СТЭД-микроскопия

с истощением стимулированного излучения ( STED ) Микроскопия — один из методов, составляющих микроскопию сверхвысокого разрешения . Он создает изображения сверхвысокого разрешения за счет выборочной деактивации флуорофоров , сводя к минимуму область освещения в фокусной точке и тем самым повышая достижимое разрешение для данной системы. ^{[ 1 ]} Он был разработан Стефаном В. Хеллом и Яном Вихманном в 1994 году. ^{[ 2 ]} и впервые было экспериментально продемонстрировано Хеллом и Томасом Кларом в 1999 году. ^{[ 3 ]} Хелл был удостоен Нобелевской премии по химии За свою разработку в 2014 году. В 1986 году В.А.Охонин ^{[ 4 ]} (Институт биофизики СО АН СССР, Красноярск) запатентовал идею STED. ^{[ 5 ]} Этот патент был неизвестен Хеллу и Вихманну в 1994 году.

STED-микроскопия — это один из нескольких типов методов микроскопии сверхвысокого разрешения , которые недавно были разработаны для обхода дифракционного предела световой микроскопии и повышения разрешения. STED — это детерминированный функциональный метод, который использует нелинейный отклик флуорофоров, обычно используемых для маркировки биологических образцов, чтобы добиться улучшения разрешения, то есть STED позволяет получать изображения с разрешением ниже дифракционного предела. Это отличается от стохастических функциональных методов, таких как фотоактивируемая локализационная микроскопия (PALM) и микроскопия стохастической оптической реконструкции (STORM), поскольку эти методы используют математические модели для восстановления субдифракционного предела на основе множества наборов изображений, ограниченных дифракцией.

Фон

В традиционной микроскопии разрешение, которое можно получить, ограничено дифракцией света . Эрнст Аббе разработал уравнение, описывающее этот предел. Уравнение:

\mathrm {D} ={\frac {\lambda }{2n\sin {\alpha }}}={\frac {\lambda }{\mathrm {2NA} }}

где D — дифракционный предел, λ — длина волны света, а NA — числовая апертура или показатель преломления среды, умноженный на синус угла падения. n описывает показатель преломления образца, α измеряет телесный полуугол, из которого свет собирается объективом, λ — длина волны света, используемая для возбуждения образца, а NA — числовая апертура. Для получения высокого разрешения (т.е. малых значений d) оптимальными являются короткие длины волн и высокие значения числовой апертуры (NA = n sinα). ^{[ 6 ]} Этот дифракционный предел является стандартом, по которому измеряются все методы сверхразрешения. Поскольку STED избирательно деактивирует флуоресценцию, он может обеспечить лучшее разрешение, чем традиционная конфокальная микроскопия. Нормальная флуоресценция возникает путем возбуждения электрона из основного состояния в возбужденное электронное состояние другого фундаментального энергетического уровня (S0 переходит на S1), которое после релаксации обратно в основное состояние (S1) испускает фотон, переходя с S1 на S1. колебательный энергетический уровень на S0. STED прерывает этот процесс до того, как фотон высвободится. Возбужденный электрон вынужден релаксировать в более высокое колебательное состояние, чем мог бы войти флуоресцентный переход, в результате чего высвобождаемый фотон смещается в красную сторону, как показано на изображении справа. ^{[ 7 ]} Поскольку электрон переходит в более высокое колебательное состояние, разница в энергии двух состояний ниже, чем нормальная разница флуоресценции. Это понижение энергии увеличивает длину волны и заставляет фотон смещаться дальше в красный конец спектра. Этот сдвиг различает два типа фотонов и позволяет игнорировать стимулированный фотон.

Чтобы вызвать это альтернативное излучение, падающий фотон должен попасть во флуорофор. Необходимость поразить падающий фотон имеет два значения для STED. Во-первых, количество падающих фотонов напрямую влияет на эффективность этого излучения, а, во-вторых, при достаточно большом количестве фотонов флуоресценция может быть полностью подавлена. ^{[ 8 ]} Чтобы добиться большого количества падающих фотонов, необходимых для подавления флуоресценции, лазер, используемый для генерации фотонов, должен иметь высокую интенсивность. К сожалению, этот лазер высокой интенсивности может привести к фотообесцвечиванию флуорофора . Фотообесцвечивание — это название разрушения флуорофоров светом высокой интенсивности.

Процесс

Сравнение конфокальной микроскопии и STED-микроскопии. Это показывает улучшенное разрешение STED-микроскопии по сравнению с традиционными методами.

Функция STED заключается в уменьшении флуоресценции в определенных областях образца, при этом центральное фокальное пятно остается активным для излучения флуоресценции. Эту фокальную область можно создать, изменив свойства плоскости зрачка объектива. ^{[ 9 ]}^{[ 10 ]}^{[ 11 ]} Наиболее распространенным ранним примером этих дифракционных оптических элементов, или ДОЭ, является форма тора , используемая в двумерном боковом ограничении, показанная ниже. Красная зона истощается, а зеленое пятно остается активным. Этот ДОЭ создается за счет круговой поляризации истощающего лазера в сочетании с оптическим вихрем . Латеральное разрешение этого ДОЭ обычно составляет от 30 до 80 нм. Однако сообщалось о значениях до 2,4 нм. ^{[ 12 ]} При использовании различных ДОЭ было продемонстрировано осевое разрешение порядка 100 нм. ^{[ 13 ]} Модифицированное уравнение Аббе описывает это субдифракционное разрешение как:

$\mathrm {D} ={\frac {\lambda }{2n\sin {\alpha }{\sqrt {1+{\frac {I}{I_{\text{sat}}}}}}}}={\frac {\lambda }{\mathrm {2NA} {\sqrt {1+\sigma }}}}$

Где ${\textstyle n}$ – показатель преломления среды, ${\textstyle I}$ внутрирезонаторная и интенсивность ${\textstyle I_{\text{sat}}}$ - интенсивность насыщения . Где ${\textstyle \sigma }$ - коэффициент насыщения, выражающий отношение приложенной (максимальной) интенсивности STED к интенсивности насыщения, ${\textstyle \sigma =I_{\text{max}}/I_{\text{sat}}}$ . ^{[ 6 ]}^{[ 14 ]}

Чтобы оптимизировать эффективность STED, деструктивная интерференция в центре фокального пятна должна быть как можно ближе к идеальной. Это накладывает определенные ограничения на используемую оптику.

