✖


Jump to content

CRISPR-интерференция

Транскрипционная репрессия через стерические препятствия
Часть серии о
КРИСПР
 
Редактирование генома : CRISPR-Cas

варианты:

Анти-CRISPR - CIRTS - CRISPeY
CRISPR-Cas10 - CRISPR-Cas13 - CRISPR-BEST
CRISPR-Disp - CRISPR-Gold - CRISPRa - CRISPRi
Easi-CRISPR – СДЕЛАЙТЕ ЭТО
Фермент
Cas9 – FokI – EcoRI – PstI – SmaI
HaeIII – Cas12a (Cpf1) – xCas9
Приложения
КАМЕРА - ICE - Направленная генетика
другой метод редактирования генома:
Прайм-редактирование - Pro-AG - RESCUE - TALEN - ZFN - LEAPER

CRISPR-интерференция ( CRISPRi ) — это метод генетических возмущений, который позволяет специфично подавлять экспрессию генов в прокариотических и эукариотических клетках. [1] Впервые он был разработан Стэнли Ци и его коллегами в лабораториях Венделла Лима , Адама Аркина, Джонатана Вайсмана и Дженнифер Дудны . [2] Специфическая для последовательности активация экспрессии генов относится к активации CRISPR (CRISPRa) .

На основе бактериальной генетической иммунной системы - CRISPR (кластеризованные короткие палиндромные повторы с регулярными интервалами), пути [3] этот метод обеспечивает дополнительный подход к РНК-интерференции . Однако разница между CRISPRi и RNAi заключается в том, что CRISPRi регулирует экспрессию генов преимущественно на уровне транскрипции, тогда как RNAi контролирует гены на уровне мРНК.

Фон

[ редактировать ]
См. Также: CRISPR и редактирование генов CRISPR.

Многие бактерии и большинство архей обладают адаптивной иммунной системой, которая включает гены CRISPR РНК (crRNA) и CRISPR-ассоциированные (cas).

О методе CRISPR-интерференции (CRISPRi) впервые сообщили Лэй С. Ци и исследователи из Калифорнийского университета в Сан-Франциско в начале 2013 года. [2] В технологии используется каталитически мертвый белок Cas9 (обычно обозначаемый как dCas9), которому не хватает эндонуклеазной активности для регуляции генов под управлением РНК. Специфичность нацеливания определяется комплементарным спариванием оснований одной направляющей РНК (sgRNA) с геномным локусом. sgRNA представляет собой химерную некодирующую РНК, которую можно разделить на три области: последовательность спаривания оснований длиной 20 нуклеотидов, шпильку, связывающую dCas9, из 42 нуклеотидов и терминатор из 40 нуклеотидов (бактерии, [4] [5] [6] дрожжи, [7] плодовые мушки, [8] данио, [9] мыши [10] ).

При создании синтетической sgRNA модифицируется только последовательность спаривания оснований длиной 20 нуклеотидов. Необходимо также учитывать вторичные переменные: нецелевые эффекты (для которых требуется простой BLAST-прогон последовательности спаривания оснований), поддержание структуры шпильки, связывающей dCas9, и обеспечение отсутствия сайтов рестрикции в модифицированной sgRNA. поскольку это может создать проблему на последующих этапах клонирования. Благодаря простоте конструкции sgRNA эту технологию можно масштабировать по всему геному. [11] CRISPRi основан на генерации каталитически неактивного Cas9. Это достигается путем введения точечных мутаций в два каталитических остатка (D10A и H840A) гена, кодирующего Cas9. [12] При этом dCas9 не способен расщеплять дцДНК, но сохраняет способность воздействовать на ДНК. Вместе sgRNA и dCas9 составляют минимальную систему ген-специфической регуляции. [2]

Транскрипционная регуляция

[ редактировать ]

Репрессии

[ редактировать ]

