✖


Jump to content

РНК-термометр

Это хорошая статья. Нажмите здесь для получения дополнительной информации.
(Перенаправлено с РНК-термометров )

Мотив РНК термометра FourU с выделенной последовательностью Шайна-Дальгарно .

РНК -термометр (или РНК-термосенсор ) представляет собой температуре чувствительную к некодирующую молекулу РНК, которая регулирует экспрессию генов . [ 1 ] Его уникальная особенность заключается в том, что для функционирования ему не нужны белки или метаболиты, а он реагирует только на изменения температуры. [ 2 ] РНК-термометры часто регулируют гены, необходимые во время реакции на тепловой или холодовой шок , но они участвуют и в других регуляторных функциях, таких как патогенность и голодание . [ 1 ]

В общем, РНК-термометры работают, изменяя свою вторичную и третичную структуру. [ 3 ] в ответ на колебания температуры. Этот структурный переход может затем обнажить или закрыть важные области РНК, такие как сайт связывания рибосомы , что затем влияет на скорость трансляции близлежащего гена, кодирующего белок .

РНК-термометры, наряду с рибопереключателями , используются в качестве примеров в поддержку гипотезы мира РНК . Эта теория предполагает, что РНК когда-то была единственной нуклеиновой кислотой, присутствующей в клетках, и была заменена нынешней системой ДНК → РНК → белок . [ 4 ]

Примеры РНК-термометров включают FourU , [ 5 ] элемент Hsp90 цис- регуляторный , [ 6 ] элемент РОЗА , [ 7 ] термометр Лиг РНК , [ 8 ] и термометр Hsp17 . [ 9 ]

Открытие

[ редактировать ]

О первом термочувствительном элементе РНК было сообщено в 1989 году. [ 10 ] До этого исследования было обнаружено, что мутации выше места начала транскрипции в лямбда (λ) фага cIII мРНК влияют на уровень трансляции белка cIII. [ 11 ] Этот белок участвует в выборе литического или лизогенного жизненного цикла фага λ, при этом высокие концентрации cIII способствуют лизогении. [ 11 ] Дальнейшее исследование этой вышележащей области РНК выявило две альтернативные вторичные структуры ; Экспериментальное исследование показало, что структуры взаимозаменяемы и зависят как от концентрации ионов магния , так и от температуры. [ 10 ] [ 12 ] Сейчас считается, что этот РНК-термометр способствует входу в литический цикл при тепловом стрессе, что позволяет бактериофагу быстро размножаться и покидать клетку-хозяина. [ 1 ]

Термин «РНК-термометр» был придуман только в 1999 году. [ 13 ] когда его применили к элементу РНК rpoH, идентифицированному в Escherichia coli . [ 14 ] Совсем недавно биоинформатические поиски были использованы для обнаружения нескольких новых потенциальных термометров на основе РНК. [ 15 ] Однако традиционные поиски на основе последовательностей неэффективны, поскольку вторичная структура элемента гораздо более консервативна , чем последовательность нуклеиновой кислоты . [ 15 ]

Биологические реакции и организм чувствительны к температуре для функционирования клеток. РНК-термометры являются эффективным способом реагирования на температуру, поскольку они позволяют клеткам отслеживать и ощущать изменения, чтобы поддерживать клетку живой и стабильной. Механизмы, индуцированные ДНК, РНК или белком, избегают небольших изменений, поскольку, чувствуя любые внешние изменения, [ 16 ]

Бактерии используют термометры РНК, чтобы проникать в своих хозяев и выживать в них, прикрепляясь к хозяину и вызывая колебания его температуры. Бактерии могут быстро реагировать на условия теплового и холодового шока, поскольку РНК-термометры контролируют экспрессию генов на уровне трансляции. [ 16 ]

Первый РНК-термометр, обнаруженный в хлоропласте Chlamydomonas reinhardtii , обнаружен в 5'-UTR мРНК psaA. Его функция была другой, особенно потому, что он считался отсутствующим. Он имеет вторичную структуру типа шпильки, которая защищает последовательность Шайна-Дальгарно при низкой температуре, но как только происходит изменение температуры, он плавится и активирует выработку белка. [ 2 ] Исследование C. Reinhardtii по РНК-термометру — это путь к наблюдению за хлоропластами фотосинтезирующих организмов с целью регуляции генов и к тому, как его можно будет использовать в сельском хозяйстве в какой-то момент в будущем, поскольку он помогает растениям привыкнуть к внешней температуре. [ 2 ]