Красители

На ранних этапах разработки STED количество красителей, которые можно было использовать в этом процессе, было очень ограниченным. Родамин Б был назван в первом теоретическом описании STED. ^{[ 2 ]} В результате первые использованные красители были лазерными, излучающими красный спектр. Чтобы обеспечить STED-анализ биологических систем, красители и лазерные источники должны быть адаптированы к системе. Стремление к лучшему анализу этих систем привело к созданию STED живых клеток и многоцветных STED, но также требовалось все больше и больше совершенных красителей и систем возбуждения для обеспечения возросшей функциональности. ^{[ 7 ]}

Одним из таких достижений стала разработка иммуномеченых клеток. Эти клетки представляют собой флуоресцентные красители STED, связанные с антителами посредством амидных связей. При первом использовании этого метода красный краситель MR-121SE сочетался с вторичным антимышиным антителом. ^{[ 8 ]} С момента первого применения этот метод был применен к гораздо более широкому спектру красителей, включая излучающие зеленый цвет Atto 532, ^{[ 15 ]}^{[ 16 ]}^{[ 17 ]} и желтое излучение, Atto 590, ^{[ 18 ]} а также дополнительные красители, излучающие красный цвет. Кроме того, Atto 647N впервые был использован этим методом для производства двухцветного STED. ^{[ 19 ]}

Приложения

За последние несколько лет STED превратился из сложного и весьма специфического метода в общий флуоресцентный метод. В результате был разработан ряд методов, расширяющих возможности STED и позволяющих предоставлять больше информации.

Структурный анализ

С самого начала процесса STED позволял флуоресцентной микроскопии решать задачи, которые были возможны только с помощью электронной микроскопии. Например, STED использовался для разъяснения анализа структуры белка на уровне суборганелл. Общим доказательством этого уровня исследований является наблюдение цитоскелетных филаментов. Кроме того, нейрофиламенты , актин и тубулин часто используются для сравнения разрешающей способности STED и конфокальных микроскопов. ^{[ 20 ]}^{[ 21 ]}^{[ 22 ]}

Используя STED, латеральное разрешение 70–90 нм было достигнуто при исследовании SNAP25 , человеческого белка, который регулирует слияние мембран. Это наблюдение показало, что SNAP25 формирует кластеры независимо от функциональности мотива SNARE и связывается с кластерным синтаксином. ^{[ 23 ]}^{[ 24 ]} Исследования сложных органелл, таких как митохондрии, также полезны для структурного анализа с помощью STED-микроскопии. С помощью изготовленных на заказ микроскопов STED с латеральным разрешением менее 50 нм было обнаружено, что митохондриальные белки Tom20 , VDAC1 и COX2 распределяются в виде наноразмерных кластеров. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]} В другом исследовании использовалась самодельная STED-микроскопия и ДНК- связывающий флуоресцентный краситель, что позволило измерить длину фрагментов ДНК гораздо точнее, чем традиционные измерения с помощью конфокальной микроскопии . ^{[ 27 ]}

Коррелятивные методы

Благодаря своим функциям STED-микроскопия часто может использоваться с другими методами высокого разрешения. Разрешение как электронной, так и атомно-силовой микроскопии даже лучше, чем разрешение STED, но, объединив атомную силу с STED, Shima et al. смогли визуализировать актиновый цитоскелет клеток рака яичников человека , наблюдая при этом изменения в жесткости клеток. ^{[ 28 ]}

Многоцветный

Многоцветный STED был разработан в ответ на растущую проблему использования STED для изучения зависимости между структурой и функцией белков. Для изучения такого типа сложной системы необходимо использовать как минимум два отдельных флуорофора. Используя два флуоресцентных красителя и пары лучей, возможно колокализованное изображение синаптических и митохондриальных белковых кластеров с разрешением до 5 нм [18]. Многоцветный STED также использовался, чтобы показать, что различные популяции белков синаптических пузырьков не смешивают ускользающие синаптические бутоны. ^{[ 29 ]}^{[ 30 ]} Используя двухцветный STED с возможностью формирования изображений на протяжении всего срока службы, можно получить трехканальный STED.

Живая клетка

Первоначально STED считался полезным методом работы с живыми клетками. ^{[ 13 ]} К сожалению, единственным способом изучения клеток было мечение плазматической мембраны органическими красителями. ^{[ 29 ]} Сочетание STED с флуоресцентной корреляционной спектроскопией показало, что холестерин -опосредованные молекулярные комплексы улавливают сфинголипиды , но только временно. ^{[ 31 ]} Однако только флуоресцентные белки дают возможность визуализировать любую органеллу или белок в живой клетке. Было показано, что этот метод работает при латеральном разрешении 50 нм в клетках млекопитающих, экспрессирующих цитрин-тубулин. ^{[ 32 ]}^{[ 33 ]} Помимо обнаружения структур в клетках млекопитающих, STED позволил визуализировать кластеризацию белков PIN, меченных YFP, в плазматической мембране растительных клеток. ^{[ 34 ]}

Недавно многоцветный STED живых клеток был выполнен с использованием импульсного дальнего красного лазера и экспрессии CLIPf-тегов и SNAPf-тегов. ^{[ 35 ]}

В мозгу интактных животных

Поверхностные слои коры головного мозга мыши можно многократно визуализировать через краниальное окно. ^{[ 36 ]} Это позволяет следить за судьбой и формой отдельных дендритных шипиков в течение многих недель. ^{[ 37 ]} С помощью двухцветного STED можно даже определить наноструктуру постсинаптической плотности у живых животных. ^{[ 38 ]}

STED на видеоскоростях и выше

Для сверхвысокого разрешения требуются маленькие пиксели, что означает больше места для сбора данных в данном образце, что приводит к увеличению времени сбора данных. Однако размер фокусного пятна зависит от интенсивности лазера, используемого для истощения. В результате размер этого пятна можно настраивать, изменяя размер и скорость визуализации. Затем можно достичь компромисса между этими двумя факторами для каждой конкретной задачи визуализации. Была зафиксирована скорость 80 кадров в секунду с фокусными пятнами около 60 нм. ^{[ 1 ]}^{[ 39 ]} Для небольших полей зрения можно достичь скорости до 200 кадров в секунду. ^{[ 40 ]}

