Патч-зажим

Метод патч-кламп — это лабораторный метод электрофизиологии , используемый для изучения ионных токов в отдельных изолированных живых клетках , срезах тканей или участках клеточной мембраны. Этот метод особенно полезен при изучении возбудимых клеток, таких как нейроны , кардиомиоциты , мышечные волокна и поджелудочной железы бета-клетки , а также может быть применен для изучения бактериальных ионных каналов в специально приготовленных гигантских сферопластах .

Зажим патча может быть выполнен с использованием техники зажима напряжения . При этом экспериментатор контролирует напряжение на клеточной мембране и регистрирует возникающие токи. В качестве альтернативы фиксации тока можно использовать метод . В этом случае ток, проходящий через мембрану, контролируется экспериментатором и возникающие изменения напряжения регистрируются, как правило, в виде потенциалов действия .

Эрвин Неер и Берт Сакманн разработали патч-зажим в конце 1970-х — начале 1980-х годов. Это открытие позволило впервые зарегистрировать токи молекул одиночных ионных каналов, что улучшило понимание участия каналов в фундаментальных клеточных процессах, таких как потенциалы действия и нервная активность. Неер и Сакманн получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине в 1991 году. За эту работу ^[1]

Основная техника

Настраивать

Классическая установка патч-клампа с микроскопом , антивибрационным столом и микроманипуляторами.

Во время патч-кламп-записи полая стеклянная трубка, известная как микропипетка или патч-пипетка, наполненная раствором электролита и записывающим электродом, подключенным к усилителю, приводится в контакт с мембраной изолированной клетки . Другой электрод помещается в ванну, окружающую клетку или ткань, в качестве эталонного заземляющего электрода. Между записывающим и эталонным электродом может быть образована электрическая цепь, между которой находится интересующая ячейка.

Раствор, заполняющий патч-пипетку, может соответствовать ионному составу раствора ванны, как в случае записи, прикрепленной к клетке, или соответствовать цитоплазме , для записи всей клетки. Раствор в ванне может соответствовать физиологическому внеклеточному раствору цитоплазмы или быть совершенно нефизиологическим, в зависимости от проводимого эксперимента. Исследователь также может изменить состав раствора для ванны (или, реже, раствора для пипетки), добавляя ионы или лекарства для изучения ионных каналов в различных условиях.

В зависимости от того, что исследователь пытается измерить, диаметр используемого кончика пипетки может варьироваться, но обычно он находится в диапазоне микрометров . ^[2] Этот небольшой размер используется для закрытия участка поверхности клеточной мембраны или «заплаты», который часто содержит всего одну или несколько молекул ионного канала. ^[3] Этот тип электрода отличается от «острого микроэлектрода», используемого для прокалывания клеток при традиционных внутриклеточных записях , тем, что он прикрепляется к поверхности клеточной мембраны, а не вводится через нее.

В некоторых экспериментах кончик микропипетки нагревают в микроковке для получения гладкой поверхности, которая помогает сформировать высокопрочное уплотнение с клеточной мембраной. Чтобы получить такое высокопрочное уплотнение, микропипетку прижимают к клеточной мембране и применяют отсасывание. Часть клеточной мембраны всасывается в пипетку, создавая область мембраны в форме омеги , которая, если она сформирована правильно, создает сопротивление в диапазоне 10–100 гигаом , называемое «гигаомное уплотнение» или «гигаомное уплотнение». ^[3] Высокое сопротивление этого уплотнения позволяет электронно изолировать токи, измеряемые через мембранный участок, с небольшим конкурирующим шумом , а также обеспечивает некоторую механическую стабильность записи. ^[4]

Запись

Заплата зажима нервной клетки в срезе ткани головного мозга. Пипетка на фотографии отмечена слегка синим цветом.