Распределение

[ редактировать ]

Большинство известных РНК-термометров расположены в 5'-нетранслируемой области (UTR) информационной РНК, кодирующей белки теплового шока , хотя предполагается, что этот факт может быть частично обусловлен предвзятостью выборки и присущими трудностями обнаружения коротких, неконсервативных последовательностей РНК. в геномных данных . [ 17 ] [ 18 ]

Хотя потенциальный термометр РНК обнаружен преимущественно у прокариот , он был обнаружен и у млекопитающих, включая человека . [ 19 ] Кандидатная термосенсорная РНК теплового шока РНК-1 (HSR1) активирует фактор транскрипции теплового шока 1 (HSF1) и индуцирует защитные белки, когда температура клеток превышает 37 ° C ( температура тела ), тем самым предотвращая перегрев клеток. [ 19 ]

Первый РНК-термометр, обнаруженный в хлоропласте Chlamydomonas reinhardtii, обнаружен в 5'-UTR мРНК psaA. Его функция была другой, особенно потому, что он считался отсутствующим. Он имеет вторичную структуру типа шпильки, которая защищает последовательность Шайна-Дальгарно при низкой температуре, но как только происходит изменение температуры, он плавится и активирует выработку белка. [ 2 ] Исследование C. Reinhardtii по РНК-термометру — это первый шаг к наблюдению за хлоропластами фотосинтезирующих организмов с целью регуляции генов и к тому, как его можно будет использовать в сельском хозяйстве в какой-то момент в будущем, поскольку он помогает растениям привыкнуть к внешней температуре. [ 2 ]

Элементы ROSE представляют собой класс бактериальных РНК-термометров, который регулирует активацию генов, содержащих небольшие белки теплового шока. Он тает на умеренном уровне параллельно с повышением температуры окружающей среды. Как только он полностью плавится при высокой температуре ~ 42 ° C, он приступает к высвобождению Шайна-Дальгарно и стартового кодона AUG. РНК-термометры также можно найти у некоторых растительных симбиотов или патогенов. Симбиоты и патогены используют РНК-термометры для регулирования экспрессии генов растения. [ 3 ] Хорошо изученными бактериями-симбиотами является семейство Rhizobiaceae. У большинства видов ризобий были видны элементы ROSE (цис-действующие), контролирующие гены теплового шока. [ 3 ]

Структура

[ редактировать ]
3D-изображение структуры РНК-термометра ROSE . [ 20 ]

РНК-термометры структурно просты и могут быть изготовлены из коротких последовательностей РНК; наименьший из них состоит всего из 44 нуклеотидов и обнаружен в мРНК белка теплового шока hsp17 у Synechocystis видов PCC 6803 . [ 9 ] Обычно эти элементы РНК имеют длину от 60 до 110 нуклеотидов. [ 21 ] и они обычно содержат шпильку с небольшим количеством несовпадающих пар оснований, которые снижают стабильность структуры, тем самым обеспечивая более легкое развертывание в ответ на повышение температуры. [ 17 ]

Детальный структурный анализ РНК-термометра ROSE показал, что несовпадающие основания на самом деле участвуют в нестандартном спаривании оснований, которое сохраняет спиральную структуру РНК (см. Рисунок). Необычные пары оснований состоят из пар GG, UU и UC-U. Поскольку эти неканонические пары оснований относительно нестабильны, повышение температуры вызывает локальное плавление структуры РНК в этой области, обнажая последовательность Шайна-Дальгарно. [ 20 ]

Некоторые РНК-термометры значительно сложнее, чем одна шпилька, как в случае с областью мРНК CspA , которая, как полагают, содержит псевдоузел , а также несколько шпилек. [ 22 ] [ 23 ]