Проблемы

Фотообесцвечивание может происходить либо от возбуждения в еще более возбужденное состояние, либо от возбуждения в триплетном состоянии. Чтобы предотвратить возбуждение возбужденного электрона в другое, более высокое возбужденное состояние, энергия фотона, необходимая для запуска альтернативного излучения, не должна перекрывать энергию возбуждения из одного возбужденного состояния в другое. ^{[ 41 ]} Это гарантирует, что каждый лазерный фотон, контактирующий с флуорофорами, будет вызывать стимулированное излучение, а не вызывать возбуждение электрона в другое, более высокоэнергетическое состояние. Триплетные состояния живут гораздо дольше, чем синглетные состояния, и чтобы предотвратить возбуждение триплетных состояний, время между лазерными импульсами должно быть достаточно продолжительным, чтобы электрон мог релаксировать с помощью другого метода гашения, или следует добавить химическое соединение для гашения триплета. состояние. ^{[ 20 ]}^{[ 42 ]}^{[ 43 ]}

См. также

Ссылки

^ Перейти обратно: ^а ^б Вестфаль, В.; С.О. Риццоли; М. А. Лаутербах; Д. Камин; Р. Ян; SW Ад (2008). «Оптическая наноскопия в дальнем поле с видеоскоростью анализирует движение синаптических пузырьков» . Наука . 320 (5873): 246–249. Бибкод : 2008Sci...320..246W . дои : 10.1126/science.1154228 . ПМИД 18292304 . S2CID 14169050 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Черт, ЮВ; Вичманн, Дж. (1994). «Преодоление предела дифракционного разрешения с помощью стимулированного излучения: флуоресцентная микроскопия с истощением стимулированного излучения». Оптические письма . 19 (11): 780–782. Бибкод : 1994OptL...19..780H . дои : 10.1364/OL.19.000780 . ПМИД 19844443 .
^ Клар, Томас А.; Стефан В. Хелл (1999). «Субдифракционное разрешение в флуоресцентной микроскопии в дальнем поле». Оптические письма . 24 (14): 954–956. Бибкод : 1999OptL...24..954K . дои : 10.1364/OL.24.000954 . ПМИД 18073907 .
^ «Виктор Охонин» .
^ Охонин В.А. , Способ исследования микроструктуры образцов, Патент SU 1374922 , (См. также в базе данных патентов СССР SU 1374922 ), дата приоритета 10 апреля 1986 г., Опубликовано 30 июля 1991 г. , Реферат по патентам СССР, раздел EI, неделя 9218. , Derwent Publications Ltd., Лондон, Великобритания; Класс S03, с. 4. Цитируется по патентам США 5394268 А (1993 г.) и США RE38307 Е1 (1995 г.). Из английского перевода : "Сущность изобретения заключается в следующем. Люминесценция возбуждается в образце, помещенном в поле нескольких стоячих световых волн, вызывающих тушение люминесценции за счет вынужденных переходов...".
^ Перейти обратно: ^а ^б Блом, Х.; Брисмар, Х. (2014). «STED-микроскопия: повышенное разрешение для медицинских исследований?» . Журнал внутренней медицины . 276 (6): 560–578. дои : 10.1111/joim.12278 . ПМИД 24980774 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Мюллер, Т.; Шуман, К.; Крегело, А. (2012). «STED-микроскопия и ее применение: новый взгляд на клеточные процессы в наномасштабе». ХимияФизХим . 13 (8): 1986–2000. дои : 10.1002/cphc.201100986 . ПМИД 22374829 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Дыба, М.; Ад, SW (2003). «Фотостабильность флуоресцентного маркера при импульсном истощении возбужденного состояния за счет стимулированной эмиссии». Прикладная оптика . 42 (25): 5123–5129. Бибкод : 2003ApOpt..42.5123D . дои : 10.1364/AO.42.005123 . ПМИД 12962391 .
^ Тёрёк, П.; Манро, PRT (2004). «Использование векторных пучков Гаусса-Лагерра в STED-микроскопии» . Оптика Экспресс . 12 (15): 3605–3617. Бибкод : 2004OExpr..12.3605T . дои : 10.1364/OPEX.12.003605 . ПМИД 19483892 .
^ Келлер, Дж.; Шенле, А.; Ад, SW (2007). «Эффективные схемы ингибирования флуоресценции для микроскопии RESOLFT» . Оптика Экспресс . 15 (6): 3361–3371. Бибкод : 2007OExpr..15.3361K . дои : 10.1364/OE.15.003361 . ПМИД 19532577 . S2CID 31855914 .
^ SW Hell, Ройсс, М. (январь 2010 г.). «Устройство с двойным лучепреломлением превращает стандартный сканирующий микроскоп в STED-микроскоп, который также отображает ориентацию молекул» . Оптика Экспресс . 18 (2): 1049–58. Бибкод : 2010OExpr..18.1049R . дои : 10.1364/OE.18.001049 . ПМИД 20173926 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Вильдангер, Д.; Б. Р. Паттон; Х. Шилл; Л. Марселья; Дж. П. Хэдден; С. Кнауэр; А. Шенле; Джей Джи Рарити; Дж. Л. О'Брайен; ЮЗ Ад; Дж. М. Смит (2012). «Твердая иммерсия облегчает флуоресцентную микроскопию с нанометровым разрешением и локализацией излучателя субангстрема» . Продвинутые материалы . 24 (44): ОП309–ОП313. Бибкод : 2012AdM....24P.309W . дои : 10.1002/adma.201203033 . ПМЦ 3546393 . ПМИД 22968917 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Клар, Т.А.; С. Якобс; М. Дыба; А. Эгнер; SW Ад (2000). «Флуоресцентная микроскопия с барьером дифракционного разрешения, преодоленным стимулированным излучением» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 97 (15): 8206–8210. Бибкод : 2000PNAS...97.8206K . дои : 10.1073/pnas.97.15.8206 . ПМК 26924 . ПМИД 10899992 .