CRISPRi может стерически подавлять транскрипцию , блокируя инициацию или элонгацию транскрипции. Это достигается путем конструирования sgRNA, комплементарной промотору или экзонным последовательностям. Уровень репрессии транскрипции с мишенью внутри кодирующей последовательности зависит от цепи.В зависимости от природы эффектора CRISPR, либо матричная, либо нематричная цепь приводит к более сильной репрессии. [13] Для dCas9 (на основе системы CRISPR типа 2) репрессия сильнее, когда направляющая РНК комплементарна нематричной цепи. Было высказано предположение, что это связано с активностью геликазы, которая раскручивает гетеродуплекс РНК:ДНК раньше РНК pol II, когда sgRNA комплементарна цепи матрицы. В отличие от блока элонгации транскрипции, замалчивание не зависит от целевой цепи ДНК при нацеливании на сайт начала транскрипции. У прокариот это стерическое ингибирование может подавлять транскрипцию целевого гена почти на 99,9%; у архей достигнута более 90% репрессии; [14] в клетках человека наблюдалась до 90% репрессия. [2] У бактерий возможно насыщение мишени достаточно высоким уровнем комплекса dCas9. В этом случае сила репрессии зависит только от вероятности выброса dCas9 при столкновении с РНК-полимеразой, которая определяется направляющей последовательностью. [15] Более высокие температуры также связаны с более высокой вероятностью выброса и, следовательно, с более слабой репрессией. [15] У эукариот CRISPRi также может подавлять транскрипцию через эффекторный домен. Слияние репрессорного домена с dCas9 позволяет дополнительно подавлять транскрипцию, индуцируя гетерохроматинизацию. Например, хорошо изученный домен Krüppel-ассоциированного бокса (KRAB) может быть слит с dCas9 для подавления транскрипции целевого гена до 99% в клетках человека. [16]

Повышение эффективности

[ редактировать ]

В то время как редактирование генома каталитически активной нуклеазой Cas9 может сопровождаться необратимыми нецелевыми геномными изменениями, CRISPRi высокоспецифичен с минимальными нецелевыми обратимыми эффектами для двух различных последовательностей sgRNA. [16] Тем не менее, было разработано несколько методов повышения эффективности модуляции транскрипции. Идентификация сайта начала транскрипции целевого гена и учет предпочтений sgRNA повышает эффективность, равно как и наличие доступного хроматина в целевом сайте. [17]

Другие методы

[ редактировать ]

Наряду с другими упомянутыми улучшениями , такие факторы, как расстояние от начала транскрипции и локальное состояние хроматина, могут быть критическими параметрами при определении эффективности активации/репрессии. Оптимизация экспрессии, стабильности, ядерной локализации и взаимодействия dCas9 и sgRNA, вероятно, позволит дополнительно повысить эффективность CRISPRi в клетках млекопитающих. [2]

Приложения

[ редактировать ]

Генный нокдаун

[ редактировать ]

Было показано, что на значительную часть генома (как репортерные, так и эндогенные гены) эукариот можно нацеливаться с помощью лентивирусных конструкций для экспрессии dCas9 и sgRNA с эффективностью, сравнимой с существующими методами, такими как белки RNAi и TALE. [16] В тандеме или как отдельная система CRISPRi может использоваться для достижения тех же целей , что и RNAi.

Для бактерий нокдаун генов с помощью CRISPRi был полностью реализован и охарактеризован (нецелевой анализ, утечка репрессии) как для грамотрицательных E. coli, так и для грамотрицательных бактерий. [4] [6] и грамположительный B. subtilis . [5]

Не только у бактерий, но и у архей (например, M. acetivorans ) CRISPRi-Cas9 был успешно использован для нокдауна нескольких генов/оперонов, связанных с фиксацией азота. [14]

Рабочий процесс строительства CRISPRi

Аллельная серия

[ редактировать ]

Дифференциальной экспрессии генов можно достичь путем изменения эффективности спаривания оснований огРНК с целевыми локусами. [11] Теоретически, модулирование этой эффективности можно использовать для создания аллельной серии для любого данного гена, по сути создавая коллекцию гипо- и гиперморфов. Эти мощные коллекции можно использовать для проведения любого генетического исследования. Для гипоморфов это позволяет постепенно снижать функцию генов в отличие от бинарной природы нокаутов генов и непредсказуемости нокдаунов. Для гиперморфов это отличается от традиционного метода клонирования интересующего гена под промоторами переменной силы.

Визуализация геномных локусов

[ редактировать ]

Слияние флуоресцентного белка с dCas9 позволяет визуализировать геномные локусы в живых клетках человека. [18] По сравнению с флуоресцентной гибридизацией in situ (FISH), этот метод позволяет однозначно динамически отслеживать хромосомные локусы. Это использовалось для изучения архитектуры хроматина и динамики ядерной организации в лабораторных клеточных линиях, включая клетки HeLa.

