✖


Jump to content

Микроскопия двухфотонного возбуждения

Не путать с микроскопией визуализации второй гармоники .
Микроскопия двухфотонного возбуждения кишечника мыши . Красный: актин . Зеленый: ядра клеток . Синий: слизь бокаловидных клеток . Получено при длине волны 780 нм с использованием титан-сапфирового лазера .

Микроскопия с двухфотонным возбуждением ( TPEF или 2PEF ) представляет собой метод флуоресцентной визуализации, который особенно хорошо подходит для получения изображений, рассеивающих живые ткани толщиной примерно до одного миллиметра. В отличие от традиционной флуоресцентной микроскопии , где длина волны возбуждения короче длины волны излучения, двухфотонное возбуждение требует одновременного возбуждения двумя фотонами с большей длиной волны, чем излучаемый свет. Лазер фокусируется на определенном месте ткани и сканирует образец для последовательного создания изображения. Из-за нелинейности двухфотонного возбуждения возбуждаются преимущественно флуорофоры в микрометровом фокусе лазерного луча, что приводит к пространственному разрешению изображения. Это контрастирует с конфокальной микроскопией , где пространственное разрешение достигается за счет взаимодействия фокуса возбуждения и ограниченного обнаружения с точечным отверстием.

В микроскопии с двухфотонным возбуждением обычно используется возбуждающий свет ближнего инфракрасного диапазона (NIR), который также может возбуждать флуоресцентные красители . Использование инфракрасного света сводит к минимуму рассеяние в тканях, поскольку инфракрасный свет меньше рассеивается в типичных биологических тканях. Из-за многофотонного поглощения фоновый сигнал сильно подавляется. Оба эффекта приводят к увеличению глубины проникновения этой техники. Двухфотонное возбуждение может быть превосходной альтернативой конфокальной микроскопии благодаря более глубокому проникновению в ткани, эффективному обнаружению света и уменьшению фотообесцвечивания . [ 1 ] [ 2 ]

Двухфотонное флуоресцентное изображение (зеленое) поперечного сечения корневища , окрашенного в цвет ландыша . Возбуждение происходит на длине волны 840 нм, а красный и синий цвета представляют собой другие каналы многофотонных методов, которые были наложены друг на друга.

Концепция

[ редактировать ]
Схематическое изображение энергетических уровней (диаграммы Яблоньского) процесса флуоресценции на примере флуоресцентного красителя, излучающего свет с длиной волны 460 нм. Один (фиолетовый, 1PEF), два (светло-красный, 2PEF) или три (темно-красный, 3PEF) фотона поглощаются, испуская фотон флуоресценции (бирюзовый).
Оптический отклик от точечного источника. Слева направо: расчетные распределения интенсивности xy (вверху) и rz (внизу) в логарифмическом масштабе для точечного источника, полученного с помощью широкопольной (а), 2PEF (б) и конфокальной микроскопии (в). 2PEF и конфокальные формы имеют лучшее соотношение сигнал/шум, чем широкое поле. Распределение 2PEF больше из-за того, что за распределение интенсивности отвечает длина волны в два раза больше, чем в случае широкого или конфокального поля. Эти распределения интенсивности также известны как функции рассеяния точки. Оптические условия: длины волн возбуждения составляют 488 нм и 900 нм соответственно для 1PEF и 2PEF; длина волны излучения 520 нм; числовая апертура 1,3 с масляно-иммерсионным объективом .

Двухфотонное возбуждение использует двухфотонное поглощение — концепцию, впервые описанную Марией Гепперт Майер (1906–1972) в ее докторской диссертации в 1931 году. [ 3 ] и впервые наблюдался в 1961 году в CaF 2 :Eu. 2+ кристалл с использованием лазерного возбуждения Вольфганга Кайзера . [ 4 ] Исаак Абелла в 1962 году показал в парах цезия , что возможно двухфотонное возбуждение одиночных атомов. [ 5 ]

