетасовка ДНК аденоассоциированного вируса дает функционально разнообразное вирусное потомство» . Молекулярная терапия . 16 (10): 1703–1709. дои : 10.1038/mt.2008.167 . ПМЦ   2683895 . ПМИД   18728640 .
  30. ^ Перейти обратно: а б с д и Эстебан О, Вудиер РД, Чжао Х (2003). «Рекомбинация ДНК in vitro путем случайного прайминга». В Арнольде Ф.Х., Георгиу Дж. (ред.). Создание библиотеки направленной эволюции . Методы молекулярной биологии. Том. 231. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. стр. 99–104. дои : 10.1385/1-59259-395-x:99 . ISBN  978-1-59259-395-8 . ПМИД   12824607 .
  31. ^ Чжао Х., Гивер Л., Шао З., Аффхолтер Дж.А., Арнольд Ф.Х. (март 1998 г.). «Молекулярная эволюция путем поэтапного процесса расширения (StEP) рекомбинации in vitro». Природная биотехнология . 16 (3): 258–261. дои : 10.1038/nbt0398-258 . ПМИД   9528005 . S2CID   20490024 .
  32. ^ Агинальдо AM, Арнольд Ф.Х. (2003). «Процесс поэтапного расширения (StEP) рекомбинации in vitro». В Арнольде Ф.Х., Георгиу Дж. (ред.). Создание библиотеки направленной эволюции . Методы молекулярной биологии. Том. 231. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. стр. 105–110. дои : 10.1385/1-59259-395-X:105 . ISBN  978-1-59259-395-8 . ПМИД   12824608 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=DNA_shuffling&oldid=1176353428"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: cc01e49e5d809a62d4b4a43b4c67683c__1695260160
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/cc/3c/cc01e49e5d809a62d4b4a43b4c67683c.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
DNA shuffling - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)