Синтетические РНК-термометры имеют простую структуру с одной шпилькой. [ 24 ] Однако вторичная структура таких коротких РНК-термометров может быть чувствительной к мутациям, поскольку изменение одного основания может сделать шпильку неактивной in vivo . [ 25 ]

Механизм

[ редактировать ]
Стабильная шпилька ( слева ) раскручивается при более высокой температуре ( справа ). Выделенная последовательность Шайна-Дальгарно становится обнаженной, что позволяет связываться с субъединицей рибосомы 30S . [ 1 ]

РНК-термометры находятся в 5'- UTR матричной РНК, выше гена, кодирующего белок. [ 1 ] Здесь они способны закупорить сайт связывания рибосомы (RBS) и предотвратить трансляцию мРНК в белок. [ 17 ] При повышении температуры шпилечная структура может «расплавиться» и обнажить последовательность RBS или Шайна-Дальгарно , чтобы обеспечить связывание малой рибосомальной субъединицы ( 30S ), которая затем собирает другой механизм трансляции. [ 1 ] Старт -кодон обычно находится на 8 нуклеотидов ниже последовательности Шайна-Дальгарно. [ 17 ] сигнализирует о начале кодирования белка геном, который затем транслируется в пептидный продукт рибосомой . В дополнение к этому цис -действующему механизму единственный пример транс -действующего РНК-термометра был обнаружен в мРНК RpoS , где, как полагают, она участвует в реакции голодания. [ 1 ]

Конкретным примером мотива термометра РНК является термометр FourU, обнаруженный у Salmonella enterica . [ 5 ] При воздействии температур выше 45 ° C стебель-петля , которая образует пару оснований напротив последовательности Шайна-Дальгарно, становится неспаренной и позволяет мРНК проникнуть в рибосому для осуществления трансляции. [ 25 ] мг 2+ Также было показано, что концентрация ионов влияет на стабильность FourU. [ 26 ] Наиболее хорошо изученный РНК-термометр обнаружен в гене rpoH у Escherichia coli . [ 27 ] Этот термосенсор активирует белки теплового шока при высоких температурах посредством σ 32 , специализированный сигма-фактор теплового шока . [ 13 ]

Хотя РНК-термометры обычно связаны с экспрессией белков, вызванной нагреванием, они также могут регулировать белки холодового шока. [ 22 ] экспрессия двух белков массой 7 кДа регулируется с помощью РНК-термометра. Например, у термофильной бактерии Thermus thermophilus [ 28 ] аналогичный механизм был идентифицирован у Enterobacteriales . [ 23 ]

РНК-термометры, чувствительные к температуре 37 °C, могут использоваться патогенами для активации генов, специфичных для инфекции. [ 17 ] Например, активация prfA с , кодирующего ключевой регулятор транскрипции вирулентности генов Listeria monocytogenes , была продемонстрирована путем слияния 5'-ДНК prfA геном зеленого флуоресцентного белка ; затем слитый ген транскрибировали с промотора Т7 в E. coli , и флуоресценцию наблюдали при 37 ° C, но не при 30 ° C. [ 29 ]

Последствия для гипотезы мира РНК

[ редактировать ]
Основная статья: Гипотеза мира РНК

Гипотеза мира РНК утверждает, что когда-то РНК была одновременно носителем наследственной информации и ферментативно активной , причем различные последовательности действовали как биокатализаторы, регуляторы и сенсоры. [ 30 ] Затем гипотеза предполагает, что современная жизнь на основе ДНК, РНК и белков эволюционировала, и отбор заменил большую часть ролей РНК другими биомолекулами . [ 4 ]

Считается, что РНК-термометры и рибопереключатели являются эволюционно древними из-за их широкомасштабного распространения в отдаленно родственных организмах. [ 31 ] Было высказано предположение, что в мире РНК термосенсоры РНК должны были отвечать за температурно-зависимую регуляцию других молекул РНК. [ 4 ] [ 32 ] РНК-термометры в современных организмах могут представлять собой молекулярные окаменелости , что может указывать на ранее более широкое значение в мире РНК. [ 4 ]