^ Черт, Стефан В. (ноябрь 2003 г.). «На пути к флуоресцентной наноскопии» . Природная биотехнология . 21 (11): 1347–1355. дои : 10.1038/nbt895 . ISSN 1546-1696 . ПМИД 14595362 . S2CID 25695312 .
^ Ланг, Зибер (апрель 2006 г.). «Мотив SNARE необходим для формирования кластеров синтаксинов в плазматической мембране» . Биофизический журнал . 90 (8): 2843–2851. Бибкод : 2006BpJ....90.2843S . doi : 10.1529/biophysj.105.079574 . ПМЦ 1414554 . ПМИД 16443657 .
^ Зибер, Джей-Джей; К.Л. Виллиг; Р. Хайнцманн; ЮЗ Ад; Т. Ланг (2006). «Мотив SNARE необходим для формирования кластеров синтаксинов в плазматической мембране» . Биофиз. Дж . 90 (8): 2843–2851. Бибкод : 2006BpJ....90.2843S . дои : 10.1529/biophysj.105.079574 . ПМЦ 1414554 . ПМИД 16443657 .
^ Виллиг, К.И.; Дж. Келлер; М. Босси; SW Ад (2006). «STED-микроскопия позволяет распознавать сборки наночастиц» . Нью Дж. Физ . 8 (6): 106. Бибкод : 2006NJPh....8..106W . дои : 10.1088/1367-2630/8/6/106 .
^ Вильдангер, Д.; Риттвегер; Каструп, Л.; Ад, SW (2008). «STED-микроскопия с лазерным источником суперконтинуума» . Опция Выражать . 16 (13): 9614–9621. Бибкод : 2008OExpr..16.9614W . дои : 10.1364/oe.16.009614 . ПМИД 18575529 . S2CID 38016354 .
^ Дунет, Г.; Дж. Келлер; CA Вурм; С.О. Риццоли; В. Вестфаль; А. Шонле; Р. Ян; С. Якобс; К. Эггелинг; SW Ад (2007). «Двухцветная флуоресцентная наноскопия в дальнем поле» . Биофиз. Дж . 92 (8): Л67–Л69. Бибкод : 2007BpJ....92L..67D . дои : 10.1529/biophysj.107.104497 . ПМК 1831704 . ПМИД 17307826 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Каспер, Р.; Б. Харк; К. Фортманн; П. Тиннефельд; ЮЗ Ад; М. Зауэр (2010). «Одномолекулярная STED-микроскопия с фотостабильными органическими флуорофорами». Маленький . 6 (13): 1379–1384. дои : 10.1002/smll.201000203 . ПМИД 20521266 .
^ Виллиг, К.И.; Б. Харк; Р. Медда; SW Ад (2007). «STED-микроскопия с использованием непрерывных волновых пучков». Нат. Методы . 4 (11): 915–918. дои : 10.1038/nmeth1108 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-DEE7-E . ПМИД 17952088 . S2CID 5576096 .
^ Бакерс, Дж.; Д. Вильдангер; Г. Висидомини; Л. Каструп; SW Ад (2011). «Одновременная многоцветная STED-визуализация для анализа колокализации» . Опция Выражать . 19 (4): 3130–3143. Бибкод : 2011OExpr..19.3130B . дои : 10.1364/OE.19.003130 . ПМИД 21369135 . S2CID 38820566 .
^ Халемани, Северная Дакота; И. Бетани; С.О. Риццоли; Т. Ланг (2010). «Структура и динамика двухспирального комплекса SNARE в живых клетках» . Трафик . 11 (3): 394–404. дои : 10.1111/j.1600-0854.2009.01020.x . ПМИД 20002656 . S2CID 22375304 .
^ Геуманн, У.; К. Шефер; Д. Ридель; Р. Ян; СО Риццоли (2010). «Белки синаптической мембраны образуют стабильные микродомены в ранних эндосомах». Микроск. Рез. Тех . 73 (6): 606–617. дои : 10.1002/jemt.20800 . ПМИД 19937745 . S2CID 5278558 .
^ Сингх, Х.; Р. Лу; ПФГ Родригес; Ю. Ву; Дж. К. Бопасса; Э. Стефани; Л. ТороМитохондрия (2012). «Визуализация и количественная оценка кластеров сердечных митохондриальных белков с помощью STED-микроскопии» . Митохондрия . 12 (2): 230–236. дои : 10.1016/j.mito.2011.09.004 . ПМЦ 3258335 . ПМИД 21982778 .
^ Вурм, Калифорния; Д. Нейман; Р. Шмидт; А. Эгнер; С. Якобс (2010). «Подготовка проб для STED-микроскопии». Визуализация живых клеток . Методы молекулярной биологии. Том. 591. стр. 185–199. дои : 10.1007/978-1-60761-404-3_11 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-D68F-7 . ISBN 978-1-60761-403-6 . ПМИД 19957131 .
^ Ким, Намду; Ким, Хён Джун; Ким, Ёнгю; Мин, Кён Сок; Ким, Сон Гын (2016). «Прямое и точное измерение длины одиночных растянутых фрагментов ДНК с помощью динамического молекулярного расчесывания и STED-наноскопии». Аналитическая и биоаналитическая химия . 408 (23): 6453–6459. дои : 10.1007/s00216-016-9764-9 . ПМИД 27457103 . S2CID 5591747 .
^ Шарма, С.; К. Сантискулвонг; Л. Бентолила; Дж. Рао; О. Дориго; Дж. К. Гимжевский (2011). «Корреляционное наномеханическое профилирование с визуализацией F-актина сверхвысокого разрешения открывает новое понимание механизмов резистентности к цисплатину в клетках рака яичников». Наномедицина: нанотехнологии, биология и медицина . 8 (5): 757–766. дои : 10.1016/j.nano.2011.09.015 . ПМИД 22024198 .