Стволовые клетки

[ редактировать ]

Активация факторов Яманаки с помощью CRISPRa использовалась для индукции плюрипотентности в клетках человека и мыши, что представляет собой альтернативу технологии iPS. [19] [20] Кроме того, крупномасштабные активационные скрининги могут быть использованы для идентификации белков, которые способствуют индуцированной плюрипотентности или, наоборот, способствуют дифференцировке.к определенной клеточной линии. [21]

Генетический скрининг

[ редактировать ]

Способность повышать экспрессию генов с помощью dCas9-SunTag с помощью одной sgRNA также открывает двери для крупномасштабных генетических скринингов, таких как Perturb-seq , для выявления фенотипов, возникающих в результате повышенной или пониженной экспрессии генов, что будет особенно важно для понимания Эффекты регуляции генов при раке. [22] Кроме того, было показано, что системы CRISPRi можно передавать с помощью механизмов горизонтального переноса генов, таких как бактериальная конъюгация , и была продемонстрирована специфическая репрессия репортерных генов в клетках-реципиентах. CRISPRi может служить инструментом генетического скрининга и, возможно, контроля популяции бактерий. [23]

Преимущества и ограничения

[ редактировать ]

Преимущества

[ редактировать ]
  1. CRISPRi может заглушить интересующий ген-мишень до 99,9% репрессии. [11] Силу репрессии также можно регулировать, изменяя степень комплементарности между направляющей РНК и мишенью. В отличие от индуцируемых промоторов, частичная репрессия CRISPRi не добавляет транскрипционного шума к экспрессии мишени. [15] Поскольку уровень репрессии закодирован в последовательности ДНК, различные уровни экспрессии можно выращивать в условиях конкуренции и идентифицировать путем секвенирования. [24]
  2. Поскольку CRISPRi основан на спаривании оснований Уотсона-Крика sgRNA-ДНК и мотиве NGG PAM, выбор целевых сайтов в геноме является простым и гибким. Были разработаны тщательно определенные протоколы. [11]
  3. Множественные sgRNA можно использовать не только для одновременного контроля нескольких разных генов (мультиплекс CRISPRi), но и для повышения эффективности регуляции одного и того же гена-мишени. Популярная стратегия одновременной экспрессии множества sgRNA заключается в объединении sgRNA в одну конструкцию с множеством промоторов или процессинговых элементов. Например, в массивах сверхдлинных sgRNA (ELSA) используются неповторяющиеся части, что позволяет осуществлять прямой синтез массивов 12-sgRNA от поставщика генного синтеза, они могут быть напрямую интегрированы в геном E. coli без возникновения гомологичной рекомбинации и могут одновременно воздействовать на множество генов. для достижения сложных фенотипов. [25]
  4. Хотя эти две системы могут дополнять друг друга, CRISPRi обеспечивает преимущества перед RNAi. Будучи экзогенной системой, CRISPRi не конкурирует с эндогенными механизмами, такими как экспрессия или функция микроРНК. Более того, поскольку CRISPRi действует на уровне ДНК, можно нацеливаться на такие транскрипты, как некодирующие РНК, микроРНК, антисмысловые транскрипты, ядерно-локализованные РНК и транскрипты полимеразы III. Наконец, CRISPRi обладает гораздо большим целевым пространством последовательностей; промоторы и, теоретически, интроны также могут быть нацелены. [16]
  5. В E. coli создание штамма с нокдауном гена происходит чрезвычайно быстро и требует только одностадийной рекомбинации олигонуклеотидов . [6]