Другие примеры

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г Нарберхаус Ф, Вальдмингхаус Т, Чоудхури С (январь 2006 г.). «РНК-термометры». Обзоры микробиологии FEMS . 30 (1): 3–16. дои : 10.1111/j.1574-6976.2005.004.x . ПМИД   16438677 .
  2. ^ Перейти обратно: а б с д и Раза А., Сиддик К.Х., Ху З. (февраль 2024 г.). «Контроль генов хлоропластов: раскрытие механизмов термометра РНК в фотосинтетических системах». Тенденции в науке о растениях . doi : 10.1016/j.tplants.2024.01.005 . ПМИД   38311501 .
  3. ^ Перейти обратно: а б с Томас С.Е., Бальцерович М., Чанг БАЙ (17 августа 2022 г.). «Терморегуляция, опосредованная структурой РНК: чему мы можем научиться у растений?» . Границы в науке о растениях . 13 : 938570. doi : 10.3389/fpls.2022.938570 . ПМЦ   9450479 . ПМИД   36092413 .
  4. ^ Перейти обратно: а б с д Аткинс Дж. Ф., Гестеланд РФ, Чех Т (2006). Мир РНК: природа современной РНК предполагает пребиотический мир РНК . Плейнвью, Нью-Йорк: Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор. ISBN  978-0-87969-739-6 .
  5. ^ Перейти обратно: а б Вальдмингхаус Т., Гейдрих Н., Брантл С., Нарберхаус Ф (июль 2007 г.). «FourU: новый тип РНК-термометра для сальмонелл» . Молекулярная микробиология . 65 (2): 413–424. дои : 10.1111/j.1365-2958.2007.05794.x . ПМИД   17630972 .
  6. ^ Перейти обратно: а б Ахмед Р., Дункан Р.Ф. (ноябрь 2004 г.). «Регуляция трансляции мРНК Hsp90. Элементы AUG-проксимальной 5'-нетранслируемой области, необходимые для преимущественной трансляции теплового шока» . Журнал биологической химии . 279 (48): 49919–49930. дои : 10.1074/jbc.M404681200 . ПМИД   15347681 .
  7. ^ Перейти обратно: а б Нокер А., Хаушерр Т., Балсигер С., Крстулович Н.П., Хеннеке Х., Нарберхаус Ф. (декабрь 2001 г.). «Термосенсор на основе мРНК контролирует экспрессию ризобиальных генов теплового шока» . Исследования нуклеиновых кислот . 29 (23): 4800–4807. дои : 10.1093/нар/29.23.4800 . ПМК   96696 . ПМИД   11726689 .
  8. ^ Мацунага Дж., Шлакс П.Дж., Хааке Д.А. (ноябрь 2013 г.). «Роль последовательностей цис-действующей РНК в зависимой от температуры экспрессии мультиадгезивных белков lig у Leptospira interrogans» . Журнал бактериологии . 195 (22): 5092–5101. дои : 10.1128/jb.00663-13 . ПМЦ   3811586 . ПМИД   24013626 .
  9. ^ Перейти обратно: а б Кортманн Дж, Шодрок С, Ринненталь Дж, Швальбе Х, Нарберхаус Ф (апрель 2011 г.). «Перевод по требованию простым термосенсором на основе РНК» . Исследования нуклеиновых кислот . 39 (7): 2855–2868. дои : 10.1093/нар/gkq1252 . ПМК   3074152 . ПМИД   21131278 .
  10. ^ Перейти обратно: а б Алтувиа С., Корницер Д., Тефф Д., Оппенгейм А.Б. (ноябрь 1989 г.). «Альтернативные структуры мРНК гена cIII бактериофага лямбда определяют скорость инициации его трансляции». Журнал молекулярной биологии . 210 (2): 265–280. дои : 10.1016/0022-2836(89)90329-X . ПМИД   2532257 .
  11. ^ Перейти обратно: а б Алтувия С, Оппенгейм, AB (июль 1986 г.). «Регуляторные сигналы трансляции в кодирующей области гена бактериофага лямбда cIII» . Журнал бактериологии . 167 (1): 415–419. дои : 10.1128/jb.167.1.415-419.1986 . ПМК   212897 . ПМИД   2941413 .