Флуоресцентная микроскопия с двухфотонным возбуждением имеет сходство с другими методами конфокальной лазерной микроскопии, такими как лазерная сканирующая конфокальная микроскопия и рамановская микроскопия . Эти методы используют сфокусированные лазерные лучи, сканируемые по растровой схеме для создания изображений, и оба имеют эффект оптического сечения . В отличие от конфокальных микроскопов, многофотонные микроскопы не содержат точечных апертур, которые придают конфокальным микроскопам качество оптического получения срезов. Оптическое сечение, создаваемое многофотонными микроскопами, является результатом функции рассеяния точки возбуждения. Концепция двухфотонного возбуждения основана на идее о том, что два фотона со сравнительно меньшей энергией фотонов, чем необходимо для однофотонного возбуждения, также могут возбудить флуорофор за одно квантовое событие. Каждый фотон несет примерно половину энергии, необходимой для возбуждения молекулы. Испускаемый фотон имеет более высокую энергию (более короткую длину волны), чем любой из двух возбуждающих фотонов. Вероятность почти одновременного поглощения двух фотонов чрезвычайно мала. Поэтому высокий пик поток Обычно требуется фотонов возбуждения, обычно генерируемый фемтосекундным импульсным лазером . Например, та же самая средняя мощность лазера, но без импульсов, приводит к отсутствию обнаруживаемой флуоресценции по сравнению с флуоресценцией, генерируемой импульсным лазером за счет двухфотонного эффекта. Лазеры возбуждения с большей длиной волны и меньшей энергией (обычно инфракрасные) многофотонных микроскопов хорошо подходят для визуализации живых клеток, поскольку они вызывают меньше повреждений, чем коротковолновые лазеры, обычно используемые для однофотонного возбуждения, поэтому можно наблюдать живые ткани. в течение более длительных периодов времени с меньшими токсическим эффектом.

Наиболее часто используемые флуорофоры имеют спектры возбуждения в диапазоне 400–500 нм, тогда как лазер, используемый для возбуждения двухфотонной флуоресценции, находится в диапазоне ~ 700–1100 нм (инфракрасный) и создается титан-сапфировыми лазерами . Если флуорофор одновременно поглощает два инфракрасных фотона, он поглотит достаточно энергии, чтобы перейти в возбужденное состояние. Затем флуорофор испустит один фотон с длиной волны, которая зависит от типа используемого флуорофора (обычно в видимом спектре). Поскольку при возбуждении флуорофора поглощаются два фотона, вероятность флуоресцентного излучения флуорофоров возрастает квадратично с интенсивностью возбуждения. Следовательно, там, где лазерный луч плотно сфокусирован, генерируется гораздо больше двухфотонной флуоресценции, чем там, где он более рассеян. Фактически возбуждение ограничивается крошечным фокальным объемом (~ 1 фемтолитр), что приводит к высокой степени отклонения объектов, находящихся вне фокуса. Такая локализация возбуждения является ключевым преимуществом по сравнению с микроскопы с однофотонным возбуждением, в которых необходимо использовать такие элементы, как точечные отверстия, чтобы исключить флуоресценцию вне фокуса. Затем флуоресценция образца собирается высокочувствительным детектором, например фотоумножителем . Эта наблюдаемая интенсивность света становится одним пикселем в конечном изображении; фокусная точка сканируется по всей желаемой области образца для формирования всех пикселей изображения.

Разработка

[ редактировать ]
Схема двухфотонного микроскопа.

Двухфотонная микроскопия была впервые разработана и запатентована Винфридом Денком и Джеймсом Стриклером в лаборатории Уотта Уэбба в Корнелльском университете в 1990 году. Они объединили идею двухфотонного поглощения с использованием лазерного сканера. [ 1 ] [ 6 ] В микроскопии с двухфотонным возбуждением луч инфракрасного лазера фокусируется через объектив. Обычно используемый титан -сапфировый лазер имеет длительность импульса около 100 фемтосекунд (фс) и частоту повторения около 80 МГц, что обеспечивает высокую плотность фотонов и поток, необходимые для двухфотонного поглощения, и настраивается в широком диапазоне длин волн. .