Ограничения

[ редактировать ]
  1. Требование последовательности мотива, примыкающего к протоспейсеру (PAM), ограничивает количество потенциальных целевых последовательностей. Cas9 и его гомологи могут использовать разные последовательности PAM и, следовательно, теоретически могут быть использованы для увеличения количества потенциальных последовательностей-мишеней. [11]
  2. Специфичность последовательности к целевым локусам составляет всего 14 нт (12 нт sgRNA и 2 нт PAM), что может повторяться примерно 11 раз в геноме человека. [11] Репрессия обратно коррелирует с расстоянием сайта-мишени от сайта начала транскрипции. Вычислительные прогнозы по всему геному или отбор гомологов Cas9 с более длинным PAM могут уменьшить неспецифическое нацеливание.
  3. Состояния и модификации эндогенного хроматина могут препятствовать специфичному для последовательности связыванию комплекса dCas9-sgRNA. [11] Уровень репрессии транскрипции в клетках млекопитающих варьируется в зависимости от гена. Необходима большая работа, чтобы понять роль локальной конформации ДНК и хроматина в отношении эффективности связывания и регуляции.
  4. CRISPRi может влиять на гены, находящиеся в непосредственной близости от целевого гена. Это особенно важно при нацеливании на гены, которые либо перекрывают другие гены (смысловое или антисмысловое перекрытие), либо управляются двунаправленным промотором. [26]
  5. Сообщалось о специфической для последовательностей токсичности у эукариот, при этом некоторые последовательности в проксимальной области PAM вызывают большое бремя приспособленности. [27] Этот феномен, называемый «эффектом плохого семени», до сих пор необъясним, но его можно уменьшить за счет оптимизации уровня экспрессии dCas9. [28]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Йенсен Т.И., Миккельсен Н.С., Гао З., Фоссельтедер Дж., Пабст Г., Аксельгаард Э. и др. (ноябрь 2021 г.). «Направленная регуляция транскрипции в первичных клетках с помощью CRISPRa и CRISPRi» . Геномные исследования . 31 (11): 2120–2130. дои : 10.1101/гр.275607.121 . ПМЦ   8559706 . ПМИД   34407984 .
  2. ^ Jump up to: а б с д и Ци Л.С., Ларсон М.Х., Гилберт Л.А., Дудна Дж.А., Вайсман Дж.С., Аркин А.П., Лим В.А. (февраль 2013 г.). «Перепрофилирование CRISPR в качестве РНК-ориентированной платформы для последовательно-специфического контроля экспрессии генов» . Клетка . 152 (5): 1173–1183. дои : 10.1016/j.cell.2013.02.022 . ПМЦ   3664290 . ПМИД   23452860 .
  3. ^ Баррангу Р., Фремо С., Дево Х., Ричардс М., Бояваль П., Муано С. и др. (март 2007 г.). «CRISPR обеспечивает приобретенную устойчивость прокариот к вирусам». Наука . 315 (5819): 1709–1712. Бибкод : 2007Sci...315.1709B . дои : 10.1126/science.1138140 . hdl : 20.500.11794/38902 . ПМИД   17379808 . S2CID   3888761 .
  4. ^ Jump up to: а б Цзян В., Бикард Д., Кокс Д., Чжан Ф., Марраффини Л.А. (март 2013 г.). «Редактирование бактериальных геномов под контролем РНК с использованием систем CRISPR-Cas» . Природная биотехнология . 31 (3): 233–239. дои : 10.1038/nbt.2508 . ПМЦ   3748948 . ПМИД   23360965 .
  5. ^ Jump up to: а б Питерс Дж.М., Колавин А., Ши Х., Чарни Т.Л., Ларсон М.Х., Вонг С. и др. (июнь 2016 г.). «Комплексный функциональный анализ основных генов бактерий на основе CRISPR» . Клетка . 165 (6): 1493–1506. дои : 10.1016/j.cell.2016.05.003 . ПМЦ   4894308 . ПМИД   27238023 .
  6. ^ Jump up to: а б с Ли XT, Джун Ю, Эрикстад М.Дж., Браун С.Д., Паркс А., Корт Д.Л., Джун С. (декабрь 2016 г.). «tCRISPRi: настраиваемый и обратимый, одноэтапный контроль экспрессии генов» . Научные отчеты . 6 : 39076. Бибкод : 2016NatSR...639076L . дои : 10.1038/srep39076 . ПМК   5171832 . ПМИД   27996021 .