^ Перейти обратно: ^а ^б Хупман, П.; А. Пунге; С.В. Барыш; В. Вестфаль; Дж. Букерс; Ф. Опазо; И. Бетани; М. А. Лаутербах; ЮЗ Ад; СО Риццоли (2010). «Эндосомальная сортировка легковысвобождаемых синаптических везикул» (PDF) . Учеб. Натл. акад. наук. США . 107 (44): 19055–19060. Бибкод : 2010PNAS..10719055H . дои : 10.1073/pnas.1007037107 . ПМЦ 2973917 . ПМИД 20956291 .
^ Опазо, Ф.; А. Пунге; Дж. Бакерс; П. Хоопманн; Л. Каструп; ЮЗ Ад; СО Риццоли (2010). «Ограниченное смешивание компонентов синаптических везикул при рециркуляции везикул» . Трафик . 11 (6): 800–812. дои : 10.1111/j.1600-0854.2010.01058.x . ПМИД 20230528 . S2CID 16847327 .
^ Эггелинг, К.; Рингеманн, К.; Медда, Р.; Шварцманн, Г.; Сандхофф, К.; Полякова С.; Белов В.Н.; Хейн, Б.; фон Миддендорф, К.; Шонле, А.; Ад, Юго-Запад (2009). «Прямое наблюдение наномасштабной динамики мембранных липидов в живой клетке». Природа . 457 (7233): 1159–1162. Бибкод : 2009Natur.457.1159E . дои : 10.1038/nature07596 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-D8CA-4 . ПМИД 19098897 . S2CID 4428863 .
^ Виллиг, К.И.; Р.Р. Келлнер; Р. Медда; Б. Хелн; С. Якобс; SW Ад (2006). «Наномасштабное разрешение в микроскопии на основе GFP». Нат. Методы . 3 (9): 721–723. дои : 10.1038/nmeth922 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-5CC4-1 . ПМИД 16896340 . S2CID 9887386 .
^ Хейн, Б.; К. И. Виллиг; SW Ад (2008). «Наноскопия с истощением стимулированного излучения (STED) органеллы, меченной флуоресцентным белком, внутри живой клетки» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 105 (38): 14271–14276. Бибкод : 2008PNAS..10514271H . дои : 10.1073/pnas.0807705105 . ПМЦ 2538451 . ПМИД 18796604 .
^ Кляйне-Вен, Дж.; Вабник, К.; Мартиньер, А.; Ланговский, Л.; Виллиг, К.; Нарамото, С.; Лейтнер, Дж.; Танака, Х.; Джейкобс, С.; Роберт, С.; Лушниг, К.; Говертс, В.; Черт, ЮВ; Рунионс, Дж.; Фримл, Дж. (2011). «Рециркуляция, кластеризация и эндоцитоз совместно поддерживают полярность переносчика PIN-ауксина на плазматической мембране» . Мол. Сист. Биол . 7 : 540. дои : 10.1038/msb.2011.72 . ПМК 3261718 . ПМИД 22027551 .
^ Пеллетт, Пенсильвания; Х. Вс; Ти Джей Гулд; Дж. Э. Ротман; MQ Сюй; И. Р. Корреа; Дж. Беверсдорф (2011). «Двухцветная STED-микроскопия в живых клетках» . Биомед. Опция Выражать . 2 (8): 2364–2371. дои : 10.1364/boe.2.002364 . ПМК 3149534 . ПМИД 21833373 .
^ Стеффенс, Хайнц; Вегнер, Ваджа; Виллиг, Катрин И. (01 марта 2020 г.). «STED-микроскопия in vivo: путь к наноразмерной визуализации живой мыши» . Методы . 174 : 42–48. дои : 10.1016/j.ymeth.2019.05.020 . ISSN 1095-9130 . ПМИД 31132408 .
^ Стеффенс, Хайнц; Мотт, Александр К.; Ли, Сиюань; Вегнер, Ваджа; Швела, Павел; Кан, Ванесса, Вайоминг; Вольф, Фред; Либшер, Сабина; Виллиг, Катрин И. (2021). «Стабильный, но не жесткий: хроническая STED-наноскопия in vivo выявляет обширное ремоделирование шипов, что указывает на многочисленные факторы пластичности» . Достижения науки . 7 (24). Бибкод : 2021SciA....7.2806S . дои : 10.1126/sciadv.abf2806 . ISSN 2375-2548 . ПМК 8189587 . ПМИД 34108204 .
^ Вегнер, Ваджа; Стеффенс, Хайнц; Грегор, Карола; Вольф, Фред; Виллиг, Катрин И. (15 сентября 2021 г.). «Обогащение окружающей среды усиливает формирование паттернов и ремоделирование синаптической наноархитектуры, выявленное с помощью STED-наноскопии» . bioRxiv : 2020.10.23.352195. дои : 10.1101/2020.10.23.352195 . S2CID 237538532 .
^ Вестфаль, В.; М. А. Лаутербах; А. Ди Никола; SW Ад (2007). «Динамическая флуоресцентная наноскопия в дальнем поле» . Нью Дж. Физ . 9 (12): 435. Бибкод : 2007NJPh....9..435W . дои : 10.1088/1367-2630/12.09.435 .
^ Лаутербах, Массачусетс; Чайтанья К. Уллал; Фолькер Вестфаль; Стефан В. Хелл (2010). «Динамическая визуализация коллоидно-кристаллических наноструктур со скоростью 200 кадров в секунду» . Ленгмюр . 26 (18): 14400–14404. дои : 10.1021/la102474p . ПМИД 20715873 .
^ Хотта, Джи; Э. Фрон; П. Дедекер; КПФ Янссен; К. Ли; К. Маллен; Б. Харк; Дж. Бакерс; ЮЗ Ад; Дж. Хофкенс (2010). «Спектроскопическое обоснование эффективных флуорофоров для истощающей эмиссионной микроскопии». Дж. Ам. хим. Соц . 132 (14): 5021–5023. дои : 10.1021/ja100079w . hdl : 11858/00-001M-0000-0010-9310-1 . ПМИД 20307062 .
^ Фогельсанг, Дж.; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хайлеманн; М. Зауэр; П. Тиннеделд (2008). «Система восстановителей и окислителей уменьшает фотообесцвечивание и мерцание флуоресцентных красителей». Энджью. Хим . 120 (29): 5545–5550. дои : 10.1002/anie.200801518 .
^ Фогельсанг, Дж.; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хайлеманн; М. Зауэр; П. Тиннеделд (2008). «Восстановительная и окислительная система сводит к минимуму фотообесцвечивание и мерцание флуоресцентных красителей». Энджью. хим. Межд. Эд . 47 (29): 5465–5469. дои : 10.1002/anie.200801518 . ПМИД 18601270 .