Многие усилители с патч-зажимом не используют настоящую схему ограничения напряжения , а представляют собой дифференциальные усилители , которые используют электрод ванны для установки уровня нулевого тока (земли). Это позволяет исследователю поддерживать постоянное напряжение, наблюдая за изменениями тока . Чтобы сделать эти записи, патч-пипетку сравнивают с заземляющим электродом. Затем в систему подается ток для поддержания постоянного заданного напряжения. Ток, необходимый для фиксации напряжения, противоположен по знаку и равен по величине току через мембрану. ^[3]

В качестве альтернативы ячейку можно зафиксировать по току в режиме всей клетки, поддерживая ток постоянным и одновременно наблюдая за изменениями напряжения на мембране . ^[5]

Разделение тканей

Точный разрез тканей с помощью компресстом, вибратом В дополнение к методам патч-клампа необходим или микротом. Поставляя тонкие однородные срезы ткани, эти устройства обеспечивают оптимальную имплантацию электродов. Чтобы подготовить ткани к исследованиям с использованием патч-клампов и обеспечить точные и надежные записи, исследователи могут выбирать между использованием вибратомов для более мягких тканей и микротомов для более жестких структур. ^[6] Leica Biosystems и Carl Zeiss AG Известными производителями этих устройств являются .

Вариации

Схема, показывающая варианты техники патч-зажима

В зависимости от того, что исследователь хочет изучить, можно применять несколько вариантов базовой техники. Методы «изнутри наружу» и «наружу наружу» называются методами «вырезанной заплатки», поскольку заплатка вырезается (удаляется) из основной части клетки. Для изучения поведения отдельных ионных каналов на участке мембраны, прикрепленном к электроду, используются методы прикрепления к клеткам и оба метода вырезания патчей.

Цельноклеточный пластырь и перфорированный пластырь позволяют исследователю изучать электрическое поведение всей клетки, а не токи одного канала. Цельноклеточный пластырь, который обеспечивает электрический доступ с низким сопротивлением внутрь клетки, в настоящее время в значительной степени заменил методы записи на микроэлектродах с высоким сопротивлением для регистрации токов через всю клеточную мембрану.

Патч, прикрепленный к клетке

В этом методе пипетку приклеивают к клеточной мембране, чтобы получить гигасеаль (уплотнение с электрическим сопротивлением порядка гигаома), гарантируя при этом, что клеточная мембрана остается неповрежденной. Это позволяет регистрировать токи через один или несколько ионных каналов, содержащихся в участке мембраны, захваченном пипеткой. Прикрепляясь только к внешней стороне клеточной мембраны, структура клетки нарушается очень незначительно. ^[3] Кроме того, если не нарушать внутреннюю часть клетки, любые внутриклеточные механизмы, обычно влияющие на канал, все равно смогут функционировать так, как они функционируют физиологически. ^[7] Используя этот метод, также относительно легко получить правильную конфигурацию, и однажды полученная она достаточно стабильна. ^[8]

Для лиганд-управляемых ионных каналов или каналов, которые модулируются метаботропными рецепторами , изучаемый нейромедиатор или лекарственное средство обычно включается в раствор пипетки, где он может взаимодействовать с тем, что раньше было внешней поверхностью мембраны. Результирующая активность канала может быть связана с используемым лекарственным средством, хотя обычно невозможно изменить концентрацию лекарства внутри пипетки. Таким образом, этот метод ограничен одной точкой на кривой доза-эффект на пластырь. Таким образом, ответ на дозу достигается с использованием нескольких клеток и пластырей. Однако потенциалзависимые ионные каналы можно последовательно зажимать при разных мембранных потенциалах в одном пластыре. Это приводит к активации канала в зависимости от напряжения, и полная кривая IV (ток-напряжение) может быть получена только за один участок. Еще одним потенциальным недостатком этого метода является то, что, поскольку внутриклеточные пути клетки не нарушаются, их невозможно напрямую модифицировать. ^[8]

Патч наизнанку

При методе «наизнанку» участок мембраны прикрепляется к пипетке, отделяется от остальной части клетки, и цитозольная поверхность мембраны подвергается воздействию внешней среды или ванны. ^[9] Одним из преимуществ этого метода является то, что экспериментатор имеет доступ к внутриклеточной поверхности мембраны через ванну и может изменять химический состав того, чему подвергается внутренняя поверхность мембраны. Это полезно, когда экспериментатор хочет манипулировать средой на внутриклеточной поверхности одиночных ионных каналов. Например, каналы, которые активируются внутриклеточными лигандами, затем можно изучать в диапазоне концентраций лигандов.