  7. ^ ДиКарло Дж.Э., Норвилл Дж.Э., Мали П., Риос Х, Аах Дж., Черч ГМ (апрель 2013 г.). «Геномная инженерия Saccharomyces cerevisiae с использованием систем CRISPR-Cas» . Исследования нуклеиновых кислот . 41 (7): 4336–4343. дои : 10.1093/нар/gkt135 . ПМЦ   3627607 . ПМИД   23460208 .
  8. ^ Грац С.Дж., Каммингс А.М., Нгуен Дж.Н., Хэмм Д.К., Донохью Л.К., Харрисон М.М. и др. (август 2013 г.). «Геномная инженерия дрозофилы с помощью нуклеазы Cas9, управляемой РНК CRISPR» . Генетика . 194 (4): 1029–1035. дои : 10.1534/генетика.113.152710 . ПМЦ   3730909 . ПМИД   23709638 .
  9. ^ Хван Вай, Фу Ю, Рейон Д., Мэдер М.Л., Цай С.К., Сандер Дж.Д. и др. (март 2013 г.). «Эффективное редактирование генома рыбок данио с использованием системы CRISPR-Cas» . Природная биотехнология . 31 (3): 227–229. дои : 10.1038/nbt.2501 . ПМЦ   3686313 . ПМИД   23360964 .
  10. ^ Ван Х., Ян Х., Шивалила К.С., Давлати М.М., Ченг А.В., Чжан Ф., Джениш Р. (май 2013 г.). «Одноэтапное создание мышей, несущих мутации в нескольких генах, с помощью геномной инженерии, опосредованной CRISPR/Cas» . Клетка . 153 (4): 910–918. дои : 10.1016/j.cell.2013.04.025 . ПМЦ   3969854 . ПМИД   23643243 .
  11. ^ Jump up to: а б с д и ж г Ларсон М.Х., Гилберт Л.А., Ван X, Лим В.А., Вайсман Дж.С., Ци Л.С. (ноябрь 2013 г.). «CRISPR-интерференция (CRISPRi) для последовательно-специфического контроля экспрессии генов» . Протоколы природы . 8 (11): 2180–2196. дои : 10.1038/nprot.2013.132 . ПМЦ   3922765 . ПМИД   24136345 .
  12. ^ Джинек М., Чилински К., Фонфара И., Хауэр М., Дудна Дж.А., Шарпантье Э. (август 2012 г.). «Программируемая ДНК-эндонуклеаза, управляемая двойной РНК, в адаптивном бактериальном иммунитете» . Наука . 337 (6096): 816–821. Бибкод : 2012Sci...337..816J . дои : 10.1126/science.1225829 . ПМК   6286148 . ПМИД   22745249 .
  13. ^ Вигуру А., Бикар Д. (май 2020 г.). «Инструменты CRISPR для контроля экспрессии генов в бактериях» . Обзоры микробиологии и молекулярной биологии . 84 (2). дои : 10.1128/MMBR.00077-19 . ПМЦ   7117552 . ПМИД   32238445 .
  14. ^ Jump up to: а б Дхамад А.Е., диджей Лесснер (октябрь 2020 г.). Атоми Х (ред.). «Система CRISPRi-dCas9 для архей и ее использование для изучения функции генов во время фиксации азота с помощью Methanosarcina acetivorans» . Прикладная и экологическая микробиология . 86 (21): e01402–20. Бибкод : 2020ApEnM..86E1402D . дои : 10.1128/АЕМ.01402-20 . ПМЦ   7580536 . ПМИД   32826220 .
  15. ^ Jump up to: а б с Вигуру А., Олдевуртель Е., Кюи Л., Бикард Д., ван Теффелен С. (март 2018 г.). «Настройка способности dCas9 блокировать транскрипцию обеспечивает надежное и бесшумное нокдаун бактериальных генов» . Молекулярная системная биология . 14 (3): e7899. дои : 10.15252/msb.20177899 . ПМЦ   5842579 . ПМИД   29519933 .
  16. ^ Jump up to: а б с д Гилберт Л.А., Ларсон М.Х., Морсут Л., Лю З., Брар Г.А., Торрес С.Е. и др. (июль 2013 г.). «CRISPR-опосредованная модульная РНК-регулируемая регуляция транскрипции у эукариот» . Клетка . 154 (2): 442–451. дои : 10.1016/j.cell.2013.06.044 . ПМК   3770145 . ПМИД   23849981 .
  17. ^ Радишевская А, Шлюева Д, Мюллер И, Хелин К (октябрь 2016 г.). «Оптимизация положения sgRNA заметно повышает эффективность репрессии транскрипции, опосредованной CRISPR/dCas9» . Исследования нуклеиновых кислот . 44 (18): е141. дои : 10.1093/nar/gkw583 . ПМК   5062975 . ПМИД   27353328 .
  18. ^ Чен Б., Гилберт Л.А., Чимини Б.А., Шницбауэр Дж., Чжан В., Ли Г.В. и др. (декабрь 2013 г.). «Динамическая визуализация геномных локусов в живых клетках человека с помощью оптимизированной системы CRISPR/Cas» . Клетка . 155 (7): 1479–1491. дои : 10.1016/j.cell.2013.12.001 . ПМЦ   3918502 . ПМИД   24360272 .