  12. ^ Алтувиа С., Корнитцер Д., Коби С., Оппенгейм А.Б. (апрель 1991 г.). «Функциональные и структурные элементы мРНК гена cIII бактериофага лямбда». Журнал молекулярной биологии . 218 (4): 723–733. дои : 10.1016/0022-2836(91)90261-4 . ПМИД   1827163 .
  13. ^ Перейти обратно: а б Шторц Г. (март 1999 г.). «РНК-термометр» . Гены и развитие . 13 (6): 633–636. дои : 10.1101/gad.13.6.633 . ПМИД   10090718 .
  14. ^ Морита М.Т., Танака Ю., Кодама Т.С., Кёгоку Ю., Янаги Х., Юра Т. (март 1999 г.). «Трансляционная индукция фактора транскрипции теплового шока сигма32: свидетельства наличия встроенного термосенсора РНК» . Гены и развитие . 13 (6): 655–665. дои : 10.1101/gad.13.6.655 . ПМК   316556 . ПМИД   10090722 .
  15. ^ Перейти обратно: а б Вальдмингхаус Т., Гаубиг Л.К., Нарберхаус Ф (ноябрь 2007 г.). «Пологеномное биоинформатическое предсказание и экспериментальная оценка потенциальных термометров РНК». Молекулярная генетика и геномика . 278 (5): 555–564. дои : 10.1007/s00438-007-0272-7 . ПМИД   17647020 . S2CID   24747327 .
  16. ^ Перейти обратно: а б Шарма П., Мондал К., Кумар С., Таманг С., Наджар И.Н., Дас С. и др. (октябрь 2022 г.). «РНК-термометры у бактерий: роль в терморегуляции». Биохимия и биофизика Acta (BBA) - Механизмы регуляции генов . 1865 (7):194871 doi : 10.1016/j.bbagrm.2022.194871 . ПМИД   36041664 .
  17. ^ Перейти обратно: а б с д и Нарберхаус Ф (2010). «Трансляционный контроль генов бактериального теплового шока и вирулентности с помощью чувствительных к температуре мРНК» . Биология РНК . 7 (1): 84–89. дои : 10.4161/rna.7.1.10501 . ПМИД   20009504 .
  18. ^ Йоханссон Дж (2009). «РНК-термосенсоры в бактериальных патогенах». Бактериальное зондирование и передача сигналов . Вклад в микробиологию. Том. 16. Базель: С. Каргер АГ. стр. 150–160. дои : 10.1159/000219378 . ISBN  978-3-8055-9132-4 . ПМИД   19494584 .
  19. ^ Перейти обратно: а б Шамовский И., Иванников М., Кандель Е.С., Гершон Д., Нудлер Э. (март 2006 г.). «РНК-опосредованный ответ на тепловой шок в клетках млекопитающих». Природа . 440 (7083): 556–560. Бибкод : 2006Natur.440..556S . дои : 10.1038/nature04518 . ПМИД   16554823 . S2CID   4311262 .
  20. ^ Перейти обратно: а б Чоудхури С., Марис С., Аллен Ф.Х., Нарберхаус Ф. (июнь 2006 г.). «Молекулярные основы измерения температуры РНК-термометром» . Журнал ЭМБО . 25 (11): 2487–2497. дои : 10.1038/sj.emboj.7601128 . ПМК   1478195 . ПМИД   16710302 .
  21. ^ Вальдмингхаус Т., Фиппингер А., Альфсманн Дж., Нарберхаус Ф. (декабрь 2005 г.). «РНК-термометры распространены у альфа- и гамма-протеобактерий». Биологическая химия . 386 (12): 1279–1286. дои : 10.1515/BC.2005.145 . ПМИД   16336122 . S2CID   84557068 .
  22. ^ Перейти обратно: а б Breaker RR (январь 2010 г.). «РНК отключается на холоде» . Молекулярная клетка . 37 (1): 1–2. doi : 10.1016/j.molcel.2009.12.032 . ПМЦ   5315359 . ПМИД   20129048 .
  23. ^ Перейти обратно: а б Джулиодори А.М., Ди Пьетро Ф., Марци С., Маскида Б., Вагнер Р., Ромби П. и др. (январь 2010 г.). «МРНК cspA представляет собой термосенсор, который модулирует трансляцию белка холодового шока CspA» . Молекулярная клетка . 37 (1): 21–33. doi : 10.1016/j.molcel.2009.11.033 . ПМИД   20129052 .