Чтобы получить конфигурацию «наизнанку», пипетку прикрепляют к клеточной мембране, как и в режиме прикрепления к клетке, образуя гигазеальное соединение, а затем втягивают, чтобы отломить участок мембраны от остальной части клетки. Удаление мембранного пластыря первоначально часто приводит к образованию мембранного пузырька на кончике пипетки, поскольку концы мембранного пластыря быстро срастаются после вырезания. Затем внешняя поверхность пузырька должна быть взломана, чтобы перейти в режим «наизнанку»; это можно сделать, кратковременно пропустив мембрану через границу раздела раствор/воздух в ванне, подвергнув ее воздействию низкого содержания кальция. ²⁺ раствора или кратковременного контакта с каплей парафина или куском отвержденного силиконового полимера. ^[10]

Запись целой клетки или патч для целой клетки

Запись цельных клеток предполагает запись токов одновременно по нескольким каналам на большой области клеточной мембраны. Электрод остается на клетке, как и в записях, прикрепленных к клетке, но для разрыва мембранного участка применяется большее всасывание, обеспечивая тем самым доступ из внутренней части пипетки во внутриклеточное пространство клетки. Это дает возможность применять и изучать, как лечение (например, лекарства) может влиять на клетки в режиме реального времени. ^[11] После того как пипетка прикреплена к клеточной мембране, есть два метода разрыва пластыря. Первый заключается в усилении всасывания. Количество и продолжительность этого всасывания зависит от типа клеток и размера пипетки. Другой метод требует подачи большого импульса тока через пипетку. Величина подаваемого тока и длительность импульса также зависят от типа ячейки. ^[8] Для некоторых типов клеток удобно применять оба метода одновременно, чтобы разорвать заплатку.

Преимущество записи целой клетки с помощью патч-зажима по сравнению с записью методом острого электрода заключается в том, что большее отверстие на кончике электрода с патч-зажимом обеспечивает меньшее сопротивление и, следовательно, лучший электрический доступ внутрь клетки. ^[12]^[11] Недостатком этого метода является то, что, поскольку объем электрода больше объема клетки, растворимое содержимое внутренней части клетки будет медленно замещаться содержимым электрода. Это называется электродом, «диализирующим» содержимое клетки. ^[8] Через некоторое время любые свойства клетки, зависящие от растворимого внутриклеточного содержимого, изменятся. Используемый раствор для пипетки обычно соответствует среде с высоким содержанием калия внутри клетки, чтобы свести к минимуму любые изменения, которые это может вызвать. В начале записи всей клетки часто существует период, когда можно провести измерения до того, как клетка будет подвергнута диализу. ^[8]

Патч снаружи

Название «снаружи наружу» подчеркивает как комплементарность этого метода методу «изнутри наружу», так и тот факт, что при нем внешняя, а не внутриклеточная поверхность клеточной мембраны располагается снаружи участка мембраны по отношению к пластырю-электроду. . ^[7]

Формирование внешнего участка начинается с конфигурации записи всей клетки. После того, как сформирована конфигурация цельной клетки, электрод медленно вынимается из клетки, позволяя луковице мембраны выйти из клетки. Когда электрод оттягивают достаточно далеко, этот пузырь отделяется от клетки и преобразуется в выпуклую мембрану на конце электрода (как шар, открытый на кончике электрода), причем исходная внешняя часть мембраны обращена наружу от электрода. электрод. ^[7] Как показано на изображении справа, это означает, что жидкость внутри пипетки будет имитировать внутриклеточную жидкость, в то время как исследователь может свободно переместить пипетку и пузырек с каналами в другую ванну с раствором. Хотя в пузырьке мембраны может существовать несколько каналов, в этой конформации также возможна одноканальная запись, если пузырь отслоенной мембраны мал и содержит только один канал. ^[13]

Заплатка снаружи дает экспериментатору возможность изучить свойства ионного канала, когда он изолирован от клетки и последовательно подвергается воздействию различных растворов на внеклеточной поверхности мембраны. Экспериментатор может перфузировать один и тот же пластырь различными растворами за относительно короткий промежуток времени, и если канал активируется нейротрансмиттером или лекарством из внеклеточной поверхности, доза-эффект . тогда можно получить кривую ^[14] Эта способность измерять ток через один и тот же участок мембраны в разных растворах является явным преимуществом пластыря снаружи по сравнению с методом прикрепления к клеткам. С другой стороны, сделать это сложнее. Более длительный процесс формирования включает в себя больше шагов, которые могут потерпеть неудачу, и приводит к более низкой частоте использования исправлений.