  19. ^ Кернс Н.А., Дженга Р.М., Энуаме М.С., Гарбер М., Вулф С.А., Маер Р. (январь 2014 г.). «Эффекто-опосредованная Cas9 регуляция транскрипции и дифференцировки в плюрипотентных стволовых клетках человека» . Разработка . 141 (1): 219–223. дои : 10.1242/dev.103341 . ПМЦ   3865759 . ПМИД   24346702 .
  20. ^ Ху Дж., Лэй Ю., Вонг В.К., Лю С., Ли К.С., Хе Х и др. (апрель 2014 г.). «Прямая активация генов Oct4 человека и мыши с использованием сконструированных факторов транскрипции TALE и Cas9» . Исследования нуклеиновых кислот . 42 (7): 4375–4390. дои : 10.1093/нар/gku109 . ПМЦ   3985678 . ПМИД   24500196 .
  21. ^ Такахаши К., Яманака С. (август 2006 г.). «Индукция плюрипотентных стволовых клеток из культур эмбриональных и взрослых фибробластов мышей с помощью определенных факторов». Клетка . 126 (4): 663–676. дои : 10.1016/j.cell.2006.07.024 . hdl : 2433/159777 . ПМИД   16904174 . S2CID   1565219 .
  22. ^ Таненбаум М.Э., Гилберт Л.А., Ци Л.С., Вайсман Дж.С., Вейл Р.Д. (октябрь 2014 г.). «Система мечения белков для усиления сигнала при экспрессии генов и флуоресцентной визуализации» . Клетка . 159 (3): 635–646. дои : 10.1016/j.cell.2014.09.039 . ПМК   4252608 . ПМИД   25307933 .
  23. ^ Джи В., Ли Д., Вонг Э., Дадлани П., Динь Д., Хуанг В. и др. (декабрь 2014 г.). «Специфическая репрессия генов системой CRISPRi, передаваемая посредством бактериальной конъюгации» . ACS Синтетическая биология . 3 (12): 929–931. дои : 10.1021/sb500036q . ПМЦ   4277763 . ПМИД   25409531 .
  24. ^ Хокинс Дж.С., Силвис М.Р., Ку Б.М., Питерс Дж.М., Йост М., Хирн CC и др. (15 октября 2019 г.). «Модулируемая эффективность CRISPRi демонстрирует эволюционную консервативность основных взаимосвязей экспрессии генов и приспособленности у бактерий» . bioRxiv : 805333. doi : 10.1101/805333 . S2CID   208583386 . Проверено 16 января 2020 г.
  25. ^ Рейс А.С., Халпер С.М., Везо Г.Е., Цетнар Д.П., Хоссейн А., Клауэр П.Р., Салис Х.М. (ноябрь 2019 г.). «Одновременная репрессия нескольких бактериальных генов с использованием неповторяющихся сверхдлинных массивов sgRNA». Природная биотехнология . 37 (11): 1294–1301. дои : 10.1038/s41587-019-0286-9 . ОСТИ   1569832 . ПМИД   31591552 . S2CID   203852115 .
  26. ^ Гоял А., Мячева К., Гросс М., Клингенберг М., Дюран Арке Б., Дидерихс С. (февраль 2017 г.). «Проблемы применения CRISPR/Cas9 для генов длинных некодирующих РНК» . Исследования нуклеиновых кислот . 45 (3): е12. дои : 10.1093/nar/gkw883 . ПМЦ   5388423 . ПМИД   28180319 .
  27. ^ Кюи Л., Вигуру А., Руссе Ф., Варе Х., Ханна В., Бикард Д. (май 2018 г.). «Скрининг CRISPRi в E. coli выявил специфичную для последовательности токсичность dCas9» . Природные коммуникации . 9 (1): 1912. Бибкод : 2018NatCo...9.1912C . дои : 10.1038/s41467-018-04209-5 . ПМЦ   5954155 . ПМИД   29765036 .
  28. ^ Депардье Ф., Бикар Д. (февраль 2020 г.). «Заглушение генов с помощью CRISPRi в бактериях и оптимизация уровней экспрессии dCas9» (PDF) . Методы . Методы характеристики, применения и обучения систем CRISPR-Cas. 172 : 61–75. дои : 10.1016/j.ymeth.2019.07.024 . ПМИД   31377338 . S2CID   199436713 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=CRISPR_interference&oldid=1214981619"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: a5583a1642c0e6d50327b5c576a2c46b__1711098480
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/a5/6b/a5583a1642c0e6d50327b5c576a2c46b.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
CRISPR interference - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)