  24. ^ Нойперт Дж., Керхер Д., Бок Р. (ноябрь 2008 г.). «Разработка простых синтетических РНК-термометров для контролируемой температуры экспрессии генов в Escherichia coli» . Исследования нуклеиновых кислот . 36 (19): е124. дои : 10.1093/нар/gkn545 . ПМК   2577334 . ПМИД   18753148 .
  25. ^ Перейти обратно: а б Николова Е.Н., Аль-Хашими Х.М. (сентябрь 2010 г.). «Термодинамика плавления РНК по одной паре оснований» . РНК . 16 (9): 1687–1691. дои : 10.1261/rna.2235010 . ПМЦ   2924531 . ПМИД   20660079 .
  26. ^ Ринненталь Дж., Клинкерт Б., Нарберхаус Ф., Швальбе Х. (октябрь 2011 г.). «Модуляция стабильности РНК-термометра Salmonella fourU-типа» . Исследования нуклеиновых кислот . 39 (18): 8258–8270. дои : 10.1093/nar/gkr314 . ПМК   3185406 . ПМИД   21727085 .
  27. ^ Шах П., Гилкрист, Массачусетс (июль 2010 г.). Спирин А.С. (ред.). «Уникальны ли термочувствительные свойства РНК-термометров?» . ПЛОС ОДИН . 5 (7): е11308. Бибкод : 2010PLoSO...511308S . дои : 10.1371/journal.pone.0011308 . ПМЦ   2896394 . ПМИД   20625392 .
  28. ^ Мега Р., Мандзоку М., Синкай А., Накагава Н., Курамицу С., Масуи Р. (август 2010 г.). «Очень быстрая индукция белка холодового шока за счет понижения температуры у Thermus thermophilus». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 399 (3): 336–340. дои : 10.1016/j.bbrc.2010.07.065 . ПМИД   20655297 .
  29. ^ Йоханссон Дж., Мандин П., Ренцони А., Кьяруттини С., Спрингер М., Коссарт П. (сентябрь 2002 г.). «Термосенсор РНК контролирует экспрессию генов вирулентности у Listeria monocytogenes» . Клетка . 110 (5): 551–561. дои : 10.1016/S0092-8674(02)00905-4 . ПМИД   12230973 .
  30. ^ Гилберт В. (февраль 1986 г.). «Мир РНК» . Природа . 319 (6055): 618. Бибкод : 1986Natur.319..618G . дои : 10.1038/319618a0 .
  31. ^ Серганов А, Патель DJ (октябрь 2007 г.). «Рибозимы, рибопереключатели и не только: регуляция экспрессии генов без белков» . Обзоры природы. Генетика . 8 (10): 776–790. дои : 10.1038/nrg2172 . ПМЦ   4689321 . ПМИД   17846637 .
  32. ^ Бокобза С.Е., Ахарони А. (октябрь 2008 г.). «Включение света на растительных рибопереключателях». Тенденции в науке о растениях . 13 (10): 526–533. doi : 10.1016/j.tplants.2008.07.004 . ПМИД   18778966 .
  33. ^ Гаубиг Л.К., Вальдмингхаус Т, Нарберхаус Ф (январь 2011 г.). «Множественные уровни контроля управляют экспрессией оперона теплового шока ibpAB Escherichia coli» . Микробиология . 157 (Часть 1): 66–76. дои : 10.1099/mic.0.043802-0 . ПМИД   20864473 .
  34. ^ Балсигер С., Рагаз С., Барон С., Нарберхаус Ф. (октябрь 2004 г.). «Репликон-специфическая регуляция малых генов теплового шока у Agrobacterium tumefaciens» . Журнал бактериологии . 186 (20): 6824–6829. дои : 10.1128/JB.186.20.6824-6829.2004 . ПМК   522190 . ПМИД   15466035 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=RNA_thermometer&oldid=1225382822"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 3064e101c7805da670589d7272a26ea9__1716508620
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/30/a9/3064e101c7805da670589d7272a26ea9.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
RNA thermometer - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)