Перфорированная нашивка

Этот вариант метода патч-зажима очень похож на конфигурацию цельной ячейки. Основное отличие заключается в том, что при формировании гигаомной печати экспериментатор не использует отсасывание для разрыва заплаточной мембраны. Вместо этого раствор электрода содержит небольшое количество противогрибкового или антибиотического агента, такого как амфотерицин-В , нистатин или грамицидин , который диффундирует в мембранный участок и образует небольшие поры в мембране, обеспечивая электрический доступ к внутренней части клетки. ^[15] Сравнивая методы цельноклеточного и перфорированного пластыря, можно думать о цельноклеточном пластыре как об открытой двери, в которой происходит полный обмен между молекулами в растворе пипетки и цитоплазме. Перфорированный пластырь можно сравнить с сетчатой дверью, которая позволяет обмениваться только определенными молекулами из раствора пипетки в цитоплазму клетки.

Преимущества метода перфорированного патча по сравнению с записью целых клеток включают свойства пор антибиотика, которые позволяют уравновешивать только небольшие одновалентные ионы между патч-пипеткой и цитозолем, но не более крупные молекулы, которые не могут проникнуть через поры. Это свойство поддерживает эндогенные уровни двухвалентные ионы, такие как Ca ²⁺ и сигнальные молекулы, такие как цАМФ . Следовательно, можно иметь записи всей клетки, как при фиксации целой клетки, сохраняя при этом большинство внутриклеточных сигнальных механизмов, как в записях, прикрепленных к клетке. В результате снижается ток, и стабильные записи перфорированных патчей могут длиться более одного часа. ^[15] К недостаткам можно отнести более высокое сопротивление доступу по сравнению с целой клеткой из-за частичной мембраны, занимающей кончик электрода. Это может привести к снижению текущего разрешения и увеличению шума при записи. Антибиотику также может потребоваться значительное время для перфорации мембраны (около 15 минут для амфотерицина-В и еще больше для грамицидина и нистатина). Мембрана под кончиком электрода ослаблена перфорацией, образованной антибиотиком, и может разорваться. Если пластырь разрывается, запись ведется в режиме всей клетки, при этом антибиотик загрязняет внутреннюю часть клетки. ^[15]

Свободный патч

Свободный патч-зажим отличается от других методов, обсуждаемых здесь, тем, что в нем используется свободное уплотнение (низкое электрическое сопротивление), а не плотное уплотнение, используемое в традиционной технике. Этот метод использовался еще в 1961 году, как описано в статье Стрикхольма об импедансе поверхности мышечной клетки. ^[16] но не получал особого внимания, пока его снова не подняли и не дали имя Алмерс, Стэнфилд и Штюмер в 1982 году. ^[17] после того, как патч-кламп стал основным инструментом электрофизиологии.

Чтобы обеспечить свободный зажим на клеточной мембране, пипетку медленно перемещают по направлению к клетке до тех пор, пока электрическое сопротивление контакта между клеткой и пипеткой не увеличится в несколько раз больше, чем сопротивление одного электрода. Чем ближе пипетка подходит к мембране, тем больше становится сопротивление кончика пипетки, но если образуется слишком плотное уплотнение, и может стать трудно извлечь пипетку, не повредив клетку. При использовании метода свободной заплатки пипетка не подходит достаточно близко к мембране, чтобы образовать гигазеальное или постоянное соединение, а также не проткнуть клеточную мембрану. ^[18] Клеточная мембрана остается неповрежденной, а отсутствие плотного уплотнения создает небольшой зазор, через который ионы могут выходить за пределы клетки, не попадая в пипетку.

