Нанодифференциальная сканирующая флуориметрия
 | В этой статье есть несколько проблем. Пожалуйста, помогите улучшить его или обсудите эти проблемы на странице обсуждения . ( Узнайте, как и когда удалять эти шаблонные сообщения )
|
NanoDSF — это модифицированный метод дифференциальной сканирующей флуориметрии для определения стабильности белка с использованием внутренней флуоресценции триптофана или тирозина . [1] [2]
Стабильность белка обычно определяют с помощью экспериментов по термическому или химическому разворачиванию. [3] В экспериментах по термическому разворачиванию для разворачивания белков применяется линейный температурный режим, тогда как в экспериментах по химическому разворачиванию используются химические денатуранты в возрастающих концентрациях.Термическая стабильность белка обычно описывается «температурой плавления » или «Tm», при которой 50% популяции белка развернуто, что соответствует средней точке перехода от свернутого состояния к развернутому.
В отличие от традиционных DSF методов , nanoDSF использует флуоресценцию триптофана или тирозина для мониторинга разворачивания белка. Как интенсивность флуоресценции, так и максимум флуоресценции сильно зависят от ближайшего окружения триптофана. [4] Следовательно, соотношение интенсивностей флуоресценции при 350 нм и 330 нм подходит для обнаружения любых изменений в структуре белка, например, из-за разворачивания белка.
Его области применения включают разработку антител, исследование мембранных белков , контроль качества и разработку рецептур . [5] [6] NanoDSF также использовался для быстрой оценки температуры плавления библиотек ферментов для биотехнологических приложений. [7]
Примеры применения nanoDSF
[ редактировать ]Технология nanoDSF использовалась для подтверждения целевого связывания BI-3231 с HSD17B13 и выяснения его неконкурентного способа ингибирования по отношению к NAD. + . [8]
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Койфль Ф., Рапп Ф. «nanoDSF» . НаноТемпер Технологии ГмбХ.
{{cite journal}}: Для цитирования журнала требуется|journal=( помощь ) - ^ «Прибор для измерения стабильности белка» . Новости генной инженерии и биотехнологии . 35 (4). 15 февраля 2015 года. Архивировано из оригинала 12 сентября 2015 года . Проверено 9 марта 2015 г.
- ^ Сенистерра Дж., Чау И., Ведади М. (апрель 2012 г.). «Анализ термической денатурации в химической биологии». Технологии анализа и разработки лекарств . 10 (2): 128–36. дои : 10.1089/adt.2011.0390 . ПМИД 22066913 .
- ^ Лакович-младший (2006). Принципы флуоресцентной спектроскопии (3-е изд.). Спрингер США. ISBN 978-0-387-31278-1 .
- ^ Койфль Ф., Рапп Ф. «Замечания по применению: технология nanoDSF» . НаноТемпер Технологии ГмбХ. Архивировано из оригинала 5 февраля 2015 г. Проверено 2 марта 2015 г.
- ^ «Заметки приложения» . Развязанные лаборатории.
- ^ Магнуссон А.О., Секрени А., Йостен Х.Дж., Финниган Дж., Чарнок С., Фесснер В.Д. (январь 2019 г.). «nanoDSF как инструмент скрининга ферментных библиотек и развития биотехнологий» . Журнал ФЭБС . 286 (1): 184–204. дои : 10.1111/февраль 14696 . ПМЦ 7379660 . ПМИД 30414312 .
- ^ Тамм, Свен; Вильвахер, Марина К.; Аспнес, Гэри Э.; Бретшнайдер, Том; Браун, Николас Ф.; Бушбом-Хельмке, Силке; Фокс, Томас; Гаргано, Эмануэле М.; Грабовский, Дэниел; Хенке, Кристоф; Матера, Дамиан; Муек, Катя; Петерс, Стефан; Рейндл, София; Ритер, Дорис (23 февраля 2023 г.). «Открытие нового мощного и селективного ингибитора HSD17B13, BI-3231, хорошо изученного химического зонда, доступного для открытой науки» . Журнал медицинской химии . 66 (4): 2832–2850. doi : 10.1021/acs.jmedchem.2c01884 . ISSN 0022-2623 . ПМЦ 9969402 . ПМИД 36727857 .
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- де Ланге О., Вольф С., Тиль П., Крюгер Дж., Клеуш С., Кольбахер О., Лахай Т. (ноябрь 2015 г.). «ДНК-связывающие белки морских бактерий расширяют известное разнообразие последовательностей TALE-подобных повторов» . Исследования нуклеиновых кислот . 43 (20): 10065–80. дои : 10.1093/нар/gkv1053 . ПМЦ 4787788 . ПМИД 26481363 .
- Линке П., Аманинг К., Машбергер М., Валле Ф., Штайер В., Бааске П. и др. (апрель 2016 г.). «Автоматизированный метод микромасштабного термофореза для обнаружения свинцов на основе фрагментов» . Журнал биомолекулярного скрининга . 21 (4): 414–21. дои : 10.1177/1087057115618347 . ПМК 4800460 . ПМИД 26637553 .