Внешние ссылки

[STED1-1] Перейти обратно: ^а ^б Вестфаль, В.; С.О. Риццоли; М. А. Лаутербах; Д. Камин; Р. Ян; SW Ад (2008). «Оптическая наноскопия в дальнем поле с видеоскоростью анализирует движение синаптических пузырьков» . Наука . 320 (5873): 246–249. Бибкод : 2008Sci...320..246W . дои : 10.1126/science.1154228 . ПМИД 18292304 . S2CID 14169050 .

[STED13-2] Перейти обратно: ^а ^б Черт, ЮВ; Вичманн, Дж. (1994). «Преодоление предела дифракционного разрешения с помощью стимулированного излучения: флуоресцентная микроскопия с истощением стимулированного излучения». Оптические письма . 19 (11): 780–782. Бибкод : 1994OptL...19..780H . дои : 10.1364/OL.19.000780 . ПМИД 19844443 .

[STED35-3] Клар, Томас А.; Стефан В. Хелл (1999). «Субдифракционное разрешение в флуоресцентной микроскопии в дальнем поле». Оптические письма . 24 (14): 954–956. Бибкод : 1999OptL...24..954K . дои : 10.1364/OL.24.000954 . ПМИД 18073907 .

[4] «Виктор Охонин» .

[5] Охонин В.А. , Способ исследования микроструктуры образцов, Патент SU 1374922 , (См. также в базе данных патентов СССР SU 1374922 ), дата приоритета 10 апреля 1986 г., Опубликовано 30 июля 1991 г. , Реферат по патентам СССР, раздел EI, неделя 9218. , Derwent Publications Ltd., Лондон, Великобритания; Класс S03, с. 4. Цитируется по патентам США 5394268 А (1993 г.) и США RE38307 Е1 (1995 г.). Из английского перевода : "Сущность изобретения заключается в следующем. Люминесценция возбуждается в образце, помещенном в поле нескольких стоячих световых волн, вызывающих тушение люминесценции за счет вынужденных переходов...".

[STED_microscopy:_Increased_resoluti-6] Перейти обратно: ^а ^б Блом, Х.; Брисмар, Х. (2014). «STED-микроскопия: повышенное разрешение для медицинских исследований?» . Журнал внутренней медицины . 276 (6): 560–578. дои : 10.1111/joim.12278 . ПМИД 24980774 .

[STED2-7] Перейти обратно: ^а ^б Мюллер, Т.; Шуман, К.; Крегело, А. (2012). «STED-микроскопия и ее применение: новый взгляд на клеточные процессы в наномасштабе». ХимияФизХим . 13 (8): 1986–2000. дои : 10.1002/cphc.201100986 . ПМИД 22374829 .

[STED3-8] Перейти обратно: ^а ^б Дыба, М.; Ад, SW (2003). «Фотостабильность флуоресцентного маркера при импульсном истощении возбужденного состояния за счет стимулированной эмиссии». Прикладная оптика . 42 (25): 5123–5129. Бибкод : 2003ApOpt..42.5123D . дои : 10.1364/AO.42.005123 . ПМИД 12962391 .

[STED8-9] Тёрёк, П.; Манро, PRT (2004). «Использование векторных пучков Гаусса-Лагерра в STED-микроскопии» . Оптика Экспресс . 12 (15): 3605–3617. Бибкод : 2004OExpr..12.3605T . дои : 10.1364/OPEX.12.003605 . ПМИД 19483892 .

[STED9-10] Келлер, Дж.; Шенле, А.; Ад, SW (2007). «Эффективные схемы ингибирования флуоресценции для микроскопии RESOLFT» . Оптика Экспресс . 15 (6): 3361–3371. Бибкод : 2007OExpr..15.3361K . дои : 10.1364/OE.15.003361 . ПМИД 19532577 . S2CID 31855914 .

[STED10-11] SW Hell, Ройсс, М. (январь 2010 г.). «Устройство с двойным лучепреломлением превращает стандартный сканирующий микроскоп в STED-микроскоп, который также отображает ориентацию молекул» . Оптика Экспресс . 18 (2): 1049–58. Бибкод : 2010OExpr..18.1049R . дои : 10.1364/OE.18.001049 . ПМИД 20173926 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[STED11-12] Вильдангер, Д.; Б. Р. Паттон; Х. Шилл; Л. Марселья; Дж. П. Хэдден; С. Кнауэр; А. Шенле; Джей Джи Рарити; Дж. Л. О'Брайен; ЮЗ Ад; Дж. М. Смит (2012). «Твердая иммерсия облегчает флуоресцентную микроскопию с нанометровым разрешением и локализацией излучателя субангстрема» . Продвинутые материалы . 24 (44): ОП309–ОП313. Бибкод : 2012AdM....24P.309W . дои : 10.1002/adma.201203033 . ПМЦ 3546393 . ПМИД 22968917 .

[STED12-13] Перейти обратно: ^а ^б Клар, Т.А.; С. Якобс; М. Дыба; А. Эгнер; SW Ад (2000). «Флуоресцентная микроскопия с барьером дифракционного разрешения, преодоленным стимулированным излучением» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 97 (15): 8206–8210. Бибкод : 2000PNAS...97.8206K . дои : 10.1073/pnas.97.15.8206 . ПМК 26924 . ПМИД 10899992 .

[14] Черт, Стефан В. (ноябрь 2003 г.). «На пути к флуоресцентной наноскопии» . Природная биотехнология . 21 (11): 1347–1355. дои : 10.1038/nbt895 . ISSN 1546-1696 . ПМИД 14595362 . S2CID 25695312 .

[STED14-15] Ланг, Зибер (апрель 2006 г.). «Мотив SNARE необходим для формирования кластеров синтаксинов в плазматической мембране» . Биофизический журнал . 90 (8): 2843–2851. Бибкод : 2006BpJ....90.2843S . doi : 10.1529/biophysj.105.079574 . ПМЦ 1414554 . ПМИД 16443657 .

[STED15-16] Зибер, Джей-Джей; К.Л. Виллиг; Р. Хайнцманн; ЮЗ Ад; Т. Ланг (2006). «Мотив SNARE необходим для формирования кластеров синтаксинов в плазматической мембране» . Биофиз. Дж . 90 (8): 2843–2851. Бибкод : 2006BpJ....90.2843S . дои : 10.1529/biophysj.105.079574 . ПМЦ 1414554 . ПМИД 16443657 .

[STED16-17] Виллиг, К.И.; Дж. Келлер; М. Босси; SW Ад (2006). «STED-микроскопия позволяет распознавать сборки наночастиц» . Нью Дж. Физ . 8 (6): 106. Бибкод : 2006NJPh....8..106W . дои : 10.1088/1367-2630/8/6/106 .

[STED17-18] Вильдангер, Д.; Риттвегер; Каструп, Л.; Ад, SW (2008). «STED-микроскопия с лазерным источником суперконтинуума» . Опция Выражать . 16 (13): 9614–9621. Бибкод : 2008OExpr..16.9614W . дои : 10.1364/oe.16.009614 . ПМИД 18575529 . S2CID 38016354 .