Существенным преимуществом неплотного уплотнения является то, что используемую пипетку можно многократно удалять из мембраны после записи, при этом мембрана останется неповрежденной. Это позволяет проводить повторные измерения в различных местах одной и той же клетки, не нарушая целостности мембраны. Такая гибкость оказалась особенно полезна исследователям для изучения мышечных клеток, когда они сокращаются в реальных физиологических условиях, быстрого получения записей и возможности делать это, не прибегая к радикальным мерам, чтобы остановить сокращение мышечных волокон. ^[17] Основным недостатком является то, что сопротивление между пипеткой и мембраной значительно снижается, что позволяет току просачиваться через уплотнение и значительно снижает разрешающую способность малых токов. Однако эту утечку можно частично исправить, что дает возможность сравнивать и сопоставлять записи, сделанные из разных областей интересующей ячейки. Учитывая это, было подсчитано, что метод свободной заплатки может разрешать токи менее 1 мА/см. ². ^[18]

Патч-Seq

, сочетающий в себе клеточную визуализацию, секвенирование РНК и патч-кламп, Этот метод используется для полной характеристики нейронов в различных модальностях. ^[19] Поскольку нервные ткани представляют собой одну из наиболее транскриптомно разнообразных популяций клеток , классификация нейронов по типам клеток , чтобы понять образуемые ими цепи, является серьезной проблемой для нейробиологов. Сочетание классических методов классификации с постфактум -секвенированием одноклеточной РНК оказалось трудным и медленным. Объединив несколько методов обработки данных, таких как электрофизиология , секвенирование и микроскопия , Patch-seq позволяет охарактеризовать нейроны несколькими способами одновременно. В настоящее время он страдает от низкой пропускной способности по сравнению с другими методами секвенирования, главным образом из-за ручного труда, необходимого для достижения успешной записи нейрона с помощью патч-зажима. В настоящее время проводятся исследования по автоматизации технологии patch-clamp, которая также улучшит производительность patch-seq. ^[20]

Автоматический зажим патча

Автоматизированные системы фиксации патчей были разработаны для недорогого сбора больших объемов данных за более короткий период времени. Такие системы обычно включают одноразовое микрофлюидное устройство, отлитое под давлением или отлитое из полидиметилсилоксана (ПДМС) чип, для захвата клетки или клеток, а также встроенный электрод.

В одной из форм такой автоматизированной системы перепад давления используется для того, чтобы заставить исследуемые клетки притягиваться к отверстию пипетки до тех пор, пока они не образуют гигазеальное уплотнение. Затем, при кратковременном воздействии кончика пипетки на атмосферу, часть мембраны, выступающая из пипетки, лопается, и мембрана теперь находится в вывернутой конформации на кончике пипетки. В полностью автоматизированной системе пипетку и мембранный пластырь затем можно быстро перемещать через ряд различных тестовых растворов, что позволяет наносить различные тестируемые соединения на внутриклеточную сторону мембраны во время записи. ^[20]