Использование инфракрасного света для возбуждения флуорофоров в светорассеивающих тканях дает дополнительные преимущества. [ 7 ] Длинные волны рассеиваются в меньшей степени, чем более короткие, что является преимуществом для получения изображений с высоким разрешением. Кроме того, эти фотоны с более низкой энергией с меньшей вероятностью нанесут ущерб за пределами фокального объема. По сравнению с конфокальным микроскопом обнаружение фотонов гораздо более эффективно, поскольку даже рассеянные фотоны вносят вклад в полезный сигнал. Эти преимущества визуализации рассеивающих тканей были признаны только через несколько лет после изобретения микроскопии с двухфотонным возбуждением. [ 8 ]

Есть несколько предостережений по поводу использования двухфотонной микроскопии: импульсные лазеры, необходимые для двухфотонного возбуждения, намного дороже, чем лазеры непрерывного действия (CW), используемые в конфокальной микроскопии. Спектр двухфотонного поглощения молекулы может значительно отличаться от ее однофотонного аналога. Фотоповреждения более высокого порядка становятся проблемой, и обесцвечивание масштабируется пропорционально квадрату мощности лазера, тогда как для однофотонного (конфокального) оно линейно. Для очень тонких объектов, таких как изолированные клетки, однофотонные (конфокальные) микроскопы могут создавать изображения с более высоким оптическим разрешением благодаря более коротким длинам волн возбуждения. С другой стороны, при рассеивании тканей превосходные возможности оптического разделения и обнаружения света двухфотонного микроскопа приводят к повышению производительности.

Приложения

[ редактировать ]

Основной

[ редактировать ]

Двухфотонная микроскопия используется во многих областях, включая физиологию, нейробиологию, эмбриологию и тканевую инженерию. Благодаря этому методу даже тонкие, почти прозрачные ткани (например, клетки кожи) визуализируются с четкой детализацией. [ 9 ] Возможности высокоскоростной визуализации двухфотонной микроскопии также могут быть использованы при неинвазивной оптической биопсии. [ 10 ] Двухфотонная микроскопия успешно использовалась для проведения локализованных химических реакций. [ 8 ] и эффект, который также использовался для двухфотонной литографии . С помощью двухфотонной флуоресценции и микроскопии на основе генерации второй гармоники было показано, что молекулы типа органических порфиринов могут иметь разные дипольные моменты перехода для двухфотонной флуоресценции и генерации второй гармоники. [ 11 ] которые в противном случае считаются возникающими из-за одного и того же дипольного момента перехода. [ 12 ] Было показано, что недегенеративное двухфотонное возбуждение или использование двух фотонов с разными длинами волн увеличивает флуоресценцию всех протестированных малых молекул и флуоресцентных белков. [ 13 ]

Исследования рака

[ редактировать ]

Также было доказано, что 2PEF очень ценен для характеристики рака кожи . [ 14 ] кроме того, мониторинг рака молочной железы in vitro. [ 15 ] [ 16 ] Также было показано, что он выявляет остановку опухолевых клеток, взаимодействие опухолевых клеток с тромбоцитами, взаимодействие опухолевых клеток с лейкоцитами и процессы метастатической колонизации. [ 17 ]

Эмбриональные исследования

[ редактировать ]

Было показано, что 2PEF имеет преимущество перед другими методами, такими как конфокальная микроскопия , когда речь идет о долгосрочной визуализации живых клеток эмбрионов млекопитающих. [ 18 ]

Исследование почек

[ редактировать ]

2PEF также использовался для визуализации труднодоступных типов клеток, особенно клеток почек. [ 19 ] Он использовался для лучшего понимания гидродинамики и фильтрации. [ 20 ]

Определение уровня вирусной инфекции

[ редактировать ]

Также было доказано, что 2PEF является ценным инструментом для мониторинга коррелятов вирусной инфекции ( SARS-CoV-2 ) в культуре клеток с использованием 2P-активного Ca. 2+ чувствительный краситель. [ 21 ]

Схема визуализации функций мозга in vivo. Показывает общую схему визуализации, а также изображения нейронов и сосудов. Визуализация осуществлялась с использованием различных флуоресцентных красителей.