[STED18-19] Дунет, Г.; Дж. Келлер; CA Вурм; С.О. Риццоли; В. Вестфаль; А. Шонле; Р. Ян; С. Якобс; К. Эггелинг; SW Ад (2007). «Двухцветная флуоресцентная наноскопия в дальнем поле» . Биофиз. Дж . 92 (8): Л67–Л69. Бибкод : 2007BpJ....92L..67D . дои : 10.1529/biophysj.107.104497 . ПМК 1831704 . ПМИД 17307826 .

[STED19-20] Перейти обратно: ^а ^б Каспер, Р.; Б. Харк; К. Фортманн; П. Тиннефельд; ЮЗ Ад; М. Зауэр (2010). «Одномолекулярная STED-микроскопия с фотостабильными органическими флуорофорами». Маленький . 6 (13): 1379–1384. дои : 10.1002/smll.201000203 . ПМИД 20521266 .

[STED20-21] Виллиг, К.И.; Б. Харк; Р. Медда; SW Ад (2007). «STED-микроскопия с использованием непрерывных волновых пучков». Нат. Методы . 4 (11): 915–918. дои : 10.1038/nmeth1108 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-DEE7-E . ПМИД 17952088 . S2CID 5576096 .

[STED21-22] Бакерс, Дж.; Д. Вильдангер; Г. Висидомини; Л. Каструп; SW Ад (2011). «Одновременная многоцветная STED-визуализация для анализа колокализации» . Опция Выражать . 19 (4): 3130–3143. Бибкод : 2011OExpr..19.3130B . дои : 10.1364/OE.19.003130 . ПМИД 21369135 . S2CID 38820566 .

[STED22-23] Халемани, Северная Дакота; И. Бетани; С.О. Риццоли; Т. Ланг (2010). «Структура и динамика двухспирального комплекса SNARE в живых клетках» . Трафик . 11 (3): 394–404. дои : 10.1111/j.1600-0854.2009.01020.x . ПМИД 20002656 . S2CID 22375304 .

[STED23-24] Геуманн, У.; К. Шефер; Д. Ридель; Р. Ян; СО Риццоли (2010). «Белки синаптической мембраны образуют стабильные микродомены в ранних эндосомах». Микроск. Рез. Тех . 73 (6): 606–617. дои : 10.1002/jemt.20800 . ПМИД 19937745 . S2CID 5278558 .

[STED24-25] Сингх, Х.; Р. Лу; ПФГ Родригес; Ю. Ву; Дж. К. Бопасса; Э. Стефани; Л. ТороМитохондрия (2012). «Визуализация и количественная оценка кластеров сердечных митохондриальных белков с помощью STED-микроскопии» . Митохондрия . 12 (2): 230–236. дои : 10.1016/j.mito.2011.09.004 . ПМЦ 3258335 . ПМИД 21982778 .

[STED25-26] Вурм, Калифорния; Д. Нейман; Р. Шмидт; А. Эгнер; С. Якобс (2010). «Подготовка проб для STED-микроскопии». Визуализация живых клеток . Методы молекулярной биологии. Том. 591. стр. 185–199. дои : 10.1007/978-1-60761-404-3_11 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-D68F-7 . ISBN 978-1-60761-403-6 . ПМИД 19957131 .

[27] Ким, Намду; Ким, Хён Джун; Ким, Ёнгю; Мин, Кён Сок; Ким, Сон Гын (2016). «Прямое и точное измерение длины одиночных растянутых фрагментов ДНК с помощью динамического молекулярного расчесывания и STED-наноскопии». Аналитическая и биоаналитическая химия . 408 (23): 6453–6459. дои : 10.1007/s00216-016-9764-9 . ПМИД 27457103 . S2CID 5591747 .

[STED26-28] Шарма, С.; К. Сантискулвонг; Л. Бентолила; Дж. Рао; О. Дориго; Дж. К. Гимжевский (2011). «Корреляционное наномеханическое профилирование с визуализацией F-актина сверхвысокого разрешения открывает новое понимание механизмов резистентности к цисплатину в клетках рака яичников». Наномедицина: нанотехнологии, биология и медицина . 8 (5): 757–766. дои : 10.1016/j.nano.2011.09.015 . ПМИД 22024198 .

[STED27-29] Перейти обратно: ^а ^б Хупман, П.; А. Пунге; С.В. Барыш; В. Вестфаль; Дж. Букерс; Ф. Опазо; И. Бетани; М. А. Лаутербах; ЮЗ Ад; СО Риццоли (2010). «Эндосомальная сортировка легковысвобождаемых синаптических везикул» (PDF) . Учеб. Натл. акад. наук. США . 107 (44): 19055–19060. Бибкод : 2010PNAS..10719055H . дои : 10.1073/pnas.1007037107 . ПМЦ 2973917 . ПМИД 20956291 .

[STED28-30] Опазо, Ф.; А. Пунге; Дж. Бакерс; П. Хоопманн; Л. Каструп; ЮЗ Ад; СО Риццоли (2010). «Ограниченное смешивание компонентов синаптических везикул при рециркуляции везикул» . Трафик . 11 (6): 800–812. дои : 10.1111/j.1600-0854.2010.01058.x . ПМИД 20230528 . S2CID 16847327 .

[STED29-31] Эггелинг, К.; Рингеманн, К.; Медда, Р.; Шварцманн, Г.; Сандхофф, К.; Полякова С.; Белов В.Н.; Хейн, Б.; фон Миддендорф, К.; Шонле, А.; Ад, Юго-Запад (2009). «Прямое наблюдение наномасштабной динамики мембранных липидов в живой клетке». Природа . 457 (7233): 1159–1162. Бибкод : 2009Natur.457.1159E . дои : 10.1038/nature07596 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-D8CA-4 . ПМИД 19098897 . S2CID 4428863 .

[STED30-32] Виллиг, К.И.; Р.Р. Келлнер; Р. Медда; Б. Хелн; С. Якобс; SW Ад (2006). «Наномасштабное разрешение в микроскопии на основе GFP». Нат. Методы . 3 (9): 721–723. дои : 10.1038/nmeth922 . hdl : 11858/00-001M-0000-0012-5CC4-1 . ПМИД 16896340 . S2CID 9887386 .