См. также

Ссылки

^ «Нобелевская премия по физиологии и медицине 1991 года» . nobelprize.org . Нобель Медиа АБ . Проверено 8 ноября 2014 г.
^ Баннистер, Нил (1 ноября 2012 г.). Лэнгтон, Фил (ред.). Основное руководство по чтению биомедицинских статей: распознавание и интерпретация передовой практики . Уайли-Блэквелл. дои : 10.1002/9781118402184 . ISBN 9781118402184 .
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д Сакманн, Б.; Неер, Э. (1984). «Методы патч-клампа для изучения ионных каналов в возбудимых мембранах». Ежегодный обзор физиологии . 46 : 455–472. дои : 10.1146/annurev.ph.46.030184.002323 . hdl : 21.11116/0000-0000-D552-3 . ПМИД 6143532 .
^ Сигворт, Фредрик Дж.; Неер, Э. (2 октября 1980 г.). «Токи одиночных каналов Na+ наблюдаются в культивируемых мышечных клетках крыс». Природа . 287 (5781): 447–449. Бибкод : 1980Natur.287..447S . дои : 10.1038/287447a0 . ПМИД 6253802 . S2CID 4238010 .
^ Эллен Кови; Мэтт Картер (2015). Основные электрофизиологические методы . Издательство Оксфордского университета. стр. 22–. ISBN 978-0-19-993980-0 .
^ Сакманн, Б.; Эдвардс, Ф.; Коннерт, А.; Такахаши, Т. (1989). «Методы патч-клампа, используемые для изучения синаптической передачи в срезах мозга млекопитающих» . Ежеквартальный журнал экспериментальной физиологии . 74 (7): 1107–1118. doi : 10.1113/expphysicalol.1989.sp003336 . hdl : 11858/00-001M-0000-002C-270A-9 . ПМИД 2560557 .
^ Jump up to: ^а ^б ^с Хэмилл О.П., Марти А., Неер Э., Сакманн Б., Сигворт Ф.Дж.; Марти; Неер; Сакманн; Сигворт (1981). «Улучшенные методы патч-зажима для записи тока с высоким разрешением из клеток и патчей бесклеточных мембран». Архив Pflügers: Европейский журнал физиологии . 391 (2): 85–100. CiteSeerX 10.1.1.456.107 . дои : 10.1007/BF00656997 . ПМИД 6270629 . S2CID 12014433 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и Моллеман, Арелес (6 марта 2003 г.). Зажим пластыря: вводное руководство по электрофизиологии зажима пластыря . Уайли. дои : 10.1002/0470856521 . ISBN 9780470856529 .
^ Фейтингер, Софи (9 ноября 2011 г.). «Техника патч-зажима» . Научная лаборатория . Лейка Микросистемс . Проверено 10 ноября 2014 г.
^ Огден, Дэвид; Стэнфилд, Питер. «Техника патч-зажима» (PDF) . utdallas.edu . стр. 53–78 . Проверено 11 ноября 2014 г.
^ Jump up to: ^а ^б Сегев, Амир; Гарсиа-Оскос, Франциско; Куррич, Саид (15 июня 2016 г.). «Целоклеточные патч-кламп-записи в срезах мозга» . Журнал визуализированных экспериментов (112): e54024. дои : 10.3791/54024 . ISSN 1940-087X . ПМЦ 4927800 . ПМИД 27341060 .
^ Стейли, К.Дж.; Отис, Т.С.; Моди, я (1 мая 1992 г.). «Мембранные свойства гранулярных клеток зубчатой извилины: сравнение острых микроэлектродных и целоклеточных записей». Журнал нейрофизиологии . 67 (5): 1346–1358. дои : 10.1152/jn.1992.67.5.1346 . ПМИД 1597717 .
^ Хау, младший; Калл-Кэнди, С.Г.; Колкухун, Д. (январь 1991 г.). «Ток проходит через одиночные каналы глутаматных рецепторов в наружных участках гранулярных клеток мозжечка крысы» . Журнал физиологии . 432 (1): 143–202. doi : 10.1113/jphysicalol.1991.sp018381 . ПМЦ 1181322 . ПМИД 1715916 .
^ фон Бекерат, Н.; Адельсбергер, Х; Парцефаль, Ф; Франке, К; Дудель, Дж. (апрель 1995 г.). «ГАМКергическое ингибирование глубоких мышц-разгибателей живота у раков демонстрирует резкую зависимость «доза-реакция» и высокую степень взаимодействия». Европейский журнал физиологии . 429 (6): 781–788. дои : 10.1007/bf00374801 . ПМИД 7541524 . S2CID 7824699 .
^ Jump up to: ^а ^б ^с Линли, Джон (2013). «Перфорированная целоклеточная запись патч-клампом». В Гампере, Никита (ред.). Ионные каналы . Методы молекулярной биологии. Том. 998 (Второе изд.). Хумана Пресс. стр. 149–157. дои : 10.1007/978-1-62703-351-0_11 . ISBN 978-1-62703-351-0 . ПМИД 23529427 .
^ Стрикхольм, А. (1 июля 1961 г.). «Импеданс небольшого электрически изолированного участка поверхности мышечной клетки» . Журнал общей физиологии . 44 (6): 1073–88. дои : 10.1085/jgp.44.6.1073 . ПМК 2195146 . ПМИД 19873540 .
^ Jump up to: ^а ^б Алмерс В., Стэнфилд П.Р., Штюмер В. (1983). «Локальное распределение натриевых и калиевых каналов в скелетных мышцах лягушки: измерения методом патч-кламп» . Журнал физиологии . 336 (10): 261–284. дои : 10.1113/jphysicalol.1983.sp014580 . ПМЦ 1198969 . ПМИД 6308223 .
^ Jump up to: ^а ^б Лупа, Монтана; Колдуэлл, Дж. Х. (ноябрь 1991 г.). «Влияние агрина на распределение ацетилхолиновых рецепторов и натриевых каналов на волокнах скелетных мышц взрослых в культуре» . Журнал клеточной биологии . 115 (3): 765–778. дои : 10.1083/jcb.115.3.765 . ПМК 2289169 . ПМИД 1655812 .
^ Трипати, Шриджой Дж.; Токер, Лайла; Бомкамп, Клэр; Манкарчи, Б. Оган; Бельмадани, Мануэль; Павлидис, Пол (08 октября 2018 г.). «Оценка качества транскриптома в наборах данных Patch-Seq» . Границы молекулярной нейронауки . 11 : 363. дои : 10.3389/fnmol.2018.00363 . ISSN 1662-5099 . ПМК 6187980 . ПМИД 30349457 .
^ Jump up to: ^а ^б Боулби, Марк; Меррилл, Томас; Васильев, Дмитрий (2005). «Разработка нового автоматизированного метода записи ионных каналов с использованием изнутри наружу цельноклеточных мембран » . Журнал биомолекулярного скрининга . 10 (8): 806–813. дои : 10.1177/1087057105279481 . ПМИД 16234349 .