Нейронаука

[ редактировать ]

2PEF, а также расширение этого метода до 3PEF используются для характеристики интактных нервных тканей в мозгу живых и даже хорошо себя чувствующих животных. В частности, этот метод выгоден для визуализации кальция нейрона или популяций нейронов. [ 22 ] для фотофармакологии, включая локализованное удаление таких компонентов, как глутамат [ 23 ] или изомеризация фотопереключаемых лекарств, [ 24 ] [ 25 ] и для визуализации других генетически закодированных датчиков, которые сообщают о концентрации нейротрансмиттеров. [ 26 ]

В настоящее время двухфотонная микроскопия широко используется для изображения живого возбуждения нейронов в модельных организмах, включая плодовых мух ( Drosophila melanogaster ) , крыс , певчих птиц , приматов , хорьков , мышей ( Mus musculus ) , рыбок данио . [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ] Животные обычно фиксируются на голове из-за размера микроскопа и сканирующих устройств, но разрабатываются также миниатюрные микроскопы, которые позволяют визуализировать нейроны движущихся и свободно ведущих себя животных. [ 30 ] [ 31 ]

Возбуждение высшего порядка

[ редактировать ]

Также возможно одновременное поглощение трех или более фотонов, что позволяет проводить микроскопию многофотонного возбуждения более высокого порядка. [ 32 ] Так называемая «флуоресцентная микроскопия с трехфотонным возбуждением» (3PEF) является наиболее используемым методом после 2PEF, к которому она дополняется. Сообщалось также о локализованной изомеризации фотопереключаемых лекарств in vivo с использованием трехфотонного возбуждения. [ 33 ]

Основная статья: Трехфотонная микроскопия

Красители и флуоресцентные белки для микроскопии двухфотонного возбуждения

[ редактировать ]

В общем, все обычно используемые флуоресцентные белки (CFP, GFP, YFP, RFP) и красители могут возбуждаться в двухфотонном режиме. Спектры двухфотонного возбуждения часто значительно шире, что затрудняет избирательное возбуждение флуорофоров путем переключения длин волн возбуждения. [ нужна ссылка ]

Сообщалось о нескольких красителях, излучающих зеленый, красный и ближний ИК-диапазон (зонды и реактивные метки) с чрезвычайно высокими сечениями двухфотонного поглощения. [ 34 ] Благодаря структуре донорно-акцепторно-донорного типа сквараиновые красители , такие как Seta-670 , Seta-700 и Seta-660, демонстрируют очень высокую эффективность двухфотонного поглощения (2PA) по сравнению с другими красителями. [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ] SeTau-647 и SeTau-665 , новый тип скварин- ротаксана , демонстрируют чрезвычайно высокие сечения двухфотонного действия — до 10 000 ГМ в ближней ИК-области, непревзойденные ни одним другим классом органических красителей. [ 34 ]

См. также

[ редактировать ]

Источники

[ редактировать ]
  • Шмитт, Майкл; Майерхёфер, Томас; Попп, Юрген; Клеппе, Инго; Вайсхарт, Клаус (2013). «Взаимодействие Света и Материи». Справочник по биофотонике . дои : 10.1002/9783527643981.bphoto003 . ISBN  978-3-527-64398-1 . S2CID   93908151 .
  • Кениг, Карстен (2018). Многофотонная микроскопия и флуоресцентная прижизненная визуализация: приложения в биологии и медицине . Вальтер де Грюйтер ГмбХ & Ко КГ. ISBN  978-3-11-042998-5 .
  • Кейхосрави, Адиб; Бредфельдт, Джереми С.; Сагар, Абдул Кадер; Элисейри, Кевин В. (2014). «Визуализация рака во второй гармонике». Количественная визуализация в клеточной биологии . Методы клеточной биологии. Том. 123. стр. 531–546. дои : 10.1016/B978-0-12-420138-5.00028-8 . ISBN  978-0-12-420138-5 . ПМИД   24974046 .
  • Ю, Генри; Рахим, Нур Аида Абдул (2013). Визуализация в клеточной и тканевой инженерии . ЦРК Пресс. ISBN  978-1-4398-4804-3 .