[STED31-33] Хейн, Б.; К. И. Виллиг; SW Ад (2008). «Наноскопия с истощением стимулированного излучения (STED) органеллы, меченной флуоресцентным белком, внутри живой клетки» . Учеб. Натл. акад. наук. США . 105 (38): 14271–14276. Бибкод : 2008PNAS..10514271H . дои : 10.1073/pnas.0807705105 . ПМЦ 2538451 . ПМИД 18796604 .

[STED32-34] Кляйне-Вен, Дж.; Вабник, К.; Мартиньер, А.; Ланговский, Л.; Виллиг, К.; Нарамото, С.; Лейтнер, Дж.; Танака, Х.; Джейкобс, С.; Роберт, С.; Лушниг, К.; Говертс, В.; Черт, ЮВ; Рунионс, Дж.; Фримл, Дж. (2011). «Рециркуляция, кластеризация и эндоцитоз совместно поддерживают полярность переносчика PIN-ауксина на плазматической мембране» . Мол. Сист. Биол . 7 : 540. дои : 10.1038/msb.2011.72 . ПМК 3261718 . ПМИД 22027551 .

[STED33-35] Пеллетт, Пенсильвания; Х. Вс; Ти Джей Гулд; Дж. Э. Ротман; MQ Сюй; И. Р. Корреа; Дж. Беверсдорф (2011). «Двухцветная STED-микроскопия в живых клетках» . Биомед. Опция Выражать . 2 (8): 2364–2371. дои : 10.1364/boe.2.002364 . ПМК 3149534 . ПМИД 21833373 .

[36] Стеффенс, Хайнц; Вегнер, Ваджа; Виллиг, Катрин И. (01 марта 2020 г.). «STED-микроскопия in vivo: путь к наноразмерной визуализации живой мыши» . Методы . 174 : 42–48. дои : 10.1016/j.ymeth.2019.05.020 . ISSN 1095-9130 . ПМИД 31132408 .

[37] Стеффенс, Хайнц; Мотт, Александр К.; Ли, Сиюань; Вегнер, Ваджа; Швела, Павел; Кан, Ванесса, Вайоминг; Вольф, Фред; Либшер, Сабина; Виллиг, Катрин И. (2021). «Стабильный, но не жесткий: хроническая STED-наноскопия in vivo выявляет обширное ремоделирование шипов, что указывает на многочисленные факторы пластичности» . Достижения науки . 7 (24). Бибкод : 2021SciA....7.2806S . дои : 10.1126/sciadv.abf2806 . ISSN 2375-2548 . ПМК 8189587 . ПМИД 34108204 .

[38] Вегнер, Ваджа; Стеффенс, Хайнц; Грегор, Карола; Вольф, Фред; Виллиг, Катрин И. (15 сентября 2021 г.). «Обогащение окружающей среды усиливает формирование паттернов и ремоделирование синаптической наноархитектуры, выявленное с помощью STED-наноскопии» . bioRxiv : 2020.10.23.352195. дои : 10.1101/2020.10.23.352195 . S2CID 237538532 .

[STED34-39] Вестфаль, В.; М. А. Лаутербах; А. Ди Никола; SW Ад (2007). «Динамическая флуоресцентная наноскопия в дальнем поле» . Нью Дж. Физ . 9 (12): 435. Бибкод : 2007NJPh....9..435W . дои : 10.1088/1367-2630/12.09.435 .

[40] Лаутербах, Массачусетс; Чайтанья К. Уллал; Фолькер Вестфаль; Стефан В. Хелл (2010). «Динамическая визуализация коллоидно-кристаллических наноструктур со скоростью 200 кадров в секунду» . Ленгмюр . 26 (18): 14400–14404. дои : 10.1021/la102474p . ПМИД 20715873 .

[STED4-41] Хотта, Джи; Э. Фрон; П. Дедекер; КПФ Янссен; К. Ли; К. Маллен; Б. Харк; Дж. Бакерс; ЮЗ Ад; Дж. Хофкенс (2010). «Спектроскопическое обоснование эффективных флуорофоров для истощающей эмиссионной микроскопии». Дж. Ам. хим. Соц . 132 (14): 5021–5023. дои : 10.1021/ja100079w . hdl : 11858/00-001M-0000-0010-9310-1 . ПМИД 20307062 .

[STED5-42] Фогельсанг, Дж.; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хайлеманн; М. Зауэр; П. Тиннеделд (2008). «Система восстановителей и окислителей уменьшает фотообесцвечивание и мерцание флуоресцентных красителей». Энджью. Хим . 120 (29): 5545–5550. дои : 10.1002/anie.200801518 .

[STED6-43] Фогельсанг, Дж.; Р. Каспер; К. Шрейнхауэр; Б. Человек; М. Хайлеманн; М. Зауэр; П. Тиннеделд (2008). «Восстановительная и окислительная система сводит к минимуму фотообесцвечивание и мерцание флуоресцентных красителей». Энджью. хим. Межд. Эд . 47 (29): 5465–5469. дои : 10.1002/anie.200801518 . ПМИД 18601270 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 23 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[ 27 ]

[ 28 ]

[ 29 ]

[ 30 ]

[ 31 ]

[ 32 ]

[ 33 ]

[ 34 ]

[ 35 ]

[ 36 ]

[ 37 ]

[ 38 ]

[ 39 ]

[ 40 ]

[ 41 ]

[ 42 ]

[ 43 ]

v т и Оптическая микроскопия
Микроскоп Оптическая микроскопия
Освещение и контрастные методы	Светлопольная микроскопия освещение по Келеру Темнопольная микроскопия Фазовый контраст Количественная фазово-контрастная микроскопия Дифференциальный интерференционный контраст (ДИК) Дисперсионное окрашивание Визуализация второй гармоники (SHIM) 4Пи микроскоп Структурированное освещение Сарфус Микроскопия интерференционного отражения (IRM/RICM) Рамановский
Флуоресцентные методы	Флуоресцентная микроскопия Конфокальная микроскопия Многофотонная микроскопия ( Двухфотонная , Трехфотонная ) Деконволюция изображения Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения (TIRF) Световая микроскопия (LSFM/SPIM) Решетчатая светолистовая микроскопия
субдифракция предельные методы	Дифракционный предел Вынужденное сокращение выбросов (STED) Фотоактивируемая локализационная микроскопия (PALM/STORM) Near-field (NSOM/SNOM)
Категория Коммонс