Внешние ссылки

[Neher-1] «Нобелевская премия по физиологии и медицине 1991 года» . nobelprize.org . Нобель Медиа АБ . Проверено 8 ноября 2014 г.

[Bannister-2] Баннистер, Нил (1 ноября 2012 г.). Лэнгтон, Фил (ред.). Основное руководство по чтению биомедицинских статей: распознавание и интерпретация передовой практики . Уайли-Блэквелл. дои : 10.1002/9781118402184 . ISBN 9781118402184 .

[Sakamann-3] Jump up to: ^а ^б ^с ^д Сакманн, Б.; Неер, Э. (1984). «Методы патч-клампа для изучения ионных каналов в возбудимых мембранах». Ежегодный обзор физиологии . 46 : 455–472. дои : 10.1146/annurev.ph.46.030184.002323 . hdl : 21.11116/0000-0000-D552-3 . ПМИД 6143532 .

[4] Сигворт, Фредрик Дж.; Неер, Э. (2 октября 1980 г.). «Токи одиночных каналов Na+ наблюдаются в культивируемых мышечных клетках крыс». Природа . 287 (5781): 447–449. Бибкод : 1980Natur.287..447S . дои : 10.1038/287447a0 . ПМИД 6253802 . S2CID 4238010 .

[CoveyCarter2015-5] Эллен Кови; Мэтт Картер (2015). Основные электрофизиологические методы . Издательство Оксфордского университета. стр. 22–. ISBN 978-0-19-993980-0 .

[6] Сакманн, Б.; Эдвардс, Ф.; Коннерт, А.; Такахаши, Т. (1989). «Методы патч-клампа, используемые для изучения синаптической передачи в срезах мозга млекопитающих» . Ежеквартальный журнал экспериментальной физиологии . 74 (7): 1107–1118. doi : 10.1113/expphysicalol.1989.sp003336 . hdl : 11858/00-001M-0000-002C-270A-9 . ПМИД 2560557 .

[Hamill,_et_al_-_Outside-out-7] Jump up to: ^а ^б ^с Хэмилл О.П., Марти А., Неер Э., Сакманн Б., Сигворт Ф.Дж.; Марти; Неер; Сакманн; Сигворт (1981). «Улучшенные методы патч-зажима для записи тока с высоким разрешением из клеток и патчей бесклеточных мембран». Архив Pflügers: Европейский журнал физиологии . 391 (2): 85–100. CiteSeerX 10.1.1.456.107 . дои : 10.1007/BF00656997 . ПМИД 6270629 . S2CID 12014433 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )

[Molleman-8] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и Моллеман, Арелес (6 марта 2003 г.). Зажим пластыря: вводное руководство по электрофизиологии зажима пластыря . Уайли. дои : 10.1002/0470856521 . ISBN 9780470856529 .

[Veitinger-9] Фейтингер, Софи (9 ноября 2011 г.). «Техника патч-зажима» . Научная лаборатория . Лейка Микросистемс . Проверено 10 ноября 2014 г.

[Ogden-10] Огден, Дэвид; Стэнфилд, Питер. «Техника патч-зажима» (PDF) . utdallas.edu . стр. 53–78 . Проверено 11 ноября 2014 г.

[:0-11] Jump up to: ^а ^б Сегев, Амир; Гарсиа-Оскос, Франциско; Куррич, Саид (15 июня 2016 г.). «Целоклеточные патч-кламп-записи в срезах мозга» . Журнал визуализированных экспериментов (112): e54024. дои : 10.3791/54024 . ISSN 1940-087X . ПМЦ 4927800 . ПМИД 27341060 .