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Jump up to: а б Денк, Винифрид; Стриклер, Джеймс Х.; Уэбб, Уотт В. (6 апреля 1990 г.). «Двухфотонная лазерная сканирующая флуоресцентная микроскопия». Наука . 248 (4951): 73–76. Бибкод : 1990Sci...248...73D . дои : 10.1126/science.2321027 . ПМИД   2321027 . S2CID   18431535 .
  2. ^ Стокерт, Хуан Карлос; Бласкес-Кастро, Альфонсо (2017). «Нелинейная оптика». Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни . стр. 642–686. дои : 10.2174/9781681085180117010023 . ISBN  978-1-68108-518-0 .
  3. ^ Гепперт-Майер М. (1931). «Об элементарных действиях с двумя квантовыми скачками» . Анналы физики . 9 (3): 273–95. Нагрудный код : 1931АнП...401..273Г . дои : 10.1002/andp.19314010303 .
  4. ^ Кайзер, В.; Гаррет, К. (сентябрь 1961 г.). «Двухфотонное возбуждение в CaF 2 :Eu 2+ ". Письма о физическом обзоре . 7 (6): 229–231. Бибкод : 1961PhRvL...7..229K . doi : 10.1103/PhysRevLett.7.229 .
  5. ^ Абелла, ID (декабрь 1962 г.). «Оптическое двухфотонное поглощение в парах цезия». Письма о физических отзывах . 9 (11): 453–455. Бибкод : 1962PhRvL...9..453A . дои : 10.1103/PhysRevLett.9.453 .
  6. ^ US 5034613   «Двухфотонная лазерная микроскопия».
  7. ^ Хельмхен Ф.; Денк В. (2005). «Двухфотонная микроскопия глубоких тканей». Нат-методы . 2 (12): 932–40. дои : 10.1038/nmeth818 . ПМИД   16299478 . S2CID   3339971 .
  8. ^ Jump up to: а б Денк В.; Делани К. (1994). «Анатомическая и функциональная визуализация нейронов с использованием 2-фотонной лазерной сканирующей микроскопии». J Неврологические методы . 54 (2): 151–62. дои : 10.1016/0165-0270(94)90189-9 . ПМИД   7869748 . S2CID   3772937 .
  9. ^ Магистр БР.; Итак, PTC; Граттон Э. (1997). «Микроскопия и спектроскопия флуоресценции с многофотонным возбуждением кожи человека in vivo» . Биофизический журнал . 72 (6): 2405–2412. Бибкод : 1997BpJ....72.2405M . дои : 10.1016/s0006-3495(97)78886-6 . ПМК   1184440 . ПМИД   9168018 .
  10. ^ Беверсдорф, Йорг; Пик, Райнер; Черт, Стефан В. (1 мая 1998 г.). «Мультифокальная многофотонная микроскопия». Оптические письма . 23 (9): 655–657. Бибкод : 1998OptL...23..655B . дои : 10.1364/ол.23.000655 . ПМИД   18087301 . S2CID   17549598 .
  11. ^ Хадриа А., Коэн Ю., Гавел П., Рош С., Клэйс К., Андерсон Х.Л. (2017). «Двухтактные пирофеофорбиды для нелинейной оптической визуализации» . Органическая и биомолекулярная химия . 15 (4): 947–956. дои : 10.1039/C6OB02319C . ПМИД   28054076 . S2CID   3540505 .
  12. ^ Рив Дж.Э., Корбетт А.Д., Бочаров И., Уилсон Т., Бэйли Х., Андерсон Х.Л. (2012). «Исследование ориентационного распределения красителей в мембранах с помощью многофотонной микроскопии» . Биофизический журнал . 103 (5): 907–917. Бибкод : 2012BpJ...103..907R . дои : 10.1016/j.bpj.2012.08.003 . ПМЦ   3433607 . ПМИД   23009840 .
  13. ^ Садег, Саназ; Ян, Му-Хан; Ферри, Кристофер Г.Л.; Тунеманн, Мартин; Сайсан, Паям А.; Вэй, Чжэ; Родригес, Эрик А.; Адамс, Стивен Р.; Килич, Кивилчим; Боас, Дэвид А.; Сакаджич, Сава; Девор, Анна; Файнман, Иешаягу (18 сентября 2019 г.). «Эффективное невырожденное двухфотонное возбуждение для флуоресцентной микроскопии» . Оптика Экспресс . 27 (20): 28022–28035. Бибкод : 2019OExpr..2728022S . дои : 10.1364/OE.27.028022 . ПМК   6825618 . ПМИД   31684560 .
  14. ^ Паоли, Джон; Смед, Мария; Эриксон, Марика Б. (сентябрь 2009 г.). «Многофотонная лазерная сканирующая микроскопия — новый метод диагностики поверхностного рака кожи». Семинары по кожной медицине и хирургии . 28 (3): 190–195. дои : 10.1016/j.sder.2009.06.007 . ПМИД   19782943 .
  15. ^ Ковач, Денес Сепеши; Контра, Бенце; Кьовини, Балаж; Мюллер, Далма; Тот, Жофия Эстилла; Абрани-Балог, Питер; Виттнер, Люсия; Варади, Дьёрдь; Турцель, Габор; Вольф, Одон; Оуэн, Майкл С.; Катона, Грегори; Дьерфи, Балаж; Кесеру, Миклош Дьёрдь; Мучи, Золтан; Рожа, Балаж Дж.; Ковач, Эрвин (сентябрь 2023 г.). «Эффективный синтез, разработка и применение высокофлуоресцентного цианинового красителя для конъюгации антител и визуализации под микроскопом» . Органическая и биомолекулярная химия . 21 (44): 8829–8836. дои : 10.1039/D3OB01471A . ПМИД   37917021 .
  16. ^ Ковач, Денес Сепеши; Кьовини, Балаж; Мюллер, Далма; Тот, Жофия Эстилла; Филипп, Анна; Абрани-Балог, Питер; Виттнер, Люсия; Варади, Дьёрдь; Вольф, Одон; Турцель, Габор; Катона, Грегори; Дьерфи, Балаж; Кесеру, Миклош Дьёрдь; Мучи, Золтан; Рожа, Балаж Дж.; Ковач, Эрвин (июнь 2023 г.). «Синтез и применение двухфотонных активных флуоресцентных родольных красителей для конъюгации антител и визуализации клеток in vitro» . АСУ Омега . 8 (25): 22836–22843. дои : 10.1021/acsomega.3c01796 . ПМИД   37396252 .
  17. ^ Танака, Кодзи; Окугава, Ёсинага; Иноуэ, Ясухиро, Кейичи; Мори, Ясухико; Кусуноки, Масато (15 мая 2014 г.) . многофотонной микроскопии: краткий обзор» . Американский журнал трансляционных исследований . 6 (3): 179–187. PMC   4058302. метастазов рака с использованием PMID   24936213 .
  18. ^ Белка, Джейн М.; Вокосин, Дэвид Л.; Уайт, Джон Г.; Бавистер, Барри Д. (август 1999 г.). «Долгосрочная двухфотонная флуоресцентная визуализация эмбрионов млекопитающих без ущерба для жизнеспособности» . Природная биотехнология . 17 (8): 763–767. дои : 10.1038/11698 . ISSN   1546-1696 . ПМК   5087329 . ПМИД   10429240 .
  19. ^ Диаспро, Альберто; Кирико, Джузеппе; Коллини, Маддалена (май 2005 г.). «Двухфотонное возбуждение флуоресценции и связанные с ним методы в биологической микроскопии» . Ежеквартальные обзоры биофизики . 38 (2): 97–166. дои : 10.1017/S0033583505004129 . ISSN   1469-8994 . ПМИД   16478566 . S2CID   33514441 .
  20. ^ Эшворт, СЛ; Сандовал, РМ; Таннер, Джорджия; Молиторис, бакалавр искусств (2 августа 2007 г.). «Двухфотонная микроскопия: визуализация динамики почек» . Почки Интернешнл . 72 (4): 416–421. дои : 10.1038/sj.ki.5002315 . ISSN   0085-2538 . ПМИД   17538570 .
  21. ^ Мате, Домокос; Салай, Гергели; Чери, Левенте; Кис, Золтан; Палий, Бернадетт; Фёльдес, Габор; Ковач, Ноэми; Филипп, Анна; Сепеши, Арон; Хайдрик, Полет; Чомос, Аттила; Жембери, Акош; Кадар, Кристоф; Катона, Грегори; Мучи, Золтан; Рожа, Йожеф Балаж; Ковач, Эрвин (июль 2024 г.). «Мониторинг коррелятов инфекции SARS-CoV-2 в культуре клеток с использованием двухфотонно-активного, чувствительного к кальцию красителя» . Письма по клеточной и молекулярной биологии . 29 (1): 105. дои : 10.1186/s11658-024-00619-0 . ПМЦ   11264913 . ПМИД   39030477 .
  22. ^ Гринбергер, Кристина; Коннерт, Артур (2012). «Визуализация кальция в нейронах» . Нейрон . 73 (5): 862–885. дои : 10.1016/j.neuron.2012.02.011 . ПМИД   22405199 .
  23. ^ Свобода, Карел; Ясуда, Рёхей (июнь 2006 г.). «Принципы микроскопии двухфотонного возбуждения и ее применение в нейронауке» . Нейрон . 50 (6): 823–839. дои : 10.1016/j.neuron.2006.05.019 . ПМИД   16772166 . S2CID   7278880 .
  24. ^ Искьердо-Серра, Мерсе; Гаскон-Мойя, Марта; Хирц, Ян Дж.; Питтоло, Сильвия; Посканцер, Кира Э.; Феррер, Эрик; Алибес, Рамон; Буске, Феликс; Просто, Рафаэль; Эрнандо, Хорди; Горостиза, Пау (18 июня 2014 г.). «Двухфотонная стимуляция нейронов и астроцитов с помощью фотопереключателей на основе азобензола» . Журнал Американского химического общества . 136 (24): 8693–8701. дои : 10.1021/ja5026326 . ISSN   0002-7863 . ПМК   4096865 . ПМИД   24857186 .
  25. ^ Питтоло, Сильвия; Ли, Хёджон; Льядо, Анна; Този, Себастьян; Босх, Майкл; Бардия, Лидия; Гомес-Сантакана, Ксавьер; Ллебария, Амадеу; Сориано, Эдуардо; Коломбелли, Жюльен; Посканцер, Кира Э.; Переа, Гертруда; Горостиза, Пау (2 июля 2019 г.). «Обратимое подавление эндогенных рецепторов в неповрежденной ткани головного мозга с использованием двухфотонной фармакологии» . Труды Национальной академии наук . 116 (27): 13680–13689. Бибкод : 2019PNAS..11613680P . дои : 10.1073/pnas.1900430116 . ISSN   0027-8424 . ПМК   6613107 . ПМИД   31196955 .
  26. ^ Сабатини, Бернардо; Тиан, Линь (2020). «Динамика нейромодулятора in vivo с генетически закодированными показателями» . Нейрон . 108 (1): 17–32. дои : 10.1016/j.neuron.2020.09.036 . ПМИД   33058762 .
  27. ^ Беннингер, Ричард КП; Поршень, Дэвид В. (июнь 2013 г.). «Микроскопия двухфотонного возбуждения для исследования живых клеток и тканей» . Современные протоколы клеточной биологии . 59 (1): Раздел 4.11.1–24. дои : 10.1002/0471143030.cb0411s59 . ПМК   4004770 . ПМИД   23728746 .
  28. ^ Хуан, Ченг; Макси, Джессика Р.; Синха, Суприйо; Саваль, Джоан; Гонг, Иян; Шнитцер, Марк Дж. (декабрь 2018 г.). «Долговременная оптическая визуализация мозга живых взрослых плодовых мух» . Природные коммуникации . 9 (1): 872. Бибкод : 2018NatCo...9..872H . дои : 10.1038/s41467-018-02873-1 . ПМК   5830414 . ПМИД   29491443 .
  29. ^ Демас, Джеффри; Мэнли, Джейсон; Техера, Фрэнк; Барбер, Кевин; Ким, Хевон; Трауб, Франсиска Мартинес; Чен, Брэндон; Вазири, Алипаша (сентябрь 2021 г.). «Высокоскоростная объемная запись нейроактивности по всей коре головного мозга с клеточным разрешением с использованием микроскопии световых шариков» . Природные методы . 18 (9): 1103–1111. дои : 10.1038/s41592-021-01239-8 . ПМЦ   8958902 . ПМИД   34462592 . S2CID   237366015 .
  30. ^ Хельмхен, Фритьоф; Плата, Мишель; Танк, Дэвид; Денк, Винфрид (2001). «Миниатюрный двухфотонный микроскоп, устанавливаемый на голову: визуализация мозга свободно движущихся животных с высоким разрешением» . Нейрон . 31 (6): 903–912. дои : 10.1016/S0896-6273(01)00421-4 . ПМИД   11580892 .
  31. ^ Зонг В., Обенхаус Х.А., Скитеен Э.Р., Энеквист Х., де Йонг Н.Л., Вейл Р.; и др. (2022). «Крупномасштабная двухфотонная визуализация кальция у свободно движущихся мышей» . Клетка . 185 (7): 1240–1256.e30. дои : 10.1016/j.cell.2022.02.017 . ПМЦ   8970296 . ПМИД   35305313 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  32. ^ Сюй, С; Зипфель, В; Шир, Дж. Б.; Уильямс, РМ; Уэбб, WW (1 октября 1996 г.). «Многофотонное возбуждение флуоресценции: новые спектральные окна для биологической нелинейной микроскопии» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 93 (20): 10763–10768. Бибкод : 1996PNAS...9310763X . дои : 10.1073/pnas.93.20.10763 . ПМК   38229 . ПМИД   8855254 .
  33. ^ Сортино, Розальба; Конкеро, Марина; Кастро-Ольвера, Густаво; Гелаберт, Рикар; Морено, Майкл; Рифоло, Фабио; Матера, Карло; Фернандес-Кастильо, Ноэлия; Агнетта, Люк; Декер, Майкл; Ллуч, Хосе Мария; Эрнандо, Хорди; Лоза-Альварес, Пабло; Горостиза, Пау (12 октября 2023 г.). «Трехфотонная инфракрасная стимуляция эндогенных нейрорецепторов in vivo» . Angewandte Chemie, международное издание . 62 (51): e202311181. дои : 10.1002/anie.202311181 . hdl : 2445/203764 . ISSN   1433-7851 . ПМИД   37823736 .
  34. ^ Jump up to: а б с Подгорский, Каспар; Терпешниг, Эвальд; Клочко Алексей П.; Обухова Елена Михайловна; Хаас, Курт (14 декабря 2012 г.). «Сверхяркие и стабильные флуорофоры скварена красного и ближнего инфракрасного диапазона для двухфотонной визуализации in vivo» . ПЛОС ОДИН . 7 (12): е51980. Бибкод : 2012PLoSO...751980P . дои : 10.1371/journal.pone.0051980 . ПМЦ   3522634 . ПМИД   23251670 .
  35. ^ Лю, Линчжи; Шао, Мэй; Донг, Сяоху; Ю, Сюэфэн; Лю, Чжихун; Он, Жике; Ван, Цюйцюань (15 октября 2008 г.). «Гомогенный иммуноанализ на основе резонансного переноса энергии флуоресценции двухфотонного возбуждения». Аналитическая химия . 80 (20): 7735–7741. дои : 10.1021/ac801106w . ПМИД   18800850 .
  36. ^ Пржонская, Ольга В.; Вебстер, Скотт; Падилья, Лазаро А.; Ху, Хунхуа; Качковский, Алексей Дмитриевич; Хаган, Дэвид Дж.; Ван Страйленд, Эрик В. (2010). «Двухфотонное поглощение в сопряженных молекулах ближнего ИК-диапазона: стратегия проектирования и соотношение структура-свойство». Передовые репортеры флуоресценции в химии и биологии I. Серия Спрингера по флуоресценции. Том. 8. С. 105–147. дои : 10.1007/978-3-642-04702-2_4 . ISBN  978-3-642-04700-8 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Two-photon_excitation_microscopy&oldid=1237906612"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 1a11987156dc8ec3a1554819e333eca1__1722469860
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/1a/a1/1a11987156dc8ec3a1554819e333eca1.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Two-photon excitation microscopy - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)