[Staley-12] Стейли, К.Дж.; Отис, Т.С.; Моди, я (1 мая 1992 г.). «Мембранные свойства гранулярных клеток зубчатой извилины: сравнение острых микроэлектродных и целоклеточных записей». Журнал нейрофизиологии . 67 (5): 1346–1358. дои : 10.1152/jn.1992.67.5.1346 . ПМИД 1597717 .

[Howe,_Cull-Candy,_&_Colquhoun_-_Outside-out-13] Хау, младший; Калл-Кэнди, С.Г.; Колкухун, Д. (январь 1991 г.). «Ток проходит через одиночные каналы глутаматных рецепторов в наружных участках гранулярных клеток мозжечка крысы» . Журнал физиологии . 432 (1): 143–202. doi : 10.1113/jphysicalol.1991.sp018381 . ПМЦ 1181322 . ПМИД 1715916 .

[von_Beckerath,_et_al_-_Outside-out-14] фон Бекерат, Н.; Адельсбергер, Х; Парцефаль, Ф; Франке, К; Дудель, Дж. (апрель 1995 г.). «ГАМКергическое ингибирование глубоких мышц-разгибателей живота у раков демонстрирует резкую зависимость «доза-реакция» и высокую степень взаимодействия». Европейский журнал физиологии . 429 (6): 781–788. дои : 10.1007/bf00374801 . ПМИД 7541524 . S2CID 7824699 .

[Linley-15] Jump up to: ^а ^б ^с Линли, Джон (2013). «Перфорированная целоклеточная запись патч-клампом». В Гампере, Никита (ред.). Ионные каналы . Методы молекулярной биологии. Том. 998 (Второе изд.). Хумана Пресс. стр. 149–157. дои : 10.1007/978-1-62703-351-0_11 . ISBN 978-1-62703-351-0 . ПМИД 23529427 .

[Strickholm_-_loose_patch-16] Стрикхольм, А. (1 июля 1961 г.). «Импеданс небольшого электрически изолированного участка поверхности мышечной клетки» . Журнал общей физиологии . 44 (6): 1073–88. дои : 10.1085/jgp.44.6.1073 . ПМК 2195146 . ПМИД 19873540 .

[Almers,_Stanfield,_&_Stühmer_-_loose_patch-17] Jump up to: ^а ^б Алмерс В., Стэнфилд П.Р., Штюмер В. (1983). «Локальное распределение натриевых и калиевых каналов в скелетных мышцах лягушки: измерения методом патч-кламп» . Журнал физиологии . 336 (10): 261–284. дои : 10.1113/jphysicalol.1983.sp014580 . ПМЦ 1198969 . ПМИД 6308223 .

[Lupa_&_Caldwell_-_Loose_patch-18] Jump up to: ^а ^б Лупа, Монтана; Колдуэлл, Дж. Х. (ноябрь 1991 г.). «Влияние агрина на распределение ацетилхолиновых рецепторов и натриевых каналов на волокнах скелетных мышц взрослых в культуре» . Журнал клеточной биологии . 115 (3): 765–778. дои : 10.1083/jcb.115.3.765 . ПМК 2289169 . ПМИД 1655812 .

[19] Трипати, Шриджой Дж.; Токер, Лайла; Бомкамп, Клэр; Манкарчи, Б. Оган; Бельмадани, Мануэль; Павлидис, Пол (08 октября 2018 г.). «Оценка качества транскриптома в наборах данных Patch-Seq» . Границы молекулярной нейронауки . 11 : 363. дои : 10.3389/fnmol.2018.00363 . ISSN 1662-5099 . ПМК 6187980 . ПМИД 30349457 .

[Bowlby-20] Jump up to: ^а ^б Боулби, Марк; Меррилл, Томас; Васильев, Дмитрий (2005). «Разработка нового автоматизированного метода записи ионных каналов с использованием изнутри наружу цельноклеточных мембран » . Журнал биомолекулярного скрининга . 10 (8): 806–813. дои : 10.1177/1087057105279481 . ПМИД 16234349 .

[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

[6]

[7]

[8]

[9]

[10]

[11]

[12]

[13]

[14]

[15]

[16]

[17]

[18]

[